Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 28
Текст из файла (страница 28)
8.90 Сйар|ет 8: Ел У!|то Атр!фсапоп о) РНА бу РСЯ МАТЕ В! А~5 яг! МРОКТАЬ)Т То гебисе йе сЬапсе оЕ соп!апипа6оп ььы!Ь ехоеепоиь РЫАь, ргераге ап6 иье а ьрес1а! ье| оЕ геацеп|ь ап6 ьо!и6опь Еог РСК оп)у. Ва)се а!! а!аььигаге Еог 6 Ьоигь а1 150'С ап6 аи1ос!аде а11 р!ап)с|гаге. Еог пюге )п)оггпа6оп, р!еаье ьее 1Ье рапе! оп СОЬ)ТАМ! Ь)АТ!О!|1 !Ь) РСК |и йе сЬар|ег )пггодис6оп.
САЕ)ТЕОЬ$: Р!еаье ьее Аррепб!х ! 2 Еог арргориа)е Ьапд))пк оЕ тпа)ег!а)ь тпаг)сед ги!ЕЬ <1>. ВпйетВ апд Яо!п6оп9 Р!еаье ьее Аррепг))х 1 Еог соп|ропеп!ь оЕ ь)ос)с ьо!и)1опь, ЬиЕЕегь, ап|$ геаееп)ь. Опи)е ь)ос)с ьо)и6опь Ео ЕЬе арргориа!е сопсеп!гапопь. 70х Атлр)тпса6ол Ьиууег г)ЬГТР ьо)ипол 120 ты) сол)ат1л8 аП Еоиг г)ЧТРь ГрН 8.0) АЕеС) 150 л|м) Р)асел1а) КЫаье тЬ|Ь)!ог Г20 ил)ТК)рр Р1еаье ьее |Ье )пЕоппа6оп рапе! оп! Ь)Н1В)ТОК5 ОЕ К$ь)ьььып СЬар|ег 7.
Епкуьпе5 апс$ ВРЕЕет5 Арргорла1е геьтлс||ол еле)олис1еаье Р!еаье ьее 5|ер 7. Кечегье 1гальслр|аье Г)00 — 200 ил)ть)р)) Тйегтоьтай)е РЬГА ро1утегаье Таа РХА ро!уп|егаье )ыЬе ыапбаг6 ап|$ арргорпа|е епгуп|е Еог йе агпр1|Вса|юп Ыаае оЕ пюы Еоппь оЕ г)иап6|аг)че РСК. Кайоас6)те СоьпроппеЬ Еа-ь|Р г)СТР Гьр. аст. 3000 СЕ)тто1е) ат 70 тС|)т) (1> Се!5 АКатоье ог Ро)уасту)атЕг)е ее)ь (1> Р1еаье ьее 5|ерь 1 ап6 7. Мпс!е1с Ас!$Ь апс1 О1фоппс!ео6деь ЕхтеглаИу ас)с)ег) теуетелсе Ге)!Ьет ЭЬГА от КХА) оЕ )глот л солселтта0ол Гог а 6)ьсиьяоп оЕ йе беяап оЕ йЫеп|р!а|е, р!еаье ьее йе шггодисгюп |о |ЬЬ рго|осо1.
Рье а РЬ)А геЕегепсе |о шеаьиге |Ье сопсеп|га6оп оЕ РЫА ьег)иепсеь Ьу сопчеп6опа1 РСК апй ь|Ьепечег роя|Ые, ап КХА геЕегепсе |о п|еа|иге |Ье сопсеп|га|юп оЕ а гагаег КХА Ьу циап6|а||хе КТ-РСК. ТЬе Ьаяс п|е|Ьо|$ Еог |Ье сопыгис|юп оЕ геЕегепсе ВЬ)Аь Ь беьспЬе6 |и СЬар|ег 15, Рго|осо! 2.
