Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 49
Текст из файла (страница 49)
Кепюче йе 61ш апс< спс оис ГЬе яе8шепс оГ ГЬе Ве1 сопсашш8 сЬе беыгес< Гга8шепс оГ РХА. 1Г а ро!уасгу1аисЫе Ве! ъчая ияе6 со яерагасе сЬе РХА Гга8шепс Ггош сЬе сешр!асе, ргосеес< Со 5<ер 17. !Г ап а!)са11пе а8агояе Ве! ъчая пяед, пепгга)(хе СЬе Ве1 Ьу ВепС1е яЬаЫп8 Гог 45 пииисея !п 0.5 М Тпя-С1 (РН 7.6), Го11оъчес1 Ъу яЬаЫп8 Гог ап асЫЬюпа1 45 ппппсез си 0.5х ТВЕ ЬеГоге сЬе гайо1аЬе1е6 РХА гя е1псес1.
Ехсгасс сЬе Е)ХА Ггогп сЬе Ве1 Ъу е1ессгое1п6оп ог Ъу сгпяЬ<п8 апс1 яоаЫп8 йе ро1уасгу1агпЫе Ве1 я1ке сп ап арргорПасе Ьпйег (р1еаяе яее СЬарсег 5, Ргососо1я 4 ап6 12, геярес6ъ е1у). СЬес1с сЬе еГЕссепсу оГ йе е1псюп ргосея сасЬ а Ьагк<-Ье1с) пппппоп!сог. ТЬе е!псес1 РХА Ь гааз<у Гог пзе аз а ргоЬе апс< ссоея пос пеес< со Ъе ссепаспгед ЕпгсЬег, 9.24 СБаргее 9г Ргерагаг$оп оу тъаг$$о1айе1ег$0$ъ$А апг$ ЯМА Ргойег ТКООВЕЕ5НООТ!$ъ$0: РКЕМАТОКЕ ТЕКМ1$ъ$АТ10$ъ$ ОЕ $ъ$ЕчтГОУ 5У$Ъ$ТНЕ5!е.ЕО 0$ъ$А СНА! Ь$5 ТЬе пюиг сотптоп ргоЫегп ъч$1Ь иупйтеи$и о1 и$пд$е-ьтгапде6 ргоЬеи Ьу рпптег ехгепи$оп 'ь ргептатиге септипайоп о1 иупгЬеи$и.
ТЬВ гептипаггоп оссиги 1ог а чапегу о1 геаиопи, пюК о1 ъчЫсЬ оп5$паге чч$1Ь 6те гатйо$аЬе$ег1 6$ъ$ТР ъчЬ$сЬ 'ь гйе гаге-йт$1$пд согпропега $п гйе геасг!оп гп$хгиге. ОЬч$оии$у, 6 1Ье и$пц!е-иггапдед ОНА иупйтеи$ь доеи пот ехтепс1 то а геипсгюп ьйе еКЬег ъч$1Ып ог 6оъчпитгеагп 1гопт 6те ге5$оп о1 $птегеиг, тЬе ргоЬе саппог Ье гесочегед аи а 61исгете Ьапд Ьу це! е1есггорЬогеиь. То гтипотиге 1Ь$и ргоЫегп, ау 1Ье 1о$- !оъъ$пд; ° 1lю Тгеий гагйо$югореа Кагйоас6че 6$ъ$ТРа тЬаг Ьаче Ьееп !Ьаъчед тоге 6тап Ьъи$се аге $псогрогагес! !еьи е$йс$епт!у $пто ОНА Ьу ОНА ро$угпегаиею ° Оие а йеяНу таг$е геаст1оп тгхгиге.
