Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 52
Текст из файла (страница 52)
ТЬе рок(ЬуЬг)6(хапоп гесойпр | ! Воп о(гйеке 1аЬе1к Ьу апт(Ьо6)ек 'ь гпоя ей!с|еи1 ччЬеи оп|у а Гетн Ьакек аге гер|асе6 Ьу1Ьеп |аЬе1е6 | соиптеграик. Сгеатег |псогрогаиоп о( тйе гпотИе6 пис|еой6е сап а1ю с$есгеаке ЬуЬп6Ыайоп о( 1Ье | , ргоЬе 1о 1агйе1 тИЧАк ог 0Ь(Ак. Ега8тепгк о( КЬ(А |аг8ег сйап — 300 пис|еойс|ек аге ипкштаЫе ак |и кт(и ЬуЬпсЕхайоп ргоЬек.
' Весаике ыпа|| (тай иепгк репе(тате 1ьюе тоге ейютеп(|у, |агйег йайтептк о( К(к(А тик( Ье гебисе6 |и ! к(ге Ьу $(т(1е6 а((та)(пе Ьус|го|ук|к (Сох е1 а|. 1984; Ап8егег е1 а!. 1987; Ва|ек ет а!. 1993). 9.36 СЬаргег 9: Ргерагайоп о7" йад|о1аЬе1ей РМА апд )ъХА РтЬез ( ТКО0ВЕЕ5НООТ!МСВ МО КМА 35 5УМТНЕ53кЕ0 ТЬе пъоз( согпгпоп саъье о1 ап аррагепг |ас|с о1 КМА зуп(Ьез(з В соп(агп|па(юп ойиЬез ог геацепь ъч)(Ь КМазе. ТЬь сопгапчпадсе сап Ье ачоЫед Ьу (аЫпВ дъе ргесаийопз дезспЬед |п (Ье (п(годисдоп (о СЬар(ег 7.
$.езз Ггег|иепг(у, гаП иге (о зуп(Ьез(ее КМА В а сопзег|иепсе о1 ргеар||а(юп о1 гЬе 0МА (егпр|а(е Ьу ГЬе ' зрегпз|д(пе (п (Ье $0х сгапзсприоп Ьийег. Ма(ъе зиге (Ьа((Ье сопъропеп(з о1 (Ье геас6оп аге аззегпЫед а| гоогп (егпрега(иге апг| )п дге зга(ег! огдег. 6 песеззагу, ГЬе ргезепсе о1 зо|иЫе (егпр)а(е сап Ье соп6ггпед Ьу апа(ух(п8 ап а|к|ио( о1 |Ье геас6оп Ьу е(есггорЬогез)з дъгоиВЬ ап аВагозе Ве!. Тгапзсир11оп 1з Ггопь ГЬе ъА(гопВ 5(гапд о1 0МА БзиаПу, )99.8% о1 |гапзспр(з зупгЬез)аед |и ч(ио Ьу Ьас(ег)орЬаВе 0МА-с|ерепс$епг КМА ро|угпегазез аге с$епчес! Погп ГЬе соггес( 0МА з(гапг! (Ме|(оп е| а!. $984).
Ноъчечег, |Ьь Ь(кЬ деВгее оГ зрес(6с((у 'ь оп|у асЬ(енед рюн(дед (егпр|а(ез аге Ьо(ЫЫеаг апд |асЫпц рго(гид(пВ 3 ' (ептип|. Соп(апг|пагюп о1 дъе (егпр|а(е ън3(Ь зирегЬе3ка| р|азгпЫ 0МА саъьез ап |псгеазе |п аЬеггап( гпйадоп о1 КМА сЬа|гь оп Ьо(Ь з(гапдз оГ (Ье 0МА. ТЬе ргезепсе о( а рго(гигПпВ 8 ' (епп|пиз доъчпз(геат 1гопь дъе Ьас(ег(орЬаде работе(ег |еадз со (Ье зуп| Вез ь о1 (гапзсп р(з согп р|егпеп(агу со дге ЙП )епВ(Ь о1 ГЬе ъчгопц з(гапс| о1 0 МА Пе., 0(игп иапзсг(р(з). Во(Ь о1 (Ьезе ргоЫегпз сап Ье ачоЫед Ьу саге(и! ргерага(юп о1 |Ье (егпр|а(е (р|еазе зее 5(ерз $ апс$2).