Рог 6ега)1ь оп р!аяпЫ сопыгис6оп Еог ьуп|Ьеяь оЕ геЕегепсе КЬ)Аь, р!еаье ьее Рпбассо е| а1. 11992), 5сЬпееЬегаег е| а!. 11995), ап|1 5сЬпееЬегьег ап6 Хе)!!шьет 11996). 5елье рлтет Г20 РМ) |л Н О алс) Ал11ьелье рлглег Г20 РМ) |л Н О ЕасЬ рпшег ьЬои16 Ье 20 — 30 пис!ео|Ыеь 1п 1епВй ап6 соп|а1п арргохипа|е!у ег)иа! пшпЬегь оЕ |Ье Еош Ьаьеь, члгЬ а Ьа1апсе|1 спыпЬи|юп оЕ С ап|$ С гея|$иеь ап|$ а!оге ргорепя|у |о Еопп ыаЫе ьесопйагу ыгис|шеь, Рог Еигйег беса!!ь, р1еаье ьее Реяап оЕ 011хопис1ео|Ые Рпгпегь Еог Ваяс РСК |и йе |шгобис6оп |о |Ыь сЬар|ег. О!Еаопис1ео|16е ргипегь ьупгЬеяге6 оп ап аигошаге6 РЬ)А ьупйеягег сап Велеса!!у Ье пьем |и 9иап6|а6че РСК ьгпЬоиг |иг|Ьег рипКса|юп.
Та|8е1 лис)е|с ас)г) ТЬе гагьес сап Ье а ргерагабоп оЕ РЬ)А ог КЫА, е)йег |оса! ог ро1уГА)'. Р)ью1че ргерага|юпь оЕ |о|а! КХА а| а сопсеп|гаиоп оЕ 0 5 — 1 шайп! ап|$ ргерагаиопь оЕ ро!уГА)е КЬ)А а| а сопсеп|габоп оЕ 1Π— 100 пайп!. Раьо1че РХА |атрея ш 10 гпм Тпь-С! ГРН 7.6) а| йе Ео11оъчша сопсеп|га6опь; гпагп|па1|ап депогпк $)Ь)А, 100 идйпЬ уеая аепош)с $)$9А, 1 ицйпЬ Ьас|епа! аепош)с РЫА, О.! Рдйпе ап|$ р!аяпЫ РХА, 1 — 5 пайп!. Рготосо! 155 Стиапт!тат!че РСЯ 8.91 прес!а! Ес1сссргпеп1 Вагпег Нря 1ог аисотастс т!сгорсрессея МссгоТиВе СиЬея !0.5 пс1, СЬ)п-чгаПег) Тот атрИ1сатсоп) ог Мссготстег р)атея Роя!Ссче-т!!яр1асетепт ртреое ТЬегта1 сус)ег рго8гаттег) сч)СЬ т)ея!гет) атр1!!!сат!оп рготосоl !ТсЬе сЬеппа! сус!ет Ь пос е9шрре6 члсЬ а Ьеасет) !Ы, пяе епЬег пппега! о!! ог рата6!и счах со ргечепс счарогасюп о1!!т)п!т) !тош сЬе гсаспоп пах!иге т)пг!п8 РСК.
СЧатег Валяя, ргеяет Со 94'С апс) Со 75'С апт) 95'С !Тот тетрlате КА!А оп)у) МЕТНОО Ргерага11оп о1 1Ье 11етегепсе Тегпр!а1е 1. 1)яе йе 80Ые)спея 81чеп ш йе !псгос)пес!оп со с)ея18п апсс ргераге а геГегепсе сегпр!асе яшсаЫе Гог сЬе сай ас Ьапд. Меаяпге сЬе сопсепсгасюп о1сЬе геГегепсе сетпр!асе ая саге6с11у ая рояяЫе, ргебегаЫу Ьу йпогогпесгу (р!еаяе яее Аррепс)!х 6). А1сегпас!че!у, еясппасе йе ашоппс оу геГегепсе сеспр1асе айег Ве! е!ессгорЬогеяя апс! ейЫштп ЬгошЫе ясасшп8.
2. Ма1се а яепея оГсеп1016 сНипопя !сп Н20) сопсатшп8 сопсепсгапопя оуйе геуегепсе сешр1аСе тап8!08 Тгош 10 а Со 10 '2 м. Айег пяп8 йе й!пс!опя !п 5сер 3, йеу яЬоп16 Ье ясогет! ас — 70'С Гог пяе ш 5сер 8. 1с !я ппрогсапс со пяе Н О гасЬег сЬап ТЕ ая сЬе с61пепс со ачоЫ а1сепп8 сЬс сопсепста6оп отМ8с' тп сЬе РСК.
