Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 22
Текст из файла (страница 22)
Тат((у о( албьелье о)(полис!ел((с(е рлтегь Г70 ПМ) т ТЕ (рН 8. О) Одопис!еогЫе рлпгегь ьупгЬеягег1 оп ап ашогпагеа 0ХА ьупгЬеь!гег сап депегаПу Ье иьег) гп агапе(агг) КТ-РСК и)гЬоиг ЕилЬег рипбсагюп. Ночгечег, апгрП6сагюп оЕ 1оъч-аЬипс(апсе гпКХАь Ь ойеп гпоге еубсгепг гЕ гЬе оППопис1еогЫе рпгпегь аге рипбег1 Ъу сЬготаго5гарЬу оп сопипегсгаПу ачаг1аЪ(е геяпь (е.В., ХЕХ5ОКВ, ХЕХ !6(е 5с(епсе Ргодиси) ог Ьу г(епагиг(п5 ро!уасгу)агоЫе Ке) е!есггорЬогеяь, аь деьсг(Ьег( гп СЬаргег 10, Ргогосо) 1. Рог дегааь оп ЕЬе иье оЕ рлтегь сап!а(п(п5 1пояпе, р!еаье ьее гЬе !п(оста!!оп рапе1 оп Г) 56 ОР 1ХО51ХЕ 1Х 0ЕОЕХЕКАТЕ РОО15 ОР ОПООХОСсЕОТ!0Е5 Г)560 РОК РСК.
Тат((у о(ьелье о1(долис!ео(!с(е рбтегь (70 )гМ) т ТЕ ГрН 8.0) прес!а! ЕГЕоьрьпепЕ Ваглег Ьрь Гог аи(отаг)с гл(сгоргре((еь М(его(иее (иЬеь Г0.5 т(, (Ь(л-ччапег( Гог атрйка((ол) ог М(его(((ег р(а(еь Роьг((че-с((ьр!асетел( р(ре((е ТЬегта! сус(ег ргоегаттесЕ чггГЬ с(еь(гес( атр66сабол рго(осо( 1Е йе йеггпа( сус1ег Ь пог ег)и!Ррег) и!гЬ а ЬеагегГ 1Ы, ые еКЬег пнпега! ог! ог рагаЕ6п иах го ргечепг ечарогагюп оЕ)гпиЫ Ггогп гЬе геасиоп пах!иге г)иг(п5 РСК. АГЫЕЕЕопа! КеацепЬ 5(ер 4 оЕ ГИгь ргогосо( гес(и(геь !Ье герело !(ь(ес( и СЬаргег 5, Ргогосо) 2, алс( СЬар(ег 72, Ргогосо( 6. МЕТНО0 |пЬе, ог йе |че11 ог" а агег(!е пнсгойег р!а|е, 5ег нр аечега) сои|го! геасНопя 1п опе геас6оп, !пс1нс(е а11 ог' йе аЪоче согпропепгя ехсерг |Ье гегпр!аге Р)ч(А.
1п г|чо ойег геасйопя шс1нг(е а11 йе согпропепь ш(пни опе ог йе ойег ог" йе 0118опнс1еогЫе рПгпегя ТЬеье сон|го)а аЬо|ч |чЬегЬег ашр66ес) $)НАв аде |гош а а(и6)е ргннег, (и(огшаг(ои |Ьа| Ь гешаг1|аЫу ые6|! $(йе |$еяге|$ рго|Ьгс| Ь ио| г(е|ес|е|$ аи|$ иегч (ашП(еа о( |)еаеисгаге рг)шест аге ге|)шге|$ (Вегиаасои( ег а!. $989). 2. !г' |Ье йеппа! сус1ег 15 иог Вяе|$ ми(Ь а Ьеаге|$1Ы, очег1ау йе геас6оп пбх|нгеа чч!(Ь 1 |1гор (-50 $$1) ог" 118Ь| пнпега! о|1. А1|егпаНче!у, р1асе а Ьеа|$ ог" рагайш гчах шго |Ье |нЪе (г" на!08 а Ьо| агагг рго|осо!. Р1асе йе гнЬеа ог йе писгоН|ег р!аге ш йе (Ьегша1 сус1ег. 3. Ашр)(гу |Ье пнс1е|с асЫВ няп8 йе |$епа|пгабоп, аппеа1!06, апс1 ро1уп|ег|ха|юп г(шеа апс1 гешрега|шеа 1(агег$ ш йе гаЫе.
