Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 60
Текст из файла (страница 60)
!973; Вег1спег апс1 РоПс !977) тх а гарЫ гпесЬос) со 1аЬе1 сЬе 5' септип) оЕ Е))ч/А Ьесаиье, ип!рхе йе Еогччагс$ геасПоп, )с с)оеь пос тес)и!ге сЬас сЬе Е)НА Ъе с)ерЬоьрЬогу1асес1. ТЬе геасПоп )ь сагпес1 оис ас а ьПВЬс!у асЫЫ РН !6.4) ш ипЫаго1е ЬнЕЕегь со ьсипн1асе с)ерЬоьрЬогу1аПоп Ьу йе епгуше (Вег)снег апс) РоПс 1977). Весанье йе оргнпа1 К ча1иеь Еог йе ехсЬаи8е геастюп ЕЗОО рм Еог АЕ)Р апс) !О рм Еог АТР) аге Ь|ВЬег йап сап Ье геай1у асЬ)ечес) ш сЬе сеьс сиЬе, йе еЕЕтс)енсу оЕ 1аЬе!ш8 Ьагс)!у ечет ехсеес!ь 3096. Носчечег, сЬе еЕПс)епсу оЕ йе ехсЬап8е геасПои тх Вгеас!у нпргочес1 Ьу шс1ийп8 ьреппЫше апс1 ро!уесЬу1епе 8!усо! /и сЬе геастюп иихсиге (Ы!еЬан8 ес а1.
1976; Нагпьои апс! Ъпнпеппап !986а). Рог абай!)опа! ш/опиасюп оп!аЪеПп8 Е))ч/А чч)сЬ Т4 ро1упис1еотЫе )с)пахе, р1еаье ьее йе рапе! оп тАВЕЕ!ЫС ТНЕ 5' ТЕВМ!Ы! ОГ 0)с)А Ч/!ТН ВАСТЕВ!ОРНАСЕ Т4 РОЕТ)с)ОСЕЕОТ!ОЕ К!ХА5Е тп йе )пггос!исг!оп Со Рготосо1 14. Рог а янпшагу оЕ шесЬос!ь наес! со 1аЬе1 сЬе сегииш оЕ Е)ХА, р1еаье ьее ТаЫе 9-2 си Ргососо! !О. МАТБс1Аей САНТ!О)с): Р!еаье ьее Аррепйх 12 Сог арргорпате Ьапс!!!па оЕ гпасепа!ь таг1сес/ чч!1Ь <!>. ВоЕЕег5 апг! Бо!иТ!ог)5 Р1еаье ьее Аррепйх 7 Еог сотропеп!ь оЕ атос!с ьо!нт!опь, Ьн//егь, апс/ геадепсь. ОПнте ьтосЬ ьо1ннопь Со СЬе арргорпате сопсептганопь.
АОР /7 гиМ) Осььо)ее ьо)та адеоояое сврЬоьрЬасе со ьсеп)е 28 сом Тпь-С! !рН 8.0). 5соге ьгоав а!крсоп /-20 01) от Йе ьо!оетоп ат — 20 С. Агпгпоп/игл асегате /70 М) Ор6ооа!, р!еаье ьее 5сер 3. АТР /70 птМ) Евььо!че ьо))с) ас!епояое спрЬоьрЬасе )и ьсеп1е 25 гом Тпь-С! !рн 8.0). 5соге ьспа!! а!)с)ось !-20 р!) о/ йе ьо!нтсоп аС вЂ” 20"С. ЕША /0.5 м, рН 8.0) Ейапо/ 9.73 !Ох Ет!с(ахо)е ЬиЕЕег 500 шм нпЫахо!е С! (РН Ех4) |80 шм МВС1, 50 гпм с1ссьгосЬгессо1 ! шм ьреппЫ!пе НС! ! шм ЕРТА (РН 8.0) Ро!уегЬу!еие е!усо! <1) (24чу сч)ч РЕС ОООО) )и Н О Епкугпе5 апд Войег5 Вассег(орЬаВе Т4 ро!уиис!еос(г)е (с!иаяе Сч!1йсуре ро!уппс|еосЫе Ыпаяе Ь а 5'-РЬоьрЬосгапь(егаье апс1 а 3'-РЬоьрЬасаье (Рересч ап8 СохыгеП| 1974; 5!гос)с!и ес а1.