Ргерага1соп оЕ СОМА 3. И ясагНп8 сгогп К)х!А, с!епаспге сЬе саг8ес КХА Ъу спспЪапп8 а1!с!по!я Гог 5 ппппсея ас 75 С, 1011очтесс Ъу гарЫ сЫ1!ш8 ш ке счасет. ТЬеп, счссЬопс с)е1ау, яес пр а яепея оу гечегяе сгапясПрНоп геассюпя сопса!и!па шсгеаяп8 апюппся 01 геГегепсе сетпр!асе сп ясеп1е 0.5-гп1 ш!сго6г8е сиЪея. Рог еасЬ геассюп !п йе яеПея, ргераге сЬе 101!оса!п8: сох агпр!!6сапоп Ьпбег 2 Н! 20 тпМ яо!ппоп оссопг ЙЬГ!'Ря !РН 8.0) ! Н! 20 рм аппяепае рпгпег 2.5 и! -20 ппаа)01 р1асепса1 КЫаяе тпЫЬпог ! и! 50 гпМ МКС!а ! и! т)епасптетС саг8ес КЫА сор8Со !.оп8 100 — 200 пп!ся)п! гечегяе стапяспрсаяс си! сап!о!Й с61псюп ос тессгепсе септр!асс ! и! Н,О со 20 р! М8С1, а айат) со гпеес сЬе пает)я о! сЬе гечегае сгапяспрсаяе.
Рог апч!се оп яессш8 пр гечегяе сгапяспрсаяе геаспопя, р!саяе яее сЬе рапе1 оп КЕЧЕК5Е ТКАЫ5СКсРТА5Е5 С)5ЕО сЫ КТ-РСК !п РгоСосо1 8. 1пспЬасе сЬе геас6оп Тот 60 ппппсея ас 37 С апс! йеп т!епаспге йе гечегяе сгапяспрсаяе Ъу Ьеапп8 Со 95'С Кот 20 пппптея. АгпрИка1соп оЕ КеЕегепсе апс! Тагце1 Мис!есс АСЫ5 4. 1п стет!]е 0.5-т1 т]сгоЕпце спЪеь, агпр!]Етса6оп спЬеь, ог йе тче!15 оЕа асеп]е ткгоспег р1асе, тес цр акр]]Етсас]оп геасс]опт чч]сЬ еасЬ геасс!оп !и йе аепеа Еготи 5сер 3: 5.
1Е сЬе йепиа! сус]ег Ь пос 6пес1 сч!(Ь а Ьеасес]!Ы, очег1ау йе геассюи тЬтспгеа тчтй 1 т]гор (-50 Н!) оЕ 1тдЫ тшега! от!. ТЬ!з ргечепсс ечарога6оп оЕ сЬе затр]еа с1пг!пд гереасе6 сус1еа оЕ Ьеа6пд апд соо1!иц. А]тегпат!че!у, р]асе а Ъеай оЕ шах сито йе СОЬе ]Е пяп5 ЬоС атагС РСВ. Р1асе сЬе сиЬеа ог йе ппсго6сег р1асе !и йе йегтпа! сус!ег. 6. АгпрИу йе ппс]ек ас]сЬ пяи8 йе депаспга6оп, аппеа1шц, ап6 ро]утиепаа6оп 6гпеа апс1 сегпрегаспгеа 1]асей ш йе саЫе.
ТЬеье 6гпес аге тшсаЫе Еог 50-Н! геас6опт аяетпЫес! ш сЫп-тча!(е6 0.5-пт! снЬет апт! спсиЪасет! тп сЬегша! сус!егт спсЬ аь йе Рег)т(п-Е)шег 9600 ог 9700, Матсег Сус)ег (Ерреп6ог(), ап6 РТС 100 (М! КеьеагсЬ). Тппет апт! сешрегаспгет птау пеед то Ье адарсед со ьшс осЬег сурет о( ет(шршепс ап6 геассюп чо!ишеа А чапесу оЕ йЕЕегепс тпесЬосЬ Ьаче Ъееп иаес1 со с1есесс апс1 с!иап6Еу атр1!6ес1 ргос1псся ТЬесе тпс1ит]е ао]Ы-РЬаае аасауя апюп-ехсЬапКе Ь]КЬ-регЕогтапсе 1п!шс1 сЬготасо8гарЬу (НР1.С), ап6 Е]иогеасепсе 1аЪе]!08 оЕ атр]]Ете6 пис1ек ас!сЬ (р!еаае аее КеЬсЫ ап6 КосЬапосчв]6 1995). Ноччечег, тшсЬ гесопйсе сесЬи!с]пес аге пе!йег тчЫе!у ачат1аЫе пот асг!сс!у песесаагу.
