Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 45
Текст из файла (страница 45)
ТЬе ЬиКег и|ау Ье Котеп апд |Ьа|че6 |счета) сапе| сч)йоис Ьагш. ТЬе согпроя6оп оЕ сЬе 5х о!фопис1еосЫе 1аЬе1)пе Ъийет береп6а оп йе )а-ттр)6)ЧТР со Ъе и|ей 1Е гагПо!аЬе1ед ЙАТР Ь со Ье и|ей йе Ъийег аЬоиЫ сопса)п |1СТР, т)ТТР, апт! 6ОТР 1Е съчо та|По!аЬе1е|1 6ЫТРа аге иаей сЬе Ьийег ьЬои16 сопсаш с|чо ип!аЪе)е6 с$ЫТРа.
Рог абчке оп гпаЫпВ ап6 а!от)пВ яос1| ао1ис)опт оЕ т!НТРА р1еаае атее сЬе шЕогшасюп рапе1 оп РЕЕЕРАЙАТ!ОЬС ОЕ 5ТОСК 5ОЕРТ1ОЫ5 ОЕ сПЧТРь А)ЧР ЙИЧТРа ЕОП 0)ЧА 5ЕОЕ)ЕЬССПЧС )и СЬарсет 12. Епкугпе5 апе1 Войег5 К)епо|ч КадтепС оЕ Е. со!| ОНА ро1утегахе ТЬе К!епо|ч ЕгаВшепс 15 ипат) Ь ге|)штеп ш еасЬ гапбогп рг)исшВ геасбоп. Се15 А!Еа)спе адагоье Ве) ог Оепасиппе ро)уасгу)атсс)е Ве) (1> Р1еаае аее 5гер 4. )ч)ос!ек Асн15 апд О1фопос!еоЕ141е5 йапс)от т)еохупис!еос)т)е рптегь ях ог аечеп Ьаьеа |п )епеСЬ 7725 пф)с) т ТЕ, рН 7.6) Весаые оЕ йе1г ишЕопп !епасЬ ап6 1ас)с оЕ ыЧиепсе Ь~аа, аупсЬе6с оПВопис!еосЫеа оЕ гапбош тес)иепсе ате тЬе рпгпега оЕ сЬоке.
0115опис!еосЫеа оЕ орсипа1 !еп5сЬ 1Ьехап|ега ог Ьерсап|егя 5щапшиа апд Сир!а 1995) сап Ье ригсЬаье6 Егогп а сопипегс|а! аоигсе Ее.д., РЬаппас|а ог ВоеЬпщег МаипЬеии), ог аупсЬеяте6 !оса!!у оп ап аисошасед Р)ЧА ьуп|Ьеяаег. Еиоге сЬе ао!исюп оЕ рпп|ега ас — 20'С !и япа)! а!)оиога. Рпп|ега аге спсогрогасед Ысо йе 5х оВВопис!еос!6е 1аЬе)шц ЬиКег. Тетр)асе ОХА ТЬе РЫА со Ъе !аЬе!е6 и тесочете6 айег е! ессгорЬогеьа йшщЬ а!отч-ше1сшВ-сешрегасиге аВагоае це! Ее.д., РМС 5еар1а|р|е 1.МТ АЕагоае) Ер!еаае ые гаера 1 — 5 оЕ сЬ)к ргососо!). '1Ъе Ее! Йои16 Ье спас ап6 тип |п 1х Тпяасесасе е!ессгорЬогеяь ЬиКег ЕТАЕ).
