Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 48
Текст из файла (страница 48)
аст. 3000 С!)шшо1е), апс1 2 ртпо!ея оЕ тешр!асе (-1 )т8), ап ачега8е оЕ оп1у 28 пис1еотЫея ъч!!! Ье аддед то еасЬ рптпег тпо1еси1е ЬеЕоте тЬе яуптЬеыя тя Ьгои8Ьт то а Ьа1т Ъу а !ас)ъ оЕ тЬе гайо1аЬе1ед дХТР. Ноъчечег, (Е тЬе сешр1ате сопсептгабоп (я гедисед !00-Ео1д то 0.02 ршо1е (-!О п8), ап ачега8е оЕ 3000 пис!ео6т(ея чд!1 Ъе аддед то еасЬ ргипег ЪеЕоге тЬе роо! оЕ ргесигяогя тя ехЬаиятед. То тпахиптае тЬе еЕВстепсу чдтЬ ъчЬтсЬ тешр!асе иго!еси!ея аге ияед, тЬе ргпиег шцят Ъе ргеяепт ш тпо1аг ехсеяя апд тЬе сопсептгатюпя оЕ ргипег апд тетпр1ате ишят Ъе Ьт8Ь епоцВЬ со т1ггче тЬе Еоппатюп оЕ ргпиег-тетпр!ате ЬуЬпдя то сотпр!е6оп.
ТЬеяе сопй6опя аге тпет ъчЬеп тЬе рптпег (я ргеяепс ш теп(о!д пю!аг ехсеяя апд Ья сопсептгатюп !я 200 рпю1ея)тп! ог Вгеатег. Рог яотпе ригрояея, Ьоъчечег, и !я дея!гаЫе то ц61тхе тЬе ргипег еЕВстепт1у (е.8., ъчЬеп тЬе ргииег !я епд-1аЪе1ед). 1п тЫя саяе, гЬе рпптег:тешр1аге га6о !я гечегяед, яо тЬас тЬе геасбоп сои!агля а Яче- то тепЕо1д шо1аг ехсеяя оЕ тетпр!аге.
Рптпег-ехтепыоп геас6опя аге цаца!!у сагпед оит !и тЬе ргеяепсе оЕ ехсеяя К1епоъч !га8- шепт. !Е тЬе епхуше (я 1шйбп8, тЬе пшпЬег оЕ !)ХА тпо1еси1ея !пЬНатет1 !и ЕЬе геастюп (апд Ьепсе тЬе очега!1 уте1д) ъч!1! Ье гейкед. Ноъчечег, тЬе пеъч1у яуптЬея!хед Е)ХА шо1еси!ея чд!1 Ъе !оп8ег, оп ачега8е, тЬап !ЭХА ию1еси1ея яупгЬея!гед ъчЬеп тЬе епгугпе тя ш ехсеяя Весацяе Ь !я рояяЫе то айест тЬе я!хе, ярест6с ас6ч!ту, апд уте!д оЕ тЬе ргоЬе Ьу ад)цят!п8 тЬе сопйбопя оЕ тЬе геас6оп, Ь тя ипрогсапт со т)есЫе ъчЬат рагтки1аг сошЪ|па6оп оЕ ргорегбея ъчои1д Ъе Ьеят яи!тед Еог тЬе тая!с ат Ьапд.
1п КХА Ыотт!и8 апс1 БоцтЬегп ЬуЪпд!тат!опя, ъчЬеге шахииа! яепя6чду тя оЕтеп тЬе очегпйп8 сопсегп, тЬе аиюипт оЕ тетпр1ате тп тЬе геастюп яЬои1д Ъе )терт то а тшпппшп апд тЬе сопсептгатюп оЕ гайо1аЪе!ед дХТР(я) яЬои1д Ье !псгеаяед ая ишсЬ ая !я ргасткаЫе. ъ'ътЬеп сЬоояп8 ъчЫсЬ оЕ тЬе Еоиг гайо1аЬе1ед дХТРя то ияе ш тЬе ргипег-ехтепяоп геас6оп, сопяЫег тЬе Ьаяе сошрояиоп оЕ тЬе ргоЬе то Ье яуптЬея!гед апд тЬе К оЕтЬе Е)ХА ро1уитегаяе Еог тЬе !пйчЫца1 дХТРя (р1еаяе яее аЬоче).
