Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 24
Текст из файла (страница 24)
1997; 1ог геч|есч, р!еаае ьее уи апт! В|оепт 1996). ТЬе ЕесЬп|т|ие 'ь рагбси|аг|у иае)и! и Ьеп асгееп|пе сЕ)МА 3$Ьгапеа 1ог с|опеь йа1 сиота п аес|иепсеа Евв 1Ье 5 ' ог 3 ' епда о1 с33ХА. Адд313опа! Ма1егда15 ВастепорЬа8е ). Е|Ьгагу Вот)гп8 |чагег ЬаЕЬ НйгосеИи1оае 68егх ЕЕ32 тт) Ре1п' д|хйеа Ет 50 пчп) 5М Ме1Ьод 1. Р|а1е 1Ье Ьастег|орЬаВе Е ИЬгагу |п тор аВагоае оп 150-тв р|а1еа аа деасг|Ьед |и СЬар1ег 2, Рготосо| 1. |псиЬа1е йе р|а1еь апс| Ьапь)ег йе со|оп|еа оп1о пип|Ьегед пИгасеИи|оае 6Иегь аа деаспЬед |и 51ера 4 — 6 о1 Рготосо| 21 ЕСЛартег 2).
ТЬеге 'ь по пеед то 3сеу йе 6!теса Ео йе р|атея Е4)тгасеИн|ахе ятегх аге рге1еггед 1а пу|оп я|егх япсе йеу ь е )ехх ехрепяче. СЬагбед ау|оп 6)тегх хпан|д пат Ье чаед Ьесанте йе Ьастег)арпабе с рапк|ех хйсс ха 1!561!у йа1 ЕЬеу саппат еая|у Ье тчгьЬед Егее. 2. С)ае Ыипт-епдед 1огсерь Ео гепюче йе 6|31ега саге)иИу опе Ьу опе. Р|асе еасЬ 6|тег |и а аерага1е 3 50-птпт сй5Ь соптгдп| пВ 3 — 5 п|$ о1 5М. )щ!е ЕЬе 6|тег то епсоигаВе ЕЬе ЬастепорЬаее раг6с|еа 1о Иоат |пса йе Иод рЬаае. Кепюче йе 631ег апд Ьо|д И очес йе д$5Ь ип63 по гааге ЬастегюрЬаВе ьньрепа|ап дг|ра 6огп йе 6|тег.
0ьсап3 йе 6|тег. И'гар йе пнвЬегед абаг р|атевп 5агап ЧЧгар. 51аге йе р)атех а| 4"С. 3. тгапа)ег йе ЬасеепорЬаВе аиарепа|оп 1о а 51ег$$е, |аЬе|ес| тиЬе. с)ае а аерага1е тиЬе тог еасЬ р|а1е. ТЬете ЮЬех ргоиде а хангсе ат ватег)а$ йа| сап Ье асгеепь$ гпапу 6вех чиИюнт Енг|Ьег р)ат)п6 а1 йе 3|Ьгьу. 4. Тгап51ег 25 63 о1 еасЬ о1 йе Ьастег|арЬаце аиарепа|опь то ап аптрИИса6оп тиЬе. С!оае ЕЬе тиЬе апс! Ьеат $1 в а Ь06$08 иа1ег ЬатЬ Еог 5 и Ипи1ея 5.
СЬ|И ЕЬе ЬоИес1 аиарепа)оп еп |се апс1 1Ьеп иае 5 и! о1 1Ье анрегпа1апт аа а Еевр|ате |п РСК5 рпптед Ьу 0$$8апис|еот|деа йа1 аге ьрес$1$с 1ог йе тагВет аес|иепсе. ИЕтеп хсгееп)п5 $)Ьгаг)ех Еаг с|апет санта)п)п6 ЕЬе 5 ' аг 3' хе9непсех от с0ЕЕА4, апе а1 йе рпвегх апаню аппеь' |а |Ье арргорпа|е Иапяпб чес\ог хе9непсеа апд йе о|Ье апаи|д аппеа|та йе дех)гед ге6)ап а1 йе тагде1 депе. ИгЬегечег Роах)Ые, |па|аде Ьой рая|дне апд пеВайче соптгоЬ тий еасЬ Ьатсп а1 РСИх. Гаг ехавр|е, еасЬ о1 йе Ьастегюрпабе яьрепяапх сап Ье сряед гий а хпачгп апюнп1 о1 а рнп6ес$ с|апе.
