Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 31
Текст из файла (страница 31)
В сап Ье апу пис!ео|Ые ехсер1 А. (В) Р!Онн сЬа|1 о! 00мТ-РСм апа!уяв нн11Ь виЬвеср|еп| сопдппа|юп о! с)16 1етепда! Теди!атюп апс! сЬагас|епга|юп о! с)!Т!егепт!а!!у ехргеввес! аепев. (Керт|птес), ннл|Ь Ретро!ввг!Оп, !тогп |д/аПЬое е1 а!. 1995.) 8.98 Оларгег 8: !и ЪНго Атр!фсаг!оп ог Р)ъ!А )лу РСЯ ехресгег! го гейке |п согпр!ехКу аь Рагън)шап ье1ес6оп ъчог1сь !гь ипП. ТЬе ыгеп8|Ь ог ье!есгюп ънП! Перепс! рагбу оп йе соп6!гюпь цье6 гог РСК, раг|1у оп |Ье беВгее ог" ьесопбагу ыгисшге |и ГЬе шКХА, апс! Пь Пе8гее ог' согпр!ешеп|ап|у Го |Ье агЬ||гагу рпшег. Ап аЬцпдапл шКХА |Ьа| |ь роог1у агпрПВес) шау Ъе цпг!еггергеьепгед 1п |Ье Ппа1 рорц1а6оп ог'сРХАь, ънЬегеаь а пипог К)ъ)А йаг !ь еП)с)епс!у ашрПВес1 шау Ьесогпе чаьбу онеггергеьеп|ей ТЬе рори1а6оп ог' агпрПВе|1 сР!ъ)Ль шау гЬегеЕоге Ъеаг 1П|1е ге!а6опьЬ!р го йе рорц1а6оп ог'шКХАь йас еп8епс!егес! ц.
ТЬ!г|1, РР-РСК !ь Ьой 1аЬог-!пгепяче апс1 ехрепяче |о реггогш. А сурка1 ьсгееп цяп8 йе ог!8!па! 1лап8 ап|1 Рагс)ее (1992) шейо|1 1пчо!неь ьея!п8 ир 1п61ч16ца! РСКь ъч)ГЬ аП роьяЫе ра)гън)ье соп|Ь|па6опь ол !6 5'-оПВопцс1еог!сне рпшегь ап|1 12 3'-оПВопцс!ео|16е ргцпегь, ънЬ!сЬ ъног1|ь ои| го 192 ьерага|е РСКь ().е., !2 х 16 = 192) )ог еасЬ |пКХА рорц!а|юп апа1ухес1. !г")цьг гъно рорц1а6опь ог шК)ъ!А аге со|праге|1, йеп йе пшпЬег ог" РСКь |1оиЫеь го 384, ап|1 япсе йе геас6опь ьЬоц16 Ье сагпе6 оцг 1п 6цр1каге ог спр!касе со епьцге гергойцс|Ь|1Пу (1лсе ап|1 Вцггоъчь 1998), йе йоса! пшпЬег ог РСКь шсгеаьеыо 768.
