Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 61
Текст из файла (страница 61)
Носчечег, Ьюьп- апд Р!С-)6- 6РТР аге тЬе рте(еперь юЬясгасек Еог 1аЬе)тп8 оЕ 3' сегпипт сч)сЬ сеппша1 сгапяЕегаке. Рог гесепс геч)есчя оЕ 1аЬеПп8 ргосес)игея, р1еаке яее Иа)е апс) РеПсОгто (1992), Кея!ег ( ! 992, ! 994), Рипп8 ()993), апс) Но!йе ес а1. (1995). Ву сопсгакс со 1аЪе1ш8 ичсЬ )Ягр)ХТРк ог !"Р)ЙХТРя, кчЬеге сЬе ербссепсу оЕ шсогрогасюп сап Ье тошсогес) апс1 сЬе крее)6с асьчиу оЕ йе 6па1 ргоЬе еая1у са1си1асей йеге ь по ятпр1е ог гарЫ тесЬод со пюпиог йе рго8геяк оЕ сЬе попЬосор)с 1аЬе!тп8 геас6опя ог со са1си)асе йе)г еЕПтс)епсу.
1п сЬе саке оЕ Ьто6п- апс) Р)б-)аЬе)ес) ргоЬея, сЬе птапи(асшгегя гесопппепс) сЬат по пюге йап 30 — 35'Уо оЕ йе сЬуттийпе гея)6иея ти сЬе ргоЬе Ье гер)асей Ьу )аЬе)е6 ипйпе геыбиея (р1еаке кее СеЬеуеЬи ет а1. 1987; ЬапгП!о ) 990). РПВЬег 1ече)к оЕ гер1асетпепс сатье а гедис6оп ш сЬе яепястчтсу чбсЬ счЬ)сЬ саг8ес яес)иепсея сап Ье Песессей ргеяшпаЫу Ьесатье оЕ сЬе ясепс Ь)пбгапсе Ьепчееп с1ояе1у ярасе6 атЫись дипп8 сЬе ЬуЬпйгаьоп ксер.
Ноъчечег, Ьесаике оЕ а )ас)с оЕ ап ебесьче тпопиопп8 куясет, яупсЬекь оЕ попгайоасбче ргоЬея гетпа)пя ап а6 Ьос аЕЕа)г. )с Ь йегеЕоге Ьекс со саггу ош а РПот геассюп ш тчЬссЬ катр!ек аге ит)йс)гаиш ас тпсегча1я дипп8 сЬе соигяе оЕ сЬе )аЬе)тп8 геас6оп. ТЬе 1аЬе1ес) ргос)исса аге сеясес) ш Пос ог к1ос Ыоь а8атпкс й1шсопк оЕ сЬе саг8ес РХА. 1.аг8е-кса)е 1аЬе1ш8 геасьопк сап сЬеп Ье с$ея)Пиес) апс! сагпе6 оис сч)сЬ югпе сопЕЫепсе сЬас йе!аЬе1ес1 ргос)исс чАП Ьаче сЬе тес)шгес) кепябчну. РЬоЕо1аЬе11пд Вюсш аис) Р!б сап Ье ассасЬес) со пис1ек астсЬ ш РЬососЬегпка1 геассюпк.
1п ЬосЬ саяек, сЬе 1аЬе! ь Пп)себ со а шсгорЬепу1 агЫо 8гоир сЬас Ь сопчегсед Ьу тггайасюп тч) сЬ )Лт ог ксгоп8 ЫяЫе ПВЫ со а ЫВЫу геасбче иЬгепе сЬас сап Еопп ксаЫе сача!еис )тп)са8ея со РЫА апс) КХА (Рогксег ес а!. 1985; НаЬт!т ес а1. 1987). РЬососЬеписа1 1аЬе1ш8 Ь Еаг!еы еЕ6с)епс сЬап епгуптаск 1аЬе)тп8: Ас Ьекс, оп1у 1 Ьаяе ш 150 Ьесотпек пюйбес), апс) сЬе гею16п8 ргоЬе Ь пос росепс епои8Ь со с)есесс яп8!е-сору яес)иепсея ш 5ошЬегп апа1укея оЕ птапнпаПап Р)я)А.
