Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 57
Текст из файла (страница 57)
о и» о ) с »й 'О й Ф .а .С « .а С О и.а о л о о о с С О О «» Ел с л л с» О о й О с л с с « С с'г 00 оХ <д д . РО Л Ойаа Я сй ) о М "с» О «» о о с ;„'Г .х ,й'Е о Я "О о.а Н а- Х « сй й а С О \ О О о а .« О» а О Со «Е а 'я а Я о с, О Я с с ,О «,О й )Х с с. О»~ Е ,О а ой О » О 'О с % а. О с О а о н Ой а о с о -'Я 'О О 4 с О О с 'О «« а. Е л » с» с -о О с с а Е ОО г < 7 'О а -О а— — о а, Х 'О й о О Х а Ф с » ) ой ' о .а О « с о Е а Ф о .а Я Ф Е г» с» "Ю о с о О Я то \ -О М с с, Н «Ой « й Е о 'с М О Тл о О О « Я с О О Ь О с Я г о < а7 Х О д М г Ю о ОО о Ь .С а.о о о 'с» с «а -О с с о с.с О о й Я Х о'с» о и й'а О о о „"о Я « с са Я О О» д.о й о.а а о о. л Е' Е О» \ ' О .О а й ой о с' о )- Ясо коЕ д а х о с»,а « с а о о О Я о я Я о \» С с с Я Е олс Ес'о Е' 'м .О лТ я о.
а'м" о < о Я '' а с « а.с Я О Я - о «ц» о Х ой О а „о с о а о ~ й л с О О ОО .а со о» о, с о й ЕО Я "с О а гс д О с 'с о .» о Я Е с О о Я с с о о о с ой с ол о .с Я й »Е с а «, о— « Ы Е ;а «. Я о 'с Е': зк » о х ΠΠ— Е с с 'я .с ',О ЯВ „а о гс О О о о с» О О М ».а. я с;» а„ с с о «.с < "О Х 'а д о ООЗ О о о „о о-, с с» о„ с Ой с я "о- а «\ Я с . ОО Я Ы «О О Е' лс о ».М с -О О « с « О с с Я а, - аЕ ь гй О о ой а а Я Ф Я о». «» л .) ' о Я ол О -О а О с .Я л~ с ° с а оо о л о х с)о о а,с о .О о йй ).;Е а а оо О Г;-» ай~' а — Хс», о а,„- .о о" й « — Я с «Е.- «»»О О а о .а а,х,с о ОО а Е)-.
о о -о ее а «» г а с ЯЕ о" ЕЛ лл а,ЕЯЯ о .~ .с» ОЛО» с Я о о о.Е.х '« О»о~~ С Э Я о о О Ы й о с о „оса ос' .Я С с О О .Я О О 'о.а - а а" О -О «О Я "»О О х«аД о о .а Я асс й Ес», а » .О,«й с м-х Ел о О ОС.Е -а а д О с — В ВИООЕ о -с» с о о с с» с с О "л Е « 'О .О Я й о ик с се ао « а аД ) с» ) с, .о о Я Х а «а .с с « а «Я з с о « л О с л а л— О "а с о а а 'с а„с а ( — л о о ФЯ м о Вм со Ео м Д 4~ о с й а ОО О» Я с » о о с о й. с а о а о .О й Я ) а О а < Л а О с, Я.а с .Я О ),л с б- 3 о о 2. ,Я с с » О о а О '«Ой с .Я у Й.." ОЯ о Е л о о Е с Я с с о '" Е Я< ~» О О с о лй О с с .с Ф о о й „о а Е О Я 7~ с с о ОО 'Й .о о О ос О а с с "О й О С, Я о а а а о о а, 1И м о с ОЕ о с» о о Я й с» ой О л Ой о о — о .а с с р С О о о О С О а .а й йо лО с ,2 о а с с О с «, Я с.
