Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 27
Текст из файла (страница 27)
(А) Кеаи)ипц агпрйкатюп ргос) ис(5 Егосп геастюп5 сопта1п1пц сц((егепт гатю5 о( ЬРСГ1 то ЬРСГ1ст55 аге 86оъчп ао екпс) плп-Ьгогп(бе-5(а)пе6 Ьапс(5 а(тег оерагатюп Ьу е)естгорЬогея5 йгоицЬ 5% ро!уасгу)агп(с)е. (8) Сотпрояте 5(апс)агд сигне и с!егсчед (гого Еоиг )пдерепс)епт ехрегппепь. тЬе )оц гатю о( па6че то сотретпог ргос)исс ъча5 р(о(тес! аца1пот Фе )оц агпоипт о( (п(6а! па6не аббес) то (Ье РТ-РСР. (Мосйцед, ъчИЬ регтпЬ5юп, Егопъ Тоа1 апс) 'ъъ'))(Ьап)с 1996.) Я 1.0 о Е о . 05 7 о со о.а о .о о. О -05 .о о о -1О 8.88 СБаргег 8: Еп ЕЕ|го Атр1фсаг!оп оЕ0)уА Ьу РСЯ То е1ишпасе (Ь(5 боигсе оЕ доиЬ(, а пюге борЬ186сагед |пе|Ьод 18 ана(!аЫе.
ТЬ|5 арргоасЬ )пчо1неб с)иап6Еуш8 |Ье а|поип|5 оЕ геЕегепсе апд гагцег бе|)иепсеб ш сопбесш|не сус1еб ип(Ь(п йе ехропеп6а! рЬабе оЕ РСК. Ашр11Е|ед ргодис|5 ассипш1аге дипп8 й|5 рЬабе ассогд)п8 |о йе Ео11онн)п8 е|р|абоп (р!еабе бее йе рапе! оп РСК ))у( ТНЕОКТ ш |Ье сЬарсег шсгодисбоп): 1оВМ( —— и 1о8 (1 -|- У) + 1оВЬ( 1е " о. о Е Я |ее о с Ф о с о о о о ь о |е е Е!О$>ЙЕ 8-9 Оиап(!(а6оп Ьу Ассип|и!а(юп о( Ргодис|8 |и КТ-РСК не. С с!е Ь(и|пЬег !и й|5 еха|пр!е, ргодис| асси|пи!а|юп В 5Ьоип (ог а|пр)(((са((оп (КТ-РСК) о( |Ьгее бап|р!еб: 125 гК)4А (с)гс(еб), су|осЬ|о|пе С ох|- дабе (СОХ !) |пК(хА (ес)иагее), апд а ге(егепсе |е|пр)а1е бес(иепсе (гогп йе 0-(оор ге8(оп о( гпКосЬопс(па! 07(А (гпап8)еб). ТЬе дага аге 8Ьоип аб ргодис! сопсеп|га|юп нб.
сус)е пигпЬег )п а бегп)- )о8апйгпгс р!о| ил|Ь гебресиче !(пеаг ге8ге55(оп ((пеб. )и (Ь(5 ехрепгпеп|, 1Ье гадоб (ог 125:0-!оор апд СОХ 1:0-(оор аге 5.77 апд 1.1, гебрес1(не(у. (Адар|ед, ией регги)55(оп, (гоп| Наг((пц апс! \н(ебпег 1997.) 1е-'е 7 8 9 1О 11 12 13 14 15 1б 17 Сус(е гнЬеге )1( |8 |Ье сору пшпЬег оЕ |Ье агпр11Е|ед бе|)иепсе аЕ(ег п сус!еб оЕ агпр116са6оп, М, 15 йе ш|6а! сору пшпЪег оЕ (Ье гагиег бег)иепсе (п |Ье Р)х)А гешр!аге, апд у !8 |Ье еЕВс(епсу оЕ ашр!|- Всагюп рег сус!е.