РЬосоасьчасаЫе Ьто6п (РЬосоЬюьп) Ь юрр1тед Ъу Ь)Ее ТесЬпо)о8)ея. Ре)ес()оп оЕ Мопгат))оас()че)у ЬаЬе)ет) РгоЬея аЕЕег НуЬг)т))га()оп Тко ксерк аге гет)и)ге6 со Песесс ргоЬея )аЬе)е6 чбй Ьтосш, Пиогексеш, ог Р1С гекЫиек айег ЬуЬпйгасюп со 5ошЬегп апс) погйегп Ыоь. ТЬе тпетЬгаие Ь 6гя ехрояед со а купйеск соп)и8асе сопяяссп8 оЕ сЬе герогсег епгуте апс) а 68апс1 йас Ь)псЬ ьВЬс)у апс! ичсЬ ЫВЬ ярестбстсу со сЬе )аЬе)ш8 спотесу. 1п сЬе саяе оЕ Ьсоьп, гиок) оЕ йе с)есессюп ргосебигея ехр!ои сЬе ЫВЬ-аЕ6шсу геас6оп Ьеьчееп Ьюбп ап6 епгутесоп)и8асес) ягерсачЫтп.
А1сегпа6че ргосе6игея ге)у оп крессбс пюпос!опа1 ог ро1ус1опа! аи6Ьто6п апстЬойек. Ниогеясешасед ог й8оЫ8епасед ргоЬек ате гошше1у де)естес) Ьу шсегас6оп тчЬЬ ярестбс епгуптесои) и8асес) ап6Ьойек. ТЬе герогсег епгутпе ь сЬеп акяауес) ъчЬЬ со1оптпесгк, Пиого8ешс, ог сЬепи1шптпеясепс киЬксгасек. 1п со!остапе)с)с аяяауя (е.8., р)саке яее Ьеагу ес а1.
1983; ))гс)еа ес а). ) 988; РПЬп ес а1. 1995), а сотпЬтпа6оп оЕ стчо с)уея Ь икес) со с)есесс аПсаПпе РЬокрЬасаке сЬас Ьак Ьееп сарсиге6 Ьу )аЬе)ед !туЪг)йя. ТЬе епгупсе саса1угея йе гепюча1 оЕ йе РЬоярЬасе Вгоир Егогп ВС)Р (5-Ьготпо-4-сЫого-3-)пбо)у) РЬоярЬасе; Ногичсг ес а1.
1966), Вепегасш8 а рго6исс йас охтйгея апд йтепгек со йЬготпойсЫого )пй8о. ТЬе гедис)п8 ес)шча)епся ргос$исе6 6ипп8 сЬе йптепга6оп геасьоп гебисе МВТ (пигоЫие сесгаго1шпи МсСас)еу 1970) со ап шю1иЫе ригр1е т)уе, йЕоппагап, сЬас Ьесоптек чтяЫе ас ясея счЬеге сЬе )аЬе)е6 ргоЬе Ьак ЬуЬгЫиес) со ик саг8ес (беату ес а1. )983; СЬап ес а1.
)985). ТЬе геят)ь сап Ье апа)уге6 ъчкиаПу апс) гесогде6 оп сопчеп6опа! РЬосо8гарЫс 6!пт. Со)опптеспс с)есессюп счог)ск слеП сч)сЬ шсгосе166оке апс) Р'ягРР тетЪгапек, Ьш 1еы ъчеП чбй пу)оп апс1 сЬаг8е6 пу1оп. РпЕогсипасе)у, ечеп тчЬеп кчог)6п8 ас сЬетг Ьея, со1огипеспс тесЬосЬ аге ьчо ог тоге огбегк оЕ тпа8шстйе 1ея яепясье сЬап ойег попгайоасс)че с)есес6оп птесЬой, Еог ехаптр1е, сЬеии1шшиексепсе (Вгопксесп ес а). ) 989а; Вес1с апс) Копет 1990; Кег1йоЕ 1992; Кпс1са 1992).
Ресесьоп оЕ яп8!е-сору яес)иепсея ш тапипаПап Вепоспек Ь сЬегеЕоге Ьаге!у мчйш сЬе геасЬ о( со1огипеспс акяаук (Рипп8 1993). А 6па1 йкабчапса8е Ь сЬас сЬе со)огес) ргестрПасек аге сИ6си1с со гетпоче Егот псептЬгапек, таЫп8 гергоЬтп8 й16си1с ог ипрокяЫе. 1п яогпе саяек, сЬе ргосейигея Еиуогтасзоп Рапе!л 9.79 изей со япр |Ье ргес|РПасеа (100ч~о Еоппаппйе ас 50 — 80'С) еВЬег д(ало!че сЬе гпегпЬгапе ог Вгеаду !псгеаае йа Ега8П!су. Пиоге|гепс аыауа Еог аП|а1ше РЬоарЬасаае гпа1|е |ье оЕ Н(ч)РР (2-Ьу|1гоху-3-парЫЬок асЫ 2'-РЬепу1аш1Ые РЬоарЬасез Ка8(уаша ес а1. 1992). АЕсег йерЬоарЬогу!ас!оп, Н)4РР Вепегасеа а Пиогеаеепс ргес(р|- сасе оп гпешЬ|апеа ЕЬас сап Ье ехеиед Ьу |ггагПаиоп ас 290 пгп Его|п а сгапяПшпшасог.
