Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 53
Текст из файла (страница 53)
Мо-М1Л' гечегве сгапьспрсаье ь сетрегасиге-зеив(с)че апс( ьЬои1й Ье ьсогес( ас — 20'С ипс11 пеег1ес( ас 5сер 2. 70х Кечегзе ггапзсгсргазе ЬиЕЕег (ч)с!с!есс Асс(Ь апд О!фопсзс!ео6де5 гЕ(ЧТР зо(ипил солса!л!л6 гЕАТР, ВСТР, апс( с(ТТР, еасЬ а! 20 тм Рог айчссе оп гпа!йпц апй всог!иВ ьо!шюпв оЕ й)ЧТРв, р!саве ьее сЬе!п(оппас1оп раис! оп РКЕРАКАТ(О)Ч ОГ 5ТОСК 5ОПЗТ!ОЫ5 ОГ <ИЧТР А1Ч0 йй)ЧТР5 ЕОК 01ЧА 5ЕОС)ЕЫСПЧС сп СЬарсег 12. с(СТР (725 рМ) Айй 1 р) оЕ а 20 тзс всос1с ьо1исюп оЕ йСТР со 160 р) оЕ 25 псМ Тпь-С1 (рН 7.6).
5соге сЬе с61исес1 ьо1исюп !п япа!1 а!(с)посв ас — 20'С. 72апс(от с(еохупис(еог!г(е рлгпегь, ях ог зечеп Ьазез гп 1елдГЬ Весаые о( сЬеп иппопп 1епцсЬ апй 1ас)с оЕ вес)иепсе Ьсаь, ьупсЬейс о115опис)со!гаев оЕ гапйогп ве0иепсе аге йе рптегь оЕ сЬо)се. 01сВопис1еосгйеь оЕ орсипа1 1еп5сЬ (Ьехатегь ог Ьерсагпегв; 5иВапита апй бирса 1995) сап Ье ригсЬаьей Ьогп а согптегсга! ьоигсе (е.5., РЬаппас)а апй ВоеЬг!иВег МаппЬепп) ог ьупсЬеьсгей 1оса11у оп ап ашогпасей 0ЕЧА вупсЬев(гег. 5соге сЬе ьо1исюп оЕ рптегь ас 0.125 Сс57)с! (и ТЕ (РН 7.6) ас — 20 С гп ьта1! абииосв.
Тегпр(аге гп)2А(А Ргераге ро1у(А) Ку(А аь йеьспЬей )и СЬарсег 7, Ргососо) 3 ог 4, апй сато!че )и КЫаье-Егее Н О ас а сопсепСгаСюп оЕ 250 пайп!. Кайоас6сге Сопсросзпд5 !и-"Р!г!СТР (70 тСс(т1, зр, ас!. >3000 С!(тто(е) <! > То ппшппге ргоЫегпв сасьес1 Ьу гай!о!ув!в оЕ йе ргесигюг апй йе ргоЬе, и ь Ъея, ччЬепечег роьяЫе, со ргераге гагпо!аЬе1ей ргоЬеь оп йе йау йе (ьср)йХТР аггЪеь сп йе 1аЬогасогу. Ьресза! ЕцшргпепЕ !се счагег ЬагЬ 5ерЬаг(ех С-50 хрип со(игпи, ег(ис1!Ьгасег( гл ТЕ (рН 7. 6! Орсюпа1, р!еаье ьее 5Сер 7.