Рог Веса!!а оп саа6и5 апд гипшщ 1отч-ше1сшВ-сегпрегасиге Ее!а, р1еаае аее СЬарсег 5. ТЬ|а рготосо! чтит)са Ьея |чЬеп 25 пВ оЕ сеп|р1асе РЫА )а иае6 ш а асапбаг6 50-и) геассюп. Катает апюипя оЕ РСЧА цепегасе ргоЬеа оЕ !отчет арес|йс асс1чиу; япа1!ег ашоипь оЕ РЫА гет)шге 1опВег геасбоп !пиеа. Р)еаье аее пасе со 5сер 4. Ва411оас11сте Согпроопд5 Еа-~~Р)с)ЕЧТР 170 тСЕ)т), хр. асс. >3000 С))тто)е) (1> То ш)п)ш)ае ргоЫеша саюе6 Ьу гагПо!уяз оЕ тЬе ргесигаог, и Ь Ьеас, тчЬепечег роаяЫе, со ргераге гагКо!аЬе!е6 ргоЬев оп сЬе 6ау йе )ттр)6)ЧТР агт!чеа ш сЬе 1аЬогасогу. 5рес1а! Е4101ргпепг Во|Вид |часег Ьай 5ерЬас)ех С-50 хрип со)игпл, еди)!ЕЬгасес) т ТЕ ЕрН 7.6) ОР6опа1, р!еаае аее Еиер 5.
Ргогосо! 2: гъанг)опг РгЕтЕнц: Ръаг)101аЬе11пц о)'ВИА 9.11 МЕТНОР 1. АЕгег е1есггорЬогеяа, ага)п ЕЬе це1 ъч!ЕЬ ейЫшш ЬгоиъЫе (йпа1 сопсепггагюи 0.5 )гцуиъ1) ог 5УВК Со1д, апс) ехс)ае ЕЬе с)еа!гес) Ъапй е1шипаипц аа ишсЬ ехсгапеона ацагоае аа рояяЫе. 2. Р1асе ЕЬе Ьагн) !и а ргеъче18Ьес) пъ!сгоЕнце гиЬе апс1 гпеааиге Ьа ъче)цЬЕ. АсЫ 3 ш1 оЕН 0 Еог ечегу цгаш оЕ ацагоье це!. 3.
Р1асе йе ш!сгоЕнце гнЬе Еи а Ьог!гпц ъчагег ЬагЬ Еог 7 ш)пнгеа со иъеЬ йе це! апс) с)епагиге йе РХА. !Е гайо!аЪе1ъп8 Ь го Ье сагг!еъ) онг ннгнейаге1у, агоге йе гнЬе аг 37'С ннг!! ЕЬе гетр!аге и ге0шгей ОгЬегннае, агоге гЬе шЪе аг -20 С. АЕгег еасЬ геточя Егот агогаце, геЬеаг йе Р)ъ)А/8е! а1нггу со !00'С Еог 3 — 5 пнин!ее апъ) ЕЬеп агоге ас 37'С нпгц гЬе гаъ)!о!аЬе!!п8 геасиоп Ь шшагей ! 0) Со 50 Н! М!х йе согпроиеп!а согпр!еге!у ъчЬЬ а иисгоргреяог. 1иснЬаге йе геасгюи Еог 2 — 3 Ьоига аГ гоош гегирегагнге ог Еог 60 пипнгеа а! 37 С. То !аЬе! !агцег атонии оЕ РЬ)А, аъ))наг йе чо!шне оЕ гЬе геасг!оп ннхшге ргороггюпаге!у апъ) !пснЪаге гЬе геасион Еог 80 пнпшеа. То !аЪе! яна1!ег атонии оЕ РЬ)А, шснЪаге гЬе геасгюпа Еог Ьгпеа ЕЬаг аге ш шчеле ргорогиоп со гЬе апюнпг оЕ !егор!аге асЫей Рог ехагпр!е, гапйот рпньъпц геасиопа сопсаъншц !О п8 оЕ гетр1аге РЬ)А аЬон!0 Ье !нснЬасей Еог 2.5 Ьонга.