ЫВЬс еппиед ас 509 п|п сап Ье сарсшей Ьу ССЕз сашегаа ог оп Ро1агоЫ 61п| сып8 ЕЬе лампе РЬосо8гарЬюе лес-ир (61сегя есс.) аа Еог сопчеп6опа1 есЬЫпип-ЬгошЫе-асаше|$8е!я Р!иогеаеепс амау| ияп8 Н)4РР аге гпоге аепя6че |Пап со!опгпеспе пзесЬода апд аге еараЫе оЕ десес6п8 яп81е-сору аез)иепсеа |и 5ошЬегп Ыоь оЕ гпашп|аПап 8епоппе Е3$|)А зчЬеп |Ье |пегпЬгапе ыпсиЬасе|1 |ч|сЬ аиЬ|сгасе Еог 2 — 10 Ьоига (Р(агпапд(а ес а1.
1993; Но!с(се ес а1. 1995). ТЬе Пиогеаеепс ргее|РПасе сап Ье еая!у гегпочед Ьу зча|Ып8 ш есЬапо1 апд сЬе П!сага |ьед сог |ечега! гпоге гоипда оЕ ЬуЬгЫ|хасюп ЬеЕоге сЬе я8па1-со-поье гаио шсгеааеа со ипассерсаЫе )ече!я Озепзз!ипзззпезееисе В |Ье Еахсехс ап|1 пояс аепя6че аыау со йесеес Р)|(А 1аЬе!ей чдсЬ Ью6п, Пиогея сеш, ог ИСп |йа соп)и8асеа сопсашш8 ЬогаегадьЬ регохЫаае (НПР) ог а1)са!ше РЬоарЬасаае (5. Вес)с ес а1. 1989; Вгопасе!и ес а1. 1989Ь,с; 5еЬаар ес а1. 1989). ТЬе НКР-1ипппо1 йесеесюп ау|се|п (ТЬогре апй Кг(е)са 198сз) ь шаг)се!ей ехс1ияче!у Ьу Агпег|Ьаш.
Н)СР сага!ухе| сЬе охЫабоп оЕ 1шп|по! (п |Ье ргеаепсе оЕ Ьудго8еп регохЫе, Вепегаип8 а ЫВЬ!у геас6че епдорегохЫе |Пас епдь ПВЬс ас 425 п|п дипп8 Па дееопзроя6оп со (ь Вгоип|1 асиле. А зчЫе гап8е оЕ соп|роипйя |пс!игПп8 ЬепгосЫасю1ея РЬепо18 парЬ- сЬо!я апд аго|паск апипея сап я8шПсапс!у епЬапсе сЬе агпоипс оЕ ПВЫ Вепегасей дипп8 сЬе геассюп (ТЬогре ап|$ Кпе1|а 198|1; РоПаг|1-Кш8Ы ес а1. 1990; Кпс1|а ап|$ В 1995).
ТЬЬ я8па! ап|РППсасюп, зчЬ(еЬ сап Ье аа гпиеЬ аа 1000-Ео!д ( зч'Ь(сеЬеад ес а!. 1983; Нод8|оп апй )опеа 1989), |псгеааеа |Ье аепя6ч(су оЕ сЬе НПР-1ипппо1 ауасегп со сЬе рошс зчЬеге Ь сап |$есесс яп81е-сору 8епеа ш 5ои|Ьегп Ыоса оЕ пзапзгпаПап $3ХА. ЫВЫ ь рго|$исе|1 ас а гарЫ гасе Еог |Ье Пгас Ее|ч гп)пиле| оЕ сЬе геасс|оп, Ьш сЬегеассег |$есПпеа апй ь по 1оп8ег |$есеесаЫе айег 1 — 2 Ьошя !)п|1ег Ыеа1 сопеП6опя -1 р8 (5 х 10 'з м) оЕ саг8ес Ез)4А сап Ье |1есессей оп 5оисЬегп Ыоса айег 1 Ьоиг оЕ ехроаиге оп 8гау-сшсей, Ыие-ППЬс-аепяс|че Х-гау 61гп ог а соо1ей ССЕ| сагпега (Вее1| ап|1 Кояег 1990; Е)иггапс ес а!.