0$! иге ю$и1$опи о1 г$$ъгТРи аге пот игаЫе 1ог !опт рег$от$и ъчЬеп игогег$ аг — 20"С. ° Кеер гйе атоипГ оГ Гетр1аге 1п гйе геасйоп Го а т1п1тит. ТЬе дгеагег тЬе пигпЬег от гегпр!аге пю$еси$еи 1п тйе геасйоп, тЬе иЬогСег гЬе !епйгЬ о1 6те пеъч$у иупгйеылег$ сЬа$ге. ° Еп51пеег гйе Ьастеггорйще М13 ог рйадегп1г1 гесотЬ1папг ю 1Иаг Гйе ргоЬе и В1 Ье аи ьйогт аг Рызгс Ые.
$1 йте ачегауе $епцйт о1 1Ье ОНА иупйтеи$хес$ диг$пц гйе йгиг итаде о1 1Ье геас6оп ($.е., Ье1оге асЫ$1$оп о1 тЬе ип!аЬе$ед 6МТР) ь $ет тЬап 1Ье йпа1 $епдгЬ о1 тЬе ргоЬе, 1Ье ирес$йс асйийту о1 6ъе 5' сепо!пои о1 1Ье ргоЬе ъий Ье сопи$дегаЫу ЫВЬег 1Ьап тЬаг о1 тйе 3 гепти пои. 1п депега$, тЫи аиугпгпетгу с1оеи гют птагтег ъчЬеп 1Ье ргоЬеи аге то Ье ииег$ $п поПЬегп ог 5оибтегп ЬуЬгкйга1$оп. Ноъчечег, 6 сап ъййате апегпрти то иие 1Ье ргоЬе гп пис!еаъе 51 тарр$пд о1 Кои. ТЬВ ргоЫегп сап Ье пипипсхег! Ьу епюппд тЬаг 6ъе йпа! $епцгЬ о1 1Ье ргоЬе 'ь $еии йтап 1Ье $епйтЬ о1 1Ье ОЬ$А иуптЬеи$ле6 т$ипод тЬе йгит итайе о1 гЬе геасгюп. Рго1осо~ 5 Ьупйеяь о1 5~пц!е-йгапс1ес1 Р!ЧА Ргооеэ о1 Не1егодепеоы ~епц1Ыгогп Вас1епор маце М13 Тегпр! а1еь не мвтноо освссввсо !н ркотосо! 4 сенекАтео Рвове5 оЕ йейпей 1еп8сЬ! Ьоъчечег, ЕЬе сееЬпп)ие йеаспЬей ш йь ргососо! Ргойисек а Ьесего8епеоик рори1а6оп оЕ гай!0!аЪе1ей пю1еси1еа оЕ й!ЕЕег!08 1еп8СЬя ТЬеае ргоЬеа аге аупСЬеякей, аа Ьеуоге, Егопс а яп81е-аггапйей Е)ХА Сегпр1аСе Ъис аге сЬеп аерагасей Егогп сЬе сепср1асе Ьу е!есггорЬогеяа сЬгои8Ь а йепасиппц 8е! Егош ъчЬ!сЬ ЕЬеу аге е!и!ей й!гесс! у !псо ЬуЬгЫгаасюп ЬиЕЕег.
Т)игсп8 аупсЬеяя сЬе 1очг сопсепсгас!оп оЕ гай1- 01аЬе1ей йХТР 1иппа СЬе 1еп8СЬ оЕ СЬе ргоЬеа Со 200-300 пис1еоСЫея Ноъчечег, СЬе !еп8СЬ оЕ СЬе пеъч1у ьупСЬеа!гей Е)ХА сап Ье ай)па!ей Егош 100 Со !000 пис1еог!йеа Ьу чагуш8 СЬе сопсепгга6оп оЕ !прис сегпр!асе апй йХТРз аа й!асиааей ш ЕЬе !псгойисс!оп со Ргососо1 4. РгоЪеа ъч!сЬйп сЬ!а яге гап8е ъчогЬ ъче!1 ш пюас ЬуЬг!й!гас!оп Еоппася ТЬе Ео!1оьч!08 ргососо1, Ьааей оп сЬе спесЬос! оЕ СЬигсЬ апс1 О!1Ьегс (!984) апй ргочЫей Ьу М.