Весацье еасЬ РСК В апа!урнес) Ьу е1ес|горЬогеяь оп а яп8!е 1апе ол а ьег)цепс!п8 Ве!, а|!еаьг 758!апеь аге гес)ц)ге6 го апа!уае аП йе геасбопь. Л |урка1 ьесрлепс!п8 Ве1 Ьаь 40 1апеь, гпеашп8 йа| -20 Ве1ь пшы Ъе роцгей гцп, дпед, ап6 ьиЪ!ес|е6 со ацгога6!о8гарЬу |о Вепега|е |Ье ганн Пала !ог сошрапьоп. ршаПу, сЬагассепха|юп ог" а сРХА ргог!цсг йа| ехЫЪ||ь 61!гегепг!а! ехргеьяоп 1ь по япаП |аь1|. ТЬе сР!ъ)А Ьапс! шцьг Ъе е1цге6 ггош йе ьесрлепс)п8 Ве1, геашрП|лес1 Ьу РСК, ьцЬс1опес! )п|о а р1аьш)й я|Ь- !есге6 со Р!ъ!А ьег!цепс!п8, гасПо1аЪе!е6 гог цье аь а ргоЬе оп ап К 1А Ыо| го сопйпп йе циба! оЪьегча6оп ог 61йегеп6а! ехргеььюп, ап|1 ечеп|цаПу |ьо1аге6 аь а йП-!еп8й сРХА. ТЬегеайег, йе геаПу Ьагд ъног1с ог !Пепл!гу!п8 йе рЬуяо1о81са! !цпсгюп ог" йе епсос1е6 ргос!цсг Ье81пь. 1п абсП|юп го йеье сопсегпь, РР-РСК Ьаь шапу о|Ьег ргоЫешь, ьогпе ог" ънЬ)сЬ аге Палеем Ье1очг: ° Моге йап Ьа1г" ог" йе сР)ъ)Аь |Ьа| аге 16епг!Вес1 аь сИЕегеп6аПу ехргеьье6 |цгп оцг со Ъе ла1ье роя6чеь йа| саппог Ье сопйггпес) Ьу пог|Ьегп Ыоггш8 ог ь1о|-Ыо|6п8 (е.8., р1еаье ьее Ыап8 е| а1.
1993; 5а8ег е| а1. 1993; А|еПо е| а!. 1994; 1л е| а1. 1994; 5цп е| а!. 1994; !ллапь е| а1. 1994). 1| 1ь роьяЫе йа| ьогпе ол |Ьеье рЬап|огп сР!ъ!Аь гпау Ье |)епче|1 агою шКХАь йаг аге ехргеььед а| чегу 1оън 1ечеЬ ш шапцпаПап сеПь. Ноъчечег, гЬ)ь ьеешь цп1Псе!у япсе 61|Тегепг!а! сПьр1ау ьЬоъчь а ыгоп8 онегаП Ь|аь гоънагг! аЬцпг)апг ггапьсг)ргь !ВеггюП ег а1. !995). ° ТЬе раяегп ог ашрППед Ъапбь сЬап8еь ъчЬеп 61|гегепл ргерага6опь ог К!ъ)Л ог 61Вегепл ьоцгсеь ол Тглс) Р)ъ!А ро1угпегаьеь аге цье6 (Наа8 апг! Кагпап 1994; 5ошраугас е| а1. 1995; 5цп8 апг! Репшап 1997). ° Мапу гере66че ьег!цепсеь аге 1|!епг!глеб аь г!1|Уегепг)аПу ехргеьье|1 1п гпоьг ьсгеепь, апг! йеье аге ог" Пгг!е цье !п ыцду)п8 |Ье Ъю!о8у ог йе ьуяеп| а| Ьап|1.
° А| 1еаы а рог6оп ол |Ье гпК!ъ!Аь 1п |Ье гаг8ег сеПь 1ь по| ашрППе6 |о Ь18Ь )ече)ь апд )ь йць пцыей ТЬеье ргоЫеп|ь апье Ъесацье ог" Й!Тегепсеып |Ье егВс)епсу ън)ГЬ ъчЬ~сЬ а 8)чеп шК)ъ)А сегпр1а|е |ь ггапьсг!Ьел! ш|о сР)ь)А апс! |Ьегеаггег ашрПВед. 1п аг!г!!г!оп, негу ьЬог| сР!ъ)Л рго|1цсь ап|1 ъегу!оп8 сР!ъ!А ргобцсгь аге пос ънеП геьо!не6 оп йе ьес!цепс!п8 Ве1ь ап|1 аге |Ьць очег!оо)се|1. ° Мапу ог" йе Ъапбь аге |1оцЫеь ог с!оье1у ьрасе|1 ьегь ог' йгее ог гоцг Ьапс!ь ог ес!ца1 !пгепя|у.