1990; Кем!ег 1992). ТЬе ргоЬеа сап Ье |спрред Егоп| П!сега Ьу Ьеа6п8 со 80'С (Е)иЬ!са)су ес а1. 1992). Мапу сопипеге|а! ялррПега (р1еаае аее Рагсу ап|$ бегаЬеу 1995) аеП йесессюп ауасегпа со десесс аП|а1|пе РЬо|РЬасаае зчПЬ дюхесапе-Ьааед сЬепп1ишшеасепс аиЬ|сгасеа аиеЬ аа АМРРЕз апз! Еиш(8еп-РР)3 ап|$ ЕЬесг гпоге гесепс депча6чеа С5РР ап|$ СРР-Всиг, зчЬ(еЬ ь сЬе шоас аепя6че сЬепи1ишшеаеепс |иЬ- а!гасе по|ч ачадаЫе (Ейзчагйа ес а1. 1994; Но!с)се ес а!. 1994). СРР-5саг д(ЕЕега Егогп АМРРР ш саггу|п8 Ьа1о8еп ылЬ|с(сиепса ас сЬе 5 роя6опа ш на а|$ап|апсу1 апй РЬепу! ппВя ТЬ(а сшррге|ьеа сЬе сепдепсу оЕ сЬе 1,2-дюхесапе со а88ге8асе апй гедисеа Ьае)|8гоипй самед Ьу сЬеппа1 йе8гада6оп (Вгопасе(п ес а1. 1991).
С1еача8е оЕ 6|е р1юарЬасе еасег оЕ С$3Р-5!а | Ьу аП|аПпе РЬоарЬасаае дгаас|еаПу гедиееа сЬе сЬеппа( асаЬ|!ку оЕ сЬе гПохесапе пп8, зчЬьсЬ сопле|)иепс!у йесоп|роаеа |чпсЬ ешЬяоп оЕ ПВЫ ас 4б5 п|п. $4у1оп пкшЬгапех (е|сЬег ап|РЬосепе ог рояиче1у сЬаг8ей) асгоп81у епЬапсе сЬе я8па! (Т|хагд ес а!. 1990) Ьу ргочЫ|п8 Ьудгс|РЬоЬ(с йошаша шсо зчЬ(еЬ сЬе йерЬоар1югу!асед |псеппееПасе ргодиеей |и сЬе еЬепи!ишшеаеепс геассюп Ьесошеа аез)иеасегед. ТЬ(а асаЬ|Пхеа |Ье |псеппегПасе апй гедисеа зь поп1иш)пеаеепс десопзрояиоп. 1п сопзез)иепее, сЬе шсепапу оЕ |Ье ПВЬ| еппие|$ Егоп| сЬе ехепе|$ гПохесапе апюп Ье8(па аа а 8(озч ЕЬас шегеааеа |и |псепясу Еог аечега1 шшисеа апд сЬеп рег|Ьь Еог аечега1 Ьоига (Магбп апд Вгопасе)п 1994). ТЬе ЬудгорЬоЬ|е шсегаесюпа Ьесзчееп сЬе пу!оп апд сЬе апюп а1ао сипае а "Ыие хЬ(Ес'* оЕ -1О пп| (п |Ье еппье|$1|8Ы, |.е., Егогп 477 пгп со 466 пгп (Вес1| ап|$ Коьсег 1990; Вгопяеш 1990).
!п шоя ехредшепса1 |Пшасзопя гЬе ехсепйей )дпеск| оЕ сЬепи1шпше|еепее оп пу1оп Ез!сег| аге адчапса8еоиа Ьесаиае |Ьеу аПозч сипе со сарплге ппа8еа ас аечега1 ехроаигея Ноъчечег, сЬе а1озч !Ппеис| гпау Ье оЕ ргасска! ппрояапсе |чЬеп аПсаПпе-РЬоарЬасаае-сг(88егей еЬепи!ишшеасепсе В иаед со десеес ехсгеше1у 1озч сопсепсгас!опа оЕ Р!4А, Ксз(А, ог ргосеш, Еог ехагпр1е, зчЬеп |Ье саг8ес Ьапй оп а 61сег ь ехрессей со еопсаш оп1у 10 '" гпо!ея 1п ялсЬ са|ея а Ьа!о8еп-аиЬас(сосед дег(час(че о( АМРР)3, Еог ехагпр)е, С5Р1Э, шау Ье а Ьеьег еЬоке.
