Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 51

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 51)

Тетр/а(е ОА/А ТЬе ОЬ[А Ега8шепсго Ье 1гашсг!Ьсс[ ьЬои[8 Ье с!опег[ !пго опе оЕ 1Ье сошшегс[а11у ачаг!аЫе р!алаш!й сопгагшп8 ЪассегюрЬа8е КХА ро!ушегаье ргошогегь оп ЬогЬ ьЫез оЕ 1Ье ро!ус!опш8 седиепсс (е.8., РОЕМ Егогп Ргоше8а ог РВ1иеясг!Рг Егош 51гага8епе).

РипЕу 1Ье сирегЬе!ка! гссопгЬ!пап! р1аыпЫ Ьу опе ог гпоге оЕ 1Ье шегЬосЬ г[еясг!Ьег[ гп СЬаргег 1. Ье ОНА иьед аа а сегпр!а(е !и (Ье Ы и!(го сгапасг!рс!оп геасПоп пеес[ по( Ье ЫКЫу рипПед — спЫе пПп!ргерагаПопа июг[с иеП. ТЬе ешепс!а! геди!гешеп( В 1Ьас (Ье сегп р!асе Ье Егее о( КЫаае, а спсепоп (Ьа( сап иеиаПу Ье Еи%! !ес$ Ьу ехсгасПпд (Ье ргерагасюп о( р!ааш!д ОНА Ьи!се и81Ь рЬепо[:сЫого1оггп. оиечег, П КЫаяе ииа асЫес1 (о сЬе р!ааш!д а1 а!асе агапе !и 1Ье рипйсаПоп ргосеаа, !.е., а((ег с[ерго!и!сайоп, Ь аЬоиЫ Ье геспочед Ьу 1геа1гпеп1 иа[1Ь рго(е!пахе К, аь ЕоПончш 1.

АсЫ со 1Ье р[аагп!д ОНА ргерага1юп; 0.1 чо!игле ог'10х рго(е!пахе К Ьи((ег (100 гпм Тгь-С! [рН 8.0!/50 шМ ЕОТА [рН 8.0[/500 спМ Нас!), 0.1 чо1игпе о1 5% (и~/ч) 505, апс! рго1е!пахе К (20 гпВ/гп[ 1о а Ппа! сопсеп1гаПоп о( 100 РВ/т!. 2. !псиЬасе (Ье геас(юп Еог1 Ьоига1 37 С. 3. Ехсгасс 1Ье ОНА иЧ(Ь рЬепоЕсЫого(оггп апд гесочегсае ОНА Ьу а(апс1агс1 ргес)р!(а(!оп ъи(Ь е1Ьало[. 4. Кеаиьрепд (Ье ОНА !п КЫаьедгее ТЕ (рН 7.6) а( а сопсеп1гаВоп о( >100 ие/ш[.

ссас![оас1[че Со!пропп(!5 /и-'~Р/гСТР (10 тС!/т!, ар, асс. 400 — 3000 С!/тто!е) <! > То пишгпие ргоЫепи саиьег[ Ьу гасПо1уяз оЕ 1Ье ргесигяог, Ь ы Ьекс, ыЬепечег роыгЫе, го ргераге гайо!аЬе!ег[ ргоЬес оп 1Ле с[ау 1Ье [иР) ЙИТР агг!чек гп 1Ье !аЬогагогу. Ьрес[а! Ес!о!рспеп1 М!сго/ице 1иЬеь (0.5 т0 5ерЬадех С-50 барии со!итп, едиг/!Ьгасед ив(Ь 10 гпМ ТпаиС! (рН 7.5) Оргюпа1, р1еаье сее 51ер 8. Яасег Ьаса ргеьес (о 40 С ЬЕ иа!па Ьассег!орЬаВе 5Р6 ОНА-дерепдеп1 К/4А ро/утегаье гп 51ер 4) Ас!с![1[опа! Кеацеп15 5(ер 2 оЕ 1Ь/ь рго(осо! геди!геь (Ье геааепса !(81ед гп Ргососо! 11 оЕ 1Ь!а сЬар(ег.

