Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 46
Текст из файла (страница 46)
Тоо июсЬ и)с)ъ)пц сгеа1ее ап ехсеае о1 |пйа6оп я1ея ъчЫсЫеаИх (о гпах)гпа! )псогрогабоп о1 гайо|аЬе| Ьи( у(е)Их ОНА 1гаВ иепЫЬа1 аге (оо хЬои 1о Ье иее(и| аъ ЬуЬлйга(юп ргоЬея Тоо ||6|е п)сйпВ, оп (Ье о(Ьег ЬапИ, гех(г|сь Иле пигпЬег ог' е)(ех ачаИайе 1ог (п)бабаи о1 п(сК 1гагь)а(юп, гехи)6п6 )п а ргосйлсг о( |оч хрес(6с ас((н(63 (Еог ас|с66опа| с|е(аИе оп 0)ъ)аее |, р!еаее хее Аррепйх 4.) ТЬе ас6ч(у о( 0(ъ)аее | наг(ех Ьепнееп ргерагаИопя аиИ |Ье агпоига о1 ОЫаъе соп(агп|па6пВ ргерага((опв о1 Е. со!л 0)4А ро(улиегаае | сап а)хо с66ег. |1 'ыЬеге1оге песегьагу (о йга(е еасЬ пенн Ьа(сЬ о1 ОЫ ье | (о Ипс! а сопсеп(га(юп (Ьа1 у(е)Их ргоЬсь нй|1Ь 1Ье дех(геИ ерес(6лс ас6ч(у апд )епВ(Ь.
ТЬе гбсй пВ апс| ро)угпег(аа((оп геасбогь сап Ье сал|еИ ои( ягпи)(апеоих)у) )п чйсЬ саве, а х()ВЫ )ац 'ь оЬхегнеИ Ье(оге )исогрогаИоп о( пис)ео((Иех ЬеВ)па (К(ВЬу е1 а!. 1977), гебесбпВ (Ье Ииле гег)и(геИ 1ог ОЬ(ахе | 1о телега(е п)с)гх |и (Ье (егпр|а(е. ТЬВ )аВ, ънЫсЬ (х ихиа()у о1 336)е ргас6са! а)Вп(6лсалсе, сап Ье е)(гп)па(еИ Ьу саггу(пВ ои( Иле п|сйпВ апд ро)уплепаабоп геас6опх еесрлеп((а))у, га|Ьег йап х(гпи)(апеоих(у (КосЬ е( а|. 1986). ТЬе а(гп 'ь (о ехгаЫ(хЬ егор|пса||у а сопсеп(габоп о1 Омахе | (Ьа1 гееи(Ыи |псогрога6оп о1 — 40;4 о1 (Ье (а-ллР]ИСТР А яапИагИ пк|с (гале(аИоп геас(юп сагг|еИ ои( ипс|ег 1Ьеее сопИ(1(опх у(е)Ие а ргодис( | и Ьохе арес)6к ас6ч(у ехсеесЬ 10е сриллщ апИ и Ьохе гаИ(о)аЬе)еИ 0(ъ)А а(гапИе аге -400 — 750 лис)ео((с$ее |и )епц(Ь. И 'ь (Ьиа песеххагу (о Ие1еггп)пе егпр(пса))у 1Ье ор(лгпигп агпоип(а о( еасЬ епхупъе гег|йгес! (о оЬ(а|п ЬоИл Ь|ВЬ хрес(6к асИн)(у апг| арргорпа1е ргоЬе )епВ(Ь.
ТЬь орИпзсха(юп ь Ьех( ассогпр|ьЬес| Ьу )гаер)п6 (Ье агпоип( о1 ОЬ(А ро)угпегаъе асйеИ соле(ап1 (е.ц., а1 2.5 ип(Ь) апг| чагу)пВ 1Ье сопсеп(гаИоп о1 ~ |при( Омахе |. А)ЬЬоиВЬ Е. сой 0)ъ)А ро)угиегаъе ! ъног(ь аг|егрла(е|у ъчТЬ сопсеп(га1югь о( ИМТРе ае |очч ае 2 рм, (Ье епаугпе са66уаех 039А хуп(ЬейыписЬ гиоге е6(с(епИу ънЬеп хирр)(еИ ъч(Ь ЫВЬег сопсеп(га6опе о( хиЬ- х(га(ея Еог геаялпх о1 сгь(, п(с)г 1гапх)абаи геасИопе иеиа))у соп(а|п пил|ила! сопсеп(гаг)опх о( гайо|а| Ье|еИ ИМТРх (0.5-5 рм) апИ гписЬ цгеа1ег сопсеп(гаИопе о1 ип|аЬе|ел| 639ТРа (1 гпм). ТЬе арес(1(с асбн(- | (у о1 1Ье Впа! ргсх|ис( Иерепсе (п )агбе рагс оп (Ье ересйс ас6н|(у о1 |Ье гаИ(о)аЬе)ед И(ъ)ТР ихеИ |п (Ье геасбоп.
