Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 54
Текст из файла (страница 54)
асс. >5000 СУпипо1е) КЫаяе-Етее Н О течетяе Стапяспр|аяе (2000 ип1Ь) 2.5 Н! 200 ишь со )т! 25 и! !О )т! 10 и! соо и! со 240 и! 10 и! 9.44 Осаргет 9: Ртератапои о!г лъадсо!аБе!ед РАЕА апд )ъХА РтоЬел Еи а геасс!ои соигагши8 !.5 игио!еа оЕ сЪе !ипЬш8 ЙЪСТРг сры гпсогрогагса х !.5 иию1еадСТР х 330 и8!ишо!е х с60 = и8 оссслМА ауисЪеыгед Гога! срп\ 5ерагасе йе гайо1аЬе1ед ргоЬе !топл йе ипшсогрогасед дХТР8 Ьу сЬгошасо8гарЬу сЬгои8Ь а 5-ш1 со1шпп оЕ 5ерЬас1ех С-50 (р1еаае аее Аррепйх 8). А сМРОКТАЪ)Т Ретсотти СЬЬ Мер аие! а8 аиЪаес)иеиг агера ччпй а!!!соп!лед СиЪеа ср!еаае аее Арреийх 8).
То СЬе гайо1аЬе1ед сРХА, асЫ СепЕо1д ехсея Ьу ъче!8ЬС оЕ йе дпчег К!ъ)А йаС ъчсП Ье шес1 Со аиЬСгасС йе сР)ь)А ргоЬе, 0.2 чо1ише оЕ 10 М апипоплшп асеСаСе, апд 2.5 чо1шпеа оЕ ке- со1д ейапо1. 1псиЬасе сЬе пнхсиге Еог 10-!5 ш)писеа ас ОоС, апс1 сЬеп гесочег йе пис1е!с ас!да Ьу сепсп6л8ас!оп ас шах!пппп ареед Еог 5 ш!пи!ее ас 4оС лп а писго6л8е. Кепюче аП оЕ йе ейапо! Ьу аарлгадоп, апс1 а!иге сЬе ореп сиЬе оп сЬе ЬепсЬ со аПоъч пюаС оЕ сЬе геша!п!п8 ейапо1 со ечарогасе. Р!яо1че йе пис1ек аснЬ !п 6 р! оЕ К!ъ)аае-Егее Н О.
10. То сЬе йяо1чес1 пис!ек асЫа, асЫ: 2 м аосПши РЪоарЪасе ЕРН 6.8) ЯЭ5ЕЕРТА ао1ииои 2 р! 2 Ег! Е!ЕЬет сочег сЬе рю1идоп ъч!ЕЬ а с1гор оЕ ПВЬс пипега1 оП от дгаъч йе пихсиге шсо а я11- соп!2ед, д!ароааЫе 20-р1 81ая сарП!агу сиЬе апд аеа) сЬе епсЬ оЕ сЬе сиЬе !и сЬе Паше оЕ а Випаеп Ьигпег. 12. Р1асе сЬе ш!сгоЕи8е сиЬе ог аеа1ед сарП!агу шЬе ш а Ьодш8 ъчасег ЬасЬ Еог 5 пиписеы ТгапаЕег со а ъчасег ЬасЬ вес ас 68'С, апд аПоъч сЬе пис1ек ас!дв со ЬуЬпйхе со С т = 1000 го гпо1еа аесопдаЕПсег. То са!си!асе йе 6ше тес)и!сед со геасЪ й!п С г, ю!че йе Ео!!оъчш8 ециадои Еог т. Ь' ас г о ъчЪеге ЕЛ Ь гЬе гегиашги8 ыи8!е-а!таис!ес! с)лгъ)А ас сиие г, Р„!а сЪе соса1 аиюшп оЕ гирш сРЫА, е Ь йе иашга! !о8апйги, )г Ь а гасе соиасаис Еог йе Еоггиапои оЕ Кр)А-)ля ЪуЪпда сЪас Ь дереидеис ои сЪе соиър!ехЬу оЕ йе шКЪСА рори1абои аид гиау Ъе аяишед со Ъе -6.7 х ! 0 ' !!сета! шо)- пес, аид С, Ь сЪе горда! соисеисгадои о! йе КЪСА дг!чег СсчЪ!сЪ доеа иос сЬаихе арргеслаЫу дшы ш8 йе ЬуЪггдйадои геассюи).
