Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 30
Текст из файла (страница 30)
Ор то 96 геаиюоа ~тау Ье |ггайатеИ л|нтн(а(нона(у, анй |Ье |плаца В сарюгей оп а ССО аггау. 5ойчаге р|очйеа арас(а( г|ьо|ыюп о1 тйе 96 чейа. Тйе ауатегп В Ьаясайу а яиц|о-со|от Иетас|ог Ьтй Ь сараЫе о1 |ыпц а~ |птегпа| ге1егепсе Иуе (КОХ) то ейп~нате чйао-чей чапа||оп |и Ьале-йпе йиогелсенсе. ТЬе АВ| Рот|о 7700 Ьть а Ьнйт-|о И|анна| сус|ег анй а!аъег чЬоае Ьеап| В |йгестей Ьу й лег-орйс саЫеа то еасЬ о1 Ите ЗЯ геастюпа. Тйе чейа ага |ггайатей |и не||нанси а~И |Ье яциЫа ага сарюгей аой гено|чей оп а ССО аггау. Опййе |Ье СеоеАгпр 5700, Ию Рпа|н ауяе|н сан бе(ест яцнаЬ асгоя Ите епйге йногелсепт аресто|от апй В |Ьеге|оге сараЫе о1 янятт(тат(пц 1Ье а(цоаЫгогп И|йегеп1 йногорЬогаа олей |и И|е нанте геасйоп. Ойе |Ье 5700, тйе Рпяп аул(опт наел КОХ аа ап |и|егпа| |а(егепсе Иуе.
Виогеасепт |наро| 1гого КОХ В |~еаангей анонц тйе Иенаьи|пц атер о1 еасЬ сус|е о1 РСК, И|на ргоч|И(пц а Ьаае йне аца|пя чй~сЬ поо-РСК-ге|а1еа, чей-то-|чей чаг|айопа сап Ье погптайаей. |и И|е ицйтсус(ег (КосЬе), |Ье антрййсайоп геастюна аге лат нр |и япай аеа1ей ц|аы сарй(аг(еа |Ьат ага Ьеатей а~И сосной |и ап а|татаа|о, ъчЫсЬ цгеайу гейнсеа |Ье 1|ото гойи|той 1ог еасЬ сус|е о1 РСК. ТЬе сарИанеа аге гота1ай тйгонцй а не~яиц яайо~ чая а Ьчйяо тйгее-сйаоне( йного|петег ВЧ|йчег ет а|. | 997Ы.
ТЬе Иата лтгеа|н 1го|и |Ье йног|нпетег Ь соичегтей Ьу аойчаге |ото аи агнрййсайоп р1от 1ог еасЬ о1 |Ье геас6ооа. О |е |Ье Рпян аул(он|, Гйе Оцйтсус(ег Ь сараЫе о1 И|аьоцльяоц Ьеьчаеп Яиогорйогея ю |Ьат ргоЬеа (айс(еа ъчйй И|Вагант геропег цгонра сап Ье наеа |и |Ье аагпе РСК. ТЬе сЫе1 ас(чаптацей о( геа| Инте РСК аге |Съ ВЫ Я(у со птеаялге СЬе сопсепСгасюпй о1 пис|е|с ас|(35 очег а чаЯ (1упапт|с гапце, !15 ЫВЬ 5Еияйчсу, апсс |съ сарае|(у 1о ргосейй Гиаиу йаитр|ей 5!Гии!Сапеоий!у.
