Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 25
Текст из файла (страница 25)
МЕТНО0 1. 1п а сЬ!и-сча!!ет! атпрййсасюп сиЬе, атЫ аит! пих ш сЬе Ео!!оийпа оп!ег: 10х 1опй РСК ЬиЕЕег 5 н) 20 шм ао1ипоп о( Гош т(ХТРа 5 и! 20 шм Еогиягт( рпшег ! Н! 20 тпм тачаете рпшег !и) сЬеггпоасаЫе РЫА ро1упсегаае пих 0.2 и( Сетпр1ате РЕСА !00 рй Со 2 ий Н,О Со 50 и! Тептр1асеа рипйей Егопс !пгйт Ыиа! гесошЬтпапс с!опеа сопягиссей тп ЪассегюрЬайе Х, сояпЫ, Ьассег!орЬайе Р1, РАС, апт( ВАС чессога аЬои1о Ье ыей ш апюипь гапй!пй Еготп !00 рй со 500 п8.
Еагйег апюипса оЕ соса! Вепопис РХАа аге гойи!гей, ыиа11у Ъепчееп 100 пй аптс 1 ий рег геассюп. 1п 1оп8 РСК, !Веге Ь!Ьс!е йехт!и!Ьу (п сЬе агпоипс оЕ сегпр!асс ыей ш сЬе геассюп. Тоо 1пс!е аптс по рготсисс Ь т)есессаЫес соо пшсЬ апт1 сЬе 1оы оЕ арестйспу сап Ъе т1гагпаис. ТЬе орйптшп атпоипс оЕ септр1асе апй сЬе орйпшпс гас!о оЕ рпгпегясешрсасе аЬоиЫ Ъе аасепашесс егпр)пса1!у Еог еасЬ пете ргерагайоп оГ РЬСА. 2. 1Г сЬе сЬеппа1 сус!ег !х пот йпес! тч!сЬ а Ьеасет(!Ы, очег)ау сЬе геассюи пихсигех сч!(Ь 1 с1гор (-50 Сс!) оГ 1!ВЬс пипега1 ос!. А!сегпас!че!у, р1асе а Ьеас1 оЕ рагауйи счах шсо сЬе сиЪе (Е ияпа а Ьос хсагс РСК. Р1асе сйе сиЪех ог сЬе ш!сгос(сег р!асе ш сЬе сЬепиа! сус!ег.
Ашр!!Еу сЬе пис1ек аспЬ ияиа сЬе депасигасюп, аппеа1!па, апс1 ро1утпепгасюп сииех апс1 сешрегасигех !тагес! ш сЬе саЫе. Сус!е Ь)ишЪег Аппеа!!и Ро! утпепгасюп Репашгасюп 1 пип а!94 С 1 пип ас 60 — 67'С 5 — 20 пип ас 68'С 24 сус1еа ТЬеае сипеа аге ашсаЫе Еог 50чй геасйопа амегпЫей ш сЫп-тча1!ет) 0.5-тп( сиЪеа апт( шсиЬасес1 тп сйегпса! сус!ега хисЬ ах сйе РегЫп-Е1тпег 9600 ог 9700, Маасег Сус!ег (Еррепт)оту), апй РТС 100 (М) КеаеагсЬ). Тппеа апт( сешрегасигеа шау пеей со Ъе ат)ар!ее( со ашс осЬег сурет оЕ ейи!Ршепс апт) геасйап чо1шпеа. 8 80 СЬаргег 8г Еп Рупа Агар!фсаг!оп оу ОНА Ьу РСРс ТЬе сепг регагнге наес) Еог 1Ье аппеа1)п8 згер г)ерепг)з оп сЬе пге!Впд гепгрегагше о! 1Ье о1)анонс!еосЫе рпгпегз.
Весаые йе рппгел нзег) гп 1опа РСК аге 8епегаНу 27-30 пнс1еос)г)ез Еп 1епа11Ь сЬе аппеаппц гешрегасигез нзег) ш 1опа РСК сап Ье сопзЫегаЫу ЫцЬег сЬап йоге нзег) 1и агапе)агг) РСК. Ро!угпегыапоп зЬон!д Ье саге!ег) он! Еог ! пппн1е Еог ечегу ! 000 Ьр оЕ !еп81Ь оЕ 1Ье гагае1 ЕгМА. Роогг) апг) Козе 11994) гесопипепг) )псгеаяпа 1Ье ро1ушепгагюп 1!гпе Ьу 30 аесопг)з ги еасЬ сус1е оЕ РСР. 1!о мечег, !и ош Ьапея ехсепяоп оЕ 1Ье ро1ушепгасюп 1ппе Ьаз пог )ег) го апу пиргочегпепсз ги зрес)йспу ог уге1й 3. 1Е пипега1 о11 гааз изес1 со очег1ау йе геассюп 151ер 2), гегпоче 1Ье о!1 Его!и йе загпр!е Ьу ехггасгюп М1Ь ! 50 р1 оЕ сЬ!огоуогпг. ТЬе аг)неона РЬаае, гчЫсЬ сопсаша 1Ье ашр11Егег) Р14А, ч8!1 Еоггп а гпсее1!е пеаг йе шепЬснз.
