Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 62
Текст из файла (страница 62)
ТЬе яипшп8 зиссеь оГ йгесс 1аЬеПп8 |п ашотпасед Р)ъ)А зет)иепсш8 Ьаз, Ьоъчечег, пос зргеад со ойег агеаз оГ тпо!еси1аг с!оп|п8, ъчЬеге йгесс попгайоасс|че шейойз оГ йесес6ов аге гаге1у |пей. ТЫз ь Ьеса|ье: ° ТЬе сгайвопа1 гпе|ЬосЬ сье|1 Гог сЬе йгесс соп) и8аиоп оГ епхутпез зисЬ аз аП|а!ше рЬозрЬасазе гесрше сЬе ехсепяче иье оГ со1 шип сЬготпасо8гарЬу, ро1уасгу!ап|Ые Пе! е!ессгорЬогеяз, апйог НР|С со оЬсаш а риге ргойисс НаЫопзЫ ес а!. 1986; ()гдеа ес а1. 1988; Гаппаг ап|1 Сазсаиеда 199Ц.
Сошп|егс|а1 Ыь аге ачадаЫе Ьш аге ехрепяче ап|1 суркаПу у|е!с( ап пирите рго|1исс, )ъ)еъчег в|есЬосЬ оГ соп)и8а6оп (е.8., р1еазе зее Пеуез аий Сос1|егеП 1993) аге ягпр1ег Ьш зППЬ|!у 1еы еГГтс(епс. 'ъътЬасечет п|ейод ь гает!, а зерагасе соп)и8ас)оп зсер Ь гес)и)гед Гог еасЬ дтТГегепс ргоЬе. Опсе ассасЬе|1,!аг8е епхув|ез юсЬ аз аП|а!ше рЬозрЬасазе тпау тес)исе сЬе гасе оГ аппеа1ш8 оГ ргоЬез ап|1 и|ау Ье!аЫ!е ипдег йе сопйбопз сопчеп6опаПу |пей Гог аппеаПп8 оГ пис1ек ас|йя НуЬпйхасюп апд ъчазЫи8 пшзс йегеГоге Ье сагпей ош ас!оъч сетпрегасиге (гьиаПу <50 С) |п ат)иеоиз зо1чепсз, ()идет ъисЬ попзспи8епс сопй6опз, ЫПЬ Ьас1|8гоип|Ь аге ап шеъ паЫе ргоЫеп|.
Веса|ье оГ йе ргезевсе оГ ЬиПсу, сЬаг8ед аддись, ргоЬез йгесс!у 1аЬе!ед ъчпЬ епхутпез тпау Ь~пд попзрес|ПсаПу Ьш 68Ьс1у со сегсаш суре| оГ тпетпЬгапез. Рог ехашр!е, |Ье Ьас)|8гоипс( я8па1 Ггогп оП8опис1еобде ргоЬез йгесс)у соп)и8асед со аПсаПпе рЬозрЬасаъе ь сопзЫегаЫу Птеасег оп сЬаг8ед пу1оп сЬап оп пешга1 пу!оп тпегпЬгапез (Вепхш8ег ес а1. 1995). ° ТЬе йесессюп оГ яп8!е-сору зет)иепсез |п 5оисЬегп ЬуЬпйхаиоп оГ гпапипаПап РХАз Пез с1озе со |Ье 1иии оГ ъепябчПу оГ спапу йгесс тпе|Ьо|Ь ип! еь ареста!Ьес) ецшршеш ь ача|1аЫе (()гдеа ес а1. 1988). Ресессюп оГ Пиогезсеис а|Ыисся Гог ехатпр1е, гет)и)гез Ьгайа6п8 ъчч|Ь ППЬ| оГ опе ъчаче1еп8сЬ аи|1 аст)и(г(и8 даса ас апосЬег. ТЬе я8па) тп|ьс |Ьеп Ье епЬапсед е1ессгошсаПу апй зсогей й(8!саПу.