5(ер 8 оЕ 1Ь!в ргососо! гпау гедисге 1Ье геадеп(а !!8(ед гп СЬар(ег 5, Рго(осо/ь 9, 1 7, апд 12. МЕТНО0 1. Ргераге 5 ршо[ея оЕ 1шеаг ссгпр1асе ОКА Ьу йцсядоп оЕ аирегЬе1!са1 р[аяв[д ОНА ичсЬ а ашсаЫе гексг!с(юп епкутпе. Апа[усе ап а[[дои( (100 пц) оЕ РЬе йкеасес1 Р[х[А Ъу акагоае ее[ е1ессгорЬогеяа.

1Е песеааагу, асЫ гпоге геяспсс[оп епкуте апс[ сопс[пие [псиЬас[оп ил([1 1Ьеге [8 по !гасе оЕ(Ье ипйаеасес1 ОНА. Арргохипагс!у 2 и8 оЕ в р!аяпЫ 3 [сЬ !и !еп81Ь !с -1 рпю1е. ,Пс !МРОКТАЬ[Т 11 ь ееаепВа! 1Ьа( р[аьгп!д ОНА 1егпр!а(еь Ье с!еачес[ 1о согпр!е1юп, а!псе 1гасе ашоипса о( с[оаед огсйаг р!аат!д ОЫА гегш!1 !и ТЬе аепегас!оп о( ехсгегпе!у !опе сгапяспрь Раас !пс!ис[е р!ааш!д аес!иепсеь. Весаиье о1 1Ье!г !епе(Ь, 1Ьеае 1гапьсг!р(ь сап ассоипс Еог а аиЬ- а(апс!а[ ргорогПоп о( сЬе !псогрога(ес! гайо!аЬе!ес! гХТР 2.

[Е геаспсс[оп епкушеа, аисЬ аь Ряс[ ог 5хг[, РЬа1 цепегасе ргосгийпа 3' сегпип1 тиас Ъе паем, сгеас РЬе йцееаед 0[х[А ич(Ь ЪассепорЬаце Т4 ОКА ро[ушегаье [п 1Ье ргеаепсе оЕ а11 Еоиг с1Ь[ТРа со гепюче сЬе 3' ргосгияоп (р[еаве аее Ргососо1 11). 9.34 СЬаргег 9г Ргерагапоп о) Яаг(!01аЬе!ег( РНА апг( Я)с[А РгоЬеь Ргоггийпе 3' сепшш сгеасе ап орроггишгу Гог сЪе РХА-дерепс(епс КХА ро1у|ПЕГахе Со Сгапьуег со йе сошр1епсепсагу ьсгапс( ос сЪе сепср1асе апс) со Вепегасе !опВ Сг-сиги сгапьспрь и4сЪ егаеп- яче ьесопс)агу ягиссиге. РипГу йе сешр!асе РХА Ьу ехсгас6оп чч[сЬ рЬепо1:сЫогоГопп апс1 ьсапс)агг[ ргессриасюп сч[сЬ есЬапо1.

Р[ььо[че йе РХА ш Н О ас а сопсепсга6оп оГ 100 пМ (с.е., 200 Нд/ш1 Гог а 3- 1сЬ р1аяпЫ). 'сАгагш сЬе 6гьс ях согпропепсь 1[ьсес) Ье1очч со гоош сешрегасиге, апс[ ш а ьсеп1е 0.5-ш1 пс[сгоГице сиЬе, ппх т гЬе ГоИоичпе оп1ег аг гоот гетрегасиге: Сешр!аге )3ХА 0.2 ргпо!е (400 пВ Гог а 3-1сЪ р!аяшй со 6 Н! 2 н! 2 н! 2 н! сн! 5 н! КХаье-Сгее Н О 5 гпм гХТР ьо1шюп 100 шм йсЪюсЪгепо! ! Ох сгапьспрсюп Ъи(уег 2 пфш! Ъоч!пе ьегшп а!Ъшшп 10 гпС!)ш! [и-ЯР)гСТР (ьр.