А бепи1оааг)(Ьш)с ВгарЬка1 р1о| оЕ 1о8 сопсеп|габоп оЕ а раг6си!аг агпр!|Вед ргодис| а8ашб( сус1е пшпЬег у(е168 а 8(га)КЬГ 1)пе (р1еабе бее Р)риге 8-9) (Тба| ап|1 Ъу|1!(Ьап)с 1996; Нагдп8 апд Ч()ебпег 1997). ТЬе е|)иабоп дебсг)Ь)пи йе ассигпи1а6оп оЕ |Ье ргодис| сап |Ьеп Ъе дег|нед ияп8 гецгебяоп апа1уяб. 1Е, аб 15 |поб| деягаЫе, йе сагВег бес)иепсеб апд |Ье геЕегепсе бес(иепсеб аге ашр11Е|ед нн)й ес)иа! еЕЕк)епсу, йе ге8геббюп 1шеб ил11 Ье рага11е! |о еасЬ ойег. ТЬе га6о Ьепнееп йе гагиег апд геЕегепсе пю!еси!еб сап Ье са!си1а|ед Егогп |Ье шсегбес6оп оЕ |Ье геВгеббюп 1шеб |н((Ь а япц!е, ш)дехропеп6а1 сус1е (Наг()п8 апд Ъйебпег 1997). Р)х)А8 епсод)п8 геЕегепсе сегпр1агеб аге сопягис|ед ап|1 с!опед )псо несгогб е|)шрред |н)гЬ а ргошо|ег Еог Ьас|егюрЬа8е-епсодед Р)х)А-дерепдепг К)х)А ро!ушегабеб.
1п шобг сабеб, |Ье геЕ- егепсе |егпр1агеб аге сопбггисгед Ъу шод)Еу)пи а с1опе оЕ |Ье гаг8ег бес)иепсе ш а |нау |Ьас аПои 8 |Ье соашр1|Вед ргодис|5 го Ъе д)86п8шбЬед Егогп опе апойег. Рог еха|пр!е, йе геЕегепсе апд |Ье гагиег пиВЫ д)ЕЕег 5!19Ь|)у ш яхе Ъу )пбег|юп ог де!егюп оЕ а япа11 Ега8шепг оЕ Р)х)А ог и| бег)иепсе Ьу а1|егагюп оЕ опе ог (по Ьабеб ГЬаг аге гес)шгед |о сгеа|е а пенн геб|пс|юп я|е ог ге|поне а па|ига1!у оссигпп8 я|е. 1п Вепега1, геЕегепсеб апд гаг8егб |Ьаг д)ЕЕег 8118Ь|)у ш яге аге ргеЕеггед Ьесаибе йеу сап Ье еая1у д)86п8шбЬед Ъу це1 е!есггорЬогеяб.
1п йе сабе оЕ КТ-РСК, геЕегепсе гешр1а|еб аге |гапбспЬед Егош йе еп8)пеегед р1аяп)д ияп8 а ЬасгепорЬа8е-епсодед К)х)А ро1уп|егабе, рипВед, апд |)иап66ед Ъу аЪбогЪапсе ас 260 пп|. Меабигед апюипгб оЕ геЕегепсе |егпр1асе аге аддед |о |еб| К)х)А8 ргерагед Егогп а )споннп пи|пЬег оЕ се1!5 ехргебб(п8 |Ье Вепеб оЕ ш|егебг, апд |Ье пих|иге 18 сопнег|е|1 ш|о сР)х)А Ьу генегбе Ггапбспрбоп.
Весаибе йе геЕегепсе апд |Ье (агре( К)х)А5 аге Ъой ргебепг ГЬгоиВЬоиг а!1 рЬабеб оЕ КТ-РСК, йеу аге сор|ед Рготосо! 15| Циттптттаттче РСК 8.89 япшПапеоиа!у !п|о Ел!ъ)А Ьу генегае сгапаспртюп апд аге йеп соатпрПВед ияп8 тЬе хаше рптпегз (Вес)тег-Апдге апд НаЫЬгос)т 1989; ЪЧапй е| а!. 1989; СПП!апд е| а!. 1990; 5!еЬегт ап|1 Ьагг!с)т 1992). Рог йь геааоп, геЕегепсе шо!еси1еа оЕ тЬ!а туре аге |ютпе6тпез саПед "сотпре|Кога." К!ъ)А геЕегепсев аге по| Еог йе Еашт-Ьеагсе|Ь ТЬеу аге йе шаг)т оЕ шчеат!Ватога ъч!|Ь а атгоп8 сопиппп|еп| со еатЬет!с ча!иеа апд а Ь!Вилене) оЕ тесЬп|са1 аЫП.
