Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 56
Текст из файла (страница 56)
ТЬе асЫЬюп оГ ип1аЬе1ед д)ъ)ТРз [1) а1!оъчз йе иле оГ апу ачал1аЫе гайо!аЬе1ес1 д)ъ)ТР ъчЬозе согпр1етепс 1з 1пс!идед ш йе ргосгийпг 5' епд, [2) е11т[пасез сЬе роза]Ы11су оЕ ехопис1ео1уск гегпоча1 оЕ пис1еоддез Егогп сЬе 3' сегт[пиз оГ йе сегпр1асе Ьу сЬе К1епоъч епгуте'з 3'-з5' ехопис!еазе асдчиу, апс1 [3) епзигез йас а11 гайо!аЪе!ед Р)ъ)А ргодиссв ъч[11 Ье сЬе залпе 1епгсЬ. Ву сЬоояпг сЬе арргорпасе [а-злр]д)ъ)ТР, Ь !з розяЫе со !аЬе1 оп1у опе епс1 оГ а доиЫеягапдед Р)А)А пю!еси1е.
Рог ехатр1е, Р)ъ)А с1еачед Ьу Всой! ас опе епс1 апд Ьу ВанлН! ас сЬе ойег епс1 сап Ъе !аЬе1ед ве1есдь е!у Ьу 1пс!ид]пг еЬЬег [азлР]дКГР [со гайо!аЪе1 йе Есор! ясе) ог [а-злР] дбТР (со гайо!аЬе! йе ВаозН! ясе). ГигсЬеппоге, 1Е сЬе Р)ъ)А лес)иепсе оЕ а Ггагтепс со Ье епс1-!аЬе!ед [з )споъчп, йе )АС пис1еосЫе ш йе гесогшс]оп вес)иепсе оЕ сегса]п гезспссюп епгушез сап Ье ихед со 1аЬе1 опе епд оГ а РСАСА шо1еси1е ргеГегепиа11у. Рог ехаплр16, сЬС геяпсВоп епгуте НтоВ гесогпсгез сЬе зет)иепсе 5'-бА)ъ)ТС-3' апд с!еачез Ъесъчееп сЬе б апд А со узе1д а 3'-гесеззед епд. 1Г сЬе НЫГГ гесогп[сюп лес)пенсе ас йе 5' епд оГ а Р)А)А Егагтепс сз 5'- бАСТС-3' апс! ас йе 3' епд йе лес)иепсе 1з 5'-бАбТС-3', йеп йе РХА Егагтепс сап Ъе зе!есссче1у 1аЬе!ед ас йе 5' епд Ьу шс1ийпг ип1аЪе1ес1 с1АТР апд [сс-з'Р]с1бТР ш сЬе геассюп ог ас йе 3' епс1 Ьу 1пс!ийпг ип1аЬе1ед с1АТР апс1 [а-злр]дСТР ш йе геассюп.
Хитегоиз чапасюпз оп сЫз зсгагецу сап Ье изед ъч[сЬ гезсгкс[оп епгулпез зисЬ аз Рде1, Рпи4Н, Взи36!, апд ЕсоО1091. ТЬе сегпппа! пис1еосЫе оГ а Ыипс-епдед Р)А)А Егаатепс сап Ье гер!асед Ьу ехр1о[с!пг йе ъчеа16 3'-з5' ехопис!ео1уск апд зсгопг ро!утепг[па асс[чсс[ез оГ йе К1епоъч Ггарпепс. Рог ехагпр1е, 1псиЬасюп оГ 13)ъ]А Ггарпепсз ргос1исед Ъу йе геяпссюп епгуте А1и1, ъчЬлсЬ гесоцшгев йе зел)иепсе 5'-АбСТ-3' апд с1еачез Ьесъчееп сЬе б апд С, ъч[сЬ сЬе К1епоъч епгуте апд [а-злр]дбТР гели!со лп ехопис1ео!удс геточа1 оЕ сЬе дбМР апд гер1асетепс ъчссЬ йе гайо! аЪе!ес1 гиапше пис!еосЫе: 9.54 СЬаргег 9: Ргерагадоп оу йад)о!аЬе)ед Е3)ъЕА анд Я)ъЕА РгоЬес МЕТНО0 0!цест ир со 5 р8 оЕ сешр1а1е 1ЭХА ъч11Ь 1Ье с)есдгес1 гессгкссоп епсугпе )п 25 — 50 р1 оЕ ПЬе арргорсдасе гесс!де!Поп епхуше ЪиЕЕег.