|978). Ноччечег, гппсапс Еоппь оЕ сЬе епхупге (Сагпегоп ес а1. |978) аге сопнпегс!а1!у ачаааЪ|е (е.8., ВоеЬпп8ег МаппЬепп) сЬас |ас1с йе РЬоьрЬасаье аспчау Ъпс гесасп а Ос|!у Еппссюпа1 РЬоьрЬосгапя(егаяе. Ч'е гесопнпепс) йас сЬе пшсапс Сопп оЕ йе епхугпе Ье шеО Еог 5х|аЬе|сп8 счЬепечег роьяЫе; 20 пшсь оЕ йе епхугпе аге гедшгес) со саса1ухе ап ехсЬап8е геасс!оп сопсашсп8 |Π— 50 рпю!ея о(РЬоьрЬогу1асег) 5' сеппшс.
(х(ос1есс АссгЬ апг1 О!сеоппс!ео$Ые5 Р)ь)А (70-50 рто!ея оЕ 5 '-рИоьрЬогу!агег7 гегтст) Р1еаье ьее сЬе рапе1 оп САЕСС)! АТ!ХС ТНЕ АМО())ь(Т ОЕ 5 ' Е)ч)05 1)ь( А РЫА 5АМРЕЕ ш Ргососо! |3. Каг||оасбсге СогпроппгЬ. !у-ь~р!АТР (70 тС!Ет), яр. асг. 3000 — 7000 С!7тто!е) <! > То ппппп!хе ргоЫешь сапяес1 Ьу гайо1уяь оЕ сЬе ргеспгюг апс) сЬе ргоЪе, гс ы Ьея, гчЬепечег роысЫе, со ргераге гайо!аЪе!еО ргоЬеь оп сЬе с)ау йе 1ягр|г)ХТР гнпчеь сп сЬе 1аЬогасогу.
йрес1а! ЕЕ1сссргпеп1 Е!ди!сЕ ьстВПаг!ои яресггогпегег, сараЫе оЕ диаиЬЕутВ ьгр Ьу Сегеи)соч гаейапои 5ерЬас)ех С-50 арии со(ити, еди()гЬгасег7 и ТЕ (рН 7.6) ог 5ерЬаг)ех С-50 со!ити (7 гпО, еди|!(Ьгагес( |и ТЕ (рН 7.6) Вой орпопа1, р|еаье яее 5сер 3. МЕТНО0 Со 40 р| |О и! ! р! М|х сЬе геацепся Вепс1у Ьу сарр|пВ я|с)е оЕ спЬе, апс) шснЪасе сЬе геассюп Еог 30 ппписея а 37'С. ТЬе сопсепсгапоп о( АРР ас сЬе Ье8!ппй8 оЕ сЬе геассюп Ь !Ос-Ео18 ЫВЬег сЬап йас оЕ АТР.