5уп(ЬеЫкед Тгапзсг|р1з Аге 5Ьог(ег ТЬап ГЬе Оез|гед ЕепВГЬ 5уп(Ьез)з о1 аЬЬгсМа(ед сгапзсп рь сап Ье с|ие (о (Ье сЬапсе осси ггепсе (п дъе (епър|а(е ог зег|иепсез дъаг (еггп(па(е (гапзспр(юп Ьу |Ье раг6си|аг 0МА-с|ерепс3еп( КМА ро|угпегазе Ье|пВ гьед.
Аподгег соп(пЬиг(пд 1ас(ог сап Ье Пт(дп|$ сопсеп(га(юпз о1 ргесиьог (изиаПу (Ье гасПо|аЬе|ес$ гМТР). ТЬе Пгз( о1 | Ьезе оЬзгас|ез гпау Ье гезо(нед Ьу сопз(гисдод а пеъч р!азт|д |и ъчЫсЬ (гапзспр(юп о1 дъе доз! гес$ зег|иепсе ь с$гМеп Ьу а ро|упъегазе 1гопь а д(йегеп( Ьас(ег(орЬаВе. Тгапзсп рдоп (епп|пагог зег|иепсез аге по( а|Ьчауз гесодпЫед ег|иаПу Ьу |Ье чапоиз Ьас(ег)орЬаде 0МА-с|ерепс|еп( КМА ро(угпегазез. г6(ЬоидЬ (Ье з(гепВГЬз о( сгапзспрдоп (еггп|падоп з(Впа|з нагу В еаду, аП Ьи( (Ье зиопеез( о1 (Ьегп сап | Ье очегсоте, ас |еаз( |и рагс, Ьу (псгеаз(пц (Ье сопсеп(гаиоп о1 ГЬе |ипйпц гМТР |и тсь( сазез, |г ь кпргас, '6са| со (псгеазе (Ье сопсеп(га(юп о1 (Ье гМТР (Ьа( ь гад(о(аЬе!ед |п |Ье геас|юп, з(псе (Ье 'кпргонегпеп( (п у|еЫ о1 ЬгП-(еп8$Ь ргос$ис| ь Ва(пед а( |Ье ехрепзе о1 гедис(пд (Ье зрес(6с асдн)(у о1 (Ье ргоЬе.
|и (Ьь сазе, а питЬег о1 асЫ|(юпа! з(ерз сап Ье (а(ъеп: ° Гоънег (Ье (ет реса(иге о1 |псиЬа(юп о1 | Ье (гапзсг(р((оп геасдоп (о 30'С (Кг)ед апд МеПоп 1987). ° Раге |Ье зег|иепсез со Ье (гапзспЬес$ (о | Ье т)о|тот. |и ГЫз ъчау, К тау Ье розз(Ые го еПъ пва(е дъе (ег- т|па(юп зег|иепсез 1гот (Ье с|опе. ° Рип1у (Ье деягед ргодис| Ьу е|ес(горЬогезь дъгоиВЬ а ро|уасгу|агпЫе ог абагозе Ве! аз дезспЬед |п СЬар(ег 5, Рго(осо! $. ТЬе (гапзспр(юп геас|юпз аге зо ебс(еп( (Ьа( 3( ь ойеп рсьз(Ые (о рип1у зи6)с(епг г|иапддез ог'ГЬе с3ез|гед КМА, енеп 6 К 'ь оп|у а ге|адче|у пдпог ргорог6оп о1 |Ье соса! КМА зуп(Ьез(еед |п гЬе геас6оп. ТЕК|ОРНАСЕ- Р Р 8 р у у ц у 8 где( 0МА Ьацгпегйз (п(о р(азт(дз саггу(пц Ьас(ег)орЬаце ргото(егз (гпа|п рго(осо!).
А|(егпа(ве|у, (епър|агез сап Ье зуп(Ьез(еед |и РСКз из(пц депе-зрес(6с рпгпегз ъчЬозе 5' епдз епсог3е зуп(Ьедс ргопю(егз Гог Ьас(ег(орЬаце-епсодед 0МА-дерепдеп( КМА ро|угпегазез. РоПоъипц рип6садоп, (Ье ргодис(з оНЬе РСКз аге изед аз с$оиЫе-з(гапс1- ег! (етр|а(ез Гог |п чКго (гапзспр(юп геасдопз (Еще! е( а!. 1992; Ва|ез е( а!. 1993; 0пиг(а е( а|, 1993). Ву из(п6 ра|гз о1 рпгпегз | Ьа( епсоде гййегеп( ргото(егз, 0МА 1гаВгпепь аге депегагед (Ьа( гпау Ье (гапзспЬег3 |п а з(гапс3-зрес|6с гпаппег Ьу (Ье арргорпа(е КМА ро|угпегазе.