й Нй а Ртогосо! 11: ЕаЬеВпц У Теттт) о) Е)оиЫе-ятапйей Е)НА пай ВасгетгорЬа8е Т4 Е)ИА Ро!утетазе 9.59 Ь)ссс!е$с Аси!5 апс! О)коппс!ео64!е5 г774ТР ио!06ол солса!о!08 йгее ип)аЬе!есЕ г7)х)ТРь, еасЬ ас 2 тм ТЬе сЬгее й)4ТРс со Ье спс1пйей ш сЬ)а со!ос)оп йерепг$ оп йе РСЕА ве0иепсе оЕ сЬе гезсгссссоп епг$оппс)еаге ясе со Ье гайсо)аЬе!ей. $4опе оЕ йеш ьЬои1й саггу сЬе затее Ьазе аг сЬе тай!о!аЬе1ей пис!еосгйе (рсеасе аее сЬе )псгогспссюп со Ргогосо) $0). Рог айт)се оп гпа)йп8 апг$ гсогсп8 ьо)пс)опт оЕ йЫТРя р1еаге атее сЬе шуоппабоп рапе) оп РКЕРАКАТ1ОЫ ОЕ 5ТОСК 5ОЕРТ1ОЧ5 ОГ йЫТРа АЫР йй)х)ТР5 ЕОК РЬ)А 5ЕС1РЕ)хссс)х)С ш СЬарсег $2.
сЕг4ТР ю!ис!оп сап!а!пт8 опе ип!аЬе)егЕ г774ТР аС а сопсепстапоп оЕ 2 тм А 1МРОКТА)х)Т ТЬе <ЙЧТР иаес1 Ьеге аЬоисй сапу сЬе пате Ьаье аа йе тай)01аЬе)ей й)х)ТР Тетр!аге Р)х)А (0.7 — 5 щ) С)ге 1спеаг, йоиЫе-асгапйей Р)4А саггуш8 арргорпасе Ыипс ог ргосгпйсп8 3' сегппш. $4аг!)ОаСМСЕЕ СОПСРООПС!5 Еа-агр)гЕНТР (7 0 тС!Ет1, ар. асс. 800-3000 С))тто!е) <! > То шшпппе ргоЫепы саигей Ьу гайюсуяг оЕ сЬе ргесиггог апй йе ргоЬе, и Ь Ьея, сгЬепечег роьяЫе, со ргераге гай)о1аЬе)ей ргоЪес оп йе йау сЬе [пр)г$ЫТР аггггес сп йе 1аЬогасогу. МЕТНО0 1. $)18екс 0.1 — 5.0 )$8 оЕЕЬе сепср1асе Р)х)А слсЬ а геьсгссс!оп епгуше(а) сЬас 8епегасеа а Ыипс ог 3'-ргоггий!08 епг1. Р1еаье атее йе посс ппйег Арргорпасе геьсг)сс)оп епгушеь ш гЬе Масег)а1с гесс)оп оЕ йа ргососо1.
2. Рипуу сЬе РЬ)А Ьу ехсгассюп ьчй рЬепоЬсЫогоЕогш апй ргесгрссасюп ъг)сЬ есЬапо1 ш йе ргеьепсе оЕ 2.5 М апнпопшш асесасе (р1еаае атее Аррепйх 8). 1псиЬасе сЬе геасссоп Еог 5 ш)пасек ас 37'С. 4. Айй 1 )с! оЕ а 2 псМ ю!ииоп ауйе ип)аЪе)ей ЕоигСЬ й)х)ТР. Сопипие йе шсиЬаг)оп Еог а Еигйег 10 пипи!ею 6. 5ерагасе сЬе 1аЬе)ей $))х)А 1гош ипшсогрогасей йЬ)ТРь Ьу арии-со!ишп сЬгогпасо8гарЬу йгои8Ь 5ерЬайех С-50 (р!еаае аее Аррепйх 8) ог Ъу Ссго гоипйа оЕ ргесср!Сагсоп слСЬ ейапо) 1п йе ргеаепсе оЕ 2.5 М апипопшгп асесасе (р1еаье аее Аррепйх 8). йрес)а! Ес!о)рпсепЕ 5ерЬасЕех С-50 зрип со!итп, ег)и!!7ЬгагегЕ гл ТЕ ЕрН 7.6) Орйопа!, р1еаае атее 5сер 6.
