Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 47
Текст из файла (страница 47)
5гоге гЬе агос)с ао!обола оЕ рпгоега аг — 20 С. 9.16 СЬаргег 9: Ргерагапоп о/'Яат/(о1аЬе!етГ РНА аптГ АХА РгоЬея 068опис!еосЫе рпшегя яупсЬея)ае6 оп ап аисотпасег1 Р)4А яупсЬеяаег сап Пепегаау Ье ые6 сп ясапПагб РСП ъчПЬоис Гигйег рипбсабоп.
Ноъчечег, ашр1тбса6ов ап6 гайо!аЬе1тп8 оГ яп81е-сору яегрлепсея Гготн птапнпа1 сап Еепопнс сешр!асея Ь ойеп тпоге еГПстепс 6 сЬе о68опис!еосЫе рппъел аге ригтТсе6 Ъу сЬгопгасо8гарЬу оп сопипегссаау ачат1аЫе геяпя (е.8., ЫЕ)45ОПВ, ХЕЫ ЫГе 5с)енсе ргск1- ись) ог Ьу Пепи!от)п8 ро1уасгу!ангЫе Ее! е!ессгорЬогеяя, ая Пеясг)Ье6 ш СЬарсег!О, Ргососо! 1. Тетр/асе Е)съ/А (2-70 пВ) А чапесу оГ сешр1асея сап Ье ые6 ш сЫя ргососо1, шс!ийп8 стиг)е птш)ргерагасюпя оГ р!аяпЫ РЫАя (р!еаяе яее СЬарсег 1, Ргососо! Н, рипбег) ЬассегюрЬа8е х Р)ъ)А ог р!асрте е1иасея (р)саяе яее СЬарсег 2, Ргососо! 23), ЬассегюрЬа8е М13 я)п81е-ясгапбе6 ог ПоиЫе-ясгапс$ес$ РХАя (р1еаяе яее СЬарсег 3, Ргососо! 5), р инбер РХА Гга8шепся Ьо!асе6 (тонг а8агояе ог ро)уасгу1аптЫе ПеЬ (р1еаяе яее СЬарсег 5, Ргососо! 1), ап6 Еепопнс Р)4Ая стош ог8ашяшя ъч(сЬ 1оъч сопзр1ехау (е.8., Ьассепа апг) уеаяс).
реп ияп8 сЬе Р)ъ)Ая о( гесошЬспапс ЬассепорЬа8е х ог р)аяш(6я ая сешр!асея, а япаП ргоропюп оГ сЬе гайо)аЬе!е6 ргоЬе пгау Ъе с1ег)че6 Ггогп сЬе чессог яег)иепсея. ТЬ)я сопсапнпа6оп апяея сГ сЬе о68опис!еосЫе рптпегя аге согпр1егпепсагу со ПапЫп8 чессог яес)иевсея ог Ъесаше сЬе РСП чаП Певегасе!оп8 "геат1-йгоиЕЬ" ясгавбя оп сЬе ясап(п8 сешр!асе РХА. Рог гноя ЬуЪпйаас!оп аррПсасюпя, сЬе ргеяепсе оГ 1оъч 1ече1я оГ чессог яетртепсея чаП пос шсег(еге ъчтй сЬе ехрегнпепс. Ноъчечег, ъчЬеп ясгееп(п8 1тЪгапея гпаде сп ЬассепорЬа8е А чессогя ог ЬтЕЬ-сору-пшнЬег р!аяпЫ чессогя (е.8., р(/С, РВ! иеяспрс, ап6 РСЕМ чессогя), сЬе ргеяепсе оГ чессог яет)иепсея (п сЬе ргоЪе сав 1еа6 со а яиЪясап6а! Ьас)с8гоипй То пъапа8е сЬтя ргоЫепг (1) ые Гогъчагб ап6 гечегяе рппгегя сЬас аге (оса!яд чайш сЬе сагЕес ге8(оп, (2) ые а Пе1-рипбет1 Р)4А ба8шепс ая а ясаптп8 септр!асе Гог сЬе аптр!т6сасюп, ап6 (3) с!еаче йе сешр1асе РЫА ъч)й геяспссюп епкупсе(я) со ргечеш сЬе яупйеяЬ о( геайсЬгоиПЬ ясгапдя.