Яасег Ьа!Ьз ог Ьеас!лд Ь!ос(сз ргезес Со 45'С, 66'С, апг( 70 С МЕТНО0 1. Тгапвуег 1 )сц оЕ ро1у(А)' К)ЧА со а зсеп!е гп)сгоуиае сиЪе. Ай)изс (Ье чо1шпе оЕ (Ье зо1ппоп со 4 ф иг!ЕЬ КХаве-Егее Н О. Неас йе с1озес! сиЬе !ог 5 ппппсез ас 70'С, апй сЬеп с)шсИу сгапзуег сЬе сиЬе со ап ке-ччасег Ьа(Ь. 2. То сЬе сЬАПес1 зо!ипоп !п сЬе т!сгоуиае сиЬе, асЫ: Рго1осо! 8 5упйеыь о1 Кайо!аое!ед, ЬиЫгас1ед с0МА Ргооея Быпц О!~цо(сГ) аь а Рпгпег НЬ РКОтОСО( 085СК)ВЕ5 тНЕ РКЕРЛКЛТЮЪ( ОГ 50ВтКЛСтво сЕ))ЧА ргоЬеа Ьу ЬуЬг(61аа6оп Ю ап тК)ЧА г(г(нег, ЕоПогсе6 Ьу рнпВсагюп оЕ !Ье япВ1е-8!ганг)ег) га6)о1аЬе1ег( с1))ЧА Ьу Ьуг1гохуарабге сЬгогпаговгарЬу. Рог адЕВ(юпа1 г1еса68, р1еаяе аее (Ье шЕоппагюп рапе1 оп 15ОЕАТПЧС О!РЕЕВЕ(ЧТ!АПЕТ ЕХРКЕ55Е0 с01ЧАа Вг' 0!РЕЕВЕ(ЧТ)АЕ 5СКЕЕ)ЧПЧС А)Ч0 СЕОЫПЧС.
МАТЕВ1А15 А 1МРОКТА)ЧТ Ргераге аП геадепта иаег)(п (Ыа ргогосо! ге((Ь ОЕРСпгеа(ед Н О (р!еаае ьее ТЬе )п(оггпапоп ране( оп нОъ\г тО глгпч тне ВАттее тлг!тн к)члае (п сьаргег 7). СА()Т!О)Ч: Р!еаае нее Арреп6йх !2 Еог арргорпа!е ЬапдбпВ оЕ гпа1еПа18 гпагкед ъг11Ь <!>.
ВоЕЕег5 аод $016Е!005 Р1еаае атее Аррепсбх ! Еог сотропеп!ь оЕ а!осЬ ао1о6опа, Ьп(тегь, апд геаВеп18. 01!н!е а!оск ао(поена !о !Ье арргорпа1е сопсеп!гаоопа. Аттоп)ит асе(а(е (70 И) ОИЫо!Ьгегго( (7 80 ЕОТЛ (0.5 м, рн 8.0) Е(Ьапо) НС! (2.5 гг) <1> )аоЬи(апо) < ! > 7ЧаОН (3 л() <!> РЬепо1:сЫоготогт (777, с)н) <! > Р(асепга( Рг(Чазе )пЫЫ(ог (20 ип)га))г)) ТЪсас )нЪ|Ъ(гога аге ао!й Ъу аечега! гнанн(асгнгега опг)ег чаг(она ггаг)е нагнеа (е.в., К)ЧЛа!и, Ргоогева 1пс; Рпгне !нЪ|Ъ(гог, 5 РгнпегЗ Ргнпе; КЪ)ааеООТ, Ове ТесЪпо!ов(еа). Рог нюге дегава, р1еаае аее гЬе (птогпаагюп Рапе1 оп ПЧН! В!ТОК5 ОГ К(ЧЛ888 ш СЪаРгег 7. 505 (70",4 ге)г) 505)НЭТА гю!и6оп 80 АМ ЕОТЛ (РН 8.0) 1 2ао 505 5ос)(ит рЬоьрЬа(е Ьитуег (2 М, рН Ь.В) 9 42 СЬарсег 9: Ргерагадоп оТ йад(о)аБе!ед РИА апд ЯМА Ргобеь 5Р5 Ьиууег 0.12 м юйшп РЬоьрЬасе Ьи((ег (РН 6.8) 0.196 (сч)ч) 51)5 Тль-С! (7 м, рН 7.4) Епкупсеб апд Впььег5 Кечегье 1гальсг!р1аье Кечегве сгапвспрсаье г)ег)че6 Ггогп сЬе ро1 8ессе о( Мо-М1Лг шпиге е(бс)епс сп сРХА вупсЬеяв йап сЬас оЬсаспег) Ггош йе ач)ап псуе!оЫаьсояь ч(гиь (е.8., р!саве вее Гаг8по!с ес а1.
