Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 33
Текст из файла (страница 33)
Ог|)егсиц за|пр)ез !п |Ь)з |чау Вгеас(у зипр)с6ез со|прапюп о( йе аисогайоцгарЬзс раис|из. Сотраге йе рассегпз ог Ъапссз оЪса!пес! зч!сЬ еасЬ рпгпег ра|г )тот йе Йггегепс КХА рори1а попа. СЧЬеп а |!Ьгегепс|аПу ехргеззе|( Ьапд ы Ыеп66ей Ь Ь айчзаЫе |о гереа| сЬе ехре|ипепс |о |иа(|е |иге |Ьас |Ье |шс(а! 6п|ппц Ь серго|(пс!Ые. )|!еа(!у, |(Ьгегеп| Ьа|сЬез о( |Ье ||чо ЕС4Аз зЬои!о Ье изей а!|ЬоиВЬ |!из ргесаи|юп и|ау по| ацчауз Ье ргас|каЫе. 14. схесочегу апс! КеаспрН!сабсоп о1 1!се О!йегепсса!!у О!Вр!ауес! с0Ь!Аь У(есочег сагцес Ъапдз ггот йе |!пес! ро1уасгу!атЫе це!. Еау сЬе аисогайоцгат оп сор ог сЬе це! ап|! изе а зогс репе|1 со!!цЬс1у |паг1| сЬе роя6оп ог йе с!ез!гес! Ьап|1 оп сЬе аисогайоцгагп. Сш6пц йгоицЬ сЬе ашогайоцга|п зч!сЬ а с!еап гагог Ыаде, ехс!зе еасЬ сагцес Ъап|! апс( сЬе ассасЬес( 'зз|Ьастап ЗММ рарег.
5оаЬ еасЬ з1|чег ог" с)г!ед це1!рарег очегп!цЬс ас гооп| сегпрегасиге |и а зерагасе 0.5-п|1 иисго6лце сиЬе сопсашшц 50 )с! ог зсеп1е Н,О. Ргогнсо! !6: Рфегепт!а! РЬР!ау-РСЯ 8.105 16. Рипссиге йе Ьопош оЕ еасЬ 0.5-ш! сиЬе тччсЬ а япа!1-Каи8е пеес!1е. Р!асе еасЬ рипсшгес1 сиЪе !пят(е а 1.5-ш! ш!сгобт8е шЬе.
Сепспй8е сЬе сиЬеа Еог 20 аесопсЬ со сгапаЕег йе е1иасе со сЬе 1аг8ег сиЪе. Ргасап1 йе атпр!т6са6оп сиЪе сопсып!08 йе геят1ие оЕ сЬе Ъйзасшап ЗММ рарег апт1 ро1уасгу!ашЫе. 1 7. АшрИу йе е!шет1 Ега8шепс гп а геас6оп сон!а!и!п8 сЬе Ео!1оьч!08: сох атпр!ЬПсасюн ЬнЕЕег 2 н! РС4А е!нтет) Егот ро!уасгу!атЫе Пе! 3 н! агЬтсгагу 5' о88оннс!еотЫе рпнтег 2 н) ансЬопн8 3' оППоннс!еотЫе ргннег 2 н! 20 тнМ ао!нПон оЕ Еонг тс)4ТРь (рН 7.0) ! тт! н2 о 9.5 тт! 5 нн)та!н! Тат) тЬеппонаЫе Р)4А ро!утегаае 2 нн)сь То Еаст!Пасе с!ошп8 оЕ тЬе Р)4А Егахтепт, ме а сЬегтотсаЫе Р)4А ро!утегаяе тюсЬ аь Тат) йас р!асеа а г)А геак)не ас сЬе 3' ент) оЕ йе атрПЕтетс Р)4А. 33Ъегечег роьяЫе, нее йе сох агар!тйсасюн Ьнссег варрПет) Ьу сЬе тнаннуасснгег оЕ йе Таа РЫА ро!утегаае, 18.
1Е йе сЬеппа1 сус1ег !5 пос ттссет! ъч!сЬ а Ьеасег!!Ы, очейау йе геас6оп ш!хсигеа чч!СЬ 1 т!гор (-50 )т1) оЕ 1!8ЬС пипега1 от1. Р!асе йе СиЪеа тп а СЬеппа1 сус1ег. 19. АшрИу йе тшс1ек асЫа ияп8 йе с1епасига6оп, аппеа!!08, апд ро1утпепгасюп с!шее апс1 сешрегасигеа 1!асес( ш йе саЫе. Ро!утнепгасюн аЬон!д Ье саггсет) онс Еог ! ннннте Еог счету !000 Ьр оЕ !енхсЬ оЕ сЬе сагхес Р)4А.