прес!а! ЕГ!о!рп7еп1 Вагу/ег С/ря Гог аигогпаВс тгсгоргрепея АГ(сто/иее СиЬея (0.5 т/, ГЬ/п-ъчаИес/ ГиЬея г/ея/епег/ Гог РСВ) Роя(С(че-Йяр/асетеп( ртреое 5ерЬас/ех С-75 хрип со/итл, ег/иП(Ьгасег/ и ТЕ ГрН 7. 6) ТЬегта/ сус/ег ргоагаттег/ ъч/ГЬ с/ея/гег/ атрЬПссабоп ргогосо/ 1Г сЬе йеппа! сус1ег Ь пос ес)и!Рре6 чай а Ьеасеб 1Ы, ияе етйег напета! оа ог а Ьеа6 оГ рата(6п ъчазт со ргечепс ечарогавоп о(1гПиЫ 6огп сЬе геас6оп пнхсиге Пиг)п8 РСК. МЕТНО0 1. !п а 0.5-ш) й(п-ъча11ет1 ш)сгоГиде сиЬе Са)шпЕПс 10х ашрЬПсавоп Ъибег 10 гпм ЙХТР яо!Ыюп 0.1 шМ ВСТР 20 Нм Гогъчагб о!т8опис1еосЫе рпшег 20 НМ гечегяе о68опис1ео6де рпгпег сегпр!асс РЫА (2-10 п8 ог -1 6по!е) !О С)/ш! [ — Р!ВСТР (яр. асС. 3000 СУпнпо1е) Н„О яес нр ап ашр!16сасюп/гас)10!аЪе1)пЕ геассюп соп- 5.0 н) !.О р) )ОФ 2.5 н! 2.5 н! 5 — 1О н! 5.0 н! со 48 н! АсЫ 2.5 ишся оГ йеггпоясаЫе Е))ъ)А ро1угпегаяе со сЬе геассюп ппхснге.
Сеп(1у сар йе яЫе оГ йе снЬе со ппх сЬе шЕгейепся И нюте сЬап опе РХА 6а8шепс ы со Ье гайо)аЬе!е6 ня)п8 а яп81е ра(г оГ рппсегя, ша)се ир ап6 йярепяе а гпаясег ннх сопя(я6в8 оГ аП йе геасстоп сошропепся ехсерс йе Р)4А сешр!асея со сЬе РСП шЬея. 1пйчЫиа! РХА сешр1асея сап йеп Ье асЫед со еасЬ сиЪе )ияс Ье(оге абай!)ов оГ епауше ап6 )пгаа6оп о( сЬе геассюп. Йаг!!оас1!ъге Согпроопг!5 /и-яхр/г/СТР (70 тСт/т1, яр. асс. 3000 Сс/тто/е) (1> То пт!шпнхе ргоЫешя сашей Ьу гайо!уяа оГ Пге ргесигяог, и 6 Ьеяс, ъчЬевечег рояяЫе, со ргераге гайо1аЬе1е6 ргоЬея оп йе Пау йе 1'тр) дЫТР апгчея тп сЬе 1аЬогасогу. 9.18 С)тартег 9: Ргерагат|оп от Яадто!а|те!ед РИА аид В)х(А Ргойет А00!Т!ОЫАЕ РКОТОСОЕт А5УММЕТК)С РКОВЕ5 Ву йит)т)пй тйе апюопт о1 опе рпптег |и тйе агпрййсатюп геастюп, а ргеропс|егагке о1 опе атгапд о1 дю доиЫе-атгапдед 0ь)А тегпр|ате тчй! Ье аупйтеа)аед дог)пП тйе аптрййсатюп геас6оп (Суйепатеп апд ЕгйсЬ )988; |ппь ет а|.
1988; 5Ьуалта|а апс! Аптеа 1989, т 993; МсСайе т 990; 5сойу ет а|. 1990). ТЬе гехи)т)пП аауптгпетпс ргоЬеа сап Ье сьед тп пот(Ьегп ЬуЬпт|ссатюп то детеггапе тчЫсЬ атгапд о1 ап ип)тпощп 0ЫА гергеаепь (Ье аепае атгапд о1 а депе апд тчЬ~сЬ гергеаепта тйе апт|аепае атгапд от' а Пепе, То аупйтеа)хе ап аауптгпетпс ргойе |и тЬе айоче геас6оп, аоЬат)тите а 8,4 ттта ео|ийоп о1 етуйег (Ье йтгтчагд оййогвс)сот!де рпгпег ог (Ье гечеье рпгпег 1ог опе о1 тйе атапдагд 28 тгтчт рпптег яо!ийопа (р)еаае аее 5(ер т о1 тйе гпа|и рготосо|). Саггу оот тйе гепта)пдег о1 (Ье рготосо! ехасйу аа деясг(Ьед.