1.еЬппап апй )й. Е)ач!а (\Упсчегясу оЕ Техаа 5оисЬъчеасегп МейЫа1 Сепсег, Т)а!1аа), !а иаери1 Еог аупсЬеяг!08 яп81е-асгапйей Т)ХА ргоЬеа оЕ чесу Ь|цЬ аресс6с ас6чпу Еог 8оисЬегп апа!уяа оЕ яп81е-сору 8епеа ш сошр1ех 8епошеа ог Еог погсЬегп апа1уяа оЕ гаге арес!еа оЕ шсъХАя МАТЕЙ!АЕ> САС)тсОП): Р!еаье аее Аррепй!х 12 Еог арргорпаге Ьапй!!па оЕ пъагепа16 шаг!ъей ъч!СЬ <!>. ВссЕЕегв апс! Бо! оссопв Р!еаае бее Аррепй!х С Еог сошропепга оЕ а!ос)ъ 6010!!опт, Ьийегя апй геадепгя О!!ите а!ос!ъ ьо!иС!опа со сЬе арргорпасе сопеепсга6опя ЕЕиСЕол Ьийег Г7 х 55РЕ еопгаГл7л8 0.5% 5Е)Я Еогтат7йе йуе Ьийег < с> Мес/„Г7 м) 67аОН Г70 ГЧ) <с> Зх РгоЬе ьупСЬеяа Ьийег 62 Рм еасЬ ИМАТР, йТТР, йСТР 0.5 гп87гп! Ьоное ъепио а)Ьош)о Сргасгсоп Ч, 5)Вгоа) 625 съм йссвсосвгессо! 32 пъМ Тпъ-С! ГРН 7.5) 6.5 гоМ М85О4 5соге све ЬоЕЕег ас — 20'С сп с00-р! а!19иося С)ъе а Егер а!)9оос Еог еасЬ Ьассв от гагво!аЬе!ей ргоЪе.
Овсагй све апогей рогйоо от еасЬ а!!9иос. 9.25 9.26 СЬаргет 9: Ртератат!ол и/ Яаг//о/айе!ег//)ХА апг/ЯМА Ртойет Епуугпей апд Войетй /г/елоыы /тадтелт о! Е. сой /3А/А ро/утетаае ! СЕ!8 Ро!уасту!ат!г/е Ве! !5;4) солта!л!ла 7 Аг итеа <!> Сая аиг( гнп гЬе Ве! ги 05х ТВЕ аа г(еасг!Ъег( Ы СЬаргег !2, Рготосо) 8. Каг(!оас1!ые Сотпроопдй !и-аар/г/СТР !!О тСг!т!, хр. асй ВОΠ— 3000 С!/глтло!е) <! > То иниитиае ргоЫегиа санаег) Ьу гайо!уяа о! гЬе ргеснгаог аиг) тЬе ргоЬе, гт ь Ьеаг, иЬеиечег рота!Ые, го ргераге гайо1аЬе1ей ргоЬеа ои гЬе г)ау тЬе (яр(ЙЫТР агпчеа ги тЬе 1аЬогасогу. ореста( Ецо!ртпеп1 А!г !лсиЬагог от вайа/г!лд ыча!ег Ьа!Ь ртеае) )о 50 С ВоПглВ гыатет Ьалй ОгароьаЫе !лоси!ат!лВ зт!с/г Гт!Пес/ со!итл !е.В., Ои!/г-ьер со!итлх, !ьо!аЬ, !лс.) Неат!лВ Ыос/г ртехет то 57 С Р!ахт!с хлар-сар тиЬех !72 к 17 глт) МЕТНО0 1.
1п а 0.5-гп1 ш!стойгае тиЬе, ппх: а!и81е-а!ганг)ег) тегир1аге (ЬастепорЬайе М 1 3 ог РЬайегиЫ РНА) (-О.!5 рзпо!е, -О.! 08/Н!) о118оинс!еотЫе рпгиег (5 рпю)еь)Н!) 25 гиМ МВС1, 0.3 Н8 1Г роаа!Ые, шс1нг1е !п еасЬ ехреглпепт а геастюп шЬе солта!п!пц а сои!го( Т)Ь)А тешр!аге апг( ап о(!аопцс(еот(г(е !Ьат Ьак ъчог(гег( чте(1 ргечюна(у.