Весасье оГ сЬезе ргоЫепь, и Ь пос знгрпяп8 |Пас йгесс т)есесдоп сесЬи(т)иез Ьаче ГаПеп 6огп Гачог апй йас |пй!гесс десесдоп Ьаз Ьесоп|е йе дошшапс попгайоас6че тпейой со 1осасе саг8ет пис1е|с асЫз Гп 5оисЬегп, пог|Ьетп, апд |п яси ЬуЬпйхабопз. Ноъчечет, с!езр|се |Ьезе ргоЫепъз, ртоЬез й|тесс1у 1аЪс1сй ичсЬ аП|аПпе рЬозрЬасазе аге иоъч ргойисед сотп|пегс|аПу Гог Согепяс ап|1 расЬо!о8!са! апа!узез. ТЬе зепз)с(ч(су оГ сЬезе ргоЬез сап арргоасЬ сЬас оГ ьоторкаПу 1аЬе!ед ргоЬез (Р(шо-5(шоп(п ес а!. 1992; К!ечап ес а1. 1993; Вепхш8ег ес а1.
1995). ТЬе сье оГ зисЬ зсапйагйхед попЬосоркаПу 1аЬе1ед ргоЬез ь ехрессед со |псгеазе Пгеаду |п 1аЬогасопез шчо!чей, Гог ехатпр1е, ш сопзсгисип8 1аг8е пшпЬегз оГ РГ4А рго61ез ог ш д|а8пояп8 шГессюиз й|зеазез. То Въч!ГсЬ ог Кос Го Въч!ГсЬ Сгеас айчапсез |и попгайоасбче десес6оп шейо|Ь Ьаче Ьееп гпа|1е дипп8 |Ье 1азс |1еса|1е, 8(ыдп8 зс|епсЬь содау геа! сЬокез. ТЬе ас1чапса8ез с!аипед Гог попгайоасбче шесЬо|Ь шс1иде Газсег гези1ыпоге зсаЫе ргоЬез, апд 1оъчег со|с. Ноъчечег, шчез68асогз ъчьЬ!п8 со зъччссЬ (тоти гайоасс|че со попгайоас6че йесессюп ше|ЬосЬ ъччП Ье йе1и8ей ъчч|Ь айчегс)яи8 Гготп п|апи(ассшегз оГ Ыь апд ет)шргпепс апй |пип- Ев)огтаг)ов РавеЬ 9.81 дасед чдй с1а)шз оЕ зиревог!су Еог опе сотгпегсса1 ргодцсс ог апойег.
ТЬе зссеп66с! Негашге ь а1зо !агае апс1 Ьа!)су, чдсЬ спапу 1псопязсепс!ез. ТЬе гап)с)па оЕ сесЬпн)цез апд зиЬзсгасез асеогд)па со сЬе зепя6чссу оЕ десесс!оп !з шсопзЬсепс; сче)1-сопсго11ед согврапзопз оЕ еН)с)епсу аге гаге1у герояед, а1йои5Ь пюге оЕ сЫз счог)с ь Ьад1у пеес1ед. Арргохппасе1у 50 д)ЕЕегепс попгад!пасс)че десесс)оп )дь аге посч ачас!аЫе оп йе соштегс)а1 псаг1сес апд вюге аге арреаг)па а1! сЬе сипе. С1аипз оп сЬе зепз)ссч!су апд яапа!-со-по!зе гасюз спаде оп йесг ЬеЬа!Е зЬои1д Ье ч)есчед едсЬ саис!оп. Мапу оЕ сЬезе с!аппз аге Ьазед оп ехрепшепь сагпед ош ипдег 1деа1саес1 сопд)сюпз, и4исЬ саппос Ье 1штед)асе1у ог еая1у гергодисед Ьу шехрепепсес) 1пчезс!аасогз сп сЬе 1шг1у-Ьиг1у оЕ а счог)с)п5 )аЬогасогу. ргес!иепс1у, сЬе яапа!-со-поье га6о )з Ь15Ьег сЬап асЬ егсьед апс! сЬе пеорЬусе чд1! 11)се!у зсгиаа!е со гпассЬ йе зепя6чву оЕ псоге сгайсюпа! шесЬодз оЕ гад)о1аЬе11щ.
