Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 50
Текст из файла (страница 50)
А тесея!н1 ьунйеяь зЬнн10 у!еЫ -10,000 — 20,000 ерш/Н!. 9.28 СЬаргет 9: Ртератайоп оТ йад(о1айе!ед ВИА апд зсМА Ртйез ТКО()В! Е5НООТ!Ь(С й ! Ье Е)МА ауп(Ьеа(ь геасПоп ь |пейзс)епй П(де ог по гад(о)аЬе)ед гпа|епа! и(П Ье де|ес|ег! аЬоне о1 ху|епе суапо! |и (Ье ее!. |и |Ье иота саае, аП о1 |Ье гад(оасйн((у, и ЫсЬ соггеаропда |о ип (а-'зР)дСТР зи|П гп|йгаге их|(Ь (Ье ЬгогпорЬепо! Ыие г|уе.
ТЬе саиаеь о1 |Ьеяе ргоЫегпь нагу апд ° Тйе г|иа11(уо1 Гйе Зх рпзЬе аупгйее|а Ьийет. Весаиье ГЫа Ьийег соп(а(па дЬ(ТРь апд дПЫодзге а(а)з(е (о гереа(ег! (Ьаих|пй апд 1гееа(па. 5гоге гЬе Ьийег (п ягпаП аПгПю|ь апд д(асагс1 ипиаед Ьийег айег еасЬ геас|юп. ° Пзе (агент|(у о(йзе гетр|а|с апд Гйе пзпсеп|гайоп оз" (йе ойдопис(еойде рптет.
Сопйгт Пза( (Ье |егпр)аге 'ь (огас( апс$ М сопсеп|га|юп 'ь соггесг Ьу апа!уе)па а етаП аагпр!е Ьу айагояе це! е)ес(горЬогеы. Рцгйу |Ье оПцопис|еогк|е рптег Ьу ро|уасгу|апзк$е де! е)есггорЬогеа)ь ог Ьу со|итп сЬгопза(оегарЬу (р(еаье атее СЬар|ег 10, Рго(осо! 1). й ргоЫегпа рета(ь(, ригйу а пеи Ьа(сЬ о1 (егор(а(е ОЬ(А апд геьуп(Ьеь(ае (Ье рппзег. ° ТЬе айе апд г)иа11(у о1 гйе тад|оас6не дМТР. РгоЬеь о1 |Ье ЫаЬеаг ьрес~йс асдн(гу апд соггес| (епц|Ь аге ауп(Ьее)аед оп Пзе дау о1 агпча! о1 а тагйоас|ве ьЫ ргпеп( 1гогп Изе гпапи1ас(игег Аа |Ье гасПо|аЬе|ед сйЧТР десауь, (Ье ейесгве сопсеп|гайоп о1 (Ье ргесигаог 1аПь апг$(Ье а|те о1 |Ье 0МА ргодвс(а с|есгеааек ° Пзе аее апг| г|иа11(у ог" йзе й|епозч епеуте.
РгоЫеп а из)(Ь (Ье епаугпе сап Ье дегесгед Ьу )пс)ид(пй ап арргорпа|е роа(1(не соп|го! геасйоп (р(еаве аее 5(ер 1). РГО1ОСО! 6 Ьупйеыь о1 5~пц!е-ь1гапс1ес1 КМА Ргооеь Оу! и М1го Тгапясп родоп тклтч0-5Ресш|с, 5||чете-5твлттою КНА Рковев по| оп!у аге еаяег |о ша)се |Ьап РЬГА ргоЬея Ьц| а1|ю Вепега!1у у!е!д атгоп8ег я8па!ь ш ЬуЪг!с!!хат!оп геас6опх |Ьап с)о РЬ)А ргоЬеа оГ ет)ца! хрес16с аст!ч!ту. ТЬ!а |а ргоЬаЫу а гехц1| оГ |Ье !ппа|е)у Ь!ВЬег ьтаЪ|16у оГ ЬуЬгЫК !пчо!ч!п8 КХА (Саьеу ап|1 РачЫаоп 1977). Р)чА ргоЬез соп6пце то Ье оГ Кепега1 цт11!ту ш, Гог ехагпр1е, пог|Ь- егп апт) 5оцйегп ЬуЬгЫ|ха|юпя Ъц| тат! о1аЪе1ес) КЬ!Аь аге потч йе ргоЬеь оГ сЬоке |чЬеп апа)ух!п8 тгапьспрта оГ тпапппа!|ап Вепея Гпхтеат! оГ т)!8ехтш8 Р)ч)А-К)ч|А ЬуЪ|1|Ь тч!|Ь |Ье Ыюьупсга6с пцс1еаае 51, К)чА-КЬ)А ЬуЬгЫь аге т!18еатет) тч)тЬ КЬ)аде А, а т)цгаЫе апт! оЬет)1епт епхуше |Ьат сап Ъе цвет) а| а тчЫе гап8е оГ сопсептгаг!опа тч!|Ьоцт сошргош)яп8 |Ье гехц!тх оГ йе ехрегппепт (7)пп ет а1.