5еь а1 рг)ветх хрес)6с Еаг Фе споып с|апе апд йе тагбет с|опе сап йеп Ье саед япнйапеась!у |и йе хате РСК. 6. Айег а с3еягес1 гесотЬ|пал1 Ьаь Ьееп $деп66ед, гер|ате ЕЬе арргорпате Ьастег|орЬаВе аиареп5300$5). Р|ате епоиеЬ Ьас|едорЬаВеь 1о оЬта|п ИчеЕо|д сонетке о1 ЕЬе аиЬрори!ат|ап о1 йе ИЬгагу. ТгапаЕег йе ЬастепорЬаВЕ5 то а п|тгосе3303оае ИИег йа1 Ьаа Ьееп ргеч|оиа|у птаг1сес| |п1о 12 ог гпоге асстогя Ве1оге гегпоч- ЕпВ йе 6|тег 1гот ЕЬе р|ате, опепт ЕЬе 631ег то 1Ье р|ате апд гпаг|с ЕЬе !осадопа о1 ЕЬе ьес|ога оп йе Ьо1- 1огп 01 ЕЬе р|а1е.
Иегар йе хестагед абаг р|а1е |и 5агап ЧЧгар. 51аге 1Ье р|а1е а| 4'С. 7. ТгапаЕег йе пдгосеИи|оае 631ег ЕЬастепорЬаВе яс1е ирреггпохт) то а ьтег$3е Рета д$5Ь. )Агог|дпе с|и|сЫу, сит 1Ье 631ег |пто аес|ога анс1 гесочег 1Ье Ьастег|орЬаее раг6с|еа 1гогп еасЬ аеВгпепт |и -0.5 гп! 01 5М. 8. С)5308 — 25 и! о1 еасЬ о1 1Ье аесопдагу аиарепа|опа $51ер 7), гереа1 51ерь 4 апд 5 1о детес| йе с|еягес| гесогпЬ|папт Ьу РСК.
Сап6пне йя атер-и ье апа|ухЬ 1ог опе аг Ьча гааге ганпдя ип6| ЕЬе са1сн|атед совр)ехау а1 йе )ахт хнхрепх)оп 'ь е1 0' гесавЫпап| Ьас|егюрЬабес Ат йя хтабе, йе яьрепяап х|юи)д Ье р|атед апта ! 020 р)атех ат а депхну а1 -2500 ртн)р|ате. ТЬе гетю|6пВ р!а9нех хЬан|д Ье хсгеепед Ьу сапчептюпа| Вептап-Оаиа ЬуЬг)д)са1)ап та 'х|еп6- Еу апд Во|ате йе с|опе о1 )п1егехт ер|еахе хее СЬар1ег 2, Рготаса|22). 6 песемагу, йе хестагед абаг р)атех $51ер 6) сап Ье сьед ат ап адд)1)апа) хангсе а1 Ьас|епарпабея А явбаг хтериЕхе ргаседнге сап Ье нях$1о хсгееп сОЕЕА $)Ьгапех сапхтгнстед |и р|аяп||$ час|ага ЕТгаюег $996; Та|сит) 1 997). 8.78 СЬарсег 8: Еи Ж!го Атр)фсапоп оу" РИА Ьу РСЯ МАТЕИАсБ я 1МРОКТАМТ То гес1нсе 1Ье сЬаисе о( соп1аиииа6ои ъмй ехоВеиоиз РМАз, ргераге апс) изе а зрес(а) зе1 о( геацеп1з аис( зо!и1юиз Еог РСК ои(у.
Ва1се а)! е(аззъчаге Гог 6 Ьонгз ас 150 С аис( аи1ос(аче а!1 р)аз6съчаге, Рог иъоге (и(оггпабоп, р!еазе зее 1Ье ране! ои СОМТАМ1МАТГОМ 1М РСК )и 1Ье сЬар1ег (исгос)ис6оп. СА()Т!ОМ: Р1еазе аее Аррепс11х 72 Еог арргорпа(е Ьапс1!1пе оГ та1епа!з гпагКес! ъч!1Ь <1>. ВНГТег5 ап41 Ьо!обоп5 Р!еазе зее Аррепс)(х 7 Гог сопъропеп1з оГ з!ос!с зо1и6опз, Ьи((егз, апс! геаееп(з. 661и1е з(ос(с зо1и6опз 1о ГЬе арргорпа(е сопсеп1гапопз.