ТЬе адчап(адез о1 (Ье РСК гпе(Ьос3 )ос|оде: ° РгоЬез гпау Ье цепегагед сПгесду 1гогп 0МА (егпр|а(ез агпрППег| 1гогп а Ье(егоВепеоиз рори|аиоп о1 0МА ГгаВтеп(з. ° ТЬе пеед 1ог с)оп(пВ апд ргерагадоп о1 р(азт(дз (з оЬч|а|ед. ° ТЬе ргоЬез сопидп по р|азгпЫ ог ро!уПп(ъег зег|иепсез. ° РгоЬез о1 ЫеЬ зрес)6с3(у апс1 о1 н(г(иа)!у апу зие сап Ье сгеасед. Ртотосо! бг 5упг)гегЬ оу' 5(п51е-есгапдед $$3ъ)А Ргобеь Ьу!и $7(сто Ттапгст|рдоп 9.37 Рпгпег Оеа|дп ТЬе рпгпеге аге иеиа3(у с|и)се 3опд (> 50 пис)ео((деа) апс1 сапе|а( ог' 1Ьгее геВ|опа: 3' Вепе-ерес|бс еес|иепсе (20 пис|еобдеь) 5' с|агпр (-10 пис|еобдеь) соте ргопюсег (-22 пис|еобдеь) ТЬе ьес|иепсеь о1 Йе соте ргогио(ега гесобпыес$ Ьу Йе Ьас(ег|орЬаВе ТЗ апд Т7 КЫА ро|угпегаееь аге (а1сеп ггогп 3огбепееп е1 а|.
(1991 ) (р!еаъе еее Йе |п1опиа1юп рапе| оп 3Ь) Ч|ТКО ТКА|ъ)5СК1 РТ103ъ3 5У5ТЕМ5): 5' 3' Вассег(орбаце Т7 соте ргогио1ег: ТААТАССАСТСАСТАТАСССАСА, Вас(ег(орбабе ТЗ соте ргогио1еи 5 АТТААСССТСАСТАААСССАСА Гог Йе ТЗ ргогпогег, Йе 3 '-гпохг И)пис(еог)де сап Ье СА ог АС. Оье а д)бегеп( с|агар еес|иепсе (ог еасЬ гпегпЬег о1 а рг|гиег ра|г. 5иеВеесед с|агпр ьес|иепсеь аге ((обе! е| а|. 1992) ' САСАСАТССФ апд ' ССААСССТТСЗ, ТЬе цепе-прес(бс ьеВгпеп1 о1 Йе рпгпег ебоиЫ Ье дее(бпед ассогд(пб со Йе иеиа| го|ее (р!еаье атее 1Ье д(есиее(оп оп Рпгпег Оеь|цп |и Йе |п(гос$исбоп со СЬар(ег 8).
Атпр!16са6оп Сопд|1|опь ТЬе агпр||бсабоп геасбопь соп(а|п 10-20 рб о1 а е|пВ|е ерес)ее о1 сегпр|а1е ОЬ)А ог ргорогбопасе|у гпоге о1 сопър|ех роро|а(|опь о1 0(ъ|Аь. ТЬе гепътбпдег о1 1Ье геаВепп |и (Ье агир((бсабоп геасбопь аге овеса ас ь1апдагд сопсепсгабопь (р|еаъе атее СЬар1ег 8, Рго1осо| 1). ТЬе депасигабоп, аппеа33пб, апс$ ро1угпепта(юп Игпеь |Всес| Ье|оьч аге аи|(аЫе 1ог 50-и| геас((опе аееегпЫед |и Й|п-ъчабед 0.5-пь! (ибея апс| ЫсиЬасед |и Йеппа| сус!его тисЬ аъ 1Ье Рег|оп-Е|гпег 9800 ог 9700, Маь(ег Сус|ег (Еррепдогй, апс| РТС 100 (М) КеееагсЬ).