9.74 СЬаргег 9г Ргерагагсоп о1 йаг(со|обе!ег( 73|чА апг( Л)сЕА РгоЬея 7. Мсх сЬе Е011осч|па геааепся сп а т|сгоЕнае снЬе РНА чай 5' сеппша! РЬоьрЬасеь 10х ппЫахо!е ЬпЕЕег ! гпм АРР 50 пМ АТР |О гпСУгп! 17-пр|АТР (ьр. асс, 3000 — 7000 СВпнпо|е) НО 249ч (сч(ч) РЕС ЬассегюрЬа8е Т4 ро!уппс1еосЫе Ыпаяе (20 пшп) т гЬе огг(ег е!чеп: |Π— 50 ргпо!еь 5 р! 5 р! 20 — |00 рспо1еь 9.76 СЬартет 9| РтератаНоп о! йат(!о!аде!ет( Р)ъ7А апт( ВХА РтоЬев 1ЧО(ъ)сзАЕ)1ОАСТ!ЧЕ ЕАВЕЕ$МС ОГ )ъ)Е)СЕЕ!С АС$06 Ме|Ьо6з Пече!оре6 (п сЬе 1900з со Песесс апд шеазиге геаззос|а6оп Ьесъчееп сошр!ешепсагу зсгапбз от" пис!е1с асЫз!ед ап епбге 8епега6оп о( пю!еси1аг Ыо1о8)зсз со ге1у ехс!ияче!у оп тайоасс|че Ьосорез— изиаПу '|Р— со десесс ЬуЬгЫ!га6оп Ьеьчееп !аЬе1е|! Ргоьез ап6 саг8ес зес)иепсез. ТЬе ргососо1 пюзс (аш61аг со 1пчезс)8асогз собау 'спчо!чез сЬе десес6оп от" саг8ес пис1ек асЫз ипспоЬ~!ге|1 оп п|стосеПи!озе ог пу1оп |пеп|Ьгапез.
ТЫз шесьод Пезсепдз гтош сЬе ъчог1| от Ьсу8аат6 ап6 НаП (19|13, 1964), ъчЬо счете сЬе 6гзс со ипшоЫ!Ье $3(ъ(А оп пьгосеПи1озе зьеесзс $3епьагдс (19оо) апд сЕППезр(е ап6 5р(е8е!гпап (19||5), ъчЬо |$есессе|1 зисЬ Пхенц пис1ек аскЬ ъч(сЬ гайоасьче ргоЬез; ап|1 5ошЬегп (1975), ъчьо дече1оре6 ше|Ь- осЬ со де!ест саг8ес зеъ)иепсез ш рори!асюпз ог пис!е(с асЫ шо!еси1ез |Ьас Ьаб Ьееп зерагасе6 ассогйп8 со яге Ьу Пе1 е!ессгорьогеяз.
Айег ЬуЬгЫ|га6оп, |Ье $3 рагбс1ез еш!ссе6 Ьу гайоасьче ргоЬез |чете гпеазигед апд !оса1Ьей Ьу Пс)и(6 зсш6Пасюп соипьп8, аисогайо8гарЬу, ог гпоге гесеп|1у, РЬозрЬог(ша8!п8. ТЬиз, тот 30 уеагз, ЬуЬпйга6оп ог пис1е(с асЫз ап6 га6!васс!ч(су |чете с1озе1у |псегсъчшей гпесЬо|Ь ъчеге |1еы8пе|! ъч!|Ь гайоасс(ч!су |п пнп|$, ап|$1аЬогасогу ехрегьпепь |чете зсЬе|1и1е|$ вгони|1 сЬе ге8и1аг деПчегу о( зсапйп8 ог|$егз ог' гайо1аЬе1е|1 соспроип|Ь.!п сЬЬ ъчау, Ьо|Ь |Ье абчапса8ез ап6 ипрейп|епсз от" гайоасбче Ьосорез Ьесав|е шз6сисюпаПге6 апд рагс от' |Ье си!шге ос п|о!еси1аг с!ошп8.
