Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 63
Текст из файла (страница 63)
ТЬе геяи1ь оЕ йезе чагюиз арргоасЬея аге гегпаг1саЫу сопзопапг, апс$ йеу сопйпп 1Ьаг йе асйче ягез Еог ро1угиепсаноп оЕ йНТРз апс$ Еог 3' — «5' ехопис!ео1уйс й(8еяг(оп гезЫе ов й(ЕЕегепг зггисгига1 йо«паша о Е йе К1епо«ч Ега8шепс апй аге яерагагей Ьу 30 — 35 «$«. ТЬе ехопис1еаяе асс«чну, «чЫсЬ и сагпей оп 1Ье япа11ег (22 )сР) йои«а«п Доусе апй 5ге(гс 1987), регЕоггпз а ргоо(геайп8 Еипсг(оп Ьу гезесйп8 Р)«)А ТЬас санга«пя еКЬег шыпагсЬей Ьазез ог Еган«еяЫВ еггогя. (ВеЬепе1с ег а!. 1990). 3' — «5' й)8езг(оп оЕ с1оиЫе-ягапс)ей Р)4А и 1ЬоиВЫ го Ео!1о«ч а 1Ьгее-ягер рагЬиау: Ь(пйп8 оЕ 1Ье я«Ьяггаге го а с!еЕг ш 1Ье ро!угпегаяе 1$ои«аш, ггапз1осасюв оЕ 1Ье 3' геппшиз го йе асгЬ е яге оЕ 1Ье ехопис1еаяе йогпаш, апс$, Впа!1у, сЬеинса1 сага!уз(я (Саса1апо ег а1. 1990).
Рипп8 сгапз1осагюп, иЫсЬ и 1Ье гаге-1ипК!п8 ягер оЕ ТЬе геасйоп, гпе11«п8 оЕ йе Еоиг ог Вче гепшпа1 Ьазе ра(гз ауйир!ех Р)4А (Со«чап ег а!. 1989) 8епегагез а Егауей 3' сегннпсь йаг Ь(пйз со 1Ье арче яге оЕ 1Ье ехопис1еазе с1огпаш, 1и)отта6ои РипеЬ 9.83 М|Ь К ча1иез ш йе папопю!аг гап8е (КисЬса ес а1. 1988). ТЬгее сагЬоху1к асЫ геяйиез |п йе ас6че зие |псегасс йгесс1у счПЬ опе ог Ьой оЕ йе йча1епс шеса1 юпз йас аге Ьоипд со |Ье ехопис1еазе |1отпа|п аи|1 аге сгис1а! Еог еитушас(с с1еача8е. ТЬе тиеса!з. Ьоип6 со йе ехопис1еазе доша(п шсегасс сч(сЬ йе сегпнпа! РЬозрЬасе гея6ие оЕ |Ье зиЬзсгасе (РегЬузЬсге ес а1. 1991; Нап ес а!. 1991), сЬегеЬу аПоъч1и8 пис!еорЬ|1|с ассас1| (ртоЬаЫу Еготп а ЬубгохЫе юп) оп сЬе ехрозе6 РЬозрЬойезсег Ьопй (Ргеегиопс ес а1.
1988). ТЬтз геасбоп Вепегасез а ргойисс, ПЬ)МР, сЬас ас ЫВЬ сопсепсгабопз сап |пЫЬ|с сЬе 3'-|5' ехопис1еазе геас6оп (С сие ес а1. 1978) Ьу оссиру(п8 сЬе загие ясе ш |Ье ептуше аз 6|е Есаул сегпипиз оЕ яп81е-зсгапдед РМА (ОП(з ес а1. 1985).
ТЬе ехопис1ео!ус|с де8габас(оп оЕ 6оиЫе-зсгапйед зиЬзсгасез ь чету з!оч' ъчиЬ а !|та оЕ -10 ' з '. Р(8езбоп оЕ яп8!е-зсгапде6 зиЬзсгасез, Ьо мечет, Ь -100 снпез Еазсег, |ч1й а )с,н оЕ 0.09 з ' (КисЬ|а ес а1. 1988; Ре|ЬузЫге ес а1. 1991). 1)яп8 ясе-йгессед пииауепезЬ со сЬап8е |Ье анино аснЬ ч66ип йе асбче ясе, пшсапс Еопиз оЕ йе К)енот епхутпе Ьаче Ьееп сопзсгиссед |Ьас гесаш поггпа! Ро!уп|егазе ас|Ы|су Ьш аге еьеп6аПу дечоЫ оЕ ехопис1еазе асичиу (Ре|ЬузЫге ес а1. 1988, 1991).