!рог а !истд деасприои оЕйЬ ес)иасюи, р!еаае аее 5аг8еис ! !9871 аид Еог адд!с!оиа! гиЕопиадои, ра8е 538 ги усач!сЬои ! !986!.) Кешоче йе ш!сгоЕи8е сиЬе ог сарП1агу сиЬе Егопл йе ъчасег ЬасЬ. сЛе а с1гаъчп-оис рлрессе Пр ассасЬес1 со а ппсгорлрессог со гегпоче сЬе ЬуЬпйхадоп 80!и!!оп Егош сЬе писго6л8е сиЬе, ог ореп сЬе епда оЕ сЬе сарсПагу сиЬе ъчПЬ а 61е ог йаплопд реп.
ТгапаЕег йе ЬуЬпйхаПоп пихгиге шСо а СиЬе сопгашлп8 1 ш! оЕ 5Р5 Ьийег. 14. 5ерагасе сЬе 8!081е-асгапдед апд доиЫе-асгапдед пис!ек ас!да Ьу сЬгошасо8гарЬу оп Ьудгохуарадсе ас 60'С аа деаспЬед лп Аррепйх 8. Меаа иге йе ашоии! о ! гасПоас6 6!у ги еасЪ Егасдои Ъу !!с)шд ас!ис!!!ас!ои соииьи8.
Ас 1еаы 90% оЕ сЪе гири! [лгр)ссср!А аЪои!д Ьаче ЪуЪпйаед со сЪе шКЫА аид Ъе ргеаеис ли сЪе >0.36 м юйши РЪоарЪасе ъчааЬ. 15. Роо1 сЬе Сгасдопа сои!а!п!08 сЬе едите-зсгапдед сРХА апд сопсепсгасе сЬеш Ьу тереагед ехсгасдопа ъч!ЕЬ ЬоЬисапо1 ехсгасдоп: АсЫ ап есрла! чо1шпе оЕ ЬоЬшапо1. М!х сЬе сио РЬааеа Ьу чогсехлп8, апд сепспЕи8е сЬе пихсиге ас шахигшш зреед Еог 2 пипшеь ас гоогп сешрегасиге ш а писгоЕи8е.
РЬсагд сЬе иррег (ог8апк) РЬаае. Кереас сЬе ехсгассюп ъч!ЕЬ ЬоЬиСапо1 ип61 СЬе чо1шпе оЕ СЬе ас)иеоиа РЬаае Ь < !00 р1. Ргогосо1 8г 5упйегйг оу гсайго!аЬе1ей, БиЬсгассей СОХА РгоЬег Уг)08 01!8о(йТ) аг а Рлтег 9А5 17. Кешохе аа115 Егош йе СОХА Ьу арап-со1шпп сЬгогпасо8гарЬу йгоп8Ь 8ерЬас1ех С-50 ес)ш1!Ьгасей ш ТЕ (РН 8.0) сопсашспц 0.1е/а Ю8 (р1еаае аее Аррепй(х 8). А !МРО!!ТАХТ Ро поС псе ейапо! Ргес!р!Са(!оп Со сопсепггаге йе СОХА аа йе ргеаепсе ос' РЬоаРЬасе Ыпа !псег(егеа ейй ргессрпапоп.
Во пос пае й!а!уа!а со гегпоче РЬоарЬасе !опа, аа йе сРХА сМП абс!с Со СЬе й!а!уа!а Ьа8. 18. Меаялге сЬе ашоппс оЕ гай(пасс(ч!су ш сЬе яашр!е апд са1сп1асе сЬе арче(8Ьс оЕ ОХА !п сЬе сшЬ(гас!ей ргоЬе. 19. Кереас 8серя 9-18. Весччееп 10ече апй 50чче оЕ сЬе сРЬ)А чг!11 Еопп ЬуЬгЫя сч!сЬ сЬе с)г!чег К)ч)А йшсп8 йе ьесопг( гоцпс( оЕ ЬуЬпйбкасюп. 1с Ь пос песеааагу со сопсепсгасе ог гегпоче ьа1ь !гого сЬе Йпа1 ргерагасюп оЕ сР)чА !Е и ь со Ье пасс! со ргоЬе а сРЬ)А 1сЬгагу. ТЬе гасбо1аЬе1ес! сРЬ(А сап Ье пасс) Еог ЬуЬгЫиас!оп сч!сЬопс йепасшасюп, РгоЬеа гаспо!аЬе!ей со Ы8Ь арес(6с асспйсу аге гарЫ1у с)аспа8ес( Ьу гасбосЬепска! с)есау.