А!сьоиПЬ в|Р-!аЬе1е|$ ргоЬез сап Песесс пнписе |)иапси|ез ог' шнпоЬ|!|ге|1 саг8ес Рсъ|А (<! Р8), йеу ыбег ггош а зЬогс Ьа!г"-П(е (14.3 |1ауз) ап|$ сЬе |паЬ|1|су со Ье ме|$ Сот Ь|8Ь-гезо1шюв )ша8(п8. РигсЬенпоге, ъчЬеп ые|! ш !аг8е ъ)иапс(су аз ог|ЬорЬозрЬасе, 'гр пшзс Ье Ьап|Пе|$ ш зрес|аПу дея8пес$ Ьосоре 1аЬогасопез. ТЬе ехрозиге о( регзоппе1 со гайа6оп ггогп йе епег8е6с В рагск1ез ге!еаза Ьу Песау|п8 "Р |нау Ье я8шбсапс. Нос зигрпяп81у, сЬе апюипс от" рарегъчог(с ап6 еъ)и(ршепс тес)и(ге6 со огдег ап|$ пюшсог сЬе изе ап|1 йзроза1 ог" гайо!аЬе1е|$ п|асепа!з Ьаз )псгеазед я8ш6сап|1у очег йе уеатз со сЬе рошс ъчЬеге и Ьаз Ьесов|е а теа1 Ьитдеп.
1п асЫ(с!оп, йе РЬуяса( ап|1 роПс)са1 ййки16ез ш йе зсога8е ап6 |1Ь- роза1 ог'!оъч-1ече1 тайоасьче ъчазсе Ьаче Ьесоше я8шбсавс, апд йеу сопьпие со 8гоъч. ТЬе сопбиепсе ог" сЬезе |отсев Ьаз 1ед со а зеагсЬ Сот а1|етпа6че шесЬодз сЬас аге аз зепя6че, Ьш 1ея Ьагагдоы ап6 1еы соя1у йап тайосЬепнса! |есЬви!иез. 1п61тес! (ъ(оптат$1оасс)че Оесесс(оп Вузсепсз 1п сопчепсюпа1 гайо1аЬе1ш8, 6я|1е асошз аге яп|р1у ъчочеп шсо |Ье вагита! саЬпс от йе ргоЬе ш р)асе ог сЬеЬ поптайоасс|че Ьогпо!о8я 1п повгайоас6че гпесЬойз, а сЬешка! 8гоир ог сошроип6 пос воппаПу Соипд ш пис!ек асЫз Ь соп)и8асе6 со сЬе ргоЬе ч|а епгушаск, РЬососЬешка1, ог зупйеьс геас6опз (тот геч!еъчз, р1еазе зее Кг|с$|а 1992; Мапз6е16 ес а!.
1995). Айег ЬуЬпйгасюи со йе саг8ес пис)ек асЫ, сЬе шой(у!п8 8гоирз оп |Ье ргоЬе аге десессе6 Ьу ап арргорпасе шйсасог зузсеп|. ТЬе 6лс попгайоас6че п|ейо|Ь от" Песесс(оп Пече!оре6 ш йе ! 980з счете Ьазед оп |Ье !аЬеПп8 о(|Ье пис!е(с асЫ ргоЬе ъчПЬ йшсгорЬепо) (КеПег ес а1. 1988), Ьгошодеохуипйпе (Тга(псаг6 ес а!. 1983), ог Ь~осш (Ьап8ег ес а!. 1981; СЬи ап|1 От8е! 1985; Пе)все!6 ес а1. 1987). !с |чав |Ыз 1ассег сои|роип|$ |Ьас рточЫе|1 сЬе тпозс |$игаЫе апд зепяс|че от сьезе ртососур|с зузсешз. Айег ЬуЬпйгасюп, сЬе Ыосшу1асе6 ргоЬе |чав десессе6 ч|а шсегассюп ъч(сЬ зсгерсачЫш сЬас Ьаб Ьееп соп) и8асед со а герогсег епгуп|е — иыаПу а1(саПпе РЬозрьасазе. ТЬе тпев|- Ьгапе ъчаз |Ьеп ехрозе6 со ап епгуше сараЫе от" Ьубго!угш8 а со!от)8еп!с, Пиого8епк, от сЬевн!ивнпезсепс я|Ьзсгасе.