Ву ййбпВ Иле гайо|аЬе3ед И)4ТР ъч(Ь 1Ье Ьогпо(оВоиа ип|аЬе|еИ д)4ТР 31 'ь роае(Ые 1о ргераге 039А |аЬе|ег| (о с66егеп1 хрес(1(с ас6чйех. 6 Ь~ВЬ хрес)6к ас6нйех () 5 х 10 ИрлъгрВ) аге гел|вгес! (е.6., ~ 1ог хсгееп(пВ гесогпЫпап( ОЬ(А 3(Ьгаг(еа ог 1ог с|е(есбпВ а|пВ(е-сору еесрлепсее |и 5ои|Ьегп ЬуЬг(И)аабопх о1 солир|ех гпагпгпабап Вепогпее), 1Ье и)с(г (гале)а6оп геас6оп хЬои(И сол(ай аП 1оиг гаИ(о)аЬе)ед Ир(ТРх (ар. ас(. ) 800 Сргп гпо)е) апИ по ип|аЬе3ес| ИМТРя Рог плох( о1Ьег ригрохея 6 ь аИегрла(е (о ихе опе д)ъ(ТР !аЬе)еИ н61Ь а-ллР (800 С)йппю)е) апд (Ьгее ип|аЬе|ел| И)ъ)ТРя ог 1о 63)и1е еасЬ (а-л'Р]ИЕЛТР ъч|(Ь ап аррго| риа(е агпоип( о11Ье ип|аЬе3ес| д(ъ(ТР ТЬе агпоип( о1 гайо|аЬе|ес3 И)ъ)ТР лп а гю|и1юп о( ересйс ас6ч(у 800 ' Сйилло|е ( — 12 рпю)ееп!) 'ь -3.754оЫ ЫВЬег 1Ьап |Ьа( )п а хо)и((оп о1 хрес)1)с асбч|у 3000 С|!гпгпо|е (-3.3 ргпо|ея'р!).
Рго1осо! 3 Кайо!аЬе! ~пц о1 0МА РгоЬеь Ьу Йе Ро!угпегаье Спа~п Кеас6оп т НК ЮГЧМККЛ5К СНЛ!Н КЕЛСтЮН (рСЙ) (КГЕЛ5Г 5ЕЕ СНЛКтКК 8) сап Ье иаед Со ргодисе РЫА ргоЪеа члгЬ ЫВЬ прес(Егс асг(ч(гу. 1(агед Ъе!огч аге йе адчапса8еа оЕ йе гпегЬод. ° Ре6пед ье8игепга оЕ йе гаг8ег РЬ!А сап Ье атр1гбед апд 1аЪе1ед шдерепдепс!у оЕ гЬе 1осагюп ог гуре оЕ геяПсдоп ягея ° ТЬеге )а по пеед го )ао1аге Ега8тепга оЕ РХА ог со аиЬс!опе йеги иио чесгога сои!а(и(п8 ЬасгепорЬа8е ргоиюгегя ° Оп1у япа11 атоипГа оЕ Гетр1аГе РХА аге гег!и!гед (2 — 10 и8 ог -1 6по1е).
° ТЬе арес(Егс асг!ч(гу оЕ гЬе гад(о1аЪе1ед атр!г6ес1 РХА сап ехсеес1 109 дрт!)гц. Роиг г16уегепс тейода Ьаче Ьееп деасПЬес1 Еог яти1гапеоиа атр116сагюп апс1 гад(о1аЬе11п8 оЕ РХА. ТЬе Еггаг йгее тегЬода гес)шге коте 1пЕоппадоп аЬош ЕЬе аес!иепсе оЕ гЬе гагВег РХА, Ьш йе Еоигй тейос1 доеа пог. ° РоиИе-аггапдед РНА ргоЬеа сап Ье ргодисед ш сопчеигзопа1 РСКа сои!а(и(и8 ес)иа( сопсепггадопа оЕ гъчо ргииегя йгее ип1аЬе1ед дара аг сопсепггадопа ехсеед(и8 йе К, апд опе (а-яр]дар аг а сопсепггадоп аг ог а!18Ьг!у аЬоче гЬе К (2 — 3 )гм) ()апаеп апд Вес!!еу 1989; ВсЬогча1гег апд 5оиипег 1989). ° Кад1о!аЬе!ед ргоЬеа Ьнгаед Егеач(Еу ги Еичог оЕ опе аггаид оЕРХА сап Ье ргодисед гп РСЙа Еи и Ь!сЬ (Ье сопсепггадоп оЕ опе рптег ехсееда гЬе огЬег Ьу а Еасгог оЕ 20-200.