ъъгЬеп ип!Еогш!у 1аЪе!ед ргоЬея аге ргерагед Еог апа1уыя оЕ тпКХАя Ьу пис1еаяе 81, тЬе уте!д оЕ Ец!1-1еп8тЬ ргоЪе тпау Ъе тпоге ипрогтапт тЬап Ья ярестйс аст!ч!ту. 1п гЬтя саяе, тЬе гайо!аЬе!ет1 дХТР тпау Ье яцрр1етиептед чдтЬ ип1аЬе1ес1 ргесигяог ип61 тЬеи. сошЪ|пед сопсептгатюп арргоасЬея тЬе К . ТЬе у!е1д оЕ тЬе геас6оп !я детегпипес1 Ьу шеаяипп8 тЬе шсогрогатюп оЕ гайоасбчду !пто еиЬег ТСА-ргестрааЫе тпатепа! ог Е)Е-8 1-Ъоипд ию1еси1ея (р1еаяе яее Аррепйх 8), ъчЬегеая тЬе яхе оЕ тЬе ргодист гя аяяауед Ъу Ве1 е1естгорЬогеяпс МАТЕВ!АЕЬ СА()Т!ОХ: Р!еаяе яее Арреийх ! 2 Еот арргорт!аге Ьапд!!и8 оЕ ша!ет!а!я шаг(ъед ъч!ЕЬ <!). ВоЕЕег8 апг! Бо!обоп8 Р1еаяе яее Аррепйх 1 Еот сошроиеи!я оЕ я!ос(т яо!и6опя, Ьийетя, апд геа8еигя. (3!1ияе атос(ъ яо1и6оия Ео ЕЬе аррторг!аге соиселгта!!опя.
Аглглойит асетате (т 0 М) СВЕЬ)отЬгетто) (! м) ЕША (0.5 м, рН 8,0) ЕгЬало! )ъ)аС( (5 М) РЬело(:сЫого(оггл (т:7, ъ(/ч) <!> 5х 78Е е)естгорЬогеыя Ьи((ег Орт!опа1, р!еаяе яее Раер )6. Рго>осо! 4: Вул(Иеь/ь о) Б(лд!е-ьггапдед/)/з/А РгоБеь о) Ре)зпед Тепе(И)гот ВасгеггорИаКе А413 Тетр!асеь 92/ Тг/ь-С/ (7 М, рН 7.6) Орйопа1, р1еазе зее 5>ер 16. Епауп7е5 апс1 Вцйег5 70х К/епосч Ьаяс Ьи((ег 500 шм Тг!з-С> <РН 7.5) 100 шм М55О4 5сеп1ае сЬе ЪиЕ(ег Ьу 6Ьгасюп апй яоге Ь >п япаН а>!с>иосз ас — 20'С.
К!елои (гаетепс оЕ Е. со!! (3/з/А ро/утегаье 1 йеь<г/с</оп епхугпе<ь), аь арргорлаге Еог цепегадоп о( <Пе деягегl ргоЬе ТЬе геяпссюп епаугпе ыей со с1еаче >Ье ргойисп о( >Ье >аЬе>шц геасйоп зЬои!й с1еаче Ьепчееп 200 Ьр апс1 1 1сЪ йоипзсгеаш Егош >Ье рг!шег-Ьшй>пц ясе.
Се!5 Репа<ос<па ро/уасгуlат/де ее/ < ! > ог а//са/те аеагоье ее( Р1еазе зее 5>ер 13. Нос!е(с Ас(415 апе! О!фопвс!ео(!41е5 дП/ТР ьоlидоп сил<а/пту ип/аЬеlед дСТР, дСТР, апд дТТР, еасИ а< 20 тм ТЬе соспрояйоп о( сЬсз зо>ийоп г>ерепсЬ оп сЬе (и-зср]йНТР со Ъе ыей. 1(, аз сп >Ьсз ргососо!, гай!о!аЬе!ей йАТР Ь ыей, >Ье шгх зЬои!й сопсасп йСТР, йТТР, апй йбТР еасЬ ас а сопсепсгасюп оЕ 20 шм. 1Е пчо гай!о!аЪе!ей йНТРз аге изей, >ЬЬ зо1шюп зЬоиЫ сопсасп >Ье осЬег пчо йЬ>ТРз.