ЕхсеПепс гесш1Ь сап Ье оЪса!иет] Ьу пе] е1ессгорЬогес(а Ео!!отчет( Ъу тоге ссапт(агс] тесЬотЬ, сисЬ аа сЬе исе оЕ Е]иогеасепс!у 1аЬе!е6 рптега с]иапйЕте6 тч](Ь ап аисотасес] Р]х]А ает]иепсег (РогсЬег ес а1. 1992), Е]поготесгу (р!еаае аее Аррепйх 9), согпрпсег апа1уяа оЕ ]тааес оЕ КеЬ асаше6 тч!(Ь есЬтйшп ЬготпЫе ог осЬег !псегса!а608 буеа (5сЬпееЬег8ег ес а1. 1995; Таа! ап6 Ю!1(Ьап]с 1996), ог гпеаапгегпепс оЕ гайоасбчпу шсогрогасес1 6пг!08 агпр]!Етсас]оп (аа Ь с]опе ш (Ь!а ргососо1). 7. Апа!ухе апт] т]иап6(асе сЬе атр1!йет] ргобпсся ЪЧне)ч с)5)нсс А кегекенссе темрсАте тнАт О(ГГек5 ГкОм тне ТАКСЕТ 5ЕС!С)Е(с(СЕ ПЧ 5!ХЕ а. Апа]уте йе яхеа оЕ сЬе акр!(Егер ргодисп !и а 20-Н! а1ирюС оЕ еасЬ оЕ йе геас6опа Ъу ае! е1ессгорЬогеяа ап6 апсогайоцгарЬу. 8.92 СЬартег 8: !и 'т'тгго Атр!т)тсат(оп оЕ ВНА Ьу РСЯ гечегте сгапссг(ртам геассюп (5сер 3) ог шгцес )ОС(А 20 нМ тепте ргипег 20 НМ ап6тепье рпптег СОх атпр!(КсаСтоп Ьис(ег (аатр]т(СТР (5000 СУпппо1е) 20 АМ со)нфоп ос (оиг дХТРа Тат) ЕтХА ро!ушегате Нто А (МРОКТАНТ Оо пот ге6все йе (псгеаае СЬе арес(((с асбиту о( СЬе пнс!еосЫе соо!6 Ьесогпе Ктп(6пд ас Ое1ес1соп апс! Яиап1(Ека1соп оЕ РСсс Ргодис15 5 н! (.5 н! !.25 н! 5н! СО нС( с н! 2 нпЪ Со 50 Н! сопсепсга6оп о( оп(аЬе!е6 г!СТР )и (Ье геассюп гп(хсоге со ргесогаог роо!.
ТЬеге Ь а 6апдег сЬас сЬе агпоипс о( (Ье (асе аса8еа сп сЬе агар!(Йсасюп геассюп. Ргогосо) 15: Оиапг(гассане РСК 8.93 Ь. Ехс(хе сЬе ашр11Елед Ьапбх оЕ сЬе соисго1 сешр1асе апд сагцес лес)иеисех Егош йе це!, аи6 плеаяие йе агиоипс оЕ гасцоасспцсу ш еасЬ Ьапс) (и а 11с)и!6 хс(ис!!1асюп соиисег. А)сегиас(че!у, хсаи йе це1 сч!ГЬ йе арргорг(асе с1есессог (е.ц., АшЬ~х хсапиег ог РЬозРЬопгпацег). с. Са1си1асе сЬе ге!а!!че аиюииь оЕ йе ссчо гасцо!аЬе!е6 РХАх ш еасЬ оЕ сЬе РСКя КеолегпЬег со соггесс йе апюипс оЕ гайоас6ч!су со а!1олч Гог йГГегепсев ш сЬе пю!оси!аг чге)5Ьсч оГ сЬе слчо гайо1аЬе!есс РИАя ЧГНЕЬС С)5!)ч)С А КЕЕЕКЕ)ч)СЕ ТЕМРСАТЕ ТНАТ СО)ч)ТАКч)5 А ЫОЧЕЕ КЕ5ТК)СТ!О)ч) 5!ТЕ ОК ГАСК5 А ~ЧАТС)КАШ ОССС)КК!Сч)С 5!ТЕ а. Неас йе хагпр1ез со 94'С Гог 5 ш)чисел Ео!!омчпц йе 6иа! гоип6 оЕ ашр!л6сабои.