ТЫа геастюп аегчеа аа а роа!т!че сол- т го(. 2. Сар гйе тцЪе апг( (пснЬате тЬе геас!юп ппх!нге 1ог 5 — 10 ш!потех ас 57"С ш а Ьеат!па Ыос(г. Ь(ос!етс Ас!418 апд О!коппс!ео6де8 О/!полис!ео!!г/е рт!тет !Ьастет!орЬайе М)3 1)л!ыегаа/ Рлтет ог сох!от-хултйех!хет/ о/!Волос/еот!с/е) ТЬе Ьеаг геьн1ь аге оЫаюед гч!гЬ а рнг!йег( о!!Волос!еотЫе (р!еаае аее гЬе рнпйсайои ягагеййеа няи8 еЬЬег Ве) е1естгорЬогеа!а ог аи о1гхоине!еотйе рнпйсатюи саггг!88е !и СЬартег 10, Ргогосо! Ц. Кеяьрепг( йе о!г8оинс1еогЫе аг а соисеитгатюи о! 5 рпю1еь/р! ги ТЕ (РН 7.6). Уеглр!ате /)А/А Рнг!/у йе а!и8!е-а!таит(ег( ЬастепорЬайе М! 3 ог РЬайегиЫ ))))А аа г)еасг!Ьес( !п СЬартег 3, Рготосо) 4 ог 8, гевресйче1у. Меаьнге тЬе соисеитгагюи о! тЬе РХА Ьу аЬкогрг!ои аресггорЬосогиеггу аа г(еасг!Ьег( !и Арреийх 8.
Арргохипате1у 0.3 08 о! !егор!ате )3ЫА ги а чо1нгие о/2 — 3 Н) ь гег)н!гег( !ог еасЬ куитЬеяа. Ршгосо! 5: 5упйеяз о~К!пд!е-зггапг1ег1 РгчА РгоЬег о~Негегодепеоиз Ееп8гБугот ВасгейорБаде М13 Тегпр!агег 9.27 Тгапагег гЬе гиЪе Угош гЬе ЬеаВп8 Ыос!с го а Ъис)се! ог ке, апг! асЫ со йе геасгюп пихгиге: Зх ргоЬе ьунгЬеаи Ьнггег 4 р! !О шСйп! [ап'р!ОСТР (вр.
асг. 5000 Сртпю1е) 5 01 К!еногч Гга8шенГ 1-2.5 нши) 0.5 н! М!х гЬе геа8епга Ъу 8епг!у гарр!08 гЬе 5Ые ог" йе гиЪе. СепгПйл8е гЬе гиЬе аг гпахппшп ареес) гог 1-2 аесопсЬ !п а ш!сгоги8е со ггапагег а!1 ог" йе 1!с!ш<$ со гЬе Ъоггогп. 1псиЬаге йе геасВоп аг 37 С гог 40 пгшисея 'чйп1е ГЬе РПгпег геасЕоп !а гпсиЬаВп8, рош а 5% ро1уасгу!ашЫе 8е1 сопГашш8 7 М игеа !п 1х ТВЕ Ьийег (р)еаае атее СЬаргег 12, Ргогосо! 8). ТЬе Ве! 5Ьои!0 Ье 1.5-пип гЬгс1с, а! !еааг 15-сгп 1оп8, илгЬ 2.5-спг гчЫе а!огя Ргегип гЬе Ве! гог 15 пппигеа ас 20-25 Ч! сш ог" 8е1 !еп81Ь го гегпоне апппопшш регаи!гаге ггош гЬе чче!1я 5гор йе ргппег-ехгепяоп геасйоп Ьу асЫш8 25 )21 ог" гогшаш!сне с1уе Ьийег апг! ЬеаЕп8 йе геас!юп ппх!иге !и а Ьо11гп8 5чагег ЬагЬ гог 3 — 5 гшпигеа, Тгапзгег йе гиЬе го ап ке Ьис1сег апс) асЫ 1)г! ог' ! Ь' )ч)аОН.