Гог аймсе оп шаЫп5 апй зсоппд зсос>г зо1шюпз о( йНТРз, р>сазе зее сЬе ш(оггпасюп рапе> оп РКЕРАКАТ>ОЬ> ОГ 5ТОСК 5ОШТ>О>з>5 ОГ йЬ>ТР5 АЬ>О ййЬ>ТР5 ГОК ОЬ>А 5Е>2>)Ейс>>з>С ш СЬарсег 12. дАТР <40 рм апд 20 тм) О(/полис/ео<(де рптег <ЬассепорПаВе М>3 ()пвегьа/ Рптег ог сиь(от-ьуп<Иеь(хед о//алоис!еобде) ТЬе Ъся гези!п аге оЬсашей ис>Ь а рипйей о>15опис>еосЫе (р1еазе зее >Ье рипйсаиоп зсгасе5!ез из!п5 епЬег це> е!ессгорЬогезЬ ог >Ье о>15опис>еос!йе рип6сайоп сагсгЫце сп СЬарсег 10, Ргососо! 11. Кезизрепй >Ье о>!Копие>ео>Ые ас а сопсепсгасюп о( 5 ргпо>ез<и! ш ТЕ (РН 7.6).
Тетр/а<е О/з/А РипЕу сЬе з!п5>е-зсгапйей ЬассепорЬа5е М13 ог РЬацеш!й (7>4А аь йезспЬей сп СЬарсег 3, Ргососо> 4 ог 8. Меаыге сЬе сопсепсгайоп о( >Ье 775>А Ьу аЬзогрйоп зрессгорЬосопсесгу ог зса!и!п5 ъчЬЬ 5УВК Со!й аз йезспЬей ш Аррепйгх 9. Арргохппасе>у 1 и5 о( сешр1асе ОНА сп а чо>шпе о( 15 и> ог >ем ы гег>шгег1 Еог еасЬ зуп>Ьейс геасйоп. Ка<1>оас(>><е Со>пропп>!5 (и-ь'Р/дАТР <70 тС//т(, ьр.
асс. 800-3000 С//тто/е) <!> То пишпиае ргоЫепи саыес1 Ьу гасВо1уяз о( сЬе ргесигзог апй сЬе ргоЪе, и Ь Ьезс, счЬепечег розяЫе, со ргераге гай>о!аЪе!ей ргоЬез оп сЬе йау >Ье (зср!й>4ТР мпчеь нс сЬе 1аЬогасогу. прес(а! Е41о(ргпепс АдИеяче до>ь таг/сед па<И гагВоассгие гпЕ < 1> ог рПоьрПогеьсепс адИеяче до>ь <е.В., С/оВоь (гот 5<гасаВеле) Веа/сег (250 тВ ЙПес( ий>П иа<ег ас 85 С апд а А((его(иВе сиЬе Ио/дег Гог ап а1>егпайче, р>еазе зее 5сер 2. 5ерПадех С-50 хрип со/итп, ег(и///Ьгасед т ТЕ (рН 7.6) Орсюпа!, р1еазе зее 5>ер 12.
И<асег Ьа<Иь ог Пеадлд Ь/ос/сь ргеьес <о 68 С апд 85 С Ма<ег Ьа(П ргеьес (о <Пе арргоргга(е Сегпрега(иге (ог геялсдоп епдопис!еаье д(ееь</оп АЕЫ1(!опа! Веадеп(5 5<ер 7 7 о(<И(ь ргогосо! гег/и/геь <Пе геадеп<ь /(мед т СПаргег 5, Рго<осоl 4 ог 72. Ргососо< 4: 5упгЬезсз оГ5<псг!езсгапс(ес( РНА РгоЬез оГРе~тег( ГещгЬ Ггот ВасгеггорЬасге М13 Тетр1асез 923 10. 15.
17. Рппп8 сЬе 20-пшшсе (пспЬа6оп (5<ер 7), гпеаяпге сЬе Ггассюп оГ гайоас6ч(су ш сЬе яагпр1ея яогес1 Еи 5серя 4 апд 6 <Ьас еиЬег Ьая Ъесогпе (пяо1пЫе Еи 10% ТСА ог сЬас адЬегея со а РЕ-81 61сег ая беяспЪед си Аррепйх 8. Неаг СЬе геасСюп Со 68'С Гог 10 ппппСея Со (пасбчаСе СЬе К1епоьч Гга8шеп<.