Ыпй)(е СЬе сгайт!опа! "епс1ро|гй" п|еаялгептеп1 о( РСК рпх)ис(5, геа| Итие РСК ргоч!Ией |гпптейате !0(оггпайоп аЬоит (Ье )с)пейса о1 (Ье РСК. Согпрепйасюп 1ог (3)Яегепсей |п ейк!егку 01 агпрИсасюп Ьеичееп (3!Яегепс йагпр|ей сап сЬеге1оге Ье са1си|асес| ай с|ейспЬе|| Ьу Напйпц апд СЯ7(ейпег (1997) (р)еаае йее Ргососо| 15) ог егиЬе(3- |3ес| |и СЬе йойч аге имм3 со са|си|асе Сйе сопсепсгатюп о( Сагцет Яес|иепсе|йп (Ье (п)йа! геасйоп гп|хтиге. ТЬе сЫе| (3!5ат)чапйтце о| геа| Ягпе РСК Ы сояй ТЬе птасЫпей аге ехрепЯЫе Со ригсЬайе ап(3 СЬе гпа|- сепапсе апс| плпп|пц сойсй аге сопя6егаЫе. Рог сЬ|5 геайоп, (Ье сЫе| Ьепейс|апей о1 геа| Итие РСК Лане 50 1аг Ьееп 1аЬога1опей чй(Л ап ехсгепте|у ЫВЬ СЬгоицЬри( о| насир|ей о1 а 5!гпйаг суре. Ноч ечег, ч е сап Ьоре СЬас сйе ссьЫ о1 геа| Ягпе РСК ъчй ()гор |и ТЬе пех1 (еч уеаг5 со сйе ропп ъчЬеге 1Ье сесЬпо|оцу Ьесоптей геас(|)у ассейй|Ые Со |пйчкйла| геаеагсЬ |аЬогатопей.
Рго1осо| 16 0йегеп6а! 0ьр! ау — РСК. | н ! 992, С.тлнс лнст рлюее, лнст тнстет инстгнсгч, ЪИьн ег ли, беае6Ъе6 а шесЬо6 сот ияп8 РСК со агпрИу апт1 6!яр!ау гпапу сРЬ(Аа 6егтче6 Сгогп сЬе тпрр(ч)Аь от" а 8!чеп сеП ог 6ааие суре. ТЬе гпесЬот1 геПеь оп стчо т)!суегепс сурет от ьупсЬестс оП8опис1еосЫея апсЬогет! ап6аепье рпптега апд агЬтсгагу кепаре ргипегя А сурка! апсЬоге6 рпшег В соптр!етпепсагу со -12 пис!еостЫеь от' сЬе ро!у(А) саП от" шй!ч)А апт1 сЬе а6)аеепс ьчо пис1еостЫеь от сЬе сгапаспЬед ает!иепсе (р!еаье атее сЬе 6тьсиьяоп оп ргтшега 1Ле6 тп РР-РСК, р.
8.99). АпсЬогет1 рг(шест сЬегетоге аппеа1 со йе )ипссюп Ьесччееп йе ро1у(А) саП апт1 йе 3'-ипсгапз1асед ге8!оп от" шКЬ)А сешр1асея Сгош тчЬеге сЬеу сап ргипе аупсЬеяа от" ттгас-астапов сР!ч)А. А аесопт! ргипег, ап агЬтсгагу ает!иепсе от -10 пис1еосЫея В йеп агЫе6 со сЬе геасбоп пихшге ап6 т(оиЫе-асгапт!ет! сР!4Аз аге ргобисет! Ъу сопчепсюпа! РСК, сагпе6 оис ас !отч аспп8епсу.
