Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 66
Текст из файла (страница 66)
1с Ь ип!где!у сЬас ялсЬ лпКХАя гчл!1 Ье йесессей Ьу яипр1е т$Негеп6а! ясгеешпд, Ая а ги!е о(сЬшпЬ, яплр1е ЙВ (егепс(а! всгеепшд Ь виссеяябл1 оп1у лчЬеп йе сопсепсга6оп от" сЬе сагдес тпКХАя лп сЬе сччо ргерага6опв Йдегя Ъу а (ассов от" 5 ог тоге, аид лчЬеп сЬе аЬипйапсе ог" сЬе тКХА ш опе от" сЬе ргерагасюпя ехсеесЬ 0.0598 ((от геч(елч, р1еаяе яее дагдепС 1987). ТЬе юссея о( ВНегепсла! ясгеепшд дерепсЬ оп сЬе дерсЬ апй т!иа16у от" йе сРХА!лЬгагу, сЬе ияе о( ргоЬея о( ЫВЬ яет)иепсе сатир!ехду сЬас аге сараЫе от" десес6пд сРХАя сопеяропйпд со 1олч-аЬипдапсе плКХАя, апй сЬе аЫ!лсу со сарсиге апт$ т)иап6(у ЬуЬт!д)вас!оп йаса ей)с(епс1у. ТЬе еддслепсу о( йе сесЬ- пк(ие Ь дгеайу ипргочед (Е йе сРХА 1тЬгапея аге огдашхет1 шсо а Гоппас (е.д., чче!1я от" ппсгобсег ВЬЬея) сЬас Ь агпепаЫе со аисотасюп (е.д, р!еаяе яее Та$саЬаяЫ ес а).
1995; 7Ьао ес а1. !995; 5сЬепа ес а1. 1996; реггес ес а1. 1998). А1сЬоидЬ 100 ог тпоге Йбегепс(а1!у ехргеыет1 депея Ьаче Ьееп Ыеп66ес1 ияпд юте готт от" р1ия-лишив ясгеепшд, сЬе атпоипс от'! аЬог шчо!чед лп ясгеепшд ечеп а (елч йоыапд сРХА с! опея геплашя топпЫаЫе. с)пс!1 гесепс1у, е(Вслепс пишпд от с$Негеп6а1!у ехргеяет$ депея стоил епслге сРХА ВЬгапея лчая ятр1у Ьеуопй геасЬ. Кесепйу, Ьочтечет, Ййегеп6а! ясгеепшд Ьая Ьедип Со Ьеаг ярестаси1аг апй лчопйегйл1 (ти(С, Ълт(сЬ СЬе спсгойисбоп о( аисотпасей плесЬосЬ, тоге соплр1ех апт$ июге еблс(епс (огтя о( Йбегепба! ясгеепшд Ьаче Ьееп дече!орей ышд йепяе1у аггауед 1лЬгапея от" сРХАя ог яупсЬебс о!лдопис1еосЫея ((ог теч|ечтя, р1еаяе яее Егто1аеча ес а1. 1998; КЬап ес а1.
1998; Волчсе!1 1999; Вгосчп апт1 Восясеш 1999; Риддап ес а1. 1999; Ка)еечап ес а1. 1999, апс1 гелегепсея сЬеге(п). ТЬе аггауя аге ргоЬей лч!сЬ сРХАя сЬас аге ргерагед (тот пчо дНегепс юигсея апс1!аЬе1ес1 чйсЬ ЙКегепс сЬгоиюрЬогея. Ап лпладе о( сЬе рапегп о( ЬуЪгк$Ьа6оп о( СЬе !аЬе!ей сРХАя Ь сЬеп сарсигей е!ессгопка!!у апй погтпа!Ьед Ьу сотприсег со сотпраге сЬе ейлс(епсу гйсЬ гчЬкЬ еасЬ о( сЬе ргоЬея ЬуЬт)д(хея со еасЬ о( сЬе пптоЫ1)хей сагдеся. Опсе с1Негеп6а!!у ехргеяет1 депея Ьаче Ьееп Ыепсл6ет1, (и11-1епдсЬ сРХАя сап Ье оЬсашей тготп а героясогу. Аггау сесЬпо1оду Ь я611 ютпе уеагя асчау лгот гои6пе ияе ш сопчеп6опа!!аЬогасопея. То тип е(6- ссепс1у, К тес)и(гея Ь$8Ь-яреед гоЬобс яуясепи со риис ча)Насел! сРХАя ш ЬлдЬ-с1епясу аггауя оп со д!аяя писгоясоре я!Ыея, юрЬея)сасед геадегя со сарсиге апй илашри1асе ипадея от" сЬе ЬуЬпйхасюи рассегпя, апд ассем со всасе-одсЬе-агс Ыо!птоттас(ся.