ТЬе епЬсгас6че ЬуЬ|Ыыасюпа еЬоп18 сЬеге(оге Ье салсес( опс аа гарЫ1у аа ргас6саЫе, апс( сЬе ргоЬе аЬоп16 Ье ыес1 ъчЬЬопс де!ау. (Ле 5 х 10г йргп оЕ гарбо1аЬе1ей сРЬ)А Еог еасЬ 150-спсп 61сег апс! 5 х 1Ое со 1 х 10г йрш Еог еасЬ 90-гппс 6!сег. 1Е а 8епогпсс Р)хА 1!Ьгагу ы асгеепес) апсЬ сЬе гасбо1аЬе1ес1 спЬсгассед ргоЬе, о!!8о(с)А) сап Ье асЫей со йе ргеЬуЬгЫсаапоп апд ЬуЬпгбкайоп геасйопа ас 1 Сс8(пс! со ргечепс попарессбс ЬуЬгЫиайоп Ьесъчееп сЬе о68о(с)Т) сас1а оЕ сЬе сРЬ)А апй о1с8о(с(А) сгась ю йе 8епосп!с РЬ)А. Рго1осо! 9 Кайю!аЬе! ~пц о1 5иЫгас1ед сРМА РгоЬеь Ьу Капдогп О!~цопис!ео1Ме Ех1епьюп | н тнь РкОСтОтткт, 5ЧНТНЕ5!5 От СО6)А !5 САКк!ЕО ООТ ш тЬе ргеаепсе оЕ аашгатш8 сопсептгат!опт оЕ а!1 Еоиг дара апд !тасе апюипта оЕ а а!п8!е гайо1аЬе1ед дар.
АЕтег ыЬтгасбоп ЬуЬпйхатюп, тЬе еппсЬет1 яп81е-атгапдед сЕтХА !а гайо1аЬе1ед то Ь!8Ь арестВс ас6чКу ш а кесопд куптЬетк геас6оп Ъу ехтепяоп оЕ гапдош о1!Вопис1еот!де рпшега ияп8 тЬе К1епотч Ега8- тпепт оЕ Е. соВ ЕтХА ро1ушегаае 1. Весаиае тЬе сопсептгат!опа оЕ д)ч)ТР ш тЬе Вгь! геастюп аге поп1пп!т!п8, ЪотЬ тЬе атпоиптх апд а!хе оЕ сутХА Вепегатед аге Вгеатег тЬап тЬоае асЬ!ечед ш ктапт1ап1 1аЬе1!п8 рготосо!а (е.8., р1еаье аее Рготосо1 8). ТЬе аиЬтгаст!че ЬуЬпйха6оп втер сап тЬегеЕоге Ъе сагпед ои! чч!тЬ Ь!ВЬег ейк!епсу.
Весаиье ЕЬе геы16п8 рори1а6оп оЕ сЕт!чА !а пот чи)пегаЫе то гайо1утк с1еача8е, !т сап Ье а!отед !пдейпЬе1у апд гадю1аЬе1ед то ЬтВЬег прес!Етс ас6чду ччЬеп пеедей ТЬе ртососо1 ччог)сз Ъект тчЬеп ЕЬе сРЬ!А ауптЬеа!хед тп тЬе шуба1 ауптЬет!с геастюп !а Еи!1 !еп8тЬ ог с!оке со К. Рог тЬ!а геааоп, ауптЬеяа оЕ сЕ)! !Аа !а ргипет1 Ьу о!!Во(дТ) гатЬег тЬап гапдотп Ьехапис1еотЫе рпшегя Ву сои!газ!, ЕЬе аиЪьет!иепт гад!о1аЬе!!п8 теастюп !а ргипед Ьу гапдош о1!Вопис1еотЫея у!е!йп8 вЬогтег ЕтХА ргодиста тчЬоае яхе !а Ыеа1 Еог ЬуЪг!д!хат!оп.