юи ТЬеае Пшеь аге гннаЫе (ог 50-01 геас6оив аяе|пЫед ш |Ь(и-|чаПег(0.5-и|! гнЬеа аис! шснЬа|е|$ (и |Ьеииа1 сус)его ансЬ аа |Ье Рег)ни-Е)шег 9600 ог 9700, Маагег Сус1ег (Ерреис(огг), аи|$ РТС $00 (М! КеьеагсЬ). Т)шеа аи|$ гешрегагнгеа и|ау инес( |о Ъе а|)аргег) |о ан(г о|Ьег гуре| ог" егрнргиеи| аиг! геас|юи чо1шиея ТЬе а|ир66са6ои соигП|юиь ПеасНЬег! аЬоче аге Ьааег) ои 32-гиешЬег |)еаеиегаге (аинПеь о( о)(ионне)еог(г(е рг)шага |Ьа| аге $7 — 20 Ъааеь (и !еиагЬ. Н(ЕЬег аииеаПиа аи|$ ро!угиегыагюи геи|- регагнгез саи Ье шее |ч)|Ь )оиЕег аи|$)ог )ея сошр!ех пихгнгез о(оПцоинс1еоПдея Ногчечег, )г" гоо и|аиу ан|РП6саиои рго|)псгз аге оЪ|а$ией ог 6 ио арес(6с ргоднсп аге |уи|Ьеягей ор|ниши аииеаПи6 аи|$ ро)ушег)гаг)ои |егирега|нгея аь неП аь сус!е ишиЬег анс( (ои(с соис)г(оия аЬон!г( Ъе г(егегш)ие|$ (и а аеНе| о( ге|| геасгюия ТЬс урсс(6с)гу о( МОРЛС саи Ъс (исгсаас|$0) Ъу на)иа а гЬсгша! сус)сг ргоагаш |Ьа| )ис)н|(сз а геи|регашге гашр)нЕ рго|осо! ()Со!ог))ни е| а!.
$993), ($|) Ьу на)иа гонсЬг(о|хи РСК (Рои ег а1. $99$; р!еаае зее йе ш(опиаПои раис! ои ТО()СНОО)й)Ь) РСК), ог (ш) Ъу (исогрогаг(нЕ сою)- чеип шго йе агир66са|юи геасПоия 4. 'ч)г(ГЬс(гагч а аашр1е (5 — 10 р!) ггош ГЬе Геаг геас|юп |шх|нге апг$ йе соп|го1 геас(юпь апс1 аиа1ухе йеш Ьу е1есггорЬогеяа (ЬгондЬ а пен|га1 ро1уасгу!ап|Ые це1. Ве |юге |о шс1н|$е РЬ)А шаг)сего ог" ап арргорПа|е яке. 5(а(п йе Ве! чч(ГЬ ей|йшп ЪгошЫе ог 5 г'ВК 0016 |о ч(ана1!хе |Ье РЬ)А.