Нолчечег, йе гею! Ь а1геаду оЬсашед дйче сопбйепсе сЬас ш сЬе пехс (елч уеагя, лс лч!11 Ьесоте рояяЫе со ясгееи сЬе еибге сотр!еспепс от -100,000 Ьшпап депея апд со тиар ЬосЬ рЬуя(о!од(са1 апд расЬо!од)са) сЬаидея ш йе сгаияспр6опа) 1апйясаре о( се!1я апй сЬяиея (дсЬепа ес а!. 1998). 1п сЬе теап6тпе, Ьоччечет, д(6егеп6а! ясгеешпд апй юЬсгас6че ясгееплпд аит) с1ошпд (яее Ье1олч) гетпаш ч(аЫе, а!Ьед!аЬогюия, орслопя со с$есесс сетпрога! апт1 сородгарЬк сЬапдея ш депе ехргеяяоп.
50Ьсгаес)че дсгееп)ид 5иЬсгассей ясгеепшд ияея ргоЪея ш чтЫсЬ сЬе сопсепсгабоп о( сРХАя соггеяропйпд со ЫВЫу гетЬлпс1апс КХАя Ь гейисей лч(сЬоис ядшбсапс! у а(лес!)пд сЬе сопсепсгасюп ол"! огч-аЬипдапсе яес(иепсея. !п сЬе ятпр!евс тпесЬос1, !аЬе1ет) сРХА депегасей (тот опе рори1асюп от" плКХА (сеясег), лчЬкЬ сопсашя йе яеоиепсев от" лпсегеяс, Ь ЬуЬпс1ыес1 со а т$пчег сЬас т)оея пос сопсаш сЬеяе яесрлепсея. ТЬе йпчег, лчЫсЬ Ь ияес1 (и пло!аг ехсея ш сЬе ЬуЬпд(хасюп геассюп, Ь июа11у а ргерагасюп о( тпКХА (тот апосЬег, с!ояе!у ге1асед воигсе.
ТЬе сРХА яет!иепсея сотпр1еплепсагу со тКХАя ехргеыед лп сЬе йг!чег рори1а6оп тоггп РХА-КХА ЬуЬптЬ, итЬегеая сЬояе сЬас аге иштрле со сЬе сеясег рори1асюп гетпаш я(пд!е-ясгапдед. ТЬе ЬуЪг)дя аге сЬеп геплочет$ Ьу Ьут(гохуара6се сЬготпасодгарЬу. Мапу тоге сотр!ех чапасюпя о( сЬ(я Ьаяс гпейод Ьаче Ъееп деяспЬей. Рог ехатпр!е: ° КХА 1аЬе!ет1 Ьу рЬосоЬлосшу!асюи сап Ъе ыед ав а йтйет, ш лчЬ!сЬ саяе йе РХА-КХА ЬуЬптЬ сап Ье гегпочей Ьу ехсгасбоп чйсЬ ясгерсачЫш-рЬепо1 (р!еаяе яее ТаЫе 9-5).
° Тсчо сРХА! (Ьгаг(ея ((тот дпчег апт1 сеясег тКХАя) аге сопясгиссет$ Ъу Йгессюпа! с1ошпд ш рЬадептЫ чессогя. ТЬе 1(Ьгапея, лчЫсЬ аге аггапдед (и орроясе опепсасюпя, аге ияей со депегасе сотпр!етпепсагу япд1е-ясгапдей сРХАя сЬас сап Ье ыей ая т$пчег апс1 сеясег (Ридшс1 ес а1. 1988; КиЬепясе(и ес а!. ! 990; КоСЬяСеш еС а1. 1993). !иуогтаг(оп Разве!в 9.91 ° Ми16р!е гоип|Ь оЕ виЬ|гас|юп сап Ье сагпей оиг ияп8 РСК ашр!16сайоп оЕ Ьо|Ь |Ье ййчег ап|1 |Ье виЬ|гас1ей сРХАв (е8., р!еаве вее Нага е1 а1. ! 991, 1993; ЪЧап8 ап|1 Вго|чп 1991; СессЬ|ш е1 а1. 1993; Ебрек-Регпапйех агк1 йе! Мазо 1993; Я|аппа ег а1.