ТЬе ачега8е еггог гасе Еог сЬезе епухтпез |з -1 Ьазе зиЬзисшюп Еог еасЬ 10,000-40,000 Ьазез ро1успепхей ТЬЬ гасе ь Ьепчееп 7- ап|1 30-Ео16 снпез ЫВЬег йап йе еггог гасе оЕ йе ч6!|1-суре К)епо|ч епхутпе (ВеЬепе1| ес а!. 1990; Е8ег ес а!. 1991). ТЬегеЕоге, сЬе ЫВЬ Пде1иу оЕ сЬе К1еио|ч епхугпе гези1ыпоге Егоги ЫПЫу ассигасе зе1ес6оп оЕ Ьазез Ьу йе ро1уп|егазе дошаш сЬап Сгош розсгерПса6оп ей6п8 Ъу йе ехопис1еазе |(о|наш. А 1аг8е с1еЕс ш йе ро1утиегазе |1отпаш ь йе Ь~пйп8 ясе Еог сЬе рпп|ег:сеи|р!асс РЬ)А (Веезе ес а1.
1993а). ТЬе анино асЫ гея|1иез йгес|1у шчо1чед ш зиЬзсгасе Ь(пйп8 ап|1 саса1узЬ Ьаче Ьееп Ыепс|йей Ьу з(се-6(гессе6 пшса8еиеяз (Ро1ез)ту ес а1. 1990, 1992) апд сопйгше6 Ьу Х-гау сгузсаПо8гарЬ~с аиа)уяз оЕ сЬе К1епосч Ега8шепс Ьоип|1 со Пир1ех Р)ч)А (Веезе ес а1. 1993а). ТЬе ро!утпегазе |1отпа|пз оЕ Ро( 1 ап|1 зечета) осЬег суре-В Р)з|А ро1уи|егазез, шс!ийп8 йозе Стоги ТЬеттнз а((иаттснз ап6 ЬассепорЬа8ез Т5 ап6 Т7, |Ьаге а ЫВЬ Пе8гее оЕ Ьоп|о!о8у чбсЬ(и сЬе ро!ун|егазе дошаш (Ре1агие ес а1. 1990; В!апсо ес а1. 1991).
ТЬсз Ьоп|о1о8у шс!изчез (1) а с1изсег оЕ геядиез йгесс1у шчоЬе|1 (и саса1уяз апд (2) а сугояпе сеяние |пчо!че|1 |п Ь|пйп8 о(6Ь)ТРз (Веезе ес а1. 1993Ь). ТЬе сиггепс п|о|1е! оЕ йе опепса6оп оЕ |Ье ргнпег сешр!асе ап6 сЬе ичо |!о|пан|а оЕ сЬе К!еио|ч Егаушепс Ь |Ьоъчп ш Р(Вите 9-6. Озез оЕ !Ье К!епочч| Ггаетеп1 оЕ Е. со!1 Ро!утегазе ! |и Мо!еси!аг С!оп!пе Е1111ое 11|е ЕЕесезхетЕ 3 ' Тегт(т' Сгеа(егЕ Ьу О(цех!!оп оЕ ОНА МЯ Яез(г(с((оп Епаутез !п спапу сазез, а яи81е Ьи((ег сап Ье изей Ьой сот с1еача8е оЕ Р)9А чбй а гезспссюи ептуше апд Сот йе зиЬ|е|!иенс ППш8 оЕ гесеье6 3' сеппш|. ТЬе еп6-П|Пш8 геассюп сап Ье сопсгоПед Ьу отп66п8 опе, ичо, ог сЬгее оЕ сЬе Еоиг дсзТРз (топ| сЬе геасиоп апд сЬегеЬу Вепегас|п8 раг6аПу ВПе6 сепгиш сЬас сопса|п поче! соЬеяче еп|Ь (р!еазе зее Р(8иге 9-7 апд Ргососо1 10).