асс, 400-3000 СУпипо1е) Мпс сЬе согпропепсь оГ йе ппхсиге Ьу цепс[у сарршд сЬе оисьЫе оГ йе сиЬе. ТЬеп асЫ: р1асепса! КХаье !пЪ!Ъ!сог (10 ип!и) ! н! Ъассег!орЬаВе РХА-йерепйепс КХА ро1ушегаье (- 10 иши) ! н1 ,Вг !А4РОКТАХТ ТЬе согпропепгь аге аг)с)ес( !и Фе огс)ег ьЬоъчп апг) аг гоош Сешрегагиге Со ачоЫ йе роьь!Ъ!!!су йас йе сегпр!асе РХА гпау Ъе ргес!р!сасес( Ъу сЬе Ь!еЬ сопсепсгасюп о( ьрепгийпе !и сЬе сгапьспрссоп Ъи((ег. М[х сЬе геацепсь Ьу кепс1у сарр!пц сЬе оисьЫе оГ сЬе сиЬе. СепсгсТице сЬе шЬе Гог 1 — 2 ьесопс[ь со сгапьГег а11 оГ сЬе 1)с[иЫ со сЬе Ьоиош.! псиЬасе йе геассюп Гог 1 — 2 Ьоигь ас 37"С (ЬассепорЬадеь Т3 апс) Т7 РХА-с)ерепс[епс КХА ро!угпегаьеь) ог 40'С (ЬассепорЬаВе 5рб РХА-с[ерепг[епс КХА ро1ушегаье).

ТЪе геасСюп шау Ъе ьса!ес( Ггош 20 Н1 Со 50 Н! Со ассоппподаСе пгоге й1иСе геааепгь. чЧЪеп сЬе геасбоп Ь сагг!ег( оис аь деьсг!Ъег( аЪоче, 80 — 90% о( сЪе гайо!аЪе! ъ4!1 Ъе сисогрогасед шсо КХА. ТЪе у!е14 оу КХА сч!!! Ъе -20 па (ьр. асс, 4.7 х ! 0" ерш)На) гчЪеп сЪе ьрес!Вс асссчиу о( сЬе [ияр) СТР и 3000 Сргпшо1е апг( -150 пц (ьр. асс. 62 х 10" ерш)НВ) гчЪеп сЪе ьресср к асичиу о( сЪе ргесигюг Ь 400 С!Йпгпо!е. (Оргсоиа1) 1Г 6лП-! епВй сгапьспрсь аге с[еягес[, асЫ 2 Н1 оГ 0 5 гпм гОТР апс1 [псиЪасе сЬе геассюп ппхсше Гог ап асЫиюпа1 60 пиписеь ас сЬе сешрегасиге арргорпасе Гог йе ро1ушегаье. Тепшпаге СЬе сп чКго Сгапьспр(юп геас6оп Ьу асЫшк 1 Н) оГ 1 шцйп1 КХаье-Ггее рапсге- а6с РХаье 1 Со СЬе геасбоп СиЬе.