ТЬе зепя6чьу от сЫз зузсеи| депчез !тоси |Ье гарЫ епгуспа6с сопчелюп от" сЬе зиьзсгасе со а ргобисс сЬас Ь со!оге|1 ог еписз ляЫе ог ()Ч 68)и ас а зрес|6с ъчаче! еп8|Ь. ТЬе йяпЬшюп ап|1 шсепясу от |Ье ргойкс соггезроп|$ со сЬе зраба) йзспЬи6оп апд сопсепсгас|оп ог саг8ес зес)иепсез оп |Ье шешЬгапе.
Весаизе йе герогсег епгуп|е Ь пос соп) и8асед йгес|1у со сЬе ргоЬе Ьис Ь Пп!|ед со П |Ьгои8Ь а ЬгЫ8е (ш й|з сазе, зсгерса|6йп-Ьюс|п), сЬ|з суре оС попгад!васс(че |$есесьоп ь 1|поъчп аз ап )пйтест зузсесп. Мапу ог" сЬе Ысз шаг$|есе|! со|)ау Ьу сопннегс|а! согпрашез ге1у оп шйгесс десессюп зузсеви йас аге е1аЬ- огасюпз ог" сЬе от!8(па! Ь|обп:ягерсачЫ|п:герогсег епгуше гпе|Ьой Мозг ог сЬезе Ысз изе Ыо6пу1асед пис!ео|Ыез (е.8., Ыо-11-ПЕТР от Ыо-7-6()ТР) аз 1аЬе!ш8 а8епь. ТЬе Ьюьп шо(есу Ь соп)и8ас|Ы со |Ье пис!еосЫе ч|а а зрасег 4 — 16 сагЬоп а|огиз 1оп8, ъчЫсЬ гебисез йе розяЬ|16у ог зсепс Ь)пдгапсе Пит(п8 зупйеяз ап|1 Песессюп оъ Ь|осшу!асе|$ пис1е|с асЫ ргоЬез.
!)п|$ег шозс сьсшпзсапсез, Ь|о6пу1асе|1 ргоьез ъчог1| чету ъчеП ап6 аге Стее 6 огп ргоЫешз. Ноъчечег Ьесаизе Ьюс|п (чнаинп Н) Ь а нас)шсоы сопзс|сиепс ог' тпавипаПап сЬзиез ап6 Ьесаые Ьюс(пу!асеб ртоЬез сеид со зс!с1| до88е|Пу со сегсаш |урез ог пу!оп гпешЬгавез, ЫПЬ 1ече1з от" Ьас)|8|оип6 сап оссиг дипп8 ш яси, погйегп, апд 5оисЬегп ЬуЬпйгасюпз. ТЬезе йрбси16ез сап Ье ачоЫед Ьу 1аЬе1ш8 ртоЬез ъчПЬ а сошроипд йас (1) Ьаз а 1оъч а6)п(су сот шеп|- 9.78 Отаргег 9: Ртерага6оп оу' Яаг)то!аЬе!ет) РИА ачт) ЯМА РгоЬея сеппша! сгапк(егаяе.
1аЬе)ед К)я)А сап Ье яупсЬея)ге6 ш чита тп сгапяспрссоп геас6опк саса)утес) Ьу 5Р6, ТЗ, ог Т7 КХА ро!утпегаяек. ТЬе!аЬе1 ш аП оЕ сЬеяе геас6опк Ь ргочЫед ак пюйбес1 игЫтпе пЬо- ог Пеохуг)ЬоспрЬоярЬасея сЬас аге сьед тп р!асе оЕ (УТР ог дТТР тп йе 1аЬе1сп8 геассюп. Рог птокс епгуптас)с )аЬеПи8 геас6опя, йе киЬясгасек оЕ сЬоке аге игЫше сгтрЬоярЬасея саггутп8 асЫись ас сЬе — 11 ог — 12 роябоп (е.8., Ьюьп-))-)ЗТР, Р!С-)1-6))ТР, ог Пиогексе)п-!2-с)()ТР).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