Мапу оЕ йе )дсз аге ехрепяче, апд попгайоас6че десесс)оп гпесЬодз оп!у Ьесоше созс-еЕЕесс)че аЕсег сЬеу Ьаче Ьееп орснпгеед Еог сЬе раяиш1аг саз)с ас Ьапс!. Рцг)пц сЬе раас ЗСс уеагз, а1спозс а11 оЕ сЬе ргоЫегпз чдй гад)о!аЬе1ед ргоЬез Ьаче Ьееп ипсочегед, апа1укед, апд, со а чесу!агае ехсепс, зо!чес1. ТЬе со11ес6че ъчеа1сЬ оЕ)спосч!едае аЬоис гад)пасс)че ргоЬез ь ЬосЬ чая апс) еая1у ассеьсЫе.
ТЬсз 1з пос уес йе сазе чдй попгад)пасс)че десес6оп зузсегпз, счЬеге йеге яшр!у Ьаз вос Ьеев шпе со Ьш!с! а Ьоду оЕ ге1саЫе ехрегппепса1 1оге. Хопгад)васс)че десессюп оЕ сагаес пис1е!с ассдз ь а1геаду счеЦ зшсес1 со!аЬогасопез сЬас изе а япа1! пшпЬег оЕ ргоЬез со саггу оис а !ипссед герегсове оЕ герессдче сезсз ипдег зсг)паев!!у сопсго11ед сопйвопз.
КезеагсЬ 1аЬогасопез йас изе а чдде чапесу оЕ пис!е)с ассд ргоЬез аз сче!! аз Еогепяс 1аЬогасопез сЬас псизс апа1ухе )ггер1асеаЫе апдЕог деагадес1 РХА зресппепз псау ъчЬЬ со Ье пюге с)гсцспзресс апд со де1ау етЬгас)па попгад)пасс)че десесс!оп ип61 сЬе ргезепс сопЕцяоп оЕ с!а)шз апс1 гпесЬодз ь гезо1чед. рог гесепс геч)еъчз апд рарегз сЬас деа1 чдй чагюиз азрессз оЕ попгад)васс)че ргоЬез, р!еазе зее Сиездоп ! 1992), Ч)а1е авд Ре1!'Огсо !1992), Ке)зсЫ ес а1. 11994), апд Мапзйе16 ес а!. !1995).
9.82 СЬаргег 91 Ргерагапоп оу' Яас(го!аЬе!ес( ЭХА апй Я)«ЕА РгоЬез Е. СОЕЕ 0(я(А РОЕТМЕКАйЕ 1 А)ЧО ТНЕ КЕЕ(Я(ОЪЧ ЕясАСМЕ(ЧТ ТАВОТЕ 9-3 ТЬе Роп«а(пз оЕ Е. сой Р!«(А Ро1угпегазе ! Роман Аст1ч1тч В1оснем1сАЕ конст«он А<Ы«йоп оЕ гпопопис!еойс1е геяЫиея 8 вега«ей Егогп й)«)ТРя со йе 3'-Ьуйгоху) гегпиш оЕ К)4А ог Р)«(А ргииегз. ТЬеяе гегпиш сап Ъе ргочйей Ьу п(с)ь ог даря (и а «Ь«р!ех Р)4А, аз «че!! ая Ъу яЬогг яериепь о(К)4А ог Р)4А 1Ьаг аге Ьаяера«гей го а яп8!е-зггапйей Р)4А ию!есн!е. 5'-«3' Р)4А ро!угиегме СагЬоху-гегш1па! с1огиа«п (геыйиея 543 — 928, -46 Ы3) С1еача8е оЕ пис1еогЫе геяйиез Егош 3'-Ьуйгоху! гегниш сгеагея гесеяей 3' сегнип1.
Сегнга1 йогпаш (геяйиез 326 — 542, -22 ЫЭ) 3' — «5' ехопис)саяе С!еача8е оЕ оИ8опис!еогЫез Егогп Ьаяе-ра(гей 5' гепп«ш. Анино-сегнипа1 йоп«аш (геяЫиез 1 — 325) 5'-«3' ехопис!еаза ТЬе сагьоху-гели«иа1 апй сепг«я! гесйоия сопяише «Ье К«епои Егасшепг ас Ро! 1. Р)4А ро1уптегаяе 1 (Ро1 1) (КогпЬег8 ег а!. 1956) сопязь оЕ а яп81е ро!урергЫе сЬаш (М„-103,000; )оусе ег а!.