Ридпц гЬе (п(г(а! сус1еа оЕ гЬе РСЙ, доиЫе-аггапдед РХА га аупгЬеяхед Еи а сопчепдопа1 ехропепда1 ЕазЫоп. Ногчечег, гчЬеп йе сопсепггагюп оЕ опе рптег Ъесотеа!ии61п8, гЬе геасдоп Вепегагеа яп8!е-аггапдед РЬ!А йаг ассити1агеа аг ап апйтедс гаге.
Ву гЬе епд оЕ йе геасгюп, йе сопсепГгадоп оЕ опе аГгапд оЕ РХА га йгее Го Кче Г(теа Вгеагег ГЬап йе сопсепггасюп оЕ ЕЬе огЬег (5си11у ег а1. 1990). (Гог июге шЕопиадоп, р1еаае аее йе раие1 оп ЛО Э!Г!ОНЛс РЙОТОСОР Л5ЧММЕТЙ!С РЙОВЕ5 аГ йе епд оЕ ГЬы ргоГосо1.) ° Кад(и1аЬе!ед ртоЬеа сопзигтд епг(ге!у оЕопе аггаид оЕ РХА сап Ье ьупгЬеяхед ш йепиа! сус1(п8 геасгюпа гЬаг сои!а(п а доиЫе-ьггапдед РМА гегпр1асе Ьиг оп1у опе рптег. РоиЫеаггапдед гетр1аге РХА (20 п8) Вепегагез -200 п8 оЕ ыи8!е-аггапдед ргоЬе очег гЬе сошке оЕ 40 сус1ея ТЬе 1еп8й оЕ гЬе ргоЪе сап Ье деЕгпед Ьу с1еачш8 йе сетр1аге РЯА аг а геагггсгюп яге догчпаггеат Егот йе Ыпд(п8 яге оЕ йе рпгпег (е.8., р!еаье аее 5гигт1 апс1 Кой 1990; Р(пс)й ег а1.
1991). Ргогосо) се Каб!о!аЬе1т8 о) Т)ХА РтоЬеа Ьу 7Ье Ро)утесове СЬат Кеасг1оп 9.15 ° ТЬе Еагде7 0ХА тау Ье б(Кеаееб ычЕЬ Сч!Д, а геаггкбоп епгуше йа! иьеь АТР аа а соуасгог го с1еаче йе гесо80171оп аеоиепсе СС (ехсер! УОСК, счЬеге У 18 а руг)ш)б)пе апб К а раппе) (5ъчаш)пагЬап е! а1. 1996). Весаиае йе гВпис1еогЫе СС оссига Егег)иеп11у ш гпоа! !))ЧА8, йе пгос1а1 яке оЕ гЬе гехи!7(пц Ыипг-епбеб Т))ЧА ЕгаВшепга 18 япаП вЂ” Ьегсчееп 20 апс1 60 пис1еогЫея ТЬеае Ега8паепга сап Ъе иьеб аа аес)иепсе-арес(Вс рпшега ш РСК5 1п гчЫсЬ ап а1и)ио! оЕ йе гаг8ег !))ЧА 15 иаес1 аа гешр1аге.
ТЬе ргобисг 18 а Ьегего8епеоиа роро)абоп оЕ боиЫе-аггапбеб пю!еси!еа хчЬоае яке гап8еа Егош а пишпшгп оЕ -60 Ьр го а шахгпшш йа! ехсееба ГЬе яхе оЕ йе гаг8ес (5чгапипагЬап е! а1. 1994). ТЬеае 1агцег пю1еси!еа аге гЬоиВЬ! со Ье сопгр1ех асгашЫеб чегяопа оЕ йе гаг8е! Е))ЧА гЬа! аге Вепегагеб Егопг сЬипепс сегпр!а!ее апб)ог рпгпега.