ЪЧааЬ игеа апс) !ооае гга8шеп!а ог" ро!уасгу!агпЫе ггот йе чне!15 ог йе Ве1 ияп8 а ауПп8е !оас1ес) чч!гЬ |х ТВЕ, апс1 птппейаге1у 1оай йе ЕгЬ)А аап1р!ея Верагаге гЬе гайо!аЬе!ед ргоЬе Ггош гЬе гегпр1аге РЬ)А Ьу е1ес!горЬогеа!а Гог 30 ш!пи!еа аг 20 — 25 Ч(снап о! Ве! )еп8й. 1г ы нннесеяагу го !нс!нде РГ4А яае аган8агна нн гЬе ро!уасгу!ашЫе 8е! Ьесаые гЬе ху1ене суапо1 г1уе и 18гагеа гн а роягюп снгпрагаЫе со гЬаг о! а Р1чА гга8шенг н! -125 Ьааея Аггег 30 гппшгея аерагаге йе Ве! Р!асея сонег йе Ве! гч!1Ь 5агап вюйар, апс1 1осаге гЬе гайо!аЬе1ес) Р!ч)А Ьу аи!огайо8гарЬу (р!еаае нее Аррепйх 9).
Ехроае йе Ве! го Х-гау 61пг гог -1 пипше. ТЬе ша!ог!гу н! йе гайо!аЬе!ен Р24А яЬон!4 Ьаче пн8гагес1 я1!8Ьг!у а!опег гЬан гЬе ху!епе суано1 !Кгеен) ггасЫн8 8уе. А!гЬон8Ь а сониннны янеаг о6 гайо1аЬе1ей |насепа! Ь гЬе ехресгег! геен! г, !н ргас6се, Ьенчеен гЬгее ан8 ген Ьанй ог" йасгеге!еп8гЬ аге ына!1у г1есессед гЬас гнау Ье ьрасед очег а йагапсе нг 2 — 5 сш о! гЬе 8е!. ТЬе саше ог гЬе йасгеге Ьанй Ь ргеаншег$ гн Ье ьесондагу аггнсгнгез гн йе рагисн!аг а!н81е-ягганг$ед РггА сегнр1аге нье8 ш гЬе геасгюн. Сиг !Ье гас)!оасг!не ЪапсЬ оиг ог йе Ве! ъчпЬ а с!еап гахог Ыас1е. Р!асс йепг гп гЬе Ьоиогп ог'а 12 х 17-пип р!аагк анар-сар гиЬе апс1 сгыЬ 5ч!1Ь а с)!ароааЫе !посо!аг!08 5Ес1с.
АсЫ 1 — 2 ш1 ог е)исюп Ьиггег апд 5Ьа)се йе !га8шепса ог" 8е! гог )3 Ьоша а! 50 С. 81ш1нп о! гЬе гайоасиче ргоЬе Ь 1ноге ег8с1енг 1г 1нйчЫна! Ьандз аге снг угнш гЬе 8е1, гайег йан ехси!п8 а ыЫе ячаг!г о! ро!уасгу!агнЫе гЬас ирана а11 гЬе Ьандя Р!асе йе е!иаге ш а УПиес1 со1шпп, р!асе ГЬе со1шпп 1п а 12 х 17-пгш р!ааВс анар-сар ГиЬе, апс! сепгг)ги8е !п а с)еа)сгор с1шка! сепгг)ги8е гог 1-2 пипигея Меааиге йе агпоипг ог" гас)!оасг)ч!гу гп 1 )г! ог" йе гайоасВче ргоЬе Ьу !!г!и!й ас!пг!1!аг!оп аресггоасору.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