ТЬе 1аЬеПп8 геасдоп гпау Ье сапсед онс нпгпейасе!у айег д18есс1п8 йе 0ХА нисЬ а гесспспоп епсугпе. ТЬеге Ь по пеед со гепюче йе геапссюп епсугпе ог со сиасссчасе сс. Весаые сЬе К!еиоъч Ега8шепс ъчог)сс ъчеП ипдег а чапесу оЕ сопйсюпс Еас!оп8 аа МП'" Ь ргесепс 1п пнПнпо!аг сопсепсгадопа), и Ь иппесеыагу со сЬаи8е Ъийегс. Ас йе епд оЕ сЬе гесспесюи геаесюп, йе К!епоъч епсугпе, ип1аЬеЬЫ дХТРс, апд йе арргорпасе )а-"Р)дХТР аге асЫед апд сЬе геаедоп Ь спсиЬасес1 Еог а Еигйег 15 пнпшес ас гоош сепсрегасиге, ав с1есспЬед Ье1оъч. ТЬе ргоеейсге ног1сс ъчеП ечеп оп ге!адче1у сгиде 0ХА ргерагасюпс Ее.8., ш1п1ргерагас1опс оЕ р1аяп1дс). То СЬе соспр1етед гестпсдоп ЙПеаС, асЫ: 10 шСйп! )а-пр)дХТР Еср, асг. 800 — 3000 С1йпшо!е) ип!аЬе!ед дХТРс К!епоъч Ега8шепс 2-50 НСс Со а 6па! сопсепггаСюп оЕ 100 НМ ! — 5 ишь 1псиЬаСе сЬе геасдоп Еог 15 ш)писес а1 гоот сешрегасиге.
Лрргохипасе1у 05 ип6 оЕ сЬе К!епоьч епсуше Ь гес1шгед Еог еасЬ р8 оЕ сепср!асе Г)ХЛ 11 Н8 оЕ а 1000-Ьр Ега8шепс Ь ес!шча!епс со -3.1 рпъо!еа оЕ сегпиш оЕ доиЫе-сьапдед 0ХА; АррепсПх 6). ТЬе К!епоьч епсупсе ъчогуь чгеП ш а1гпосс аП Ьийегс исед Еог й8есиоп Ъу гесспсдоп епсупсес. Кечегсе сгапкпрсасе Е1 — 2 ипсь) сап Ье исед !и р1асе оЕ йе К!епоъч епсупзе сп сЫя ргососо!. Ноъчечег, гечегсе сгапсспрсасе ь пос ас Еог81ч1п8 оЕ Ьибег сопйсюпа ас йе К!епоъч епсупъе аид сс сЬегеЕоге исед сЬсебу со!аЬе! рипбед 0ХА Ега8шепсс сп геассюпс еопса1пси8 сопчепдопа! гечлсе сгапсспрсасе ЬиЕЕег. ЪЧЬеп йе 1аЬе1ед 0ХА Ь со Ье мед Еог сеоиеис1п8 Ьу йе Махаю-Я!Ьегс сесЬпгВие ЕР1еасе сее СЬарсег 12, Ргососо1 71 ог Еог спаррсп8 шПХЛ Ьу йе пис1еаье 51 псесЬод Ер!енсе сее СЬарсег 7, Ргососо! 101, сЬе сопсепсгасюп оЕ 1аЬе!ед дХТР сп сЬе геасс!оп сЬоиЫ Ье 1пегеасед со сЬе Пгеасесссечд сЬас ь ргаеИеаЫе.