Итагег Ьай ргеьег Со 70 С 3. Е)гаю1хе йе Р)х)А ре11ес )п: $0х Ьассег)орЬаце Т4 Р)х)А ро!ушегаье ЪпЕЕег 2 гпм го!ос!оп оЕ сЬгее пп1аЬе)ей йЫТРь $0 гпСУгп) (асар)й)СТР (800-3000 Сс/пнпо!е) ЬассегюрЬа8е Т4 РЫА ро1угпегаье (2.5 ип)сг7а1) НО 5. Всор йе геас6оп Ьу Ьеас)08 11 со 70 С Еог 5 пипшея 2 сг) $ 01 $ )гс си) со 20 р) Рго1осо! 12 Епд ЕаЬе!~пд Рго1гис~~пд 3' Теггп~п~ о1 0оиЫе-~йгапс1ес1 О!ЧА нлмк ~о,-~2Р1Согс~усер~п 5 -Тпрйо~рЬа1е ог ~ц,-~2Р1йдеохуАТР т нг 3'-Ркоткно!нс гнва Ог !3йА, 3нсн ль тно31 сгнгаатто Ьу Ргг! ог 5ас! ог огЬег геагги> 1)оп епгугпез, сап Ье !аЪе!ес) Ьу ияп8 1Ье епгугпе са!г" 1Ьугпы гегпппа1 ггапзгегаае го са1а!уге 1Ье ггапагег ог [асоР)г1Ь4еохуАТР ['гоиааг" ег а1, 1984) ог [аупР]согг)усер!и гпрЬоарЬаге !Ти апе) СоЬеп 1980).
Весаиае пе)1Ьег ог 1Ьеке гпо)еси1еа сагпеа а 3'-Ьус)тоху! Вгоир, по адйг!опа! пис1еогЫеа сап Ъе апасЬес1 го 1Ье ргоггие)!п8 3' епс1. 1Упг)ег гпоаг сггсшпагапсея [асиР]й- йеохуАТР )а тЬе ргегеггег) аиЬаггаге уог !аЬе!!п8 3' гегпиш Ьесаые !1 )а !псогрогагес) гпоге егТгс)епг)у РЬап [а-пР]согг1усерш гпрЬоарЬаге. Ногчечег, )3)х)А гпо1еси!еа саггу!п8 согг)усер!и геяг)иеь аг РЬе)г 3' гегпиш Ьаче опе ае)чапга8е: ТЬеу аге геа)агапг го г)18еаг!оп тч)1Ь сопгапипаг)п8 ехопис)еааеа 1Ьаг сап гешоче 3'-гегпипа1 1аЬе1а )гпмнп 13ЫА.
Рог а аишшагу оу шегЬог)х иаес) го 1аЪе1 гЬе гегпиш ог" )3МА, р!еаье атее ТаЫе 9-2 ш Ргогосо) 10. МАТЕК!АЬй СА13ТЮМ: Р!еаае атее Аррепйх 12 тот арргорпа1е Ьапд!1п8 о! та!ее)а!а шаг)гег) илй с!>, Взбегя апс) йо)о6опь Р)еаае аее Аррепйх 1 1ог сошропеп1а от а1осЬ ао!ипопя Ьийегя апг) геа8епея О!1и1е а1ос)г ао1ийопь го ЬЬе арргорпа1е сопсеп1гапопя Аттоп ит асега1е ЛО М) Орг1ооа1, р1еаее еее 8гер б. ЬГПа по! РПепо):сП)огоуогт (угт, ~)ч) с! > Еплугпеь апг) Впйегь Арргорпаге геьггУсгУоп епгугпеаа СЬооее епгугаее гЬаг рго4исе 3'-ргоггийп8 гегпапЬ Са)1 Яугпиа гегт)па) 1гапаГегаье 5х тегтгпа) ггапйегаье Ьи6ег 9.60 Ргогосо! 12: Епг) ХаЬе1те Ргоггиг)(по 3' Тегттс о]~РоиЫе-яггапг(ег) Р)в)А 9.бl [я]ос[е[с АснЬ апе! О][еопос]ео1]е]е5 Тегпр)асе РА)А (0.7 — 5 щ) С)зе!снеаг, с)онЫе-згганс)ес) Е)ХА саггушц арргорпаСе ргоггнйнц 3' Сегннш.