СЬ!огоуогт <! > сГМТР зо!ипоп (20 тМ) сои!а(и!ид аП Еоиг сЕМТРз (рН 8.0) 70х Еои8 РСК Ьи(уег 500 гим Тг!з-С! (РН 9.0 ас гооги гешрегагнге) 160 пъм апипопиип зн1Еаге 25 шм МОС1 !.5 ги87ги) Ьолие зеиии а1Ьниип 5геп16е йе 1Ох Ьнпег Ьу 6Ьгапои йгонКЬ аи 0.22-рги гиегпЬгапе. Ргчгае ЕЬе згеп1е Ьнпег шсо а!ирюсз аис( згоге йе а))с)носа аг -20'С. Н18Ьег сопсепггагюпз оЕ ТгЬ аге шее го шашгагп соггесг РН с)нг(п8 сЬе 1ои8 ехсепяои сипез гег)шгес) Гог апгр1гбсас1ои оЕ 1ои8 гепгр!агез (ОЫег апг) Козе 1992).
ТЬе РН о! 1Ье зсос)с зо1нсюи Ь а1зо (псгеазес) го 9.0 (ас гоопг сегпрегагше) со согиреизаге Еог йе!аг8е с(огчпъчагс) з!66 )и РК, йаг осснгз ъчЬеп Тпз Ьну(егз аге Ьеагес) (Снос( ес а1. 1966; Рег8ыои ес а1. 1980); Еог ЕнгсЬег г)еса!1з, Р1еазе зее Арреиебх 1. А!гегиапче!у, Тпз сап Ье гер!асей Ъу Тпсше (РН 8.4 аг гоош гепгрегагнге; Впа! сопсепггагюп 30 пъм) (Роисе апг) Мко1 1991).
ТЬе гепгрегасше с(арсис(енсе оГ сЬе РК, о( Тпсше Ьнбегз Ь Еаг 1еы сЬап сЬаг о( Тпз (Снос( аи6 1хаъча 1972). КС! (100 пъм) сап Ье шее ш р!асе оЕ апипопшги зн!Гасе |и сЬе 10х!оп8 РСК Ьн((ег, аиг) 8е1а6п сап Ье ые6 ас а сопсепгга6ои оГ 0.0196 )и ЕЬе 6па! геас6ои гп р1асе о(Ъочше зегшп а1Ьшпш. АОгппоиа! согироиепсз героггег) Ьу РооЫ апг) Козе (1994) го ипргоче йе еЕВсгеису оГ 1оп8 РСК шс1нбе 8!усеги! ас а соисеигга6ои оГ 5с8 (ч(ч) ш йе 6па! геаспои пихсше со ргогпосе зерага6ои оЕ РХА зсгапгЬ ас 1огчег сегирегасп, апд ЕРТА ас а соисепсгасюи о(О.75 шм гп йе 6па! геассюп пихсше со с!ъе1асе гпча!еис са6оиз шсЬ аз Мпм йас ш(861 ргогиосе зсьяои оГ РХА зггапс(з.
Епкугпе5 апд Войег5 ТЬегтозсаЬ!е ЕЗМА ро!утегаье иих К!еисас(1 сап Ье оЬсашег) Ьопь АВ Рерсгаез (Вп Еошз, Мгяонп), апг) Р~и ро!успегазе саи Ье оЬга(пес( Егопь 5ггага8епе. А сурка! пихшге сои!а(из О 187 нпЬ о! РГи апг) 33 7 нши оЕ К(епгас(1 ш а соса! ъо1- шпе о( 1.2 р! (Ронге( апс) Козе ! 994). Се!5 А8агозе 8е! Р!еазе зее 5сер 4. Ь)ос!е!с АСЫ5 ап41 О!!еопос!ео1!141е5 Тетр!аге Р)ъ(А Еоп8 РСК ъчог1сз ъче11 оп а чапесу оЕ геспр!асез 1ис!нспп8 гесошЬгиапг РАСз, ВАСь, сояп1сЬ, аис( ЬасгепорЬа8е х с!опез, аз ъче11 аз 168Ь-шо1есн1аг-ъче(8Ьг Веиопис РХАз. Ноъчечег, гЬе Она)(!у оЕ сЬе РХА Ь рагашониг.