ТЬе пэсее11е сап Ье ггапзЕеггег) го а 6езЬ снЬе них ап аогопгапс шгсгоргрепе. А !МРОКТАМТ Оо пос апегпр1 сЫогоЕоггп ехсгас6опз !и гп)сгобсег р!а1ез, ТЬе р!асс изег! )и 1Ьезе р!а1ез )з по1 гез!з1ап1 1о ог8апгс зо!чеи1з. 4. Апа!ухе ап а1!с)иос оЕ 1Ье аг)иеоиз рЬазе Ъу е!ессгорЬогеяз 1Ьгои8Ь ап а8агозе Ве! ияпа гпаг1сегз оЕ ап арргорпаге з!ге. 1п спапу сазез, йе агпоипг оЕ агпр116ес) ргог!исг гпау Ье соо япа11 1о Ье с1есессег1 Ьу сопчепс!опа! зсасп)п8 мп1Ь ей)с!1игп Ьгогп)с)е. 1п йы сазе, зсагп 1Ье 1)ХА ш йе Ве! чч)й 5 г'Вгс бо!д ог ггапзуег со а пу!оп ог п!1госе11и1озе 611ег апс1 ргоЬе Ъу Воийегп ЬуЬг)йгагюп (р!еазе зее СЬарсег 6, Ргососо! 10). АЬЬои8Ь 1опа РСК Ь гпоге г)ешапйп8 йап агапе)агг) РСК, Ь дога пос г)1ЕЕег )п апу еззепг)а) рппсгр1е.
ТЬе ргоЫешз ч4Й 1опа РСК апг) зсапг)агг) РСК аге япп1аг апд а!гпозг аЬчауз гпчо1че зресгВспу апг) уге!й !п сЬе чазс гпа)опсу о! сазез, сЬезе сап Ъе зо)че8 Ъу сагеун1 орпгпыапоп о! аП РЬааез оЕ 1Ье геасиоп ЕР1еазе зее ТаЫез 3-4 агк1 8-5 ш Ргососо! 1). Рго1осо~ 14 ! пчегье РСК тляэлю Рск лмринтя яысмнчтя от Р!чл гЬаг 1!е Ьегячееп гччо !пячагс)-ро!пг!п8 ргипегя. Ву сопсгаяг, шчегяе (а!яо 1споччп ая !пчегге6 ог !пяЫе-оиг) РСК !я ияе6 го ашрИу апг) с1опе ип)споччп РХА гЬаг Вап)гя опе епс) ог а )споячп РЬ)А яеииепсе апс) гог гчЫсЬ по ргипегя аге ача!1аЫе. ТЬе СесЬп)иие, с1ече1орег! шс1ерепс1епГ1у Ьу яечега) Вгоиря (О<Ьшап ех а1.
1988; Т681!а еГ а1. 1988; 8!)чег апг) Кеег))саие 1989), !пчо)чея с68еяхюп Ьу а геяГПсхюп епхуше оЕ а ргерагагюп ог" РЬ)А сои!а!и!п8 йе )споячп яециепсе апд Кя ВапЫп8 ге8!оп (р1еаяе яее Р!Вите 8-7). ТЬе шсбчЫиа1 геяибс6оп )га8шепгя (шапу гЬоияапс)я !п йе саяе ог" гога1 гпагпгпабап Вепопис РЬ)А) аге сопчеггег) шго с)гс1ея Ьу )пггашо!еси1аг 1!Ваг!оп, апг) йе с!гси!аПхес1 РЬ)А )я йеп ияег! ая а Сегпр!ахе 1п РСК.
ТЬе ип1споячп яециепсе гя ашр66ес1 Ьу Гччо ргипегя ГЬаг Ъ!пг) ярес!6са11у Го ГЬе )споячп яе9иепсе апг) ро)пг 1п орроя!ге Йгесгюпя. ТЬе ргодисг ог' йе агпр!!6са6оп геас6оп гя а 1!пеаг РХА !га8шепг сопгаш)п8 а я!п81е гбге Еог йе геягпсгюп епгугпе ог!8!па1! у ияег) го ЙВеяг йе РХА. ТЬ!я я!ге гпаг1ся гЬе )ипсг!оп Ьегячееп йе ргечюия1у с1опед яес)иепсе ап6 йе йапЫп8 яес)иепсея. ТЬе ябге ог" йе ашр!16ед )га8шепс г)ерепс)я оп йе сбягПЬи6оп оЕ геягпсгюп я!гея чч)гЫп 1споячп апс1 ВапЫп8 РХА яег)иепсея.