Моет йепна! сус!ега Ьаче ан ент) гонсше ш тчЬссЬ йе атнрПЕтет) катр!еа аге )нснЪасет) аг 4'С ннП! йеу аге геточеа Егогн тЬе тнасЬше. 5атр!еа сан Ье !еЕг очаги!8Ьс ас сЫа сегнрегашге, Ьнт аЬон!0 Ье атогетс тЬегеаугег ас — 20'С 20. Е56гпаСе йе сопсептгаСюп оуйе геашр1!6ет( РЫА Ега8шепт Ьу е!есСгорЬогеяь о( 5 — 10% оЕ СЬе геас6оп йгоицЬ а 1% (сч)ч) ацагоае Ке!. 21. 1Е пипега1 о!1 тчаз иает1 со очег1ау сЬе геас6оп (5сер !8), гетпоче сЬе от! Егогп йе аагпр1е Ьу ехсгас6оп нт!й ! 50 )т! оЕ сЫогоЕопп. ТЬе ат)неона рЬаье, тчЫсЬ санга)нь сЬе атпр!тйед Р)4А, тчП! Еопп а нтссеПе пеаг сЬе нтешасия ТЬе тнтсеПе сан Ье !гана(еггетс то а Егер снЬе юнЬ ан ансогнаис пнсгортрепе. А !МРОКТАХТ Оо пос аиегпрт сйогосогпт ехсгасПопа сн ннсгоПсег р!атея ТЬе р!ааПс наес) )и сЬеье р!асеа ь пос геа)асан! со ог8апсс ао!чепся 22.
1!Пасе йе РХА !псо а чессог йас Ьаа Ъееп са!!ес1 ичсЬ т)Т (е.8., РСЕМ Т чессог Еготп Рготпе8а) (р!еаае аее Ргососо1 5) апс! сгапаЕогш Е. соП тчпЬ а1нртош оЕ сЬе 1!Пас!оп геас6оп. 23. 1501асе р!аяпЫ РХА Егош ях ог пюге гесошЬ!панса апт! сошраге сЬе ягеа оЕ йе !паегса ге!еаьет( Ъу геьгг!ст!оп епгуше т(!ПеаС!оп. ТЬе ает)пенсе оЕ тЬе сньегс РЫА сан Ье еасаЫ!аЬет) Ьу нян8 ннгчегаа! ргстега тЬас Ынт) то тЬе ПанЫн8 ге8)она оЕ йе чессог. ТЬеае о88оннс!еот)т)еа сан а!ьо Ье стает) аа рпгнел то сЬес)т тЬе яге оЕ йе !пьется Ьу РСП (р!еаье аее ргососо! ! 2).
Ес Ь штрогсанс со Ьо!аге ант) ьет)пенсе тпоге сЬап оне р!аяпЫ гесотнЬтпапс Еготп тЬе !т8атюн геасПон Ьесаые сЬеге тау Ьаче Ьеен тоге сЬан оне РХА Егахтенс тн йе ь!Ые ехссает) Кот йе 8е!. Сотнраге йе сР)4А а!тех антс ьет)ненсеь то еасЬ ойег анд го йод ш тЬе чапаю т)асаЬааеа. 24. Соп6пп сЬе т!!ЕЕегепс!а1 ехргеаяоп оЕ а сапдЫасе сРЫАЕшКХА ш аа шапу тчауа аа роаяЪ|е, шс1исбп8 погсЬегп ЬуЬг!с!!гас!оп (СЬарсег 7, Ргососо1 8), Крахе ргосессюп (СЬарсег 7, Ргососо! 11), ог циапйа6че РСК (Ргососо! 15 оЕ СЬ!а сЬарсег).
1п яСи шКХА ЬуЬпсбгасюп сап Ье пает( со !оса!!ге йе сгапьсг!Рс со а т!!аеаьет! ог дече1ор!08 с!55не. 8 10б СБаргет 8: 1п Тт|гто Атр((рсаг|оп о! ОХА Ьу РСК То |псгеаке (йе сЬапсек о! киссекк чч(1Ь 00-РСК: ° Еосик оп сОЫА ргодис(к (Ьа1 кйои ай-ог-попе д)йегепсек )и 1Ье|г ехргеккюп раиетк |п (Ье тКЫА рори|айопк Ыйпд сотрагед. Аррагеп( <)иапй(айне дй(егепсек |п ехргеккюп аге Бег(иепйу | Бе геки)1 о! агй(ас(к апг! найапек о( РСК ог кйокупсгак(ек о! кагпрйпй. Мапу ай-ог-попе д)((егепсек, Ьоъченег, 1игп ои( (о Ье геа|, |.е., (Ьеу сап Ье сопйгтед Ьу юс|ерепдеп( те(ЬосЬ кисЬ ак попЬет ЬуЬг(д|га6оп. ° уЧЬегечег рокк(Ые, ьо|а(е 1Ье К)к)А икед Ьг 00-РСК (гого риге сей рори|айопк.