1983; Ме1|оп ет а1. 1984) Гр!еаае хее СЬар|ег 7, Рготосо1 11). ТЬе тетпр1атеа Гог тгапаспЪ|п8 КЬ!А ргоЪех аге Вепегатет) Ьу!шеапхш8 гесотпЬ~папт р1ая тпЫх йат саггу а ро|чегрц! Ъас|епорЬа8е ргопюсег |пппесбате!у цратгеаш оГ |Ье РЬ)А Гга8шепт оГ !птегехт 1р!еаае хее р!Вше 9-2) ог Ьу цяп8 РСК |о Вепегате тешр1атеь тчЬоае 5' епт)х епсот!е а Ьас|епорЬа8е ргогпо|ег (р!еаае хее |Ье рапе! оп А001Т!О|9АЕ РКОТОСОО Е|51НС РСК ТО А00 РКОМОТЕК5 ЕОК ВАСТЕК!ОРНАСЕ-ЕЫСООЕ0 К|!А РОЕ|МЕКА5Е5 ТО ЕКАСМЕ|9Т5 ОЕ 0НА а| |Ье еп|1 оГ тЬ!а ргососо1). РГАЬМЮ ЧЕСТОКБ БЬЕ0 ЕОК ПЧ Ч!ТКО ТКАЬ!ИСК!РТ!ОХ Мапу р!аяпЫ ап6 рЬа8еш!т! частота аге сопппегс|а1!у ача|1аЫе |Ьа| сопта|п чаг)оца сошЬ|па6опь оГ ЬассепорЛа8е рготпосега ап|1 ро!ус!оп!п8 х!теь (е.8., |Ье рСЕМ аепех апд йе р5Р ьепея р1еаае хее Аррепгбх 3).
5оп|е оГ тЬеье честогь а1ао епсо|!е йе !ась а-согпр1ешеп6п8 6а8шепт, ччЬкЬ а!!оччх ье1ес6оп Ъу со!ог оГ гесошЬ!пап|а оп р!атеь сопта!и!п8 Х-8а! 15-Ьгопю-4-сЫого- 3-!пс)о1у!-13-0-Ва!асторугапояс)е). ТЬе с!юке атпоп8 тЬеье честогх Гх 1аг8е!у а гпаттег оГ регьопа! ргеГегепсе. Ночечег, |Т тгапхсг)рта оГ Ьой ьтгапт!х оГ |Ье |етпр!ате аге гет)ц!гет), и Га Ье||ег то цае а честог саггуш8 ттчо с66егеп| ЪастепорЬаВе ргошогегх йап |о с1опе йе те|пр!ате !п тччо о6- ептатюпа |и а чес|ог саггу)п8 а яп81е рготпотег. 1т |а а1ао Йпрогтапт то сопят)ег йе сбхроя6оп оГ геяпс6оп ятеычпЬ!и |Ье |етпр!а|е РЬ)А ап|1 т!отчпатгеаш Ггоп| 6.
ТЬе 5' тегпппца оГ йе сгапхспрт !а 6хе|! Ьу |Ье Ъастег!орЬа8е ргопютег, Ъцт йе 3' сегпппца ы1е6пе|1 Ьу |Ье с)отчпхтгеатп я|е оГ с1еача8е Ьу йе геа|пс6оп епхуше. Ву цяп8 т!|ТГегепт геыпс6оп епхушея КЬ!Аз оГчаг)- оца!еп8|Ьх сап Ъе аупйеяхе6 Ггош а аепеа оГ 1|пеаг сешр!атех Вепегатес) !топ| |Ье ьатпе р1аяпЫ. 9.29 Ртотосо! бт БуптЬет(т оЕ Бт8!е-тткаидед ИХА РтоЬез Ьу Еп )т!тко Ттатспртюп 9.3! ской«8 сегпцш' ргойке йе Ъеат 1тпеаг тетпр!атея Ногченег, Ъой оЕ йеае туреа оЕ тегпиш уге!д КХА ргос1цсь тЬак аЬочн Ьетего8епе«у ат тЬекг 3' епда (МеЬоп ет а1.