ЕаЬе1те 1!те 3 ' Тегт|п1 о1 ОНА Егадтеп(з Езу Епсогрога((оо о1 ЕЕаг1101аЕ|еlегЕ тЕМТРз 1п Пепега1, сЬезе 1аЪе!ш8 геасбопз сопса|п сЬгее ип!аЬе1е6 д)чТРз еасЬ ас а сопсепсгаиоп ш ехсегь оЕ йе К апд опе гайо1аЬе)е6 6МТР ас а Еаг!отчет соисепыасюп, счЬкЬ (з гьиаПу Ье!о|ч сЬе К . )7пдег сЬезе сопйсюпз, сЬе ргоропюп оЕ!аЬе1 сЬас ь шсогрогасе|1 шсо РЬ)А сап Ье чету Ь|8Ь, ечеп |Ьои8Ь йе гасе о( йе геасиоп тиау Ъе Еаг Его|и н|ахнпа1.
ТЬе ргезепсе оЕ ЫВЬ сопсепсгас|опз о( |Ьгее ип!аЬе1е6 61!Трз 1еыепз сЬе розяЬ|16у оЕ ехопис1ео!ус|с гешоча1 оЕ пис1еосЫез Еготи сЬе 3' сегпипиз оЕ йе сетпр1ате. ЪйнсЬ оЕ йе Еош а-1аЬе!е|1 6Ь)ТРз ь а|Ые|1 со йе геас6оп дерепсЬ оп йе зетрлепсе ап6 пасите оЕ йе сепшш оЕ йе РМА. ° Яесеззе|Е 3' сепи!и| сап Ъе !аЬе1е6 чбсЬ апу 6Ь)ТР счЬозе Ьазе ь сотпр!етиепсагу со ап пира|ге|1 Ьазе ш сЬе ргоспк1ш8 5' сепишиз. Кайоас6чиу сап йеге(оге Ъе шсогрогасе|1 ас апу роясюп нт(сЫп сЬе геЬш1с сепшпгы1ерепйп8 оп сЬе шчез68асог'з сЬоке оЕ гайо1аЬе1е|1 с15)ТР. То епзиге сЬас аП оЕ сЬе гайо1аЬе!ед п|о!есн1ез аге йе за|не 1еп8|Ь, (с |пау Ъе песеьагу со согир!есе сЬе енса-Е|Пш8 геассюп Ьу саггу(п8 ош а "сЬазе" геас6оп соисашш8 Ьт8Ь сопсепсга6оиз оЕ аП Еоиг ш|!аЬе1е|1 619ТРз.
° В!нигеиг(е|Е аит( ртоггнт(ти8 3 ' гегт(ив тпау Ье 1аЬе!ед |п аи еихутпас|с теас6 оп йас изез ЬосЬ 6ошашз о( сЬе К1епо|ч Ега8шепс. Р(гзс, йе 3'-|5' ехотшс1еазе асспбсу гепючез апу ргосгийп8 саПз Еготп сЬе РЬ)А аи6 сгеасез а гесеье6 3' сепи1пия ТЬеп, ш сЬе ргезепсе оЕ Ьт8Ь соисепсга6огь оЕ опе гадю1а- 9.84 СЬаРтег 9: РгеРагапап и) йад|о|аЬе[ед 0|ъ)А аид й|ъ[гт Рг«Ьег 5' тепър!ате 5' тегир|ате .м:-тиапъь м.— «виъ« рг|гпаг ргнпег ГЕСЕ)КЕ 9-6 А Моде! оЕ О[ъ|А Воипд то ЕЬе К|епоън ОЬ)А Ро! гпегахе Ье1ед ргесиглог, ехоиис! ео!удс деПгададоп ь Ъа!аисед Ьу шсогрогадоп оЕ гасПо1аЬе!ед дтъ(ТР ат йе 3' тегпт[п«3.
ТЫ3 геасдои, ъчЫсЬ сопг|гтх оЕ сус!«3 оЕ гегпоча1 аид гер!асептепт оЕ |Ье 3' тегпт|и«3 [гоги гесеьгед ог Ыиит-епдед 0)ъ)А, |3 го«тес|«тел саПед ап ехсЬап8« ог гер1асегпеит геасдои. ТЬе грес|6с асттчЬтек |Ьат саи Ье а«Ьиечед ъч[тЬ йтг геасдоп аге итодегт !теса«ге йе 3'л5' ехоиис1«але оЕ йе К[еиоън епгугпе В га|Ьег 31«8813Ь, егрестаПу ои доыйе-гтгапдед 3«Ьгтгатеь. Т4 0)ъ)А ро! уитегаге сагпег а гиоге ротеит 3' — «5' ехопис1«аге йат |3 -200-Ео!д тпоге асттче |Ьап |Ье К!епоъч Егарпеит аид |л йе гигугпг оЕ сЬогсе Еог тЫг тург оЕ геасдоп. .....Етрттртгои 3 лтртгрттрттрттрттр 5' 3.... хт еъ атттрв ГЕСъ)КЕ 9-7 Г!11[и«-[и ттесеххед 3' Теггп1п1 оЕ Ой)А Гга гпептх Отдп К!епоън О(ъ(А Ро| гпегаье К(еиоъч тгартиеит ТЬе 3' тегит(п! Вепегатед Ьу д!Вегт!оп чдй гехтг)ст)оп епдопис|еахех птау Ье |аЬе|ед «3)иВ |Ье К1епои ЕгаПгпепт о( 0)ъ|А ро|угпегахе | тп (Ье ргехепсе о( ди|ТР5 апд МВг+.