Гш|Ьег апа1уяь ьц88еыь йаг йеье гапи!1еь ог Ъапс)ь соггеьроп6 |о йе гъно соп|р!ешепгагу ьггапбь ог йе ьа|пе !га8шепг ън)гЬ ог ън1|Ьоцг с1А, ъчЬкЬ зь адде6 Ьу Тас) ро1уп|егаье ас йе 3' епбь ог согпр!есе6 Р!ъ)А сЬа!пь. ° ЛЪоцг 259а ог" йе Ъапбь сап Ье геашрПВед ьо1е!у Ьу |Ье агЪ||гагу ргцпег ап6 пог Ъу йе апсЬогес1 ргппег ( нъге!ьЬ е| а!.
1992; Моц е| а1. 1994; МсС!еПап6 е| а!. 1995; !цгеск е| а1. 1996; Сгаг" ег а1. 1997; Сшшагаеь е| а1. 1997). ТЬеье Ьапс!ь пюы 1Псе!у аг)ье аь а сопьес)цепсе ол ашрППсабоп ог" шгегпа! ьес)иепсеь ог' |Ье Вгы-ыгапд сР!ъ!А Ьу |Ье агЬ1|гагу рпшег. Рготого! )б: РЯегептта! Р!яр!ау-РСК 8.99 ° 5отпе оЕ йе Ъапдя десессед !п РР-РСК аге детгчед Егогп тпсгопя ог Еготп я!сея Еаг гетпочед Егогп сЬе 3'-ипсгапя1асед гец!оп оЕ гпрт)ч)Ая. ТЬеяе ргоЫепь аге йоицЬс со атье !тоги аппеа!- шц оЕ йе апсЬоппц ргппег Со гец!опя оЕ йе рдтпагу СгапясПрС йат сопСа!и СгасЬ оЕ А геягдиея (Ъисе апд Виггончя 1998). ° С1огдпц апд яет)иепс!пц яЬотч йас гпапу оЕ йе Ьапдя гесочегед Егогп йе це1 сопса!и а пихсиге оЕ РЫА Егацшепся (СаИагд ес а1. 1994; Ы ес а1.
1994). ТЬ(я геяи1с яиццеяся сЬас агпр11Етсасюп Ьу агЬВгагу ргипегя гпау Ье ргогп)ясиоия (ЪЧе1яЬ ес а1. 1992) апт1 гпау цепегасе а Ъас)тцгоипд оЕ РЪ)А Егацгпепся сЬас регшеасея йе це1. 5огпе (пчеябцасогя сЬегеЕоге гесопипепт! с!оп!пц сЬе РЪ)А е1шед Егогп це! апд ясгеешпц шецчгдиа) с!опея Ьу погсЬегп, дос-Ыос, от я1ос-Ыос ЬуЪг!д!гас!оп (Са11агд ес а1. !994; Ы ес а1. 1994). РК!МЕК5 (36Е0 !!Ч 00-РСК АпсЬогег! Рг!гпег8 !п сЬе ог!ц!па! деяспрдоп оЕ сЬЬ сесЬп!т!ие (Ъ!апц апд рагдее !992), йе апсЬогет1 (апдяепяе) рпгпег (Т)„ьХУнчая т1еяцпед со Ье согпр!ептепсагу со сЬе ро1у(А) са!1 оЕ тКЪ)А апт1 йе 1аяс снчо пис1еос!дея оЕ сЬе сгапяспЬед яет)иепсе.
Х гпау йегеЕоге Ъе дС, дА, ог дС апд Утпау Ье апу опе оЕ йе Еош деохупис1еос!дея. Весатье т1Т ь пос гьет1 !п сЬе репи!сппасе роядсю, йеге аге 12 роятдЫе апсЬоппц ргипегя оЕ сЬЬ суре, еасЬ Ьатдпц а гцйегепс гцпис1еосгде ас йе 3' епд. АпсЬогед ргппегя чч!сЬ ас 1еаяс опе С геягдие цепегасе йе 1агцеяс пшпЬег оЕ агпр!т6ед Ъапдя, нчЬегеая сЬояе епд!пц !п А ог Т аге сЬе 1еаяс еЕ6степс (Мои ес а1. !994). А пшпЪег оЕ ргососо!я Ьаче Ъееп риЫгяЬет1 ш тчЬтсЬ опе ( чЧапц ес а1.