!990). ТЬе с!опас) чегвюп о( гечегье сгапьспрсаве епсог)ес) Ьу йе Мо-М1У епгуше Ь йе епкуше о( сЬо)се сп сЫв ргососо1. Мисапсь о( йе епкугпе йас )ас1с КХаье Н асбчау (е.8., еагаса5спрс Ггогп 5сгаса8епе ог 5ирегспрс П Ггогп ЕсТе ТесЬпо!о8)ев) Ьаче юше ас)чапса8еь очег сЬе счс!с)-суре епкугпе ыпсе йеу (1) ргос)исе Ьс8Ьег усе!сЬ о( бс!1- 1еп8сЬ ехсепяоп ргос)исс апс) (2) счог)с ег)иа0у ъче)) ас Ьой 47'С апс) 37'С (Сегал) апг) Е РА1еы1о 1993).
70х Кечегье сгальслрсаье Ьиууег Месс!есс Ас(ГЬ апд О! фопесс!ео6де5 дСТР (725 рм) АсЫ 1 01 о( а 20 гпм ьсос1с во1ибоп о( 6СТР со 160 и! о( 25 гпм Тпь-С1 (РН 7.6). 5соге йе ййсе6 ю)ибоп сп япа11 а1крюсв ас — 20 С. дНТР ьо!идол солса!л!08 дАТР, дСТР, алд дТТР, еасЬ а1 20 тм Гог аг)ч(се оп шарбп8 апс) ыопп8 ю1исюпь о( с)ХТРь, р1еаье ьее йе ш(оппабоп рапе1 оп РЙЕРАССАТГОХ ОГ 5ТОСК 5ОШТ1ОХ5 ОГ г!ХТРь АХО с)дХТРЬ ГОК ОНА 5ЕОС)ЕХС(ХС ш СЬарсег 12. Рггиег тКА(А Р1еаье ьее 5серь 9 апс) 19. О))оо(ду)гь — ш РигсЬаье апс( йыо1че о118о(с1Т) и и аг 1 ш8)пс! ш ТЕ (РН 7.6).
5гоге аг — 20'С. Раис(огп 8еохупис1еосйе рпшегв сап а1во Ье вцЬьсаисе6 )п сЬе сРХА ьупсЬеьЬ геассюп (р1еаве ьее Ргососо1 7). А1йоц8Ь с()ХА ьупсЬеыхес1 сч(сЬ о118о(с)Т) сепсЬ со Ье 1оп8ес сЬап сЬас вупйеяхе6 ичсЬ галс)опс рпшегь, сЬЬ Ь о( 1811е ас)чапса8е ш ЬуЬгйиасюп геасбопь. ТЬе сЬоссе о( рпгпег с)ереси)в оп сЬе гпесЬог) ше8 со сопьсгисс сЬе с()ХА!сЬгагу со Ье ьсгеепей Уье о! 18о(с)Т) аь а рппсег ш сЬЬ ргососо) сТ сЬе с))ХА 1сЬгагу счаь сопьсгиссес( ц)сЬ о!с8о(с1Т).
0ве гапг)ош рпшеш с( сЬе сРХА 1сЬгагу счаь шали(ассигес) сп апу ойег счау. 1п гаге швсапсеь, пЖХАь сопсаш шгасПе гереббче вес)иепсев сп сЬей 3'-ипсгапь1асес) ге8)опв апг) сЬеье сап сгоы-ЬуЬпйсе со гереббче ьес)иепсеь ш попЬогпо!о8оив сРХАь г)ег)чес) Ггопс сЬе попехргеысп8 се)). 1п юсЬ саьеь, ьупсЬеяхе йе гасою!аЬе!ес) ргоЬе сч(сЬ гапс)огп рпгпегв. Тетр)а1е пИА)А Ргераге ро1у(А)" КХА аь 8екпЪе6 (п СЬарсег 7, Ргососо! 3 ог 4, апс) йыо1че сп КХаье-Ггее Н О ас а сопсепсгабоп о( 230 и8)ш1. Кае!1оасйсге Соп)рооп(15 Га-ьаР)дСТР (70 тС!)т), ьр. ас1.