То ъпопиог ЕЬе сошае оЕ йе геасг!оп, пъеааше ЕЬе ргорог6он оЕ гаъ)!о!аЬе!ес) г))4ТРа гЬас еЬЬег аге !псогрогагеь) !пго гпагепа! Ргес!р!гагеь) Ьу ТСА ог гЬас аъ)Ьеге го а РЕ-8! 6!гег !р!еаае аее Аррепйх 8). !)пъ)ег гЬеае геаспоп сонйнопа, гЬе !епцгЬ оЕ ЕЬе гаъ))о!аЪе!еъ) ргоъ)нес Ь -400 — 600 пнс!еогЫеь, аа с)есегт!пег) Ьу е!есггорЬогеяа гЬгонцЬ ап ацса!!пе ацагоае 8е1 1СЬаргег 5, Ргогосо! 8) ог а ъ)епагнпп8 ро!уасгу1атЫе 8е! !СЬаргег 5, Ргогосо! 9).
5. АсЫ 50 р1 оЕ )ъ)А яорЕагогаце ЪОЕЕег го йе геасг)оп, аис1 ргосеес) ъч!ЕЬ опе оЕ ЕЬе ЕОПоъч)иц орс!Опв ав арргорПасе: ° цгоге йе гайо!аЪе1ес) ргоЬе аг — 20'С ииг!1 Ь га пеес!ес) Еог ЬуЬг!йгаг!Ои. е 5ерагаге ЕЬе гас)101аЪе1ес) ргоЬе Егош нп)псогрогагес) д)ъ)ТР8 Ъу еЬЬег арпи-со1ншп сЬгошагоцгарЬу (р!еаае аее Арреийх 8) ог ве!есг)че ргес)р!Еаг!Оп оЕ ЕЬе гайо1аЪе!ес) Р)ъ)А ъч)ЕЬ апииопшиг асс!а)е аид егЬапо1 (р1еаае аее Аррепс)18 8).
ТЬ!8 8!ер 15 пог гес)и!гес! !Е >5094 оЕ ЕЬе гас)!01аЬе!ес) с))ъ)ТР Ьаа Ьееп шсогрогагес1 с)нг!иц йе геасг!оп. Аяшшпц ЕЬаг 50% оЕ йе гаъ))оасг!ч!гу Ьаа Ьееп )нсогрогагеъ) шго ТСА-ргесгр!гаЫе тагегъа! ъ)нпп8 гЬе гандот рпннн8 геасиоп апъ) йас 90% оЕ ЕЫа пъагеиа! Ьаа Ьеен цепегасег) Ьу ганс)от рипнп8 ечепга оп йе гетр!асе РЬ)А !гайег ЕЬан ае!Е-рппнпц оЕ о!!8опнс!еогЫеа), гЬеп гЬе ргоЬе Р)4А ъчон18 сон!а!и а соса! оЕ -4.5 х !07 Йрт ЕепонцЬ Еог ьчо го йче 5ошЬегн ЬуЬпйхаиопа оЕ пъапнна!ъан 8епопнс РЬ)А). ТЬе аресъцс асг!ч!гу оЕ гЬе ргоЬе ъчон!О Ье -!.8 х !О" с)рт)08 апс) гЬе ъче!8ЬЕ оЕ Р)ъ)А аупгЬеа!аеъ) ъ)нг!п8 йе геасгюн ъчон!й Ье 9.7 п8, ъчЬЫЬ ъа енонцЬ го с)егесг яп81е-сору аеъ)ненсеа.
4. То а Егер писгоЕнце 10Ье ш а 37'С ъчаЕег 5х о!!8оннс!еогЫе 1аЪе!ш8 ЬнЕЕег !О т8)т! Ьояпе аегшн а1Ьшпш ао!шюп РЬ)А !и а чо!шне по 8геагег йан 32 01 ЕО тС!Ет! !а-ЯР)г))4ТР !ар. асг, >3000 С))тто!е) К!епоъч Егацтепг !5 ншга) ЕЕ,О Ъай ог ЬеаЕ!пц Ыос1с, асЫ Еи йе Ео!1оъч!пц огс!ег: )О 01 2 и! 20-50 н8 5 01 9Ы2 СЬаргег 9г Ргерагайои оГ)(аг((о1айе1ег( Р)х(А апг( Яг(А Ргойез М1СК ТКАМБЕАТ1ОМ: АМ Н15ТОк(САЕ МОТЕ 0п(1! (Ье еаг!у 1970з, габюасйн!(у сои(б Ье (псогрога(еб !п(о пес!е(с ас!бв оп(у Ьу гпегаЬойс 1аЬе чгЫсЬ габ(оасйне ргесигвогв (ивоайу !п ГЬе 1оггп о1 НзгаРОх) гчеге (п(гос(осеб (пго се! Ы (ЬаС чнеге в (пе ГЬе 0МА оГ !п(егез(.