!998), Еоиг (Ь|апц апт1 Рагт1ее 1992), ог СЬгее (1лапц еС а1. 1994) апсЬогет1 апдяепяе рптегя Ьаче Ъееп тьед Еог РРРСК шясеад оЕйе ог!ц!па! 12 (Ыапц апд Рагдее !992; Ваиег ес а1. 1994). !п сЬеогу, гедисшц йе пшпЪег оЕ апсЬогед ргппегя гедисея йе пшпЬег оЕ геасдопя сЬас аге гет)шгет1 со асЬтече Еи11 сочегаце оЕ йе герегсо!ге оЕ торт!)Ая оЕ а се!1. Нотчечег, гедиссюп ш йе пшпЬег оЕ апсЬогед рг!гпегя а1яо 1еадя со ап шсгеаяе ш йе пшпЬег оЕ РР-РСК ргодись цепегасед !п йе геассюп.
Кеяо!одоп оЕ РМА Ьапдя яогпедгпея десепогасея со йе рошс тчЬеге сЬе Ьапдя саппос Ье адет)пасе!у геяо)чед. Ыапц апд Рагдее (1992) са1си!асе йат 20 агЪтсгагу десапис1еосгде 5' рПтпегя гьед тп а11 рояя!Ые ра!г-сн)яе согпЬ!пасюпя тч!сЬ 12 апсЬоппц ргипегя оЕ йе яет)иепсе (Ти, ХУ) нчои1д акр!!Еу йе 3' сегпиш оЕ 10,000 д!ЕЕегепс шКЫА ярес!ея. ТЬеяе еяйпасея аге Ъаяед оп йе аяяигпрс!оп йас гиря!)Ая аге оп!у сортед тпсо сР)ч)Ая тчЬеп йеу Еогтп регЕесс ЬуЬПдя ъч!й сЬе апсЬоппц 3' рПгпег.
Ноччечег, йеге аге ясгопц !пгцсадопя йас йе репи1сипасе 3' Ьаяе оЕ Тт,ХУ ргипегя сап пияратг тч!сЬ ап готт!)А сегпр!асе ъчВЬош цгеас1у аЕЕесдпц сЬе еЕЕтс!епсу оЕ гечегяе стапяспрдоп (Ъ(апц ес а1. 1993). ТЬеяе геяи1ь аге дергеяя!пц Ьесаияе сЬе 1ас)т оЕ яресгцсбу тп сЬе репи!шпасе роыс!оп еЕЕесс!че1у гедисея сЬе пшпЪег оЕ ачат!аЫе апсЬоппц рПтпегя. 5!псе еасЬ оЕ сЬеяе рПгпегя цепегасея Ьеьчееп 10 апд 100 геяо1чаЫе Ъапдя оп а це1 ъчЬеп ратгед нч!сЬ апу ц!чеп 5' рпптег оЕ агЬтсгагу яет!иепсе, а "сотр!есе" ецяр1ау оЕ йе 3' сегппш оЕ 10,000 торт!)Ая тчои1д гет)и!ге, ая ап аЬяо!исе гп!и!гпит, б0 гцсуегепс агЬтсгагу 5' ргипегя. Ргдпц а япц1е "ип!чегяаГ' апсЬоПпц рппсег ( чттапц ес а!.