ТЬе айгП|юп оЕ а еЫоппе асопз со сЬе 5 роябоп оЕ |Ье айашапсу1 8гоир ге|спаса (са (псегас6опа |чПЬ пу1оп 61|егя 391|Ь сЬ(а сопзроип|1, |Ье шпе со геасЬ |пах~пшп ППЬ| егпьяоп ыпаг)сед)у гейиеей ао сЬагчегу япаП г)иапс(с(еа оЕ саг8ес гпо1ееи!еа сап Ье |$есессе|$ гарЫ1у (е.8., р1еаае аее Магсш ес а(. 1991). ()пдег Ыеа1 сопгПсюпя аз 1пс1е аа 1 герсошо1е (10 " м) оЕаП|аПпе РЬоарЬасаае ог 1 х 10 '" пю1еа оЕ Ез)з(А сап Ье десессед (5сЬарр ес а1. 1989; Вес)с апд Коьсег 1990; Вгопасеш 1990; КпеКа 1992). 5исЬ аепясв пу шеапа |Пас а яп8!е-сору Вепе ш а 5оисЬегп Ыос оЕ |папипа!|ап Вепоппе $3$4А сап Ье йесеесес! а(сег сЬе пу1оп гпегпЬгапе Ьаа Ьееп ехроаед Еог -5 пиписеа со 8гау-с(псед, Ыие-ПВЬ|-лепя!(че Х-гау 61гп ог а 9.80 СЬаргег 9| Ргерата6оп о) Пад|о!аЬе!ет( РтчА апт) ЛХА РгоЬез соо1ей ССР сашега (Но!с(те ес а1.
1995). ТЬе ргоЪез сап Ье япрред Ьу 5096 ГогшашЫе ас 65 С (РиЫсз)су ес а1. 1992) аид сЬе иу1оп п|егпЬгапеъ сап |Ьеп Ье соей Гог зечега! ГигсЬег гоипдз оГ ЬуЬгЫЬасюп. Р!гесс )ъ(опгад!оас(1че Ре(есНоп Вузсепъз 1п й|з туре оГ йесессюп, пис1е|с асЫ ргоЬез аге!аЬе1ес1 йгесс!у ъчч|Ь Яиогезсепт |1уез юсЬ аз Яиогезсеш, Техаз гей, ог гЬойапипе (АПгаъча1 ес а1. 1986); ичй 1апйапЫе сЬе!асез (еигоршгп) (Тетпр1есоп ес а!. 1991; РаЫ6п ес а1.
1994); ъччсЬ асг!йпштп езсегз (Ые1зоп ес а!. 1992); ог ъчПЬ епхутиез, Гог ехагпр1е, аП|аПпе рЬозрЬасазе ДаЫопзЫ ес а). 1986) ог Ьогзегай|Ь регохЫазе (Пепе апй Кита 1984). ТЬе ргезепсе оГ зисЬ соча1ет|ду ассасЬей а|Ыись ь асьауей Ьу апу опе оГ а пшпЬег оГ сесЬп(т)иез, |пс1ийп8 со!агапе|ту, сЬепи1ши|пезсепсе, Ъ|о1ииипезсепсе, 6|пе-гею1чед Пиогогпесгу, ог епег8у става(ег/Пиогезсепсе т)иеттсЬ(и8. ОГ соигзе, йгесс йесессюп ше|ЬосЬ сап Ье сопчегсед со |пйгесс шейодз (Г ап епхупк-ап6Ьоду соп)и8асе зрес(Пс Гог сЬе а|Ыисс ь ачадаЫе.
Весагье П Гопиз |Ье Ьа|Ь оГ ашогпасей Р)4А зет!иепсш8 гпейо|Ь (5пи|Ь ес а1. ! 986; Апюг8е ес а). 1987; ргоЬег ес а!. 1987), йгест!аЬеПп8 оГ пис1ек асЫз ъчПЬ Яиогезсепс соп|роипсЬ Ьаз гечо1ииопЬе|1 пю!еси1аг Ью!о8у. А яп81е Пиогезсепс а|Ыисс рег Р)4А пю!еси1е ь зисдс|епс Гог детессюп Ьу аисоп|асе|1 РМА зет)иепсегз ъчЬеп |Ье РМА ь ш сЬе Ве1. ГнпЬеппоге, сЬе аЬ|! )су оГ АВ1-суре аисоп|асей зет)иепсетз со йъсппипасе ассигасе!у Ьепчееп д(ГГегеттс Яиогз я8шПез сЬас аП Гоиг зес)иепсш8 геассюпз сап Ье апа1ухед ш а яп81е 1апе оГ а Ве!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