Айег сЬе геасиоп Ьас Ьееп аПосчед со ргоееед Еог 15 пипшес ас гааги сеспрегасиге, адд аП Еоиг ип!аЬе!ед дХТРа со а 6па! сопеепсгасюп оЕ 02 спм Еог еаеЬ дХТР, апс1 сопдпие сЬе шсиЬадоп Еог а ЕигсЬег 5 пнписес ас гааги сепсрегасше. ТЬь соЫ сЬасе епспгес йас еасЬ гесеыес1 3' сегпниис ъчиП Ье соспр1есе!у 68ес1 апд йас аП 1аЬе!ед 0ХА гпо1еси1ес ъдП Ье ехасс1у сЬе саше !еп8сЬ. 5сор Йе геасдоп Ьу Ьеасш8 К Еог 10 ш)писеа ас 75"С. РКЕРАК!!ъ!С КА01ОЕАВЕЕЕО 5!ХЕ МАККЕК5 РОК СЕЕ ЕЕЕСТКОРЯОКЕ515 ТЬВ ргососо! Пепегасес )аЬе)ед 0ХА Ега8шепсс йаС сап Ье исед аъ ые шаг!сегс дипп8 Пе1 е!ессгорЬогес!с, Весаисе СЬе Ега8шепсс аге!аЬе1ес1 !и ргорогсюп со йе!г пъо1аг сопсепсгабопс алс! пос йет сссеь, Ьой сшаП апс1 !аде Ега8шепь!и а гессг!сдоп епгуше й8ес1 Ьесоспе !аЬе1ес1 со ап ес!иа) ехсепс. ВапсЬ оЕ 0ХА йас аге соо сшаП со Ье ч!сиаПхед Ьу сьдп1п8 нчсЬ есйд!игп Ьгогп1де сап йегеЕоге Ье )осасед Ьу аисогад!оцгарЬу.
1С ь дес!гаЫе, ЬиС пог песесьагу, Со гегиоче ип!псогрогагед !адар)с)ХТР Егогп йе гадю!аЬе!ес) 0ХА ЬеЕоге Пе! е!есСгорЬогес!к ТЬе !ааир]с)ХТР сп18гасес Еассег йап ЬгопъорЬепо1 Ыие оп ЬосЬ ро!уасгу!ашЫе апс1 а8агосе ПеВ апд доес пос 1псегЕеге на11Ь йе десесдоп оЕ апусЬ!п8 Ьис йе сгпаПесс оЕ 0хА Ега8гпепь. Ноъчечег, гегпоч1п8 сЬе ип!псогрогасед гад)о!аЬе! Ьас сосне адчапса8ес; П ачо!дс йе росс1- ЫПсу оЕ сопсапнпас1п8 йе апосйс Ьидег сЬапъЬег оЕ йе е!ессгорЬогеа!с сап!с ъий гасПоасПМсу, 1с аПонь сЬе агпоипс оЕ гайо1аЬе!ес) 0ХА аррПед со йе Ве! со Ье есс1спасед Ьу а Ьапс)-Ьей пнгнгпопПог, апс1 1с гедисес йе рось!ЫПсу оЕ гадюсЬесп1еа! дата8е со сЬе 0ХА.