1984; МППВап апд РЬ!епЬес1с !989). Тгапасг)ртюп оЕ Сешр1атеа кч(тЬ 3'-рготптйи8 тепшш гетш!Ка ш тЬе зуптЬеяа оГ я8п16сапт апюцпта оЕ КХЛ пю1есц1ез йат аге аЪеггаит!у ш«катед ат тЬе тегпцш оЕ йе Сепгр1асеа апд кЬы (и йе ргот1цсбоп оГ доцЫе-акга«дед КХА шо1есц!еа (5сЬепЪоги апд Мтегепк1огЕ 1985). Кеатпстюп ептугпеа кЬат Вепегате ргосгцйп8 3' тегпшц' аЬоц!д йегеГоге Ье ачоЫед. 1п асЫ«юп то р!аяпЫВ аогпе ЬассепорЬа8е апс1 сояпЫ нес!ока а!тю соптакп ЬастепорЬа8е ргоиюкегя итшаПу аггап8ед ки оррояте опепта6опз оп е«Ьег ят1е оГ йе с!ошп8 яте Еог Гоге(8п РХА. чктЬеп а гесотпЪтпапт сопаттцстег1 ш а нес!от оГ тЬь суре ь й8еатед кч)тЬ а геяпстюп епгутпе тЬат с1еачеа тпапу кппеа кн(тЬ)п йе Гоге(8п РХА, а 1аг8е пшпЪег оГ Ега8пкепта аге Вепегатед, опе оЕ чнЬ(сЬ со«каша а раг6си!ак ЪастепорЬа8е ргоиютег апд тЬе Гоге(8« аек!цепсеа тЬат 1те цптпейате1у ад)асепс то тт.
!Г йе Гга8шепта до пот саггу рготгцйп8 3' кепптпт, оп!у тЬе Ега8- шепт Ьеапи8 тЬе ЪастепорЬа8е рготпотег аегнеа аа а тешр!ате Еог ки ч«го тгаиаспртюп. ТЬе геа«16и8 гайо1аЪе!ед КХА, кчЬ(сЬ ь сотпр!ешеитагу то ает)цепсеа 1осатед ат опе епс1 оГ йе ог)8- кпа1 ае8гпепт оЕ Гоге(8п РХА, сап йеи Ье цаед аа а ргоЪе то ьо!ате очег1арр(«8 с1опеа 6отп 8епопцс РХА ог сРХА 1гЬгапея ТЬеае нес!ока 8геат1у юпрПГу йе таа(с оГ "ъчаПс(п8" Егопт опе гесотпЬкпапт с1опе то апотЬег а!оп8 йе сЬгошоаоше.
ТЬе ЕоПоъч(п8 ате ткни Ь18Ыу ербскепт гпетЬода ачат1аЫе то Вепегасе атгапд-арес)Етс КХА ргоЬея ° ТЬе ге1ечапт РХА Ггадпепт тпау Ъе с1опес1 ог тшЪс1опед тико ареста!тхед р1ааш(да йат сопкаш ргопютега Еог ЬастепорЬа8е-епсодед РХА-с1ерепс1епт КХА ро1ушегааея ТЬе гесошЪ|папт р!аяп(да аге а аошсе оЕ доцЫе-ягапдед тегпр1атеа кЬас сап Ье тгапаспЪед 1« ч«то (псо яп8!еЯгапдед КХАз оЕ дебпед 1еп8тЬ апс1 атгапд арестбс«у (Улпп ет а!.
1983; Ме1соп еК а1. 1984). ° ТЬе РХА Гга8шепк то Ье сгапаспЪед тпау Ье ашр66ес1 )и РСКа кн(тЬ рпгпега кчЬоае 5' епда епсос1е ауптЬет(с ргопютета Еог ЪастепорЬа8е-епсодед РХА-дерепдепт КХА ро1утпегааея РоПоън)п8 рцп6сатюп, йе ргойкь оГ йе РСКа аге ыес1 аа доцЫе-акга«дед тешр1атеа Гог )и ч(тго Сгаиаспрт(оп геас6опз (1.о8е1 ет а1. 1992; Ва1еа ет а1. ! 993; ()тки!(а ет а!. ! 993). 1п Ьой сааея йе ауптЬеяа оЕ КХА ь тешат!саЫу ейк(еит. 'ччЬеп ш н«го тгапаспрт)оп геаст)опа ате аатцгатед ндтЬ пЪопцс1еояде тпрЬоарЬатеа (кХТРа), йе тешр1атеа сап Ье кгапаспЬед тпапу типея у!е1д!п8 а гпааа оЕ КХА кЬак ехсееда тЬе кче!8Ьт оЕ тЬе тепкр1ате аечега1(о!д.