ТЬе ргот(исса от йе атпрПВсасюп геас6оп аге аерагасе6 Ъу е!ессгорЬогеяь сЬгоиВЬ а т!епасигтп8 ро1уасгу1ашЫе Пе1 ап6 чьиа!тге6 Ьу аиСогайоВгарЬу. Ву согпрапп8 йе Ьапйп8 раССегпь от" сРМА ргобиста депче6 !гопт Сччо 6тКегепс сеП сурея ог тгош йе хаше сеП суре Вготчп ипт!ег с1Негепс сопйсюпя Ь тх аошесппеа роя яЫе со Ыепс(ту йе ргот!исса от" т)тттегепстаПу ехргеаает( Вепея Вапт(а от тпсегеас сап сЬеп Ье гесочегед !гош йе Ве!, агпрППе6 йгйег, апд с1опед, апт)тот паем ая ргоЪеа со ьсгееп, Сог ехашр1е, погйегп Ыотз апт! сРМА 1тЪгапез (р!еаье атее Р18иге 8-10). Р!Суегеп6а1 т(!ар!ау оттега аечега! йеогебса1 ат!чапса8еь очег о!бег тпейотЬ, якЬ аа 6(йегепба1 ЬуЪ6Йгасюп апт1 т!т(уегепста! сР!ч(А с!оптп8, йас Ьаче Ьееп пает! со тЫепстту братие- апт1 сеП-арес)ттс тпКЬ)Ая р(г~с, пипипа1 ашоипса (0.1 — 0.5 )т8) от" ро!у(А)' ЯМА аге геПшгей 5есопс1, Ьесаиае 6тйегеп6а! т)тьр!ау — РСК (РР-РСК) тпчо1чеа ап агпр1тПсасюп зсер, В сап !п йеогу Ье ихет! со бесесс Йттегепста! ехргеаяоп от' шКЬ(Аа йас аге ехргеаает! тп чету!отч аЬипт1апсе.
ТЬ!гт1, Ъесаите сЬе атпрПВсабоп ргот(исса Сгош стчо ог пюге аоигсеь аге 6!ар1аует) оп йе ваше це!, Ь аЬои!6 Ье розатППе со Ыепстгу ЬосЬ т!иапстса6че апт1 т!иаПсастче сЬап8еь тп сгапас6рбоп. Р!паПу, Й!Тегеп6а! т!(ар!ау сап т1еСест сЬап8еа тп ехргеаяоп от' с!оае1у ге!аСет1 К)ч)Аа йат пиВЬС Ье 1отт тгош сЬе саг8ес рори1а6оп т1ипп8 сопягиесюп от зиЬсгассе6 сРЬ(А ПЪгапея Ехашр!еа от" сЬе аиссеаати! иаеа от" 6(йегеп6а1 6!ар!ау !пс1ит1е соптраг(хопа от' (1) поппа1 апт1 сшпог сеПа (Ьтап8 апт! Рагт1ее 1992), (2) погша! ап6 аепеасепс сеПа (1лпь)тепа ес а1.
1995), (3) аса8еь тп т1ече!орш8 Хетюрит апт1 пюиье егпЬгуоь (Хппшегтпапп апт1 5сЬи!сг 1994; Ат1а6 ес а!. !995), (4) сеПа Сгеатеб апт! ипСгеаСет1 тчтСЬ Ьоггпопез (%тхсЬе еС а1. !996), ап6 (5) Пепел ехргеаае6 ш гезропзе Со Йетагу птета! юпхт (В!апсЬагт! апт1 Соияпь 1996; 'чттап8 ет а1. 1996). ТЬе иае от т!1йегеп6а! Жар!ау Ьаа 1ет1 со йе Ыеп66сасюп от" ьечега! Вепеа !пчо!чей тп сапсег (Ь)ап8 еС а1.
1992; 5а8ег еС а1. 1993), 6(аЬетеь (%ьЬ(о еС а!. 1994), ап6 Ьеагт Йаеаае (Ртапь еС а1. 1994). РеьрПе сЬеье аиссеааея 6тйегепс!а! Йар1ау гешаша а ргоЫешаск шейой!с ь аиасерстППе со а 8.9б Ртогосо! 16: РЯетепг)а1 Р)бр)ау-РСВ 8.97 А сва В СУ1СР|авгп|с йМА су1ор!авгпк йМА --М В ДДДДДДДДДДДДД„в в' ООМА вупалввя млап12 Совглвтгвалг ргипегв Т11НМ = боопвггеапв рпгпег батвв генегве 1гапвспргаве ООМА аул|пав|в а' в ддддддддддддд в м н ттттттттттт СОМА тг|нм 1О-гпег = орв1геапг рггпгег батРЫ|с-"Р|бптп ог |с-вва|бЮР Тас ОМД роГнпгегвве | Рса апгрггггсаггоп ог еасп ООМА роо1 оров пв боопвггеапг рп пвг согпипеб огго васо о1 Фе 24 орвггеапг рггпгегв |дв1 сус|е Ос РСй в' хххххххххх — — — — — — - — - —— и и ттттттттттт РСй вгпр||тгсат|оп |ва пе ргосебоге |ог боопвггеапг рпмег 02 1о 012| в|ес1горьогеис вврага|юл тгадптепт гас|висл впо вптррд|са1юл мнтгтгттпт т пис!еаг гил-оп с|слгпд ~а- вециелс|лд пн тгтгтгтггл Е!С0ЙЕ 8-10 5сЬеп|а|!с Кергевепгаг!Сп ОТ О!1!егер!!а! О!вр!ау 1агае пшпЪег ОГ |есЬп)са1 с)16ки111ев апс) агйсас|я оп1у вогпе оу тнЬкЬ сап Ье е!ишпа|ес1 Ьу соп|го! ехрепгпеп12.