>3000 С!)тто!е) <1> То гпшппие ргоЫешв саивес1 Ъу гайо1уыь о( сЬе ргесшьог апс) сЬе ргоЬе, и Ь Ъевс, гчЬепечег роьяЫе, со ргераге гайо!аЬе1еб ргоЬеь оп сЬе с)ау йе (ьср)6ХТР агг(чев (п йе 1аЬогасогу. Ьресса! Е(7осрспеп$ Аррагасиь Гог ьерагадол оГ ь(л8!е-ьсгалдед алд доиЫе-ь(галдед лис)есс ас!дь Ьу Ьудгохуарас(се сЬготасоегарЛу ас 60 С Р!саве ьее Аррепйх 8.
80(Г!л8 ччасег Ьа(Ь Гсе иасег Ьа(Ь Мслега! од алд рсрейе Брь дгаччл оис со Ье аоасЬес! (о ал аи(отадс р)реое ог 5!)!сил(лед, д!ьроьаЫе 20-0! 8)аьь сар!!)агу сиЬеь алд Б)е ог о5атолд рел 5ерЬадех С-50 со)итл Г5 гл0, ес)и!!ГЬгасед гл ТЕ ГрН 8.0) 5ерЬадех С-50 ьрил со)илсл, ес)и(!!Ьгасед сл ТЕ ГрН 8.0) солса(л(ле 0.79' Ги)ч) 5Е)5 5)!)сол)хед т(сгоуиее 1иЬеь (7.5 то Игасег Ьа(Ьь ог Ьеадл8 Ыос)сь ргеьес со 45 С, б8 С, алд 70 С Ртотосо! 8| 5упгЬея!я оу Пат((о!аЬе1ет(, 5иЬгтассет( соХА РтоЬея (Ея!п8 О!18о(тЕТ) ая а Рптет 9.43 МЕТНОО ат !МРОКТАЪСТ Ве(оге ргерапп8 сЬе ртоЬе, !с !я а 8оог( Ыеа со Ьаче 6Иетя (тчЬ|сЬ сои!а!и йе сОЫА ИЪгату со Ъе ясгеепет)) теас!у со ЬуЪп|Иге.
Тгапяуег 5 — 10 Р8 оЕ ро1у(А)+ К)я(А со а ясегПе ш(сгойг8е шЬе. Ат!) гьс сЬе чо!шпе оЕ сЬе яо1и- Поп со 40 р1 ълсЬ К)я)аяе-Егее Н О. Неас сЬе с1ояет! сиЬе со 70'С Еог 5 ппписея, апт! (Ьеп т!и!сЫу сгапяуег сЬе сиЬе со ап ке тчасег Ьа(Ь. А ! МРОКТА)я(Т А|Ы сЬе течетяе сгапяспрсаяе 1аяс. рече|те |гапяспрсаяе яиррИе6 Ъу тИЕЕетепс п|апи(асситетя чапея !и ия асичЬу рет ипЬ. Ся|Ьеп ияп8 а ие|ч ЪассЪ оЕ еигутпе, яес ир а тепе| оЕ ехсепяоп теассюпя сопсаш!и8 ет)иа! атпоипь оЕ ро!у(А)' КЫА апт( о68опис!еос!т(е рпп|ет, апт( йбетепс атпоиися оЕ епгутпе.