А пшсЬ еаяег а1|егпа6че !а |о иле ТЛХА геЕегепсез, ъчЫсЬ аге тоге дигаЫе апд пшсЬ еаяег Со Ьапд!е (е.8., р1еаье атее 5!еЪегс апт! 1.агпс1| 1992). РХА геЕегепсеь аге епиге1у аи)таЫе Еог трлап6|ат|че РСК оЕ РХА |ешр!атея Ъ|л| йеу аге с1еаг!у 1еаа арргорпасе Еог т!иап66сатюп оЕ КЫАь. 1п аишшагу, ЬеЕоге анетпрбп8 т!иапт!тат!че РСК, и В еааепт!а1 то аддгеаа йе ЕойоъчшВ !ааиея Р!тат, г!Вогоил1у орт!ппхе йе геацепта ап|1 сопсП6опа иаед 1п |Ье атпрПЕтсат!оп геас6оп (р1еале аее Рагашетегь ТЬа| Айест Ро!ушегаае СЬа|п Кеаст!опа |и йе сЬартег штгодис6оп).
5есопд, ялрргеы |Ье сошрет!п8 геас6опь |Ьат оссиг |и йе атпрППса6оп геас6оп дие |о шьрпппп8. ТЬ!а Воа! ь Ъеат ассошрПаЬед иа!п8 а Ьот атагт РСК ог |оисЬдоъчп РСК рготосо!. ТЬ~гд, саггу ои| саПЬгатюп ехрепшеп!а 1п ъчЬкЬ ргоВгеаа!че1у япаПег ашоипта оЕ яапдагд тешр!атеа аге атпрППед, Роигй, еатаЫВЬ йе герго|1ис|ЬПЬу оЕ |Ье ше|Ьо|Ь Ъу регЕогпип8 а ьтат!аткайу я8- шдсапс пшпЬег оЕ пш16р!е аааауь оп |Ье ьатпе лета оЕ сешр1атеа ати1, ПпаПу, оп шт!ерепдепс!у ргосеааед аатпр1ея Р!пайу, регЕогш соптго1 ехрег!шеи|а аЬоъч|пй йа| йе еЕПс)епсу оЕ атпрПЕтсатюп оЕ тагВет апд геЕегепсе тпо1еси1еа аге ет)иа! диппВ йе спитаке оЕ |Ье РСК. Ъ'1|Ь |ЬВ Вгоипдъчог1| |и р1асе, и Ьесотпеь роы|Ые со |1гаъч сопЕЫепт сопс!иа!опа аЬоит |Ье ге!а||не ог аЬьо1ите сопсептга6оп оЕ |Ье тагВет зет)иепсе Еготп йе у|е!д оЕ ашрППед ргодист 1п а атапдагд РСК. 1п Кь пюьт Ъаыс Еогш, т)иапйа6че КТ-РСК !пчо!чеа соашрПВса6оп оЕ тъчо |етпр1атея а сопатапт атпоипт оЕ ап К)ъ)А ргерага6оп сопла!п)п8 |Ье деягед сагйет лет!иепсе апд аепа! ддитюпа оЕ а геЕегепсе те|пр1ате йа| ь а|Ыед ш 1|по|ни ашоиптх то а аепеа оЕ ашрПВсабоп геастюпя ТЬе сопсептгабоп оЕ |Ье тагВет аесрлепсе ы де|егпипед Ъу яп|р!е ш|егро1ат|оп |п|о а лтапдагд сигче (СПППапд е| а1.