1982) епсос1ей Ьу 1Ье Е. соВ ро!А Вене (Ре Ьис(а апс1 Са(гия !969). Еи асЫшоп го а РЬозрЬагеехсЬап8е асг«чйгу, Ро1 1 сагг«ез оиг 1Ьгее епаугпаг(с геасгюпз 1Ьас аге рег(опией Ьу 1Ьгее сВзйпсг Еинсгюпа1 йошашз (р!еаяе зее ТаЫе 9-3). Ршш8 Р)4А гер1(сайоп ш Е, со10 йе епаугпанс асйлйея оЕ Ро! 1 асг ш а соогсВпагей ЕазЬюп со геиюче 1Ье К)«)А рпи«егя Егош 1Ье 5' геггпш«оЕ паясепг Р)4А апй го В11 Варя Ьенчееп ай)асепг ггась оЕ Р)«(А. Рог йега«1ей йезспрйопз оЕ 1Ьезе ргосеыея, р1еазе зее КогпЬег8 апй Ва)сег ($992).
Ро! ! сап Ье с1еачей Ьу ниЫ сгеаггпепг и(й яиЬВ!ийп шго 1«чо Ега8шепгя; йе!аг8ег Ега8«пенс (согпрпяп8 геяЫиез 326-928) (з )ло«чв ая 1Ье К1еиои Ега8шепг. ТЬе Р)4А ро1угнегаяе апй ЕЬе 3' — «5' ехопис1еазе асг(ч(с(ез оЕ Ро1 1 аге сагпей оп ЕЬе К1епо«ч Ега8шепг (Вгиг!а8 ег а1. 1969; К!епои апй Непшп8зеп 1970; К1епо«ч апй Очег8аагй-Напзеп $970; К!епо«ч ег а!. 1971), иЬегеаз 1Ье 5' — «3' ехопис!еаяе асг(ч(гу оЕ1Ье Ьо1оепхугпе и сагпес$ оп 1Ье япа!!ег анино-сепшпа! Ега8п«епг (геяс$иея 1 — 325), «чЬкЬ Ь пап«е!еи (Еог геч)еж, р!еазе зее )оусе апс1 51еЬс 1987; р!еазе а!зо яее ТаЫе 9-3).
ТЬе Ро! 1 Вене Ьая Ьееп зес)иепсей ()оусе ег а1. 1982) апй ехргеяей Егош рго)сагуог(с ехргезяоп чесгогз (Миггау апй Ке11еу 1979), и«аЫп8 и розяЫе го рипЕу 1аг8е ан«онпь оЕ 1Ье ргогеш Еог согни«егс«а1 ригрозез (Миггау апй Ке))еу 1979). ТЬе яе8шепг оЕ йе Ро1 1 Вене евсосВп8 1Ье К1епои Ега8шепг Ьаз а!зо Ьееп с!опес1 шю чапось ехргеяяоп чесгогз (е.8., р!еазе яее )оусе апс1 Опий!еу 1983; Рапйеу ег а1. !993), йегеЬу ргочЫ«п8 риге ргогеш !п ап«оипь 1аг8е епоиВЬ Еог ЬогЬ сопипегс«а1 разросся апй ЪюрЬуяса! апс$ ЬюсЬениса! зшсВез. Кпои!ей8е оЕ йе йгееоВшепяопа! яггисгиге оЕ К!епои Ега8шепг, «чЬ«сЬ «чая оЬгашей «п 1985 Ьу Х- гау й)ЕЕгаст(оп (Орйз ег а1.
$985), згнпи1асес1 а зепея оЕ е1е8апг зггисгига! «пчез118асюпз (Вееяе апс1 51е(га 1991; Вееяе ег а!. 1993а,Ь), Ыпе1к зшсВея (КисЫа е1 а!. 1987, 1988; Со«чагс е1 а1. 1989; Сага!апо е1 а1. 1990; диез! ег а1. 1991), апс$ гпшагюпа1 апа1уяея (Ргее«понг ег а1. 1986; РегЬузЫге ег а1. 1988, 1991; Ро1ез!су ес а1, 1990, 1992).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