Мсх СЬе геацепгь Ьу ВепС1у Сарр[од СЬе оигьЫе оГ СЬе СиЬе. [псиЬасе сЬе геас6оп пихсиге Гог 15 гпшисеь ас 37'С. АсЫ 100 Н! оГ КХаье-сгее Н О, апс1 рипГу йе КХА Ьу ехсгассюп чч[сЬ рЬепоЬсЫогосопп. !Г сЪе ргоЪе сч!!! Ъе пьем сп ехрепгпепи счЪеге !епВсЪ Ь ппрогсапс (е.В., КХаье ргосесиоп), рип(у сЪе гайю!аЪе!ео КХА Ъу ро!уасгу!апгйе Ве! е!ессгорЪогеяь (р!еаье ьее СЪарсег 5, Ргососо! 9). ТЬе аип ос сЫь ехсга ьсер Ь со е1пшпасе сгипсасег( гас)!о!аЪе!е4 спо!еси1еь Ьопс сЬе ргерагагюп. ТО РБк!Рч кхА ВУ етнАхОГ Ркес!Р!тАт1Ох а. АсЫ 30 Н[ оГ 10 м апппопшш асесасе со сЬе ас[иеоиь рЬаье. Мгх, апс[ сЬеп агЫ 250 Н1 оГ ке-со16 есЬапо1 со сЬе сиЬе. Айег ьсогаце Гог 30 пиписеь оп ке, со11есс сЬе КХА Ьу сепсгсТицас[оп ас шахппшп ьрее<$ сог 10 пиписеь ас 4"С сп а шкгоГиВе.

ТгапьГег йе ас)иеоиь рЬаье со а ГгеьЬ гшсгоГице сиЬе, апг[ ьерагасе сЬе гайо1аЬе1ес[ КХА 6ош ипс[еягес[ япа11 КХАь апс[ гХТРь Ьу опе оГ сЬгее шесЬог[ь: Ргогого! б: 5уи!Ьеык о! 5|ад!е-ксгапбе6 К)х)А Ргойек Ьу Ги )ттсго Тгаиксг(рс|ои 9.35 Ь. Кеиюче ак ппкЬ оГ(Ье е(Ьапо1 ак рокяЫе Ьу Веп(1е акр|гаиоп, ап6!еаче 1Ье ореп гиЪе оп 1Ье ЬепсЬ Гог а Гетч пиписек го а!!отч 1Ье 1ая ЫяЫе 1гасек оГ е1Ьапо1 то ечарогате. 0ью1че 1Ье КЬ)А |и 100 р) оГ К)х)аке-Ггее Н О. с. АГЫ 2 чо1шиек оГ !се-со16 етЬаио1 го 1Ье шЪе апс1 кгоге |Ье КХА ат — 70"С пи(|1 пеебес|.

То тесочет |Ье КГГА, тгатисет ап а(|9иот ос тйе етЬапо||с ко|шюп то а ГгекЬ ш|сгосийе тиЪе. АтЫ 0 25 чо1шпе оГ | 0 м апипопштп асетате, иих, ап6 тйеп стоге тйе шЬе Гог ат |еаы! 5 иииитек ат — 20'С. Септисийе 1Ье ю1итюп ат тпахипшп крее6 Гог |О шшитек ат 4 С ш а тп|сгосисе. Кепюче (Ье етйаио| Ъу акрпатюи, аи6 йяо!че |Ье К (А |и тйе беыгебчо|итие ос |Ье арргорпате К)саке-Ггее Ъийет. ТО РОК)РУ КЫА ВУ 5РОЫ-СОШМЫ СНКОМАТОСКАРНУ а. Ргераге а 5ерЬабех С-50 крои со1шпи (р1еаке кее Арреийх 8) 1Ьа( Ьак Ьееп аигос!аче6 ш 10 тм Тгь-С1 (РН 7.5). Ь. РипГу 1Ье КЫА Ьу крип-со1шпп сЬгогпа(о8гарЬу ассогйп8 го (Ье ргогосо1 |и Аррепйх 8. с. 5(иге |Ье е1иа(е гп а гп|сгоГп8е сиЬе аг — 70"С ип61 |Ье КЬ(А Ы пеебе6.