А ьоссеы(н! агар!|6саПои геаспои аЬон)г) у(е6$ а геагП!у тяЫе $)ХА (гаашеиг о(йе ехресге|$ яке, ТЬе |Венйу о( |Ье Ьаис( саи Ье сои6гше|$ Ьу $5Ь(А ае|)аеас)иа (р)еаае аее СЬар|ег $2, Рго|осо1 $)). $( йе Ьаи|$ о( |игегея Ь ои)у оие ог а ишиЬег о( агир66е6 угаЕшеигя р)еаае аее йе ране! ои ВАНО-ЯТАВ РСК. 8.70 СЬаргег 8| гн $7(гто Атр!фсаг(он оу РНА Ьу РС|с 1. 1и а агег(1е 05-ш1 пнсгойбе |нЬе, ашр1|6сагюп пнх ш йе (о11о|чш8 огс(ег: 0.5 Иа о(|егор!а|е РХА $0х ашр66са|юи Ьнбег 20 гия ьо!н|)ои о((онг ЙНТРв $0 НМ ьеиье ргниег (анн1у (70 ршо!еа) $0 НМ аи|ьеиье РНгиег (апн!у (70 ршо)еа) $ — 2 ни(Га ГЬегшок|аЫе $)Ь)А ро)ушегаке Н,О 5 Н! 5 р! 5 Н! 7н! 7 н! $ )г! |о 50 р! Ргогосо! 11: М(хег( О!!5оиис!еог!г(е-ргутег( Атр1!Елсаг(ои о) с0)ъ(А 8.72 1Е а япП!е сопВПиоил апипо асЫ ле9иепсе ъчах ше6 ло г)еяцп ЬолЬ лепке апс) апилепве риплеш Еог йе МОРАС геасгюп, 1Ье ехасг яхе оЕ йе л)еягел) ргос)исл ъч61 Ье )лпоъчп.
1п плоя салех, йлп ро1уасгу!агпЫе Пе!л (<лл%) лЬои!д а!1оъч яхе Егаслюпагюп аг пис1еогЫе геао!ипои апл) ипатЬ|Пиоил Ыеп66сагюп оЕ 1Ье г(еягел) ргол)исс. Опсе Ыеппбей 1Ье ргос$исл сап Ье епс$-1аЬе!ес$ (СЬаргег 9, Ргогосо1 14) апл$ зиЬ)есгес) со сЬегпка! ае9иепс(иП (СЬаргег 12, Ргогосо) 2) го с1елегпипе а ип(9ие лециепсе 1(пЫпП 1Ье ьчо ЕагпсВел оЕ о!!Попас!еосЫе ргоЬея ТЫь ип)9ие леииепсе сап лп шгп Ъе зупйеыхес( апл( шел$ аа а ргоЬе го Ьо!аге 1опПег с0!4Аы АЬегпапче!у, йе МОРАС ргос1исл лье!Е сап Ье гас)(о1аЬе!ел( л(иг)пВ а аесопл) гоши) оЕ РОК апс1 шес$ ах а ргоЬе. 1Е геыпспоп ялел аге (псогрогалел( аг йе З' епл(л оЕ 1Ье ыагппП о1(Попас(еогЫе рптегы йеп йе атрИел$ ргол)исл сап еая!у Ье с!опес) айег йПеьиоп ъч!й 1Ье арргорпаге епхуте лила арргорпаге р!аыпЫ ог Ъасгег)орЬаВе чесгогы В1ипг-епс(ес( ЕгаПшепгл сап Ье с!опас) ал шг)(сагал( т Ргогосо1 4.
5. 1Е пппега1 оВ ъчах ихес$1о очейау йе геас6оп (51ер 2), геточе йе ол! Егот 1Ье хагпр1е Ьу ехлгас(соп ъч11Ь 150 р1 оЕ сЬ)огоЕопп. ТЬе а9иеош РЬаье, ъч!ВсЬ сопгаша 1Ье алпрИес$0$4А, ч611 Еопп а ипсе11е пеаг 1Ье плешлсш. ТЬе гике1!е сап Ье !галл(аггел)го а 6елЬ гиЬе ъч(1Ь ап ашотапс лпкгорлреие. Рог тапу ршролея е.ц., рипбсаглоп оЕ йе атрПЕлел(0ХА ихшП а Сеигпсоп писгосопсепсгагог ог с)ошпП агпр1л6сапоп ргойиси, Ь Ь л)еягаЫе го геплоче 1Ье о11 Ьоил 1Ье лашр1е ЬеЕоге ргосеесПпц.