Сопк(к1епг раиетк о! д)йегепйа! Иепе ехргекк)оп сап Ье оЬЬйпед Ьу согпраппй К)к)Ак 'во|а(ед (тот си|(игед таттайап сейк дедчед йот а к)пе)е сей (уре (е.ц., ерйЬейа). Мок( иккиек аге дупат)с апс! согпр|ех апд тау гекропд (о рЬук)о(ой(са! сЬапцек Ьу а(1еппй (Ье га(ю о( опе сей (уре (о апо(Ьег. ТЫк гекропке гпау арреаг )и 00-РСК ак а сЬапйе )и упе аррагеп( аЬипдапсе о! тКЫАк, Ьи( |п геай(у, )1 (к по(. ТЬе кате сачеа1 Ьо|сЬ ъчЬеп сотраг)пц поппа! апд сапсегоик йккиек Ьесаике пюк1|игпоп'- Иепек)к (пчо(чек 1гапк(огтайоп о! а к(пй(е сей (уре, (ойоигед Ьу ехрапкюп апд гарИ ечо(ийоп о! 1Ье рори|а1юп. ° )ик( аЬои1 апу |пкий 1о сейк |еагЬ (о д(((егепйа! ехргеккюп о! герейве кес(иепсек |п 1Ье Иепогпе, (пс(ид(пй 1гапкрокаЫе е(етеп(к, 5)ЙЕ апд Ейк)Е кес|иепсек, епдодепоик геггочгикек, апс| о(йег аккодед герейве 0)4Ак.
|п ток( |пк1апсек, И и4И ргоче еагегпе)у д((йси)1 (о ге|а1е 1Ье ехргекк)оп о( кисЬ кес(иепсек (о (Ье Ью)ойу ог ра(Ьо|ойу Ыйпй к(исйед. Атрййсайоп о! гереййче 0)к(А кес|иепсек сап аЬо Ье киЬк(апйайу гедисес| Ьу епкиг(пц (Ьа( (Ье к(аг6пц тК)чА кагпр|е 'ь (гее (гогп соп(агпюайоп Ьу (гасе атоип(к о! Испит(с 0)4А (р|еаке кее (Ье еп1гу оп ОЫаке ! |и Аррепд(х 4). ° (Ипоге)д|ксагд ай с0(к)Ак (депййед Ьу 00-РСК (Ьа1 до по1 ргодисе а к(арпа! оп а пот(Ьегп Ыо( ог |п ап К)к)аке рго(есйоп аккау. ТЬе ог)8(п(к) о! !Беке ОЫАк )к ип)споччп. РегЬарк |йеу согпе (гогп (очн аЬипс|апсе гоКХАк, (тот )п(юпк, ог !гого (гайтеп1к о! репою|с ОНА 1Ьа( соп(апхпа1е 1Ье ргерага6опк о! К)х(А 'н)гЬа1енег |Бей ргонепапсе, (Ье д)йегепйа! ехргеккюп о! 1Ьеке К)к)Ак саппо1 Ье сопйппед апд уйеге )к по геакоп (о к|иду упет (ипЬег.
1 сап ~отй|не А)(тед Майе)!от Бан|пд тнеп сед дупатп |ге, Ьиг оп!у а (тепд |п Бит ап 1отт сои(д Бане |пь епгсд Ьйе гч'ойе! Рпге, Сеогйе Вегпагд 5Ьав 1и)огтаг)оп Раве!в 8.107 Мх)ЕТ!РЕЕХ РСК Ми16Р1ех РСК Ь |Ье сегт ыед тчЬеп итоге сЬап опе ра|г оЕ рптегв Ь ыей ш а ро1утегаве сЬа|п геассюп. ТЬе Воа! оЕ пш16Р1ех РСК ь со атр)1Еу вечега! веВтепсв оЕ сагаес Е|ЫА яти1сапеоив1у апд сЬегеЬу со сопвегче сегпр1асе Ет)4А, ваче типе, апй т)п!т!те ехрепве. ТЬе у|е!й оЕ еасЬ ап|р1|6ей ргойисс Ь гейисей 1п ргорогс|оп со йе пшпЬег оЕ рптег раста |пс!идей ш сЬе геасс!оп. Ночтечег, ав а аепега1 ги1е, ир со е)аЬ| рптег раста сап Ье ые|1 в!пш!сапеоив!у ш а всапйаг|1 РСК ЬеЕоге |Ье у)еЫ оЕ еасЬ атпр!16ей ргойисс ь гейисе|1 со сЬе ро!пс оЕ!пияЫ!иу оп ап ааагове ае1.