Ву яег6п8 ир геас6опя гч!гЬ сешр1аге РХА йаг Ьая Ьееп с!еачег) Ъу Йбегепс геяггкг!оп епгугпея, ая шисЬ ая 4 )сЬ ог" ВапЫп8 РЬ)А сап Ъе гесочеге6 Ьу !пчегяе РСК ()опея апс) 'ччш!яхогуег 1993). Бой ирягеагп апс) г)оччпяггеаш ЯапЫп8 ге8юпя сап Ье оЬга!пег! )п а гбп81е !пчегяе РСК Ьу ия!п8 а геягг)сг!оп епхугпе гЬаг с)оея по! с!еаче чч!гЬ~п гЬе 1спогчп РЫА яеииепсе. 1пчегяе РСК Ьая Ьееп ияей сЬ!ейу го Вепегасе епг)-ярес!6с ргоЬея Гог сЬгопюяоше чча! Ып8 (багха ех а1. 1989; 3!1чегшап ег а!. 1989; 8!1чегшап 1993, 199б), Го с!опе ипЫгоячп сР!4А яециепсея гхош Го!а! КХА (Ниап8 еГ а1 1990, 1993), апй Го гесочег шхе8га6оп гбхея ияег) Ъу Ыгияея, ггапя8епея, апс1 ггапярояопя (ОсЬгпап ег а1.
1988, 1990, 1993; Тг!81)а ех а1. 1988; 3!1чег апс1 Кеег!)сагхе 1989). Нотчечег, !пчегяе РСК геша)пя опе ог йе пюге ргоЫешаг!с ГесЬп!ииея ш гпо1- еси!аг с1ошп8 апг! яиссеяя 1я пог Виагапгеей Весаияе гЬе шегЬой ччог)ся Ъеяг яч!гЬ РХА гешр!атея ячЬояе яег)иепсе сошр1ехЬу гя <10я Ьр, К гя ип6)се!у гЬаг шчегяе РСК яч111 ячог)с ччЬеп соса! шашша!)ап Вепопис РХА !я ияес1 ая а гешр!аге.
То )псгеаяе йе сЬапсе оГ яиссеяя, Вепошк РЬ)А сап Ъе Егасг!опасен ассогсбп8 го гбхе айег Й8еяг)оп яч)гЬ а геяпбс6оп епхугпе, ог Вепопис РЬ)А 11ЪгаПея сап Ъе яиЬи)ч)йеи !пго а!1ииогя ччЬояе яеииепсе согпр!еигу 1я <10я Ьр. ТЬе ияе ог" пеягес) яегя ог" ргипегя 1п яециепг!а! геасгюпя сап а!яо Ье1р (Та)са8! ег а!. 1992).
ТЬе гоПочч!п8 ргососо1, ап агпа18аш ог' яечега! героггей ш йе !Бега!иге, ячая ргоч61ег1 Ьу Репи)я МсКеаг)п (Уп)чегя!гу ог" Техая ЯоигЬячеягегп Мейса! Сепгег, Ра1!ая). 8.8! 8.82 СЬаргег 8г 1п Тг!гго Агар!гбсаг!оп б1 1)ИА Ьу РСЯ гепюо оГ Кпоап пес!еоИбе веоиепсе геввпсбоп есауле веГ ир ПаеГюп гевсбопв вв!ГК !овг сопсепвгввюпв оГ ОГ7А го еосоигвре с)гон!вг!гвГ)оп О | вгпрЫу !и в гесс!юп сопгв!и!пд ва с~гсс!вгаеб ОПА вовс~ее Рс В ргобисг ргвпег А рппгег В рпгпег В Е1С0!ТЕ 8-7 8сЬегпа6с 71е гевеп1а6оп о1 !пуегве РС)1 !пуегве РСК )в ивед 1о агпрйу ОНА о1 ипКпогуп вециепсе (гуаг)г вЬагйп8) 1Ьаг 'ь аб)асеп11о Кпоууп 0МА вег)иепсе 7778Ь1 вЬаг7)п8). Сепопис 0)бА )в б)цевгеб ъч)Ь ап епкупге 1Ьаг ргобисев а 1гаагпепг 1агпопа о)Ьега) саггу)п8 )Ье Кповуп 0)бА, ав бегептнпес! Ьу Бои)Ьегп Ыо)1)п8. ТЬе 0Ь)А 1га8пгепгв аге с)гси)аг)аев Ьу )гда6оп, апд врес)1)с вег)иепсе рг)гпегв, дев)8пеб 1о ех)епб ои)вуагд )гогп гЬе Кпогуп вег)иепсе, аге ивеб го агпрП)у ипКпомгп вег)иепсев ад)асепг 1о)Ье ге8)оп о1 Кпоип вег)иепсе.