ТЬЫ ргосебоге гено!геб агиоип(з оГ габюасйн!(у (Ьас юои1б Ье ып(ЫпйаЫе ! пюге сопвегча(йе сйгпа(е; й )пно!неб!аЬогюив рипйса(!оп о1 (Ье гагйо!аЬе1ег( пис1е(с аскЬ, апс( Ь аррйег( оп! у (о а япай пигпЬег ог' 0МАв (е.е., чка! кепоигев). 5а1ча(юп сагпе (п (Ье гпк( 1970в хч (гапв!айоп ччав бече!ореб ав а гпейкм( го гасйо!аЬе( 0ХАв (о Ь!аЬ врес!йгс ас(ййу !и нй(го ()ч(ап! 1975; йцЬу ес а1. 1977).
й(сй (гапв(айоп гес(и!гев (Ье асгййу о1 Ьчо б!Г(егеп( епгугиев (р!еаве зее Е!йоге 9-1). 0йаве ! 1 с!саче (пк1с) рЬоврЬоб(ев(ег ЬопгЬ а( гапбогп в((ев (и Ьо(Ь в(гапбв о1 а с1оиЫе-в(галбес1 Сагее( 0й 0МА ро(угпегаве) ь изеб (о абб беохупис!еойбев (о(Ье 3'-Ьубгоху) Гепп(п( сгеа(еб Ьу 0йаве 1. 1и (Сои()иаеб ои Гас 5' 3' Ггеа( кгйЬ 0йазе ! 5' 3' !пооЬа(е кг!!И Е, сой 0йА ро!угиегаве ! 3 ип!аЬе!еб бйТРз 1 габю!аЬе!еб бйТР 0йаве ! | | 3' 3' 3' ехгепс! зг!!Ь Е, сой 0йА ро(угиегазе 1 3 ии!аое!еб бйТРв 1 габю!аЬе!еб бйТР 0йаве ! 3' Е100КЕ 9-1 М!сй Тгапв!а(!оп 1)в(пе Е.
со11 0МА Ро!угиегаве 5)пе1ев(гапбеб и!сйв аге (п(гобисеб (п(о (Ье 0МА Ьу (геа(гпеп( нн)(Ь 0йаве1. Е. со(г 0МА ро!угиегаве (Ро! 1) Ь!пбз (о (Ье п!сй ог вЬог( кар гп бор!ех 0МА, апб (Ье 5' — ~3' ехопис1еаве ас(!ч((у о1 Ро( ! (Ьеп гегиочев пас!еойбев 1гогп опе в(гапб о1 ГЬе 0МА, сгеаг(пе а сегпр!а(е 1ог в!гпи((апеоив вуп(Ьев!в о1 Гйе егогч(ие в(гапс1 о1 0МА. ТЬе ог!е(па( п!с(с Ы (Ьеге1оге Ггапв!агеб а1опегйе 0МА гпо(ест!е Ьу Гйе согпЬгпег( асйоп о( (Ье 5' — +3' ехопис(еаве апб (Ье 5' — г3 ро(угиегаве, 1и (Ье геас(юп гергевеп(ес( Ьеге, (Ье и!с(г !и (Ье иррег в(галс1 о( бор(ех 0ХА 'ь (гапв!а(еб 1гоги !еГ( (о г!еЬ( Ьу Е. сой 0МА ро1упгегаве (и (Ье ргезепсе о1 бХТРв.