!п адйтюп, Ьесаые ЬастепорЬа8е-епсодед РХА-дерепдепК КХА ро!угпегааеа Ецпсбоп еЕ6- с(епт1у !и н«го ш тЬе ргеаепсе оЕ ге1а6не!у!окн сопсептгатюиа оГ гХТРа (! — 20 )кМ), Е«П-)еп8тЬ ртоЬеа оЕ Ь18Ь арестбс асбн«у сап Ье ауптЬеяхед ге1а6не1у (пехрепяче1у. Р(паПу, КХА ргоЬеа сап Ье Егеед !тото секир!асе РХА Ьу тгеа6п8 тЬе геас6оп ргодцста чдтЬ КХаае-Ггее РХаае 1.
РгоЬеа цялаПу с1о пот пеес1 то Ье рцп6ед Ьу 8е! е1есткорЬогеяя Е!омечет, кнЬеп ця«8 КХА ргоЬек оЕ Ь!8Ь прес(6с аст(ч(ту то де!ест гаке шКХА тгапаспр! я Ьас)с8тоцпд ЬуЬпйха6оп сап Ье )керт ко а пипипши цяп8 ркоЪеа рцп6ед Ъу депатцпп8 Ве1 е1естгорЬогеяя !п тЬ)а рготосо1, кче деасг!Ъе ргоседцгеа Гог аупйеятдп8 КХЛ ргоЬеа оЕ Ьк8Ь арес!6с ас6ч«у Ггош р1аятпда сопташш8 ргогпотега Гок ЬастегюрЬа8е-епсодед КХА ро1ушегааея Ап ас1йтюпа1 рготосо! деа1а кч!тЬ ГЬе 8епегатюп апс1 ттапаспрт)оп оЕ РСК ргодцстя Сц(дапсе апс1 Ъас1с8гоцпд ш(оппа6оп оп ЪотЬ тпетЬода ате рточЫед тп йе тпГоппа6оп рапе!я ° ТЬе ептуша6с ргорегт(еа оЕ КХА ро!ушекааеа цаед ш тЬе тгапаспрт(оп геаскюпа аге деаспЪед тп йе тп(оппа6оп рапе! оп !Х Н!ТКО ТКАХ5СКтРТ!ОХ 5Ч5ТЕМ5 ат тЬе епд оЕ йЬ сЬартет. ° Хесеяагу ргесацтюпа то гейке ргоЫепь кн!тЬ соптаицпаип8 КХааеа аге оцЕПпес1 гп тЬе гпЕогшатюп рапе1 оп нОъч тО !аl!Х ТнЕ ВАТТЕЕ ЪЧ!ТН КХдае ти СЬартег 7.
9.32 СЬарсег 9: РгерагаНоп о)'йаг((о1абе1ег( РЫА аиг$)$)н(А Ргобех МАТЕР!А~5 А !МРОПТА~ЧТ Ргераге аП геаПеп15 ихес((и 1Ых рго(осо1 гМ1Ь ЕГЕРС-1геа(ес( Н О (р(еахе аее (Ье )иЕоггиа(юп рапе( оп НОЧЬ ТО ЪИЬ( ТНЕ ВАТТЕЕ ЪЧ!ТН ВНА511и СЬар(ег 7). СА()Т1ОЬ(: Р!еаье атее Аррепг(!х 72 Еог арргорпа1е Ьапг(!(пП о1 та1епа15 таг(сег$ и11Ь <1>. Войегб апд Бо!обопб Р)еаае аее Аррепг((х 7 Еог согпропепп о( а(осЬ ао!01(опь, Ьи((ега, ап6 геадеп(ь.