Кеер |и гп)пд тйат аяугигпетпс аптрййсайоп )п)йайу ргосееда ат ап ехропептй гаге апд (Ьеп а)отча то ап апдхпе6с гаге тчЬеп тйе агпооит о( опе оййопис)сот)де рпгпег Ьесогпеа йит)т)пй. ТЬе арес аауптгпетгк ргойе 'ь тйе аапте аа (Ьат ргодосед (п тйе поггпа| РСК, Ьот (Ье апюцпт о( 06(А а геастюп ъч)П Ье гписЫеаь 5ед)пП ир гпо|йр|е геастюпа ат 5(ер т сап Ье|р согпрепаате тог (Ье у|е|д о1 ргоЬе. А|йю )теор |и гп|пд тйат тйе Ыть )и 1ачог о( опе гатйо|аЬе|ет! атгапд очег тйе о(Пег )а оаиа а 1астог о1 5. Н песеатату, (Ьь гатю сап Ье )итргочед (1) Ьу аерагат)пй (Ье а(пд)е- апт| дооЬ ргойкь от' тйе РСК Ьу Пе! е)естгорЬогеа)а ог ап)оп-ехсЬапйе сЬгогпатойгарйу (р)еаъе аее А Ьу оа)пд а гпоге согпр|ех, Ьчо-атайе аптрййсатюп ргоседиге (Ьат епаЫеа а а)пй)еьпаидед тйлсет! тп >20-(о)д ехсеаа (Кпсй т ет а|.
1 99) ). Рго1осо! 4 5упйеыь о1 5|пи!е-Мгапдед 0МА РгоЬеь о1 Оеппед Еепц1Ыгогп Вас1ег|орЬаце М13 Тегпр!а1еь | н тн!я рхотосот лно !н Рхотосот 5, л зчнтнгт~с онсонистеотюз аппеа1ей то з!пц!е-зтгапйей РХА йепчей ттош а гесотпЬтпапт ЬастегюрЬаце М13 ог РЬацешЫ тешр!асе 1з изей со РПтпе тЬе яупгцезйя оГ сотпр!ешептагу тай)о1аЬе1ей )ЭХА (1еу ет а!. 1982). цуптЬеяйз 1з сата1угей Ьу тЬе К1епотм тгацшепт от" Е. со!т 1)ХА ро1ушегаяе 1, ммЬкЬ ехтепйя тЬе аппеа1ей рпшег тот чагюиз й)зтапсез а1опц тЬе з)пц!е-ятгапйей тетпр!ате 0)м)А.
ТЬе ргойистз оГ гце теаст!оп, ммЬкЬ аге Ьесегоцепеоиз ЪотЬ тп 1епцтЬ апй тп тЬе ашоипт оГ шсогрогатей тай)о1аЪе1ей йЫТРз, аге й!цеятей мм)тЬ а гезтпстюп епхутпе то сгеасе йоиЫе-зтгапйей ТРА Ггацшептя оГ ип!1отш 1епцтЬ, ммЬ!сЬ аге яиЪ- зет!иепт!у рит)ттей Ьу ацагояе це! е1естгорЬогеей. ТЬезе ргоЬея аге Ыеа1 Еог пис1еазе 51 ог пшпц Ъеап пис1еазе шарршц от" гце 5' епйз от" шКЬ)Аз, Еог йетегпишпц тЬе рояйтюпя оЕ ехопя !п а цепс, 1ог изе !п зо1шюп ЬуЪт)й!гат)оп то т)иапт!тате тпКХА, ог Кот ргойис!пц а ргоЬе тЬат 1ас)тя честог яет!иепсез ог гергезепгз оп1у а зша11 гец!оп от" а с)3Ь!А ог цепе. ТЬе о!1цопис!еотЫе ргипег гя изиа1!у сошр1етпептагу то а гец)оп оГ тЬе !ас цепе птппей1- ате1у 3' то тЬе ро1ус1оп!пц зйте 1п тЬе птр яепез оГ ЬассепорЬаце М13 честогз (Уап)зсЬ-Реггоп ес а1. 1985).