МАТЕгх!А15 А!МРО)1ТА)к)Т То гебисе 1Ье сЬапсе о1 соп1апппа6оп илгЬ ехо8епоив 0Ь)Ав, ргераге апб иве а прес)а! вег о! геа8еп1в апб во!и1гопв )ог РСП оп)у, ВаКе аП 8)аввгеаге 1ог 6 Ьоигв аг 151) С апд аигос)ане аП р)авг)скуаге, Рог пгоге )п)оггпаг)оп, р)еаве вес 1Ье рапе! оп СОЬ)ТАМ!А)АТ1ОЬ) 1Ь) РСВ )и 1Ье сЬар1ег )пггодисг)оп. СА1)Т!Ойг Р!еаве вее Аррепг!!х 12 1ог арргорпа1е Ьапг!!!па оЕ пга1егга!в гпагЬег! иг!1Ь <! >.
Войегь агтд Ьо!66ооВ Р!еаве бее Аррепг)!х 1 1ог согпропеп1в о1 в1осЬ во!и6опв, Ьийегв, апг! геадеп1в. О!!и1е в1осЬ во)и6опв 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1га6опв. 70х Агпр)госасгоп Ьийег АТР )'70 гпАГ) 8.84 СЬартег 8: Еп И!го Атр1 фоат)оп оу РНА Ьу РСК МЕТНО0 Реь)ип апг1 ьупсЬеь)ке 01)яопис1еос)де рпгпегь 1 апд 2 Ьаьед оп йе Ьюъчп ьег)иепсе оЕ РЛ)А. Р)8еьс 2-5 )тц оЕ РЛ)А сепср!асе (ьеъ)иепсе сотпр1ехЬу <109 Ьр) ъчссЬ ап арргорпасе геьспс6оп епхуше (р1еаье ьее посе Ье1оьч).
Ехсгасс сЬе д)аеьсед РХА ъч)сЬ рЬепоЬсЫогоЕопп, апг1 сЬеп ъч!ЕЬ сЫогоЕопп а1опе. Ргес)рпасе сЬе РХА ндсЬ 0.1 чо1шпе оЕ 3 м ьод)игп асесасе апг1 2.5 чо1шпеь оЕ ейапо1. Кесочег сЬе ргес)рЬаСед РЛ)А Ьу сепспйцасюп апг) д!ььо1че тс 1п ТЕ (рН 8.0) ас а сопсепсгасюп оЕ 100 )сц)гп1. А1сегна6че!у, Ьеас сЬе й8еяед ттЛА со б5'с Еог !5 — 20 пиписеь со !пасссчасе сЬе геяг!с6ол ен туше. 5ошЬегп ЬуЬгсд!аа6оп ЕСЬарсег б, Ргососо! 10) гпау Ье ыед со !денс!Еу а геьспсиоп еигуше сЬас 8епегасеь а Ега8шепс оЕ йе арргорпасе яге ! ! — 4 КЫ. ЧЧЬегечег роьяЫе, сЬооье ап еикуше сЬас у!е!дь согпр!егиепсагу соЬеьсче сепп!ш. Т1иь сЬо1се !псгеаьеь сЬе еЕбсгепсу оЕ с!гси1апааиоп оЕ сЬе сегир!асе ЕЗЛ)А дипп8 !т8а6оп.
Еиаугпеь йас 8епегасе Ынпс еидь саи Ье ньед аь а !аьс геьогс. 1п йть саье, Ьоъчечег, ро!уейу1епе 8!усо1 ьЬои1д Ье аддед со сЬе !18асюп ЬиЕЕег 1р!еаье ьее СЬарсег с, Ргососо! 19 апд йе ъпЕопиабон ране! оп РОсь'ЕТН ъ'сЕЫЕ С!УСОЕ ги СЬарсег ! ) со рготпосе с!гси)аг!тат!оп. 1п ьсеп1е 05-т! гп)сгоЕияе сиЬеь, акр!!Есасюп шЬеь, ог сЬе ъче!18 оЕ а ьсеп1е писго6сег р!асе, ьес ир а ьепеь оЕ 118ас!оп геассюпь сои!а)п)п8 с1еачед сетр1асе РЛ)А ас сопсепсгасюпь гап8- !08 Еготп 0.1 Со 1 )с8йп1. !егор!аге ЕтЪСА 10 и8 Со 100 п8 сох !!8ас!оп ЪнЕЕег 10 и! 1 ни!С)и! ЬастепорЬа8е Т4 1314А 1!8аье 4 и! !О птм АТР 10 и! Н,О Со 100 и! 1псиЬасе йе геассюпь Еог 12-16 Ьоигь ас 16'С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