С)в!от!ипате!у, ти16Р1ех РСК Ь чету спс)ту со вес ир. С|вас саге тиас Ье са)теп со епв иге сЬас а11 оЕ сЬе ргипегв ш |Ье геассюп Лаче арргохппасе!у тЬе ватпе тердо сетпрегасиге, сЬас |Ье ргипегв аге ип16те!у со штегасс чдсЬ опе апосЬег, апй йас йе атр!16ей ргодиссв аге оЕ арргохипасе1у йе вате яхе Лис сап Ье ипатЬ)циоив1у йьсшаи)вЬей Еготп опе апойег Ьу Ве! е1ессгорЬогеяв. ТЬе пш16Р1ех геассюп пшвс сЬеп Ъе орс)т)гей ав Ео!1оия ° СЬес1| сЬас а11 Сагает 1ос| сап Ье атр1|6ед ербс|еп|1у |п верагаСе геасСюпв ияпц йе вате РСК ргоВгагп. ° ТКгасе сЬе атпоипс оЕ еасЬ рпгпег раи со асЫече тахипшп агпр1|6садоп 1п верагасе геассюпв ияпВ |Ье вап|е РСК ргоагатп ап|1 геассюп сопй)с)опв. ° Ва!апсе сЬе атоипс оЕ еасЬ рптпег ра|г ш |Ье пш16Р1ех геассюп со асЫече ассерсаЫе агпр116садоп оЕ а11 сагаес геа)опв.
ТЬе!ая тес)шге|пепс ыиа11у саивев сЬе тповс ргоЫетпв. Ргет)иепйу, опе ог свчо геа)опв оЕ |Ье сагаес О)в!А у|е1й 1Ь|1е ог по агпр1|6ей ргойисс, тчЬегеав аБ осЬег ргипег рапи ЬеЬаче регЕес|1у. ТЬе Ъея орс|оп ь со шсгеаве ргоВгеыче!у сЬе совсепсгасюп оЕ |Ье теса)сКгапс рг! п|ег ра!гв |чЫ!е тейпе!пц йе совсепсгасюп оЕ йе тче11-ЬеЬачей рптег ра|гв. СопвЫег ай)пасшая |Ье геассюв совсбсюпв оп1у 1Е сЬь всгасеЕсу Еа|!в; Еог ехатпр!е, а!сег йе совсевсгасюы ог МВтт ог КС! ш йе геасдоп т1хсиге.
Нотчечег, |Е йе у|еЫв оЕ сЬе ти!- 6Р1ех геас6оп аге вувсетаска!!у Ь|аве|1 1и Еачог оЕ!опаег РСК ргойиссв, сЬе Ьевс орсюп ь со георг)т)хе сЬе атошн оЕ еасЬ рпгпег ра1г |п а вепев оЕ пш!6Р1ех геассюпв сопсаш)па Епсгеаве|1 сопсепсгасюпв оЕ КС! 11.0 — 2.0-Ео1д) апд а сопяапт сопсепсгасюп оЕ МВт' 115 тм). Сопчегве!у, 1Е тЬе у!е!йв аге Ъ|авед ш Еачог оЕ япа)!ег РСК ргот)исся )псгеаве йе сопсепсга6оп оЕ Мц ргоагеввтче!у Еир со 45 тсчс) |чЬКе та)псаш!пц а сопвсапс сопсевсгапов оЕ КС!. !Е а!! оЕ |Ье ргойись аге роог!у атпр!|бе|1, сгу шсгеав)па сЬе сопсепсгасюп оЕ сеп|р!асс ап|1 сЬегтояаЫе Р)4А ро!утегаве.
1Е по |трточетепс 1в посей, |псгеаве сЬе сопсепсгас|оп оЕ а!1 ргипег раста Ьу а Еассог оЕ 2 апй ые а соисЬйовчп ргоагат ш |чЬтсЬ |Ье аппеа)ша апй ехсепвюп сетпрегасигев аге йесгеавей ш 2 С |птегча1в Ер!еаве вее йе ш!огтпайоп рапе! оп ТО!)СНОО)А|Ы РСК). 1Е попврес16с атпр116сасюп ь а ргоЫегп, сгу со ЫепНЕу йе ди1!су ргипег ра)гв Ьу вессша ир апойег вепев оЕ атр1|6сасюп геассюпв еасЬ сопсаш)па оп1у опе ргипег ра|г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