ТЬе сЕтМА ргерагет1 ат деаспЬет1 тп 5тера 1-10 оЕ тЬ!а рготосо1 сап Ье сопчегсес1 !пто доиЫе-ягапс1ет1 ТтМА (р1еаае кее СЬартег ! 1, Рготосо1 ! (5та8е 2] ) апт1 с1опед што а ЬастегюрЬа8е ог р1аяпЫ честог то ргодисе а ятЪтгастед сЕтХА 1!Ъгагу (е.8., р1еазе атее 5аг8епт апд Е)атч!д 1983; Етач!а !986; КЬупег ет а1. 1986; Рат8по1! ет а1. !990). ТЬе сутЫА 1!Ътагу сап тЬеп Ье асгеепед чдтЬ а аиЬтгассед ргоЬе. Весаиае аиЪтгастед 1!Ъгапеа аге еппсЬед Еог сР)'(А с!опт соггезропд!п8 то попаЬипдапт шКЬ)Аа, тЬе апюипт оЕ ьсгееп!п8 гет)и!гед то Впд а с1опе соггекропйп8 то а гаге тпКХА шау Ъе гедисед Ъу а Еассог оЕ 10.
5иЪтгастед ргоЬеа гайо)аЪе1ед аа деаспЬед Ьеге сап т1етест сртЫАх соггеаропд!п8 то шК)ч)Аа ехргеааед а! а 1ече1 аа 1очч аь Вче шо!еси1еатшапппа1!ап сеВ. Рог адй6опа1 детат1я р1еаье атее ЕЬе шЕоппа6оп рапе1 оп !5ОтАТВМС О!РЕЕВЕ!9Т!АИЛ' ЕХРКЕ55ЕО сО!9Аь Ву О!ГРЕКЕ!т!Т!АТ 5СКЕЕММС А!90 СсОМХС. 9А6 Ргососо)9: йад(о1аЬе!тК о)' БиЬсгассед сВ)с(А РгоЬег Ьу Калдогл О1(Вилис!еос(де Ехселс(ол 9.47 МАТЕИАЕ5 А 1МРОКТА1ЧТ Ргераге а!! геацепп иаес) !и СЫ5 рго(осо! иай РЕРС-Сгеа(ед Н О (р!еаае аее СЬе (п(огпсадоп раие1 оп НОМ( ТО СА71Ы ТНЕ ВАТТЕЕ 1471ТН КЫАЕЕ !и СЬарсег 7).
САНТ!ОЪ(с Р)еаае аее Аррепд1х 12 сог арргорпасе Ьапд1)пе оЕ гпа(епа!5 таг)сед чч!ЕЬ <!>. Войег5 апе! ао1ойоп5 Р1еаае аее Аррепд!х 1 Еог согпропепса оЕ а!ос)с 5о)ипопа, Ьи((ега, апд геакеп15. О!!исе а(оса ао(исюп5 со 1Ье арргорпасе сопсепсгасюп5. 01(ИгосИгеао) (7 м) ЕОТА (0.5 М, рН 8.0) Е(Иапо) НС) (2.5 гг) <! > А)аОН (3 57) <1> РИело);сИдогоуоггл 007, чпд <! > Р1аселга( КА(абе глИ(ЬЕ(ог ТЬесе !игдЪ|согь аге ао!д Ьу сечега! гпапигассигеп ипдег чалою сгаде пасись (е.8., К)4Аяп, Ргогпе8а; Ргипе 1пЬсЪ|сог, 5 Ргппе — г3 Ргипе; КХаьеОУТ, ЫЕе ТесЬпо1о8!еа). Гог пюге десас!я р!гасе гее йе 1пгоппадои рапе) оп 1ЫН(В!ТОК5 ОГ КЫА5Е5 ю СЬаргег 7. 5х Каис/от рлтег Ьиууег 250 гим Тг!г (РН 8.0) 25 гпм МВС1, 100 гим Ъ)аС1 10 гпМ гКСЬюйгесго! 1 м НЕРЕВ (агЦоасед со рН б.б чдй 4 М ХаОН) С)се а ЕгесЬ сп1идоп !и Н,О оЕ 1 м сосЬюйгеао1 ссос)с, яогед ас — 20'С.
Рысагд сЛе са1исес( сЫиосЬгеЬо1 а(сег иае. 505 (20/ иг(ч) 5ос)(ит асега(е (3 М, рН 5.2) Тг)5-С) (7 М, рН 7.4) Епгугпе5 апе1 Войег5 К)елоиг Егацтелс оЕ Е. соК РА(А ро)утегаае 1 Кечегае Тгалсслрсасе Кечегге сгапссг!рсаье депчед Егопс йе ро1 Еепе оЕ Мо-М1Л' Ь пюге ейк!еис сп сРХА аупйеяь йаи йас оЬсагиед (гоги йе ач!ап гпуе!оЫаасояс ч!гис (е.8., р!еасе сее Гаг8по1с ес а1. 1990).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