!Е рояяЪИ, сЪе ртипет яЪои!6 Ъе ярес!6с Еот ап шКЫА ртеяепс ас тпот!стасе аЪипт(апсе |п |Ъе ргератасюп оЕ ро!у(А) т КХА. Аыау сЬе ртот(иста оЕ еасЪ геасиоп Ъу Ве! е!ессторЬогеяя ая т(еясг!Ъет) ш йь ртососо1. С)яе сЪе пшшпа1 ап|ош|с оЕ епгутпе тет)и!гет( со ргой|се сЪе шахипшп у!е!д оЕ ехсепяоп ртот(исс. ТЬе ишь ияет( !п й!я ртососо! |чотК |чеИ |ч!сЬ гпояс ЪассЬея оЕ 5стаса5спрс апт( 5ирегяспрс !!. М|х йе сотпропепся Ьу Вепс)у саррш8 сЬе яЫе оЕ сЬе шЬе. СоПесс сЬе геассюп пихсиге (п сЬе Ьоссоп| оЕ сЬе сиЬе Ьу Ьпеу сепспбг8ас!оп (п а ш(сгоуи8е. 1псиЬасе йе геас6оп Еог 1 Ьоиг аС 45'С.
Ая ап а!сетпас!че, (а-'|Р1|1СТР оЕ ярес|6с ас6чиу 800 С!/шшо1е сап Ъе яиЪяг!ситес( ш |Ъь геассюп. 1Е й|я я|Ъяйисюп ыпат(е, |Ъеп апис |Ъе ! 25 рм т(СТР Етош |Ъе теаспоп инхп|те. 5сор йе геасПоп Ьу асЫ!08: 0.5 М ВАТА (РН 8.0) 10 р! )О% ( !ч) ЕЕ|5 со н( М(х сЬе геа8епь ш сЬе сиЬе счеП. ТЬе яп81е-ястап|1ей тагИо!аЪе!е|! с(2)4А Ь т)и!се яос!|у апт! ат(Ьетея попярес|6саИу со 81аяя 61сетя, апт( топ|с р1ая6ся. Рот сЬтя теаяоп, К ь ипротсапс со тпашса!п а ш!п!шиш оЕ 0.05% (тчтч) Я>5 |п аИ Ъи((етя айет 5сер 5 оЕ йе ртососо1, апт( О.! — !.0% 5Е|5 ш ЪуЪтЫ|гасюп Ъи((етя.
А|Ы 30 р1 оЕ 3 )4 ХаОН Со СЬе геасПоп СиЬе. 1псиЬаге СЬе пихгиге !ог 30 пипигея аС б8'С Со Ьут)го!ухе йе КХА. Соо1 сЬе пихсиге со гоогп сешрегасиге. Хеисга)(ге сЬе яо!шюп Ьу асЫш8 100 р! оЕ 1 М Тпя- С! (РН 7.4), пихш8 счеП, ап|1 сЬеп а|Ыш8 30 р1 оЕ 2.5 Н НС!. СЬес1| йе РН оЕ сЬе 80106оп Ьу яросПп8 <! р1 оп РН рарег. Рипуу сЬе сЕ)(я(А Ьу ехсгасНоп члсЬ РЬепо1:сЫогоЕопи (р1еаяе яее Аррепг!!х 8). Меаяиге сЬе ргорогсюп оу гас!101аЬе1ет) т!)я(ТРя сЬас е|йег аге !псогрогасес! !псо шасепа1 ргес|РПасе|1 Ьу ТСА ог ас)Ьеге со а Е)Е-81 П!сег (р!еаяе яее АррепгПх 8). Са1си1асе сЬе у(еЫ оЕ с!ЭХА ая ЕоПотчя: То сЬе сЬ(Пег! ш(сгоуи8е сиЬе, асЫ; О.! М тИСЪ!оСЪте!Со! р1аСЕП|а! К(я(аяЕ !ПЪ|Ъ|СОт о68о(ИТ)и и сох течетяе |тапяспрсаяе Ъибет 20 шм яо!исюп оЕ |1СТР, т(АТР, апт( |1ТТР 125 РМ |ССТР !О тиСИш1 (и-'|Р)|1СТР (яр.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