схае]]оас63)е Со!пропп(]5 Еа-ллр)Согг)усер(л ГлрЬоярЬасе (70 тС()т), яр. асс, 5000 Сс)тто)е) <1> Согс)усср(и (3'-с(еохуас)енояие), (зо!асяс( оогн сЬе си1сше Е)н(из оЕ СоЫусярз ш05снгн (а с1нЬ- зЬарес) гиыЬгоогн), вчаз сЬе 6гзс ннс!еосЫе аис1Ъюс1с со Ье йзсочегес( (Сини)иКЬаш ес а1. 1951). ог Еа-л~р)Р(г)еохуАТР Л 0 тСЕ/тl, яр. асс. 3000 С()ттоlе) <! > То ш(н!ш)ге ргоЫегнз сашей Ьу гайо1уяз о( сЬе ргесшюг анс) сЬе ргоЬе, и Ь Ьеяс, счЬенечег розяЫе, со ргераге гайо!аЬе!ес( ргоЬея ои йе с(ау йе влр-1аЬе!ес) инс1еосЫе агпчез ш сЬе 1аЬогасогу.
прес]а! Ее[шргпеп$ 5ерЬас)ех С-50 ярил со)итл, ег)и(1(Ьгасег) сл ТЕ (рН у.б) Орсюиа1, р)сазе зее Енер 6. МЕТНОЕ) 1. Р[деяс 0.1 — 5 )сц оЕ сепср!асе 13[в)А нг[сЬ йе арргорпасе гевспсс[оп епкуше. 2. Рог[Ту сЬе Р)ч)А Ьу ехсгассюп ннй РЬепоЬсЫогоЕопп апс[ ясапс)асс[ ргессрпапоп сч)сЬ есЬапо1. 3. Р)взо1че СЬе с[)цезгес[ РХА сп 10 Р1 оЕ 5х Сепп[па! сгапзуегазе ЪиЕЕег апс[ 34 )с! оЕ НлО. 4. АсЫ 5 )с! оЕ 10 гпСйп! [а-"Р]согс1усер[п 5'-спрЬоярЬасе (5000 Сйгппо!е) ог [а-влр]с]ЫеохуАТР (3000 Сйпгпо!е) апс[ 1 )с[ оЕ са!Е йупшя сегт[па) сгапяЕегаяе (-20 ишсв). 20 ии(сз оЕ са1Е йунснз сегшша1 сганзЕегазе аге ге9и!гес) со сага)усе сЬе гайо!аЬе1(нц о( -10 рсио1ез оЕ ргосгийиК 3' сегпни(.
5. 1псиЪаге СЬе геасгюп 1ог 1 Ьоиг аг 37 С. 6. 5ерагаее йе !аЬе1ес[ РХА Егот ипшсогрогаСес1 [а-влр]согс[усер[п 5'-СпрЬоярЬаге (ог [а-"Р]с1ЫеохуАТР) Ъу ярпп-со1шпп сЬготасоагарЬу сЬгоиКЬ 5ерЬас[ех С-50 ог Ъу ссчо гоипс[я оЕ ргессрпапоп яч)сЬ есЬапо1 сп сЬе ргеяепсе оЕ 2.5 м апппопшпс асесасе (р!еаяе яее Аррепйх 8). КХА саи Ье еис)-1аЬе!ес( п)сЬ ['лр)согс1усер)и аис( уеазс-ансис(ес( ро1у(А) ро1ушегазе, аи еихуше сЬас сага!указ сЬе адйсюи оЕ ас1енояне гез)анез онсо сЬе сегинна! 3'-Ьус)соху! ронр оЕ аиу о1[цоог ро1упЬоиис!еосЫе (Ынцнег анс) Ке11ег 1993). 5иЬзмшюн оЕ гайо!аЪе)ес( соп)усерш сг1РЬозРЬасе (3'-сИГР) Еог АТР геял1а си сЬе ас)йс)ои оЕ а з(на1е 3с-аА геяс)не со йе 3' енс( оЕ йе К)в)А.