Пепел апс$1епгрегасигеа гпау пеед 1о Ье адарсед со хи!1 о(Ьег (урез ог' ес|и)ргпепс апс1 геас(юп но|испек Ро|угпептабоп ьбои)д Ье сагпес3 оис (ог 1 гвпиге (ог счету 1000 ЬР о( |еп8|Ь о( Йе гагбег 0)хА. Мое( 1Ьепиосус|егь Ьане ап епд гоисюе |и ъчЬ|сЬ 1Ье апзр||бед ьатпр1ее аге |псиЬа(ед ас 4'С ипб! гегпочед 3 оги Йе пъасЬ! пе. 5агпр|ее сап Ье |ей очегп(ВЬ1 ас 1ЬВ сегпрегасиге, Ьис ьЬои|д Ье когес| Йегеайег а1 — 20 С. Рипйса6оп о1 Агпр|31|ед 03Ъ)А А!ЙоиВЬ агпр||бес| ОЬ|А гпау Ье иеед ъъ((Ьои( риг(Исайи ае а 1егпр|асе |и 1Ье |и ъйго сгапесг(рбоп геассюп (Ва|еь е1 а|. 1993; Огтиба е1 а|. 1993), Йе е(бс)епсу о1 К|ъ|А еуп(Ьее(е ь !гпргочед И ипиеед рг|тпегь апд Йе Ьу-ргодис(е о1 Йе аигр3(бса((оп геассюп аге гегпочед Ьу е|ес(горбогее|ь 1ЬгоиВЬ а де! саьс чдбь 3оъч-гпе|бпд1егпрегасиге абагоье, Ьу арии-соЫгп сбгогпа1одгарбу (ЬгоиВЬ Зербадех С-75, ог Ьу аЬеогЫ(опте|обои оп а согпгпегс|а| тех|и ьисЬ ае )Мтатд РСК Ргере Рипбса1юп 5уь1егп (Ргогпеда) ог О|Ас|и)с|с ((~3аВеи) (р!еаъе еее СЬар1ег 8, Рго1осо| 2), 1и Ч31го Ттапьспр6оп о1 Атпр|31|ед 03ъ|А Арргох|гиасе|у 0.5 )сВ о1 рипбес1 агпр338ед ОЬ)А гпау Ье иеед аъ 1егпр|а(е |и е(апдагд 1гапесг|рбоп геас6опь саббулМ Ьу Йе арргорпа1е Ьас|ег|орЬаВе-еисодед ОНА-дерепдеп1 КЫА ро|угпегаее (р|еаее еее Йе гпа|п рго1осо|).
КЬ)А ро|угиегаьее епсодес1 Ьу ЬассегюрЬаВее ТЗ апд Т7 (гапьспбе РСК-агпр3|бед ОНА саггу|пВ Йе арргорпасе ргогпо(его чд(Ь ЫВЬ ьреабс((у. Нонченег, (Ье у|е|дь о1 КЫА аге Вепегабу Йгее- 1о 1оиг|оЫ |оъчег Йап сап Ье оЫа|пес1 1гогп 33пеаптес$ р|аяи)д (егпр|а(ек )Агбеп ие|пВ апгр3313ес$ ОЬ)А сегпр1а1ее, Ье(ъчееп 20% апс$ 30% о1 Йе |аЬе|ед гЬ(ТР 'ь солчегсед |иго ас|д-(пео|иЫе гпа1ег|а3, согпрагед (о ) 75% |п геасбопя соп(а(п(пд 3)пеапгед р|аьги|д ОЬ(Аь ае 1егпр|а(еь ($.оВе3 е( а|.
1992). ЫечеиЬе|еее, Йе у|еЫ агк$ прес)бс ассм(у о1 Йе КМА Вепегасед 1гогп Йе агпрЕбед рих(исса о1 РСКь аге пюге Йап зоб|с(еп( 1ог пюа( ригроьек ТЬе КЫА ро)угпегаье епсодед Ьу Ьасгег|орЬаВе 5РЬ 'ь герог|ед (о сгапесг|Ье РСК-агар|бес! ОЬ|А пгисЫеее ейь с|епбу 1Ьап 3(пеаг(тед р|аеги|д ОЬ|Аь (Еоце! ес а|. 1992).