ТЬе ачега8е 1еп8гЬ оЕ гЬе гешр!асе РХАз (амауед Ьу а8агозе Ве! ог рн1зейбе16 Ве! е!ессгорЬогеяз) зЬон!д Ье аг 1еазс йгее сипез Вгеасег йап сЬе 1еп8сЬ о(сЬе с(еягес1 РСК ргог(нес. ТЬе РМАз зЬон!д а1зо Ье ехгеияче!у рнп6ес( со гес)нее гЬе соисепсга6оп оЕ (п161ъ!согз. !г гиау зееги со Ье ошпъодей з1оъч, апс( ехреияче, Ьнс ш ош Ьаис(з, гЬе Ъея ъчау го ргераге Веиогик РХАз Еог!оп8 РСК Ь Ьу ег)н(11Ьг(нсп с(сия!у сепсп(и8агюп гп СзС1 8га6(епгз, Го1!оъчсс( Ьу йа1уяз а8а1изс ТЕ (РН 8.0) (р1еазе зее СЬаргег 1, Ргогосо1 10). Рштосоl 13т Еопй РСЯ 8.79 Ротсчатд рдтетх Г20 рм) 1п Н О апд Вечетхе ргттегх Г20 рм) т НгО (20 рто1ех1РГ) ТЬе ги1еа Гог сЬе йеяйп оЕ рпшега (р!еаае аее Реяйп оЕ О1!Вопис!еосЫе Рпшега Еог Ваак РСК Ы сйе !истое(исс!оп со ЕЬВ сЬартег) птыс Ье Гойои ее! с1оае!у.
Ноъчечег, рппсега пает( Гог 1оп8 РСК аге Вепега1- 1у айВЬс!у 1опйег (25 — 30 пис!еос!т)еа) сЬап сЬоае ыетс Еог агапе(агт( РСК. !с ы рагйси1аг!у ппрогсапс со ятгче Гог ейиайсу Ьеьчееп сЬе птеГйпй сегпрегасигеа оусЬе ьчо рппсега. !Е сЬе с(!йегепсе ш гпе!йпй септрегасшеа ехсеейа опе сепг!Вгайе т(ейтее, ппарппнпй аптс ргеЕегепйа1 апср1!6сасюп оЕ опе асгапй птау Ьесоше а рюЫегп.
Оййопис!еос!йе рпспега аупсЬеа!гет) оп ап аисошасетс РЬСА аупсЬеыгег сап ютпейшеа Ье ыей шссеяйт!1у !п!опй РСК тч!йтоис ГигсЬег рипйсасюп. Ночтечет, аптр!т6сасюп ы ыиа11у паосе с!6к!епс !Е сЬе оййопис1еоитсе рпгпега аге рипйетс Ьу сЬгошасойтарЬу оп сопипегс!а11у ача11аЫе геяпа (е.й., ХЕЬС5ОКВ, НЕ!4 Ейе 5степсе Ргот)иста) ог Ъу тсепасит!пй ро! уасгу!аптЫе Ве! е!есСгорЬогеяа, аа т(таст!Ьет( ш СЬарсег ЬЬ Ргососо1 1. прес!а! Ег!сг!репеп1 Ватиет Врь 1ог аитотадс гптстортреоеь М(сгоуойе СоЬеь (0.5 гп1, СЬ(п-тча11ед Гот атпрййсадоп) Роют(че-дгар!асетепс ртрепе УЬегтаl сус(ет ртойгаттед сч(СЬ с(еятед атр1тт(сас(оп ртогосо1 11 сЬе сЬеппа! сус!ег Ь пос еци!Рретс часЬ а ЬеасетС 1Ы, ые е!сЬег пипега! ос1 ог рагаГ6п тчах со ргечепс ечарогайоп о( 1н)и!т) йопт сЬе геасстоп ппхсиге йипп8 РСК. АЕЫ!бопа! КеацепЬ 5(ер 4 оЕ (Ь(х рготосо1 гегЕо(тех СЬе геадепо 11хсед т СЬарсет 5, Ртососо) 2, алд СЬаргег 6, Рто(осо) 70.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