Ь. А)!олч йе хашр1ех со соо1 цгабиа1!у со гоогп сегпрегасиге аис! йеп йцехс а 20-)с! а1(с!иос оЕ еасЬ оЕ сЬе геасс(опх чччсЬ сЬе арргорпасе гехсг!сс!оп епгугпе. с. Аиа1уге йе ягех оЕ сЬе акр!!6е6 РМА Егацгпеиь Ьу це! е1ессгорЬогеях апд аисога6)оцгарЬу. д. Ехсье сЬе агпр1л6ес1 Ьаибх оЕ йе соисго1 сешр!асе апд сагцес лес)попоете Егош сЬе це!, ап6 гпеахиге сЬе апюиис оЕ гайоасбчиу 1и еасЬ Ьапб !и а 1щи)6 хс(ис!11ас!ои соипсег.
АЬегиа6че!у, хсап сЬе це1 ъчсЬ йе арргорпасе с1есессог (е.ц, АшЪ|а асапиег ог РЬоарЬогииацег). е. Са1си1асе йе ге1а6че агпоиисх оЕ йе пчо гасцо1аЬе!е6 РЯАх !и еасЬ оЕ сЬе РСКя КегпелпЪег со соггесс сЬе аплоипс оГ гайоассп4су со а!1огч Гог 61ГГегепсеч лп сЬе гпо!еси1аг гче)5Ьь оГ сЬе ьчо гайо1аЪе1е6 РМАя ТЬе аип оЕ сЫч депасигасюп ап6 геаппеа1!пц чсер ь со ацок ейксепс Гоппасюп оГ Ьесегодир!ехеа сопяабпц оГ опе асгапс$ оГ геГегепсе сеплр1асе апд опе чсгапс$ оГ сагцес чечиепсе. ЪЧЬеп есрла! сопсепсгас!опч оГ сЬе ичо сешр1асеч аге ргечепс лп сЬе ог)5)па! геассюп пах!иге, сЬе геаппеа1ед ргобись ъч11 сопяя оГ 509ч Ьесегобир1ехеч ап6 25чй оГ еасЬ суре оГ Ьопюдир1ех.
Оп!у опе оГ сЬе ьчо сурел оГ Ьошодир!ехел лч)11 Ье яьсер6Ые со йцелс!оп чгссЬ сЬе арргорпасе геасгкссоп епгупле. ТЬия ъчЬеп сЬе агор1л6е6 ргобиссч сопл)чс оЕ ечиа) 9иап6- 6еа оЕ сагцес апс! гегегепсе селпр!алея опе с!иагсег оГ сЬе геаппеа!есс шо!еси!еч ъчс!1 Ье лия сер6Ые со с1еачаце Ьу а геаспс6оп епгугпе. ЖЬкЬ оЕ сЬе пчо !урез оГ Ьошойлр!ехеа сч)11 Ье яьсер6Ые со Йеачаце 6ерепда оп чгЬесЬег сЬе геГегепсе сегпр!асе сагг!ел ап ехсга геяпсиоо сЬе ог! ас)ь а ясе сЬас )ч ргелепс лп сЬе сагцес чечиепсе, Несегодир)ех Гоппа6оп )ч Гаг 1еь еГЕслепс счЬеп сЬе сагцес апд гесегепсе сешр!асеч йГГег яцп)йсапс!у лп яге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