А $МРО$$ТА(ЧТ 0о ио1 аиегир1 сЫого(огги ех1гас6оих !и иисго61ег р!а1ея ТЬе р(ах6с ихел$)и 1Ьехе р(а1ех (х ио1 геяа1аи1 1о огВаик ьо(чеи!я ВА(ъ(0-5ТАВ АшрПЕкабои о ъче)ВЬ(х. Малу (иВ; ойегх гиау соиипи 1Ье с)еягес) ЕагВе1 хес)иеисея )и хаше сахих, ъчЬеи а ьил1аЫе ргоЬе ь ача~!аЫе, йе с(ех(гес( ЕгаВтеи1(х) сал Ье!оса1ес( Ьу 5оиПлеги ЬуЬг!6(хабои; 1и о(Ьегх аП о( йе аилрППе6 ЬаисЬ тих( Ье гесочеге6 аис(1ех1ес( !исПМдиаПу.
ТЫь хагпрПиВ ь Ьех1 асЬ!ечес( Ьу Валс(-5$аЬ РСК (В!оиггюи аис) Соорег 1992) ах с(егкг!Ьел) Ье!оис Айег йе аВагохе Ве! Ьах Ьееи хЬП!иес( ъч!й ейЫЫги ЬготЫе аис( аиа(ухес( Ьу Оъ26(ииииагюи, геиюче ехсехх Пшс1 Ьу р!ас!иВ а рясе о( \Члаггпаи ЗММ рарег ои 1Ье хиг(асе Еог а Ееъч хесоис(я Кегпоче 1Ье с(агпр рарег аис( хашр(е еасЬ Ьаис! о( 1и(егех1 Ьу х(аЬЬ(иц регреис)(си(аг!у (иго йе Ве! илй 1Ье Ьече(ес)6р о( а 21-Ваице Ьурос(еипк иеесПе.
Ве сагеЬП 1о ачоЫ рагаПах еггогх аис( ихе а ЕгехЬ иеесПе Еог еасЬ Ьаий ИЧЕЬл(гаъч йе иеесПе !гоги 1Ье Ве! аис( йеи ъчахЬ йе Ьр )и а ЕгееЬ РСК гиЫиге алс! геагирИу йе Ьаис) о( 0МА )АлЬеиечег рохх(Ые, геаилрПВсапои еЬоиЫ Ье саге!ес( ои1 их!иВ иеь(ес( РСК 14(Ьеи гесочег!иВ ЬаилЬ Е оги ро!уассу(алп)де Ве(х Ьу Ьаид-х(аЬ РСК, суо ио( иле )АлЬаииаи ЗММ арег 1о с)лу 1Ье хиг(асе ог' йе Ве!. 1иь(еаза, саге(иПу гегиоче ах гиисЬ Пи!д ах рохх(Ые Ьу Веи1!е ъМр!ид ъч(й а В(очес( Ьапй ТЬеи и хе а иеесПе 1о Егаих(ег а хшаП ЕгаВгиеи! о( ро!уаслу1агп Ые соиЬП!и(иВ 1Ье Ьаис! Е (и(егех1 1о йе ЕгехЬ РСК. АПоъч йе Ееилр(а1е 0Ь)А 1о с((Психе $иго йе геасгюп т!хгиге Еог аи Ьоиг ог 1ъчо Ье(оге ЬеВ(ии)иц йе аиърПВса6ои, Рго1осо! 12 КарМ Спагас1еплабоп о1 Р!ЧАь С!опед ~п Рго1агуобс Чес1огь т НЕ РО!ЧМГ8ЛЬК СНА!Н атЛСт!ОН Ситв тНГ т!МГ аЕГ~и!8ЕО Го сЬагасГег!ге ае8шепГа оусРХА с!опед ш ЪасгегюрЬа8е Х апй р!аяпЫ чессогь (гогп ьечега! г)ауа го а Гегч Ьоцгя гч1гЬ а сопцпепьцгаге гес(цсг)оп (п е!Тогг (Сцааогч апй С!ас)саоп 1989; Рогйпап 1993; Соага апд 'гче!пег 1995).