5ерагасе 1Ье гайо1аЬе1ед РХА Егогп ип)псогрогасед дХТР Ъу арин-со1ишп сЬгошасоПга- РЬусЬгоиПЬ 5ерЬадех С-50 ср1еасе аее Аррепйх 8) ог Ьу ьчо гоипдс оЕ ргес)р)садоп науй есЬапо! ш сЬе ргеаепсе оЕ 25 М апипошшп асесасе ср!еаяе сее Аррепйх 8). Реобоео! 10: СаЬе11щ 3' Теепбип' о1'Роио1е-кЕгапб1еб1 РХА ~3ь1пК 11бе К!епон ТгарпепЕ 9.55 -О 4 б ба а о с Е б о и о О д < Б О и "бб ба о Е м б .с о й ая о З б 'О о О й .с о -О 0 'О б 'О о б с Я о о д о % д й й а.
< Д о аа с х й б Э О Д е о х о О. 'а Е Ы ° С б о с й с ,с 'Я о о с о ,с о с -О о Я с а. 3 м и Я ба Б <.Е ДД -О и й и и с о. б и м -О и и б с о- .О Е О и а '2 "' д х 0 .с и ОХ ДД -О с д ОБ б'. Б< о Х Д Д с иб бх О' бй Ю < О -Я < ЙХ йб Д "О а с ба 'йЯб Д с б '» о -О б б и а б с о О о и 'Ю О ".Й Е- о.с б б с и б .О и о б аи й Л 1 с,— о б а 'б и б б б ба а.с „а ,д о ба ) \ о~ Е -' б > р о -О О и о б и д„ и О. < ид аа — о да о О ба о .О ». и .й б < " .а о .с р и и д Я б й с О 'Х с 'О.а О О б О 0 и с а б с,д.с ЯБ о и Д а б ".а 'Я и б х б , .с Одаб б б ал .с и .с>иа ~--О ха с б м б а— б с ййдс Х'м и й с Е х Д вЂ” о с о ид о Е ас и р баса о б о с ' б д ф.Я Ц,'= аи.с о ЯБ Ьх»йд .с — аа" с О О О2 .О д,~ и .с о .с сбЯ са а и б б —,„.а д и б д идо б 'О Я О , "ао б 'О > и о о с о.
и б 'Е ').Б .д о х с д' и д Я б ,;х и 'О до б о 0 О б а а О. »а Д б < а о о О б «б и Хб > иа их -с х б о й -Я Ж Я .Я о ~. 0 О .С И о " ба 3 О о с и о о р й. и а б а о о с .а о аа .О И и о — а 0 б д .с и Е .а о й Я и 0 .с а. о .с 0 й "О Д.а Я й о'» Е й Я б ба'О и б с аа и' д б „Х3 х б Я б -.с а о с о а.= и 'Я ои") О и я .О ий' а > о,~ -О и-а с с б о.с Д бабай < а и и х с б б .О о.д-- „о о< и б ди й а.с да а б б» .О и б б .0 Я йб.а б О Сх С 'О ' Б ) ЕД х' б ОЛ б „-О Я и д ба,б .с о.Я Е о с бах Я абай б д и.
) Е.й Од йб б Б О а а.с3 а 'и л» д Об-ОЯ ОО а Е й с О,о и а О ба а б". Π— о а и а а б — с б 'й ба 3 .а Е Я о о и о б 'с :) иб 'О б 0; б < Е о \ и б "О и б .с х .с ) ) и б и ба б с Е дх а д о— ,а,Ф о а~ 'са ба',; б .й Я „аи о б ииЕ б б 0 Х б .Я о .'Х с б с бЯ Я . о о Я Б д д,о а д3 3 Я б .Я.с б а и и о йб с о и > х о „ .ф .с б о Е 3 б .О Е б и ».