Уеазс ро!у(А) ро!унсегазе ргеЕегеиба!1у 1аЪе1з !онцег КЫА исо!есн1ез, счЬегеав зЬогс КЫА гио!есн!ез аге 1аЬе1ес( нюге е(бс(енс1у Ьу К)9А 113азе. А1сегиас1че!у, гас(ю!аЬе!ед [ллр]РСР саи Ье ассасЬес) со йе 3' енс)з оЕ КХА знЬзсгасез мнсЬ КЫА 1!Казе, ан еияуше сос)ес( Ьу Ьассег(орЬаце Т4 сЬас саса1уяез сЬе АТР-с1ереис(еис сисга- анс) шсегию1есн!аг Еогнсанои оЕ РЬоярЬоо1езсег ЬоисЬ Ьесъчеен 5срЬозрЬасе анд 3'-Ьус)соху) сегннис оЕ янц1е-зсгаис(ес( КМА ог РМА.
ТЬе нииниа1 юЬзсгасе ь а нис1еозЫе 335ийрЬозрЬасе яисЬ аз РСР (1)ЫеиЬес1с анс( Сшироп 1982). Рго1осо! 13 ОерЬоьрЬогу! акоп о1 РМА Ггацтеп1ыллй А%а! ~пе РЬоьрЬа1аье не кемочАЕ ог 5' гноя нлтг5 гхом нг)сее!с АОО5 !а пае6 со епЬапсе хиЬаецпепс 1аЬеПиц тч!гЬ [уипр]АТР, го гедпсе гЬе с)гсп)апгабоп о( р1аяпЫ чесгога !и 1фаг!оп геасгюпя апд го гепг!ег РХА апасерг!Ые ог геяагапс го огЬег епхушеь гЬаг асс оп ппс1ек асЫа (е.ц., ).
ехоппс!еаье). Еыеп6аПу апу ппс)еогЫе РЬоьрЬасаае (е.П., Ьассепа1 аПса1ше РЬозрЬагаье, са1Е )игеяг!па) аПса)пзе РЬозрЬасаае [С1Р[, р!асепга1 аПсаПпе РЬоьрЬагаье, аЬгппр аПса!гпе РЬоарЬагаае [5АР), ог аечега1 асЫ РЬоарЬагаьеа гшсЬ аа ячеес рога!о ап6 ргоагаге асЫ РЬоьрЬагазе) хП! сага!ухе йе геточй оу 5' РЬоьрЬагеь Егогп ппс1ек асЫ сесар)асея 1и Тасс, гЬеье епхушеь ргегег япаП апЬьггагеа апсЬ аз р-пагорЬепу( РЬоарЬаге апг[ гЬе ехроьег[ 5' РЬоьрЬасеа о( ппс!ек асЫа го ЪиПсу ц1оЬп1аг ргогеш апЬаггасея Рог абоП6опа) беса1[а оп аПса!ше РЬоарЬасаьея р1еаье аее йе )п(огшаг!оп рапе1 оп АЕКАЕ!л!Е РНО5РНАТА5Е. Весапве С1Р апг! 5АР аге сопппегсгаПу ачаПаЫе ап6 геагП1у !пас6часей йеу аге йе тозг ччЫе1у паес) РЬоарЬасааеа ш то1есп!аг с!ои!пП. А1гЬопПЬ С1Р !а 1еаа ехрепяче рег птг оГ ас6чПу, 5АР епхуте Ьаа гЬе абчапгаце оу Ъе!пц геасП!у !пас!!чагег! !и гЬе аЪаепсе оу сЬе1агогя г))ч!А шо6!Пса!!оп геасг!опь (е.ц., РЬоарЬогу!аг!оп ап6 ППа6оп) сап йегеуоге Ье сагпед опг ш ьепа) ЕавЬюп !и гЬе заше геасбоп гпЬе, йегеЬу ачо!61иП ехсгас6оп чч!гЬ РЬепоЬсЫогоуогш апг! Ргес!РЬабоп чбй ейапо1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