А6!пзс сЬе сопсепсгасюп оГ ХаС1 ш сЬе геасбоп со асЬ<ече ор6ша1 сопй6опз Гог с1еача8е оГ сЬе ргос<цсс Ъу <Ье яе!ессес1 геясПсбоп епхуше. КегпегпЪег йас сЬе сопсепсгасюп оЕ С<аС! !и сЬе рпгпег-ехсепзюп геасссоп Ь 50 псы. 1Е сЬе гезсггс6оп епгупсе ъчог<сз Ьеяс <п сЛе аЪзепсе оЕ ХаС1, ог <Е сЬе епгупсе гес<шгез пипа па) сопйсюпз (е.8., ЫЕЬ сопсепсгасюпз оЕ ТгЬ ог сЬе ргезепсе оГ с<есег8епс), сгапз(ег сЬе гайо1аЬе1есс РХА со сЬе арргориасе Ьп<сег Ьу опе оЕ сЬе Ео!1оълп8 сто гпесЬосЬ. 00 РопЕу йе ргойсссз оЕ йе ргппег-ехсепыоп геасс!оп Ьу ехсгассюп ъч<сЬ рЬепоЬсЫогосопп апсс ргес!рссасе чАй есЬапо!. Айег ймо!чш8 йе ргес)рссасес< Р)ъ)А си 27 рс оГ ТЕ (рН 7.6), ас<8 3 р! оГ сЬе арргорпасе !Ох геяпспоп Ьосуег.
(8) ЕхсЬаихе сЬе рпгпег ехсеппоп ЪпЕЕег Ьу арпи-со!шпп сеисг16з8асюп Ье(оге й8езсюп (р1еазе зее Аррепйх 8). АсЫ 20 шпся оГ сЬе беясге6 геяспссюп епкуше, апс1 гпспЪасе сЬе геас6оп Гог 1 Ьопг ас <Ье арргорпа<е сегпрега<пге. РппГу сЬе РХА Ъу ясап6агс1 ехсгассюп ъч!<Ь РЬепоЬсЫогоГопп, апс1 гегпоче ппспсогрогасес1 с1ХТРя Ьу арпи-со1игпп сЬгогпасо8гарЬу ог с1<ТГегеп6а! Ргессрпабоп ъч(сЬ 2.5 м апппопппп асесасе апс1 есЬапо! (Гог сЬеяе ргосес<пгея, р!еаяе яее Аррепйх 8).
АсЫ 0.5 М ЕРТА (РН 8.0) со а 6па1 сопсепсгасюп оГ 10 шМ. ~ <МРОКТА<ъ<Т !С )з еяяепС!а! йаС Егее гпа8пеяагп 'юия поС Ье ргеяеп< ъчЬеп СЬе РХА )з ехрозес! со а!<са!! !и <Ье пехс зсер. О<Ьеич!яе, йе РХА ъч!!! Еоггп ап !пзо!оЫе сагир!ех ъч!<Ь М8(ОН) . 1яо1аге СЬе гайо1аЪе1ес1 РХА Ъу е1есггорЬогеяя СЬгои8Ь а бепа<ппп8 ро1уасгу1агпЫе Ве! (р!еаяе яее СЬарсег 12, Ргососо1 8) ог ап а1<са1!пе а8агояе Ве1 (р!еаяе яее СЬарсег 5, Ргососо! 8), дерепйп8 оп <Ье я<хе оГ сЬе Гга8шепс. Айег е1ессгорЬогеяя, ргераге сЬе Ве! Гог апсогайо8гарЬу. Ехрояе сЬе Ве! со Х-гау 61ш Гог 5-10 пппшея. А118п сЬе бече!орес1 61ш г6<Ь <Ье Ве1, пяп8 сЬе ппа8ея Ггогп сЬе РЬоярЬогеясепс с1ося (О1о8оя) ог гайоассгче Еп1с ароса Таре йе Гбш со <Ье Ве1 апд псаг1с сЬе роя6оп оГ сЬе ргппег-ехсепс1ед гайоас6че РХА Гга8шепс оп <Ье Ъас1с оГ <Ье Ве! Р1асе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