01101е 5!ос(г ао!06опь 1о 1Ье арргорйа(е сопсеп(га1юиа. Алгтолгигп асе(а1е (70 М) ОР11опа!, р!еаге гее 51ер 8. Войле бегит а)Ьитгл Г2 тфт), Ргаспол $1 5)ата) Р!1Ь(о1Ьгеао( (7 М) Е1Ьало! РЬело1:сЬ)огоуогт (7г7, ч)н) <!> Р(асел(а1 ГЕ)ч)аье тЬгЬ(1ог Г20 ил(18 р)) 5ос(гит асе(а(е ГЗ М, рН 5.2) 70х Тгаласг(р((ол ЬиГЕег 400 шм Тг(я-С! (РН 7.5 аг 57'С) 60 гпМ МПС1г 20 шМ ярегш!Йие НС! 50 гим НаС! 51егйге йе 1Ох Ьп((ег Ьу 6! сгагюп апП ГЬел гаоге Ь ш япа)! а! ьрюгя аг -20'С.
Оасага еасЬ а1в!пос айег пж. Епкугпеб апд Войегб Арргорла1е геьслспол елхутеа Р1еаье аее 5гер !. сг(чА-г(ерелс)ел1 ВЬ)А ро!утегахе оГ Ьас(ег(орЬаПе ТЗ, Т7, ог 5Рб ТЬезе епгушег аге ачаааЫе 1гогп гечега! сошрап(ег апП аге пгоаПу епрраеа аг сопсепггагюпг оГ $0 — 20 пшгг)Р). Мояг шапа(асгпгегк а1ю сарр!у а 10х ггапгспргюп Ьп((ег 1Ьаг Ьаь ргеьшпаЫу Ьееп орбппгеП 1ог 1Ье(г Рагбсп!аг ргерагабои оЕ 1Ье Р)4А-Перепг(епс КЬ(А ро!ушегаяе. ТЬе Пепепс 10х ггапяспрбоп ЬпЕЕег (!асей ппг(ег Пп((егь апП 5о1шюпь) сап Ье мед г( 1Ье гиаппбасшгег'з Ьы(уег Ь !и гЬогг тпрр!у.
~ К(гх гог (и чг1го ггаиасг)рбоп аге ао(г( Ьу пгапу спали(ас(игегх (е.П., МАХЬсирг апс1 МЕСАаспрг Егопг АгпЫоп апс1 ППюргоЬе Сегп(пг 5ухгета (гоги РгогпеПа). ТЬеае (е(15 аге сопчеп!еп1 Еог (инее(!Па1ога чнЬо аге иа(пП (и нПго (сап хсг(рбоп те(ЬосЬ Еог (Ье Пгаг Пгпе, апг(1Ьеу аге сепа) п( у а гпагче(оих Ье! р 11 хогиеПг(пц Пиеа ччгопц ча(Пг Пге (есЬпк(ие. Ноччечег, 1Ье геаПеп(5 апг( Ьийегх аиррПес$(и ГЬе (а)15 саи Ье еахПу аххегпЫег((п 1Ье $аЬога1огу Ьу апу согире(еп1 ъчог1сег, апс( ЕЬе еихутех сап Ье ригсЬааес((пехреп- 5(че(у ах аерага(е 1(еша.
)1(чахи-Егее ралсгса6с Сг)чахи! (7 те)т() ТЬ(г епгупге и ачаааЫе Ггош гечега! шаппГасшгегь (е.8., И)1 П)4аге-Ггее 775(аге 1 Егош Ргогпе8а). А!сегпабче!у, сопгапипагш8 П)4аге сап Ье гепючег$ (гоги ггаиг(ага ргерагаИопь оГ $)!часе ! Ьу аЕПшгу сЬгогпасоПгарЬу оп а8агоге 5'-(4-аш(иорЬепу!РЬоьрЬогу1)-пг(П(пе-2'(3')-РЬоьрЬасе (МахгчеП ег а!. 1977). Р1еаге атее Аррепйх 8 Еог Пе1аг!с Се!5 Ааагохе де! (0.8-7.0;4) Р1еаге гее 51ер 1. )Чос!е!с АСЫ5 апд О!коппс!еоЕЫе5 гЬ)ТР хо1иВол сол1а(л(ле гАТР, гСТР, алс( г()ТР, еасЬ а1 5 тМ Ршгосо! бс 5упсЬеыс о)' Б[пд/е-зсгапдед )с/чА РгоЬея Ьу 1п [7(сго Тгатсг(рс(оп 9.33 гСТР (0.5 тм) Оргюпа1, р!еасе асс 51ер 5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