3' ... .....тгрттрттртгртгртт 3 .....ттрттрттрттрттрттр 5 ТЬе гподе1, и ЫсЬ 13 Ьахед оп (Ье сгухтаПодгарЫс 3|гостите оЕ ЕЬе согпр!ех Ьетъчееп тЬе К!епоъч ЕгаВгпепт апд дир[ех 0МА (Веехе е1 а|. 1993а), 5Ьоъчх а ргорохет| аггапВептепт о( 0Ь|А Ьоипд а| 1Ье асПче «|тех от' |Ье ро|угиегахе дог«а|и (Р) апд тЬе ехопис1еахе дог«а|и (Е). ТЬе ропдоп о( тЬе 0|ъ|А оЬаегнед |и тЬе сгухта| аттис(иге В )пд)сатед [п 3РПд Ыас$с, апс$ йе рогтюп йа1 $5 птот$е1ед $5 3Ьоип |и оийпе; 19-20 Ьр оЕ 0(ъ|А (птегаст ъчИЬ |Ье К1епоъч епхугпе (Ко!осЬена ет а|. 1989).
ТЬе тептр$ате 3|таит|, ъчЫсЫ3 Ьепт а1 ап апд[е оŠ— 80, Ьтпдх ти тЬе ро|угпегахе с[е(т апд 13 Ьахе ра|гед то тЬе ргииег. ТЬе 3 епд о( |Ье ригпег Пех пеаг |Ье йча$епт тиета| юпх |Ьат аге ЬеПечед то Ье 1гирогтапт !п йе ро1уптегаге геастюп (Ро1ех)су ет а$. 1992). ТЬе рЬух|са| херагадоп оЕ тЬе асдне 3[тех Еог 1Ье ро|угпегахе апд ехопис)еахе догпа|пх Ьу 30 А сгеатех ргоЫегпх о( хъч)тсЫпВ |Ье рпгиег 3' теггп(п«3 (гоги опе 3[те то апойег. ТЬе гподе1 5Ьои и тп тЬе Е(доге доех пот геаПу го|не тЬ|5 ргоЫегп Ьыт итеге|у аххогиех йат (Ье цгочдпд пахсепт 5|гапд 3Ь«тт!ег Ьеичееп |Ье асПче 3)теа о( йе ехопис|еахе апд ро!уптегахе дотиатпх.
ТЬе с|упаписх оЕ |Ье ра|Ьъчау о( йе ро|угиегахе геасдоп Ьаче Ьееп е1«сЫа1ед тп Вгеат детаП: Пате сопхтап|3 Ьаче Ьееп гпеахогед Еог еасЬ о( |Ье тптПнЫ«а! 51ерх |п 1Ье райъчау (КосЬ|а е1 а|. 1988; РР1ех[су ет а1. 1990, 1992; ОаЫЬегП апд Веп1сочк 1991). Сыггепт пют$е15 3««Вехт |Ьат |Ье сата!Кдс атер — а пис|еорЫ!к аттас[с оп |Ье а-рЬохрЬате оЕ |Ье дйТР Ьу тЬе 3'-Ьудгоху! ат тЬе теггп|п«5 оЕ йе рг«иег — ь (Ье гехи!т о( а соп(оипатюпа! сЬапВе |и йе епхугпе саохед Ьу Ь~пд)пд о( 0(ъ|А апд дЬ|ТР (ОаЫЬегц апд Веп[соч)с 1991). ГоПочипВ Еоггиатюп оЕ йе рЬохрЬод)ехтег Ьопд, |Ье епхугпе ыпдегдоех а хесопс$ соптоггиатюпа| сЬаиВе ЬеЕоге ге!еахе о( ругорЬохрЬате.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