Тгапзгогшед Ьасгег!а1 се1!а ог Ьасгег!орЬа8е Х раггк!еь сап Ье р!с)сей ггпу со!оп!ез ог р1а9цеа апд ггапь1еггед с)!гесг1у шго гЬе РСК ш(хгцгез 1асЫп8 гЬегпюагаые РХА ро!ушегаае Ьш сопгашш8 рг!шега саг8есей со чесгог зег(цепсеа ишпейаге1у ()ап)с!п8 йе ршаггче ае8шепг ог с!опт Р)ч)А. ТЬе геасг!оп пихгцгеа аге Ьеагед го Ьо!1(п8 го!гЬегасе гегпр1аге Р)ч)А апй го !пас!ваге пцс1еааеа апг( ргогеазея А гЬегшоьгаые РХА ро!ушегаье !а гЬеп асЫег) апг) -30 сус1еь ог ьгап8агд РСК аге реггогшей А ацссеаагц! ашр1!6саг!оп геасгюп у!е1да а РХА гга8шепг гчЬоае яхе сап Ъе еьгипагей Ьу а8агоье 8е! е!есггорЬогеа!ь апд ччЬоае Ыепг1гу сап Ье сопйгшег) Ьу РХА вес!цепс!п8 (СЬаргег 12), 8оцгЬегп ЬуЬгЫ!хаг1оп (СЬаргег 6), апс((ог геагг!сг!оп гпарр!п8. Мапу со!оп!ез ог р1аццез сап Ье аааауей яшц!гапеоць1у апй Ьесаые гЬе гесЬпн!це га ао гарЫ, гЬеге !а цаца!!у по пеег) го а!иге 1аг8е пцшЪегз ог' сапйЫаге с!опеа уог ехсепдег( рег!ода ог" г!гпе.
ТЬе шегЬос( сап еаа!1у Ье а8аргег( го зсгееп сР1МА 11Ьгаг!еа ш а ьгерк1ае гаьЬюп (р1еазе атее СЬарсег 11), со гчог)с оцг йе ог!епгаг!оп ог" уоге!8п ае8шепь оГ РХА ицй!и (пйчЫиа1 гесош- Ь!пап! с1опея апд го 8епегаге гешр1агеа гог РЬ(А ьег)цепс!п8 (Кг(ьЬпап ег а1. 1991). Е(па1!у, гЬе гесЬпи!це сап Ье ехгепдес( го ец)сагуог!с се!1а ап<Я паем, Кот ехашр1е, го апа1уге 8епе йагцрг!опт )п уеаага (р1еаае атее йе агЫЬюпа1 ргогосо1ь аг йе спи пай!а ргогосо1) апг) го Ыепг!гу с1опеа ог" шцг!пе ЕЯ сеПа гЬаг Ьаче цпдег8опе шосЬ()саг!оп Ъу Ьопю!о8оцз гесошЪ!паг!оп (1оцЫапоч ег а1.
1997). рог ГцггЬег с1ега!1я р1еазе аее йе асЫ1г!опа! ргогосо1з ас йе епг) ог гЬ!а ргогосо1. ТЬе го!)огч!п8 ргоГосо1, шой6ег( ггпу 8а1Ы еГ а1. (1988), Сцзаогч апд С1ас)салоп (1989), апй 8апс)Ьц ег а!. (1993), каь ргочЫео Ьу Р!апе Е )е1ше1с (Мауо С1!пк, КосЬезгег, М!ппеьога). 8.7г Ртогосо! 12: КарЕгЕ СЬатастет!гас!оп оу РМАь С!олег! т РтоЕсатуоГГс Честить 8.73 МАТЕВ1АЕЬ 4г! МРОКТАНТ То гейисе Ейе сЬапсе оЕ сопгапйпа1юп иь!1Ь ехойепоиь ОЬГАь, ргераге апг! иье а ьрес1а! ьег оЕ геайепгь апг! ьо!ийопь Еог РСК оп!у, Ва1се аП В!аььччаге Еог б Ьоигь ас 150'С апд аигос!аче а11 р!аьйсччаге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