!и ГЬе 1омгег в(гапс) о1 г(ир(ех 0МА, п)с(г (гапв(айоп оссигв 1гогп г(еЬ( (о!е((. ТЬе в(ге(сЬев о( пеи (у вуп(Ьев(аеб 0МА аге гергевеп(еб Ьу ГЬе со(огеб нчану аггочгв. ]ъ(]с)г Тгапба6оп: Ап НЬ)ог(са! Ноге ' (о 31х ро)упъег)а)пВ асИч(у, ОЫА ро)угпегахе | сагг(ех а 5 'ъ3 ' ехопис|ео|у6с асбч|(у 1Ьа1 гелюнех пис!ео()Иее 1гогп (Ье 5 ' х(Ие о1 |Ье п(с(с ТЬе е)гии)1апеоих е|аи|па6оп о1 пис)ео1(Иех (голл 1Ье 5 ' х)де агх| 1Ье асЫ|6оп о1 | гаИ(о)аЬе)ес3 пис)ео(Ыех (о |Ье 3' яде гехи)1 |и пючеллеп( о1 |Ье вс|ъ (пк|с (гале)абаи) а(опц |Ье ОМА, ънЫсЬ Ьесогпеа (аЬе)еИ (о ЫВЬ хрене ас6ч(у (КеПу е( а|.
1970). ТЬе геас(юп гег(и(гее 1004оЫ )еее гагйоас(йе ргесигялг (Ьап гпе(аЬобс (аЬе)(пВ ъчЫ|е рпЫис)пц ИоиЫе-ягапИеИ ргоЬех и Ьохе хрес)6к ас6ч(у (е ир (о 200- 1оЫ Ь~ВЬег. 5исЬ ргоЬсь сап Ье иееИ 1ог а чапе(у о1 ригроась )пс|ийпВ есгееп)пВ Веполъ)с апг| сО)ЧА 3(Ьгапех апг! 5ои(Ьегп апИ пог(Ьегп ЬуЬпгйга6опя А((ег оссиру)п6 а Иогп(пап( роя6оп 1ог гпапу уеагя п)с)ь (гале)а1(оп Ьах Ьееп )агВе(у йьр]асеИ Ьу галс|огп о66опис3ео6с|е риги |пВ, и ЫсЬ гег(и(гее оп|у опе еиаугпе, ае | Ье гпе(Ьод о1 сЬо)се 1ог гаИ)о|аЬе| )пВ ИоиЫе а(гапИеИ 0)ъ(А, А гпа|ог ргоЫегп чч|ТЬ п)с)ь (гагь)а(юп Ьах а|и аух Ьееп йе сййси|1у |и Ьа)апс)иб | Ье асбч36ее о1 039А ро)угпегаве | апИ 0(ъ)аъе | ихеИ (п 1Ье ргосес|иге.
)А'3(Ь 1Ье аИнеп( о1 п)с(ь (гагь|аИоп Ы(х (е.В., 66 К|Т ЧчопЫпВ(оп В~ос Ьепл)са! | пс), (Ых И)йси)гу Ьаъ Ьееп хо!чеИ, а)1ЬоиВЬ по1 |и 1иие (о Ыип( | Ье аИчапсе о( гапИогл рг(гп(пВ. Ь)ечегИзе)еая |и а 1еч |аЬога(алея п)с)г (галь)аИоп 'ь а63! ргасИсег! — сйебу Ьу |Вохе ч4ло гегпегпЬег рь р|асе |и 1Ье Ых(огу о1 с)оп)пВ. О р6гп|х)пВ 63!с)л Тгапа)а6оп 31еас6опа | ТЬе атоип1 о1 гас6о|аЬе| )псогрога1еИ Ииг(пВ п(с)ь (гале)а()оп г|ерепсЬ оп (Ье пигпЬег о1 3'-ЬуИгоху! 1епи|- п) сгеа1еИ |и 1Ье (егпр|а(е Ор(А Ьу 0)ъ)ахе |.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