1пчеьНВагогз 5чЬо Еее1 ипеаау аЪои! ияп8 а ргоЪе 5чЬоае вес)иепсе 15 по! со1гпеаг гч(гЬ ГЬе ог!8(па! сешр1аге 0)ЧА шау ъч)8Ь го ачоЫ гЫ5 шейос1; ойега 5чапгшц со иве а РСК-Ъааеб СесЬп(с)ие гп йе аЪаепсе оЕ !))ЧА аес)иепсе гп!оппапоп гпау ешЬгасе ге ТЬе Е011охч(п8 ргогосо1, ргочЫеб Ъу Ма1а МаЬепбгоо апб Са1ч(п 55ч)ЕГ (()п(чегягу оЕ Техас 5оигЬ5чеа!егп Меб)са! Сепгег, Е)а11аа), геша(па с1оае го йе ог)8(па! ргосебиге оЕ 5сЬогча1гег апс! 5опипег (1989) Еог йе Вепегабоп оЕ боиЫе-аггапбеб габ101аЬе1еб ргоЬея А пюгВВсагюп йа! беасНЪеа Ь05ч го цепегаге ааупипеСНс ргоЪез Ьу РСК 18 ргеаепСеб ш йе рапе1 оп А00!Т!О(ЧАЕ РКОТОСОО А5УММЕТК!С РКОВЕ5 а! ГЬе епб оЕ гЫ5 ргогосо!.
МАТЕК1АЕЬ СА()Т!ОЫ: Р!еаае атее АррепгВх 12 Еог арргориа(е Ьапб1!пд оЕ гпа!епа18 гпаг1себ гч1!Ь <! >. Войег5 апе! Бо!06оп5 Р!еаье аее Аррепспх 7 Еог сошропеп!а оЕ 8!осЬ ьо!ипопа, Ьибега, апб геадеп!я О!!и!е а(ос)с 5010!!опа !о !Ье арргориа!е сопсеп!га!юпя Аттол)ит асе!а(е (70 М) 70х Аглр00сапол ЬиЕЕег Сагпегх иьеб стиг(лд ейало) ргесурГ!а(гол оЕ гао5о)аЬеlед ргоЬе Гр1еаае аее 5гер 5) Е)ае е)гЬег 8!усо8еп (агос1с ао!шюо = 50 го8/го! !о Н О) ог уеааг гКЬ)А (агос1с ао!тюо 70 т87т! !о Н,О). Рог тоге ш(опоабоо, р!еаае аее Арреос()х 8. СЫогоуогт <! > ЕГЬалоl ТЕ ГрН 7.6) Еп2угпе5 апс! Вийет5 ТЬегглоа!аЫе Р)ЧА ро)утегаае Ге.5,, Тас) ОГЧА роlутегаае) ТЬепооагаЫе РЬЕА ро!угоегаае (2.5 оо)и) и ге9о1геб Еог еасЬ атр!!6саиооЛаЬе!ш8 геасг!оо.
)ч)ос1егс АСМ5 апд О! коппс!ео11Е1е5 гlСТР (0.7 глм) Р!!ше ! чо!шпе о(а яос1с ао!огюп оЕ !О тм ИСТР ю17Ь 99 чо!шпее оЕ 70 гом Тг!МС! (рН 8.0). 5гоге йе б!!огеб ю!шюп аг — 20'С ш 50-0! а!!ооога. ВГЧТР 501игГол сил!а(л)ла сАТР, бСТР, алд дТТР еасЬ аг 70 тм рог асМсе оо гоарбо8 аоб агог!о8 агос)с ю!обола оЕ б;ЧТра, р!еаае аее гЬе ш(опоагюп рапе! оо РКЕРАКАТ7ОЬ) ОЕ 5ТОСК 5ОШТ!О!Ч5 ОЕ бЫТР АГЧ0 бб(ЧТР5 ЕОК РЫА 5ЕЕ27)ЕЫС!ЫС ш СЬарсег 12. Еогччагд рг(тег Г20 рм) гл Н О алд Яечегье ргутег (20 рм) т Н О ЕасЬ рпгпег аЬоо!б Ъе 20 — 30 оос!еоггбеа !о !еп8гЬ аод сопса!о арргохопаге!у ес)оа! ошпЬега оЕ гЬе Еоы Ъааеа, аогЬ а Ьа!апсес! <аагпЬогюп оЕ О аоб С геагбоеа аод а !огч ргореоягу го Еопо яаЫе аесоодагу аггостгеа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