ТО РОК!ЕУ КЫА ВУ СЕЕ ЕЕЕСТКОРНОКЕ515 а. Ргераге а пешга1 ро1уасгу1ат|6е Ве1 ассогйпВ го СЬар1ег 5, Ргогосо1 9. Ь. АгЫ 1Ье арргорпа1е Ве1-1оайп8 ЬиГГег го 1Ье атрлеоик РЬаке апт1 рипуу |Ье К)н(А Ьу Ве! е1ес1горЬогеяк. с. Ьоса1е 1Ье КЫА Ьу аигогайоВгарЬу ассогйп8 (о СЬарсег 5, Рго(осо1 11 6. РипГу 1Ье КЫА Ггот 1Ье Ве1 к!ке ияп8 1Ье спткЬ апг1 юа1с тпе(Ьос1 асеог6|п8 го СЬаргег 5, Рго1осо1 12. е.

5(оге 1Ье К)х|А ат — 70'С пи(|1 иеес1ес1. Аиу оНЬеке рипйсайоп ксйешек кЬоиЫ гегпоче >99 09ч ос иишсогрогате6 гХТРк йоги |Ье КГ(А. К(х(А РКОВЕ5 РОК 1Ы 5!ТО НУВК101ХАТ1О)х( КЫЛ ргоЬек Гог |и к|1и ЬуЬп6(ха((оп 1о гпКЬ(А ог 014А сап Ье куп1Ьек(|хе6 тчйЬ гайо|аЬе|е6 (кН, яр, ак5, тткй ог 6ег(чат(хе6 (Ыойпу|атес1, 6$8ох)8еи|п, йиогексе|и) иис|еоис1ек |и р|асе о( яр-|аЬе|е6 пис(еот|6ек. кН> 'к5-, апс! ткр-)аЬе(е6 пис|еойс1ек сап Ье ике6 |и (Ь|к рготосо|, ргочЫе6 1Ье гСТР (отти о( 1Ьеке |аЬе|ес! пис|ео(Ыек 'ь икес!.

1Г апосйег пис1еотк|е 'ь юЬкйтитес! Гог гСТР 1Ьеп 1Ье согпроытюи оГ 1Ье 5 гпм гс4ТР ко|итюп кйоиЫ Ье сЬапйе6 ассог6|п8|у. То ике а Ыот|пу|ате6 гвс|еотк|е (е.8., Ыойпу|атес$ гОТР), юЬктйите а пис|ео(Ые юЫйоп сопта|п|п8 5 тм гСТР гАТР ап6 гСТР апс$2.5 гпм гБТР Гог 1Ье пис)еойбе ко|и1юп о( 51ер 4 ап6 асЫ 1 и! оГ а 10 тттм ю)ийотт о( Ыит(тту(ате6-тпТР йт р1асе оГ |йе гайо$аЬе|е6 гс4ТР То ике а 6$8ох(8еи(тт-)аЬе)е6 (4ТР (е.8., 6|8ох(8еп)п-ОТР; Но)!(те ап6 Кекк)ег 1990), гер|асе (Ье 5 гпм гХТР юЫВоп ап6 1Ье гайо|аЬе|е6 | гЫТРчч((Ь 0.1 чо|ите о(ап гЫТР ко|ииоп сопта|п|п8 10 гпм гАТР гСТР апс! гСТР 6.5 гпм гОТР апс! 3.5 | |тм 6$8ох(8еп(п-гУТР а8 |и 25 гпм Тг|МС| (рН 8.0).

1и гйе саке о( Ьютв- ап6 6$8охуйеи(п-(аЬе(е6 г(ч(ТРк, 1Ье тпосИе6 пис1еойс$е В икет| а1 а |очч соп! септгаиоп |и 1Ье геасйои то епюге 1Ьат оп1у а Гетн |аЬе|ег$ пис|еойт|ек аге |псогрогате6 рег гпо|еси|е о(, | |ргоЬе (-1 |аЬе|е6 пис|еоит$е Гог енету 20-25 иис|еотк|ек ро|угпегаес$).

Характеристики

Список файлов книги