ая .О ' о с 3 о б -О С .О Д Б б б и ба ба Я с о О' и о х б аБ 7 о 0 "О б .О О О с о < 4 Я с о ай с б с 3 и ас и б .О 3 с о 0 и Е ~~ с с ~~ Д гх О о О о а х >О а б а , о 7,0 О „д и ба и с и О .О :,О б б и .а 'О о с ба о Я ба б сБ Д ба 0 Я о" и Е д о б и ба О' и .и о иа .с а а с ои .х б б .а б б и 'б ба о О Я и б и я о В о 1О и б О ба О Р, б ио б и 0,3 а б Я а 'Е о Я .бб и б Е ао б с и а ба О Е с о 2~ б б д б о и б о " .а аа о с иа и а .) ' и с». 8 а г О о о д< ал '0 и »- о < оХ и еЯ б О. Д а й с си „а й о Б — „ О а О с с »- О а 0 и о 3 и О с Е ,а с б и 0 б о о б а о и 'О .
'О хб б оа Я дЯ О бб йб ба ~Я х > о б б 'а .й а и а и. Я б а о б х ба Я Е и о 'Я с о б ба -'Я о и и > и "а.д - .О с с б -О б и со 'а с и 'с Е- б .0 б .М "о и б а о О ОЕ с б б с 'д и о и > о а Е > д,с »хо и "О О и б б' д О О 'и и б о и б 'О о -О С и и иб ~'4 'д ба О ° 'О б 'бб б о а 'а о б б б б а и и б и' ,3 с си Е ба б б Я < -к 4Д аб б с о ба а и ао о о .О б -О и ,0 бо б и б с -х б .О о и с о О .с 'у о -О ба и 0 б о Е а а б — .й о о я д .'х бб к '», б и а й. и .0 ба с Е б б м иО б Я д б о „ ба б о а о .0 и и и б о й а~ Й "с .д ~Б де о аЕ Я Д О и О .О .О и Б ба о о х )" б б, .тб .О и .с о д, й.
б р б О Е > с х 'с Е Е о - Е о,„ Е с б б б о б .Й б б 'д . о',а и а 0 а. бб '»а О бб и с б 3 с и о б х иа ба б а б О. ». б .Я и » о й' а б я .с Ь О м с ба ба Я б аЯО ба д с ЕЗ а о б о 'Я о л об о а и О б и о р оа, х < б .О с б с» б б ) а о б я о Е Е ». 3 а. б О б о б и сю ». о х о. б - И с . -О ' с»"- и б б Я и о я х С бб б .С О с йд Е' и ба х б б .е Е с б", -,0 о с до й о .с .0 и О 0 й". Х ХЕ .О а б д о б с х б б и .а и о с ос и "О а б и а а Е л 3 'Ои С и .й о о д с б Я б Е Е а о О Ей б б и О с д и о д о 03 д о о Я б с .х о о > о М х Е с о а О.
Х О .О и и х» о '-Я о о о й и О. .Й а с Е 9.56 СЬареее 9: Ргератае1оп о~Вайо!аЬе1ед й»ХА апд ЯМА РеоЬе5 о с М о О о о Е а Е О « .с» с « .О о -О « с Е «, О о с а Е а. 'О с 'I» Х О а о. о Х о В с Е с О й М .О « о 'Я м г:» < 7 7, к Х О с„. й с о с .Е о о оО ) о О:Е й О ) с с а О о с с С .с 7~ д о О о о Х о М а.
У со СО а 7 ю~ о да о ~з Ф а с а о ~) еч О» ьы с Ю Н < -О ю О ") о ОХ до д .Е с с Е с о ам г" < О о с о .) о й "О с с о с л о О о .О с с с о с й о -С О Х с .О "О с с О Е а Х д л~ О О с с с с О» о е О й Е с О с Е с О Л .) Х с о Я с сс с .а :) :О о с с о а, Х 'с» О 1 Г г.» л са О ах я с с ОХ < о~ Х « «С 'О Ой с й .а ) .) с .о О .а о о Е ой « Х < о с М с ОО о Е х Е О с 8 .С О о й .с 'О с Е х «» с. о О О гг О' « а О ой ~ Я с 'О к:" о «й с Я Ой л о с с Е .с Е Е Е ~ с о я 'У с с а Н 7 с Й Е о м л 'О с О о а.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