!998) гпа1ея йе ргоЫегп енеп ъчогяе. !п сЬтя саяе, а са1си1асюп яиццеяся сЬас а пипипитп оЕ 200 агЪтсгагу 5' рпгпегя тчои!д Ье гетригет1 со оЬса!и т!есепс сочегаце оЕ йе тпИЧА рори1асюп. ТЬеяе са1си!адопя аге оп!у ча!гд тЕ еасЬ рптпег рап яагпр!ея сЬе яагпе пшпЬег оЕ шКЫАя тч!сЬ ет!иа! еЕЕтс!епсу, 1Е д!Йегепс сРЪ)Ая аге агпр1т6ед нч!сЬ ет!иа1 еЕ6степсу, апд !Е еясипасея оЕ сЬе пигпЬег оЕ тКМАя ш а еи(тагуос!с се!1 аге ассигасе. ТЬе 1аяс оЕ йеяе аяяигпрс!опя Ь яЬа)ту, чтЬеге- 8.100 Огаргег 8: 1и 'нггго Атр1фсаггоп оЕРИА ))у РСК аа гЬе Вгя гнно аге сегга)п)у ннгоп8. ТЬеоге6са! са!си!а6опа йегеЕоге гепд го очегеяипаге — регЬарь го а Вгеаг ехгепг — гЬе бергЬ оЕ сонега8е йаг сап Ъе асЫече6 Ьу РР-РСК.!п а 81чеп зсгееп, гЬе аате 6!ЕЕегеп6аПу ехргеяе6 тКХА сап аотегппек Ъе Ыепг(йеб ж)гЬ гпоге гЬап опе рптег ра(г. ТЫа сои!д Ье шгегргегед го теап йаг гЬе сочега8е оЕ йе тКХА рори1а6оп )а с1еер епоиВЬ го Вепегаге пш16р!е ЬЪ оп йе аагпе КХА пю!еси!е.
Ногнечег, гне апс) огЬегк (Веггю!1 ег а1. 1995) Впд гЬаг с!опек Ыеп6Еге6 Ъу пшрбр!е Ыя геп6 го Ье бег!че6 Егопг аЪипбапг тКХАз, аи88ея(п8 йас аЪипбапсе сап Ыиг йе а)геас1у 6иЬюиа кресгйсау оЕ ргппег ра!гя ТЬе ЬапсЬ Вепегасеб 1п РР-РСК гпау йеге1оге геЕ!есг аЬипбапсе, пис1еогЫе ьег)иепсе, ог коте ата18ат оЕ йе пчо. АгЬ!Фгагу Рг!тег5 АгЪ|ггап1у беЕгпе6 ргппел аге аг 1еаьг геп пис1еогЫеа 1п !еп8гЬ. ТЬеу хЬои16 Ье сотрозес1 оЕ ег)иа! пшпЬел оЕ АТ ап6 бС Ьаье ра!гь ап6 аЬои!6 Ье рге61сгед по! го ае1Е-аппеа! ог го Еопп агет-1оор ягисгигея АгЫггагу рптегь юЬоае 5' 6(пис!еогЫе )а бС ог Сб Вепегаге гЬе Ь!8Ьея пшпЪег оЕ агпр1!Всагюп ргобись, ап6 а б геаЫие аг гЬе 3' гегт(пиа )а а1ао аднапга8еоиа (Мои ег а1.
!994). !.обжег АгЬ!$гагу Рптег5 !.оп8ег агЬгггагу ьепае рпгпегз (25 — 28 тегь) Вгеаг1у !псгеаье гЬе гергобис!Ь!1Ку оЕ РР-РСК (ХЬао ег а1. 1995). Ноннечег, йеу а1ао г)есгеаье йе пигпЬег оЕ атр!гВе6 Ьапба бегессед Ъу Ве! е1есггорЬогек(а (2Ьао ег а1. 1998). Аь йе аписа!ш8 гетрегагиге )а !псгеаье6, йе агпп8епсу оЕ ргипег аппеа1!п8 )а а1ао шсгеазед, 1еа6(пц го тоге прес(6с ап6 гергобис)Ые агпр1г6са6оп оЕ а япа11ег аиЪьег оЕ сРХАв (Ма)Ьогга ег а1. 1998). ТЬе Ва)п (п ьресгйсау )а асЬ)ече6 Ьу гес1исш8 йе пшпЪег оЕ сРХАь е1181Ые Еог атр1гВсабоп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