А)1ЬоиВЬ а чету !ага пшпЬег ог рго!ес|а Ьаче Ьееп пп6а|ес1 ив|па с)1йегеп11а! с)1вр!ау, |Ье Ьагчев| оу поче1 депев Ьав Ьееп гайег с)!барро)п6па, апс) |папу агоирв Ьаче аЪапс)опес) йе |есЬпк)ие ш 6 ивгга6оп. 016егеп6а! 41!ар!ау, ав ргевеп|!у ргас6сес1, |в с)ш1е |псараЪ!е оу с)егес11пВ а!1 сР)н!Ав вупйеыгес) |и се112. Р1121, оп1у а Ггасг)оп ОГ |Ье тК!х)А врес)ев 1п а се!1 Ти!6!1в йе сопс6|юпв гес)шгес) 1ог агпр1|6са|юп. рог ап гпрс!х)А |о Ъе агпр!|6ес1 Ъу с)1ууегеп11а! с)1вр1ау, Ь пи|в| Ье аЫе 1о Тост а ЬуЬгЫ нч11Ь а раг6си1аг апсЬогес) 3' рптег апс) сн)й йе агЪ||гагу 5' ргипег.
Риг1Ьеппоге, 1Ь)з 5'-рпт)па я|е пшв| 11е тн)й)п 500 Ьавев оу |Ье ро1у!А) |а!1 и| огс)ег Рог йе а|пр116ес1 ргос)исг |о Ье сбвр1ауес1 оп а сопчеп|юпа1 с1епагиппа ро1уасгу!атЫе це1. 1п сопвес)иепсе, оп1у а виЪвег оу |Ье тй!х)Ав 1п а се11 ну!11 Ъе атр116ес) Ьу а раг6си!аг ра|г ОГ ргппегв. 'ннт11Ь гпов| ра)гв оу ргппегв, Ьегтнееп 10 апс) !00 ЪапсЬ ог" агпр!|6ес1 СРХАв, 100-500 пис1ео|Ыев 1п 1епВТЬ, аге ч)яЫе оп |Ье ае! (Ваиег е| а1. 1993; Ь)апд е| а!. 1993). Весопй, 1Ье атр166са|юп ргосевв 1п РР-РС|с |а еввеп6а!1у Рагтчш)ап ш па1иге. ТЬив, оп1у йове тКЬ!Ав йа| аге сне!1-611ес) Уог гечегве 1гапвспр6оп |ч|11 Ье сор)ес) ейк|еп|1у |то сРЬ!А.
Риппе 1Ье виЪвес!иеп1 РС|с, боте ог" йе геви16пц сРХАв ту|11 Ье тоге е61с)еп11у атр116ес) 1Ьап ойегв. Очег йе соигве оу 30 ог пюге сус!ев ОУ агпр1|6са|юп, йе рори1а|юп ог" сРХАв сап Ье (Я! Ропе| р!е о! йе теасдопв ипс!ет!угпц 00КТ-РСК апа!ув!в. Ас гертевеп12 апу о! 1Ье 1оиг пис!еодс!ев С, А, Т, ог С. 12 сап Ье апу пис!во!где ехсер1 Т.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