Еог 1Ыь геаъоп, ъче гесопгтпепд их|об рг|гпегь 1Ьас епссх|е ргогпо1еге 1ог ЬассегюрЬабея ТЗ апд Т7. Рго1осо! 7 Ьупйеыя ог с0МА РгоЬеь 1гогп гпКМА Выпь Капдогп О!~допрос! ео6де Рпгпегь нь Ркотосог 0евск!ВГ5 тне Оемеклт!Он ОГ сОНА ргоЬез 1гогп ро!у!А)' КХА )п а гапс!огп рг!пт!пВ геас!!оп. РгоЬез оГ !Ьь суре аге пзес) Гог с!!ГГегепг)а! зсгееп!пВ оГ с))1!А 1!Ъгапез. Гог ас)йг!опа1 с)ега1!з, р1еазе зее гЬе !пуоггпа!!оп рапе1 оп !5ОЕАТ!!з!О О!ГГЕКЕЫТ!АЕЕТ Е)!РКЕ55Е0 с0ХАз Вз' 01ГГЕКЕНТ!АЕ 5СКЕЕН!НС А!з!О СЕОН!йС.
МАТЕК!АЕ5 ,Вз !МРОКТАХТ РгеРаге аП геаВеп!з изеВ !и !Ь1з Рго!осо1 зе!!Ь 0ЕРС-ггеагес1 Н О !Р!еазе зее гве 1п!отта!гоп рапе1 оп НО!Аг ТО ЪУ!Х ТНЕ ВАТТЕЕ ЪЧ!ТН КЧАвг !и СЬар!ег 7). САГ)Т1О!з!г Р!еазе зее Аррепйх !2 !ог арргорна!е Ьапг111пВ о! та!ег!а!з таг1сег! ъи!Ь <1>. Вг!Негв апг! 50!г!1!005 Р!еазе зее Аррепйх ! !ог согпропеп!з о! з!осЬ зо!иВопз, Ьпттегз, апг! геаВеп!з. О!1йе з!осЬ зо1п!1опз то 1Ье арргорна1е сопсеп!га!!опз. Аттоп!игп асегаге !10 аз) ИГЬ!огЬге!Го) Г7 а0 ЕОТА !0.5 аг, рН 8.0) ЕгЬапо1 НС1 !2.5 ге) <! > )з)аОН !3 Г0 <!> РЬепо):сЬ)оготогт !т:1, е)е) <1> Р1асепга) И)з)азе !пЬ!Ь!гог !20 ип!гз)р)) ТЬезе гаЬ)Ь)гога аге зоИ Ьу забега! пзапа!асгшегз апс)ег гапона !заде папзез !е.ц., К)з)Аяа, РгопзеВа; Рг1зпе !пЬ!Ь!гог, 5 Рпгпе — +3 Рпгпе; К!зазеОТ)Т, Е!!е ТесЬпо!оВ)ез).
Гог пюге дега!!з, р!еазе зее гве !атоппапоп рапе1 оп 1!з!Н!В!ТОК5 ОГ К!з!Авез !и СЬаргег 7. 505 !!О;4 и)И Тг!з-С1 !7 аг, рН 7.4) Ргогосо! 7г 5улгЬезгз оу'сР)чА РгоЬезугот тК)ьТА (уз!п6 Есапг(от О!!Еопис!еог!г(е Рптегз 9.39 Епкупсе5 апд Впйег5 Кечегзе Сгапьслрсазе Кечегье сгапьспрсаье йегьей Ьот сЬе ро1 Вепе оЕ сЬе Мо1опеу пшппе 1еи)сет(а чггсь (Мо-М07) Ь тоге еЕ6с)епс )п сРХА ьупйеяь сЬап йас оЬсаспей Егопс йе ачсап псуе1оЫаьсояь чьиь (е.5., р!еаье ьее рагВпо!1 ес а!. 1990). ТЬе с!опейчегпои оЕ гечегье сгапьспрсаье епсойей Ьу йе Мо-М1У епгуте и сЬе епаупсе оЕ сЬоке (и йь ргососо1. Мшапь оЕ йе епгугпе сЬас !ас1с К)4аве Н асйчау (е.В., 5сгаса5спрс, Егот Епгаса5епе ог 5ирегьсгсрс 11 Егогп ЫЕе ТесЬпо)о56еь) Ьаче югпе айчапса5еь очег сЬе ъч!1й-суре епауспе япсе сЬеу (1) ргойисе Ь!ВЬег у!е1йв оЕ Еи!1-!епВЕЬ ехсепяоп ргойисс апй (2) ъчог)с ег)иа11у сче)1 ас Ьой 47"С апй 37'С (Сегагй апй 1РА1еьяо 1993).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