1993; ЬоппеЬог8 ег а!. 1995; Р!агсЬеп)со ег а!. 1996; !ш ег а!. 1997; Кои!егх)со апй КиЫ 1998). ТЬе |1есьюп Ьегчгееп |Ьеве ше|Ьо|Ь гиги| оп |Ье агпоипг оЕ вгагйп8 гпагепаЬ ача|1аЫе ап|1 |Ье|г сошр!ех||у. ТЬе випр!ев| ше|Ьой, иЬеге шВМА Ь изей ав |Ье йпчег, гпау ге|)шге ав ии|сЬ ав 20 и8 оЕ ро!у(А)ч шВХА. В Ь Егег)иеп|1у 1гпровяЫе го оЪ|аш вий|с|епг гпКЫА 1о йпче виЬ|гасг|че ЬуЬпй(забои 1о сагир!ейоп. 1п о1Ьег с!гсипь1апсев, Ьеса|ье |Ье агпоипг оЕ гагВоасг|Ы|у ш ап аЬюгЬей ргоЬе согир1егпепгагу |о апу 8(чеп сРНА ь я па!1, ЬуЪгЫЬагюп |о а я|Ыгасгей 1|Ьгагу шау Ье шей|с!епг, апй ваг!в(асгогу я8паЬ гпау Ье оЬгашей оп!у а(гег рго!оп8ей ехровиге оЕ аигогагВо8гарЬВ 1п еВЬег саве, |Ье ргоЬаЬ|!||у оЕ ьо!айп8 а сРХА соггевропсбп8 го а чегу гаге шВ)в)А ь гегпоге.
1Е |Ьь апюип| Ь ипача|1аЫе, а РСВ-Ьавей всЬегпе ог а гпе|Ьой шчо!ч(п8 ЬуЬпй(айаг!оп оЕ согпр!егпепгагу сРХА 1|Ьгапев п||ь1 Ье |пес!. ТЬе и! |ипаге Воа1 и 1о оЬ|аш а виЫгасгей сРЫА ргоЬе |Ьаг сап Ье |пей го всгееп а сРЫА 1|Ьгагу сопягисгей Его|и АВИА ехггас|ей Егогп |Ье гев|ег сеП. А виЪ|гас|ей ргоЬе оЕЕегв 1|чо рогепйа! Ьепе6ь. Р!гвг, Ьесаиве аЬипйап1 вес!иепсев соиипоп со Ъо|Ь се!! |урез аге гегпочей, гЬе ргорогйоп оЕ гай!оасбч)гу |п |Ье ргоЬе соггевропгВп8 го гаге шВЫАв Ь шсгеавей, |ьиа!!уЪу а Еасгог оЕ-1О.
5есопй,|Ье гегпоча! оЕаЬипйапг ве|)иепсев Вгеайу гейисев |Ье сЬапсе |Ьаг а гаге с!опе оЕ |пгегея ииВЫ Ъе!овг ш |Ье п|огавв оЕ сРЫА с1опев |Ьа| ЬуЬпгВхе вггои81у |о аЬипйапг вес)иепсев |п |Ье гагВо!аЬе!ей ргоЬе. ТЫв епЬапсешепг гпеапв |Ьаг |Ье сРХА 1!Ьгагу сап Ье р! а|ей Еог всгеепш8 аг а Ь~ВЬег йепягу, чй|Ь а соиипепв агаве гейисйоп ш |Ье чо! шпе оЕ ЬуЬгЫ!хайоп во!игюп ап|1 ап шсгеаве ш |Ье сопсеп|гайоп оЕ |Ье аЬюгЬей ргоЬе. ТЬе вепяйчйу оЕ |Ье ргоЬе Ь 1ЬегеЕоге шсгеаве|1, во |Ьа1 сРХА с1опев соггезропгбп8 го гаге шВХАв (0.005 — 0.0! 96) погч Еа1! ъп|Ьш |Ье гап8е оЕ йегесйоп (Жи ег а!.
1994). ТЬе шсгеаве|1!ече! оЕ вепягпйгу ь я|ЕВс!епг го а1!о|ч ипашЬ|8иогь й!вепш)пабоп Ьепчееп роро!агюпв оЕ шВХАв ехггасгей, Еог ехаи|р!е, Его|и Р!пуовге!гггиг аг й(ЕЕегеиг вгаВев оЕ йече!оршепг (ТипЬег!а!се 1980), Егоп| |Ье Вавгги1а ап|1 очагу оЕ Хеиорив (5аг8еп| апй Ра|чЫ 1983), Егош ипггапв(оппей ишппе се!!в апй пшппе се!1в ггапв(оггпе|1 Ьу 5Ъ'40 (5соп ег а1. 1983), Егош и|уоЫавь (Рачь ег а1. 1987), Его|и врес!а)(кей рори!агюпв оЕ!ушрЬосу1ев (Нейпс)с ес а1. 1984; РачЬ 1986 апй ге(егепсев |Ьегеш), Его|и |Ье пеига1 р!аге оЕ Его8 е|пЬгуов (К1аг ег а1. 1992), ап|1 Егогп а си1|иге|1 !ше оЕ Ьшпап пеига1 гшпог се!!в (е!-Ре!гу ег а!.