ТЬтз "ип1мегяаГ' ргипет, ммЬ)сЬ )з зо!й Ъу земета) сошрап!ея, Ьая тЬе ас1чаптаце тЬас Ь сап Ье изей то ргераге ргоЪез сошр1етпепсагу со апу зецшепс оГ )3ХА тЬат Ьаз Ьееп с1опей тпто апу геятт)с!!оп айте ш тЬе ро!у1!и!сег оЕ тЬе честог (тот уигтЬег йета11я, р1еазе зее тЬе !птотшат)оп рапе1 оп !ЗнгмЕ85А1 Р81х4885 тп СЬартег 8). Номмечег, сиятотп-шайе о!тцопис1еотЫез сошр!ешепсагу со зрес)ттс яес!иепсея тм)тЬ)п гце с!опей РХА сап а!яо Ье изей то ргераге ргоЪез тЬас гергеяепт оп1у а рог!!оп от'тЬе с1опей зес)иепсе. ТЬе з!хе, зрес)ттс аст)ч!ту, апй уте1й от" тЬе ргоЬе зуптЬез!хей Ъу тЬе К!епотм тгацшепт аге аттессей Ъу тЬе ге1атгче сопсептгатюпя оЕ ргипег, тешр1асе, апй йЬ1ТРз.
!'ттЬеп тЬе сопсептгайоп оГ еасЬ ог тЬе Еоиг йХТРя !п тЬе геастюп !з цгеатег тЬап тЬе К ог тЬе Иепомм ептуше, зупгЬегйз оЕ АЗХА оссигз ат а тпахипа! гасе. 1Г гце сопсептгат)оп оу апу опе от тЬе тоиг ргесигяогя Еа!!з Ье1омч тЬе К, гце тате от" зуптЬегйя йгорз йгашат)са11у. ТЬиь, ммЬеп еасЬ от" тЬе Гоиг йХТРз !з ргеяепт ат а сопсептгайоп!езя тЬап тЬе К, аз 1з оттеп гце сазе мтЬеп оп1у гай1о1аЬе1ей пис1еотЫея аге изей ая ргесигяогя, тЬе у!е1й от ргойист сап Ье ехсгетпе!у 1омм. То ачоЫ тЬтз ргоЫеш, ргипегехтепгйоп геаспопя аге ияиа11у сагпей оит чйтЬ тЬгее ип!аЪе!ей йИТРя, еасЬ ас а сопсепсгайоп ш ехсеяя оГ тЬе К, апй опе тай)о!аЬе1ей йХТР ат а !отчет сопсепсгатюп, змЬ!сЬ тз изиа!1у Ье!омм тЬе К .
Упйег тЬезе сопй!т!опя, гце ргорогйоп оГ тай)о!аЬе1ей йХТРз шсогрогатей !пто ТРА гз мету ЬтцЬ, емеп тЬоицЬ тЬе гаге оГ тЬе геастюп птау Ье гаг антош птахипа!. ТЬе К ог гце епхуше гз й!Йегепт Еог еасЬ йеохупис!еояЫе тПРЬозрЬате: 200 )тм Гог йСТР, 140 )тм Еог ТТР, 45 )тм тот йСТР, апй 12 )тМ Еог йАТР (Тгачац!!и! ет а1. 1975). 9.19 9.20 Отартет 9: Ртерата6оп оЕтъадто1а(те!ед РХА алд РъХА РтоЬея 'ъчЬеп опе ог пюге дХТРя аге ргеяепт ат 1ш66п8 сопсептгатюпя, тЬе яхе оЕ тЬе ргодист тпау Ье ипассертаЫу япа11 ип1еяя тЬе апюипт оЕ тетпр1асе !и тЬе геастюп !я а1яо гедисед. Рог ехаитр1е, ш а геас6оп сопса!п!п8 тЬгее ип1аЪе1ед дХТРя еасЬ ат а сопсепсга6оп !п ехсеяя оЕ тЬе К, 16 ршо1ея (50 )тС1) оЕ а гайо1аЬе1ед дХТР (яр.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