1990; Ргеешап е| а1. 1999; р1еаае лее Р18иге 8-9 апд ассошрапу!п8 техт). Опсе тЬта Ьаяс тесЬп)т!ие |а еатаЫВЬед ш йе!аЪога|огу, йе шейод сап еая1у Ье ехтеп|1- ет! |о !пс1иде йе тоге ассигате гейгезяоп апа!уяа оЕ |Ье асситпи!атюп оЕ йе атпрПЕтсат!оп ргодиста дипп8 яксеьяче сус1еа оЕ РСК (Наг|)пй апс1 чът)еапег 1997). Рог а чапа||оп оЕ тЬ!а ргоседиге, р!еаве атее |Ье рапе1 оп МЕА5ЕЛК1!9С МШТ!Р! Е ОЕМЕ РКОО!|СТ5 ВТ КТ-РСК. Весаиае оЕйе ашоипт оЕъчог1| )пноЬ е|1 |и зетт!п8 ир сотпре66че т)иап6тат!че РСК ш а ЕааЬ- юп йат чдП лат!аЕу ьсер6ся а1|егпа6че шетЬода (аеш!т)иапт!тайне РСК) Ьаче Ьееп дече)оред йас |1о пот )пс1иде ех|егпаПу а|Ыед а|апдагдя 1п ютпе ЬапсЬ, тЬеье кегп!т)иапт!тат)не шейо|Ь у!е1д гели!та |Ьат аге Ыеп6са! то тЬоае оЪ|а)пег! Ьу тпоге япп8еп| ехрегипептатюп (Еог геч)еъч, р!еаяе атее На!Еогд 1999).
Ноъченег, Ъесаиае |Ье ча1ие оЕ ьеш!т!иапт!тат!че РСК гешапы соп|гочегяа!, П аеешыпоге ргидеп| ат йе тпошепт со !пс!иде |Ье ЕиП гапйе оЕ атапдагй апд геЕегепсе |етпр1атея 1п гесепт уеагя сопипегс|а1 ьуьтетпь Ьаче Ьееп дене)пред то трлапт|Еу лрес!Етс лет)иепсеа |и ргерагат!опт оЕ Е|ХА ог КХА Ъу тпеааиппц йе штепяту оЕ а!Впа!а епике|1 Ьу Ет!ъ)Аз Вепегатед 1п аттссеъяче сус1еь оЕ а РСК. Весаиче тЬеъе луч|ешь айоъч |Ье яппл1тапеоиа атпр!|Всатюп ап|1 т)иап6Псабоп оЕ прес)Пс пис1ек асЫ ает)иепсеа !п геа1 типе, йеу е1итппа|е йе пее|1 то ъчпЬ|!гаъч аПт)иотъ ат д!йегепт ьтайеа т)иппй йе РСК. Кеа! типе РСК ап|1 |Ье сопипегс!а! 1пвтгишепть пее|1ед то саггу оит йе тпейод аге д!ьсиааед ш детаП |п йе рапе! оп КРАС Т1МЕ РСК ат |Ье епд оЕ тЬ!а рготосо!.
МЕА50К11ь)С МО)Т! Р1.Е СЕ!ъ1Е РКО00СТ5 ВУ КТ-РСК А с!ечег |гпрточетпеп| от |Ье пзейтод ргеьептед 1и тЬ1ь рготосо) ь деьспЬед Ьу Ъчапй ес а!. (1989). А р1аьпйд честог 'ь у|тат еп81пеегед |Ьа| сопла!па а Ьас|епорЬайе Т7 КМА ро!угпегаъе ргоп|о|ет ап|1 ра1гв оЕ 5 апд 3' оййопис1ео|1де рптпег ъет)иепсеь депчед !тоти Вепш ъчЬоье пзК!ъ|А сопсептгайопь аге |о Ье тпеаъигед. ТЬе ра1гь оЕ оййопис1ео|1де рпшегь аге депчед Егогп аъ |папу аъ 12 д1ЕЕегепт Вепш апд аге ьрасед чапаЫе, Ьи| !ъооъчп, д1атапсеь араг| 1и |Ье чес|ог. ТЬе д)яапсе ьерата|1п8 а Вепе-врес1Е|с ра1г оЕ оййопис1ео|Ые рг1|петь 'и йъе яапдагд |еп|р1а|е р1аяпЫ 'ь ъ1шйаг то, Ьит ъйВЫ)у тййегепт Егопз, |Ье д1ьтапсе ьерагайп8 |Ье рпгпег лет)пепси 1и йъе пап|та) тпКМА. ТЫь т)ййегепсе айоъчь тЬе атпрййсатгоп ргодисть !тот |Ье СОМА апд р1аь- тпЫ О!ъ|А тетпр1атеыо Ье д1а|1пйи1ьЬед.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