1993). МЕГНОО РЙО5 АМО СОМв Вегехемсев ербс|еп| Ьш п|еяу СЬгогиа|о8гарЬу оп Ьуйгохуарай|е Вюйпу(айоп оЕ йпчег Р!саве зее Аррепйш 8 апй |Ье рапе1 оп (4()А)ЧТ!ТАТ!8(С ЙЧА (п СЬар|ег 7. |5учаиеп е| а1. (1986, 1988) |1||!е!апй е| а!. (1990) |5|чагоор е| а!. (1991) |1.еЬеаи е| а!. (199 Ц |5учапеп е| а1. (|986, |988) |1.6рех-регпвпйех апй йе( Маго (1993) |Яче апй 58 1оЬп (1988) |Г|иВиЫ е| а!. И 988) вриЬепвге!и ег а!.
(1990) ьВогЬ|ге!и е| а1. (1993) |пс1|у го ргераге йпчегв |ч!|Ь гЬе соггес| йе|ьиу оЕ Ь!обп ге|Ыиев' |; еаву апй еЕ6с|еп| |о верагаге лойпу!асей апй попЬюг!пу!а|ей п|о!еси1ев айег ЬуЬгЫ!- кайоп Ъу Ь!пй)п8 |о пишоЬ|!!аей з|геря- Ый!пхв в ог Ъу ехггасйоп |ч(|Ь в|гергалгбп РЬеио1| | СЬгогпаго8гарЬу оп о1|8о(йА) се11и1ове Рагаша8пейс Ьеайв е(6с|еп| апй яшр!е Вагга ег а1.
(1991); Ъги ег а1. (1994) заир!е Ьш ехрепяче Войс(Вием апй СЬайег (1992); 5Ьаггпа е| а1. (1993); СосЬе е1 а1. (1994); 1.оппеЬог8 е| а1. (1995); Аа|Ьеип е| а!. (!997); СосЬе (1997) ТАВЕЕ 9-5 МеЕЬойз Соиипоп)у ()вей 1о Весочег 5(пе!е-в(гапйей (в(ис1е(с Ас|йз Айег 5иЬ(гас1!че НуЬг!й!ха1(оп и!1Ь Рпчег 9.92 СЬаргет 9: Ртератабоп о) Ла|Г(о!аЬе!ег( Р)чА ап|! ЯМА РтоЬек АЕКАИМЕ РНОБРНАТАйЕ 5ечетй сурек оГ а)(са1ше РЬокрЬасакек (ог а))сацпе РЬокрЬоп|опоексегаке) аге сопипоп1у ике6 (и шо1еси!аг с!ошпц: Ьассепа! аП|а1ше РЬокрЬасаке (ВАР) ап|1 са1Г (псек6па! вП|а1ше РЬокрЬасаке (С1Р, С1АР, ог САР). 5(пи!аг епаушек Ьо1асе|1 Ггоп| |поте екосепс со!йЫооце6 огцапЬпи (е.ц., 5АР Ггош кЬгипр) Ьаче Ьесоше ачацаЫе (и гесепс уеагк апс) Ьаче сЬе а|Ь апсаце оГ Ъе(пц еаяег со (пасс|часе сЬап ВАР ог СГР ас йе епд оГ дерЬокрЬогу!акоп геас6опк.
АИ|а!ше РЬокрЬасакек, чч1исЬ аге ац Хп(11) п|есацоеигушек, саса1уае РЬокрЬасе пюпоексег Ьус(го!уяк сЬгоицЬ йе Гоггпа6оп оГ а РЬокрЬогу!асед кеппе шсегше6(асе. ТЬеу аге шее Гог сЬгее ригрокек ш шо1еси!аг с1опшц: ° То теточе р)локрйаге текЫиек Гтогп йе 5' сегпиш оГ пис1е(с асиЬ Ьегоге гагцо!аЬе1шц оГ йе гею16пц 5'-Ьуйгоху! цгоир Ъу сгапкГег оГ л|Р Гтогп у-!аЬе1е|1 АТР. ТЬЬ кесоп|1 геас6оп Ь сага!ухей Ьу ЬассепоРЬаце Т4 ро1упис!ео|Ые Ыпаве (СЬасопак ап6 чап бе 5апс)е 1980). ° То те|поте 5 '-р)сокр)гаге тека(иек (тоти Ггацгпепо оГ Гл)к)А со ргечепс ке! ГПца6оп. ТЬ)к дерЬокрЬогу1а6оп геас6оп (к шее сЬ(ецу со юрргея ке!Г-Пца6оп оГчессот пю!еси!ек апд сЬеге(оге со с)есгеаке сЬе пшпЬег оГ "егпрсу" с1опек йас аге оьсашес) |Ьлппц с!ошпц (П!псЬ ес а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
