Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 36
Текст из файла (страница 36)
Но|чечег, |ЬЬ туре оЕ ехрептепс ь Ъо|Ь!аЬогю|ь апй |пеЕ6с!епс ип!ея а крее(а1 суре оЕ сЬегта( сус1ег (е.5., 5сгаса5епеЬ КоЬосус!ег) Ь ача|!аЫе. Рог гпокс (очек|!Васогя а Ьестег а!сегпасйе ь соисЬ|1о|чп РСК (Роп ес а!. ! 991; Ресегкоп апй Трап 1993; Коих 1995; Нес(|ег ап|1 Коих 1996; Коих апй Нес1|ег 1997), |и тчЫсЬ а гапВе оЕ аппеа1(п5 сетрегасигек аге ис!Вхей (п а к!с|5!е РСК.
1п соисЬйо|чп РСК, |Ье аппеабпц сен|регасиге йипп5 йе 6гя ьчо сус1ек оЕ атрВЕ|сасюп ь кес -3 С аЬоче |Ье са(си1асей те!йпд сегпрегашге оЕ а рег(есс ЬуЪгЫ Еоппей Ьеьчееп сЬе п|окс СС-псЬ о65опис!еосЫе ргнпег ш йе геассюп апй (ск сагВес РХА. ТЬе аппеа1!пц се|прегасиге !к сЬеп гейисей Ьу опе сепсг!Вгайе йеВгее Еог еасЬ ра|г оЕ киЬкестиепс сус1ек. Ас югпе ро|пс, а сетрегасиге реппьяче Еог крес|6с рйпнп5 |лП Ье геасЬей апй атр66сасюп оЕ йе сагВес ке|р|епсе чй11 Ье5!и. ТЬе опкес от попкрес|6с а|пр!|- 6сасюп |ч|11 Ье йе!ауей Еог кечега) а|ЫЬюпа( сус!ек оп|6 йе аппеа1!пВ сегпрегас|не Ьак Ьееп !отчегей со сЬе ро|пс |чЬеге попкрес|6с рг!т!п5 сап оссиг.
Но|чечег, Ьу сЬск Вгпе, сЬе крес|6с агпр1|6са6оп ргойисс ч !11 Ьаче ЬеВепюпу очес йе геассюп апй |ч(1! еЕЕесс(че!у кирргея йе ассшпи!айоп оЕ попкрес|6с ашр!16са6оп рго|Ьксск. 1п йеогу, а рег(есс!у гпассЬей рг(тег-сагВес ЬуЬгЫ кч!1! Ьаче а 1024-Ео1й айчапсаВе очег шЬ- п|ассЬей ЬуЬгЫк |чЛоке н|е!ВпВ сегпрегасиге ь 5 С!отчет, '1оисЬйо|чп РСК |Ьегесоге 8|чек а ке1есс|че айчапсаце со агпр66сасюп ргойись Вепегасей Егогп соггесс!у ргнпей геасйопк.
!п оиг 1аЬогасогу, соисЬ- йо|чп РСК ь сЬе с)и!с(секс гпесЬос! со орснпйе РСКк ъчЬеп ияпВ пе|ч сотЬ|пайопк оЕ о115опис1еосЫек апй сен|р!асек, апй (с, соцесЬег |ч|й Ьос яагс РСК ог йе айгбсюп оЕ СС-Ме!с, ь а гетейу оЕ 6гкс гекогс тчЬеп (асей чйй ргоЫень ысЬ ак шеЕВс(епс рг!пнпВ, тЬРПсп|п5, апй Еоппайоп оЕ ргнпегобтегк, Мойегп йегта1 сус1егк кисЬ ак М! КекеагсЬ гпойе1 РТС !00, РегЫп-Е!п|ег пюйе1 9600, апй МаЯег Сус!ег (Еррепйогу) аге еая!у ргоцгагпгпей со ассоннпойасе соисЬйо|чп РСК. Но|чечег, ш коте сурек оЕ Ьаяс йеггпа( сус1егк, ргоВгатт(п5 оЕ а рго5гея|че гейиссюп оЕ аппеа!шВ се|прегасиге Ьесогпек а и!ЕЛ|- таге. ЕпсбчЫиа! 6!ек Еог еасЬ ра(г оЕ сус!ек пшкс Ье кейа!1у Вп(сей шсо а кепек ик!п5 ехсепяче согшпапйк, а ргосея |Ьас ь 1аЬопось апй и6!Ьек 1аг5е атоипь оЕ ргоВгатт!п5 красе.
А рокяЫе согпрготЬе ь со |ье Ее|чег Ьис ксеерег сен|регасиге ксерк со 1ш1| йе шК|а! апй 6па1 аппеа1!пВ сеп|регасигек (Коих 1995; Нес!сег апй Коих 1996). 1п енЬег саке, соисЬйо|чп РСК ъчог1|к Ъекс ш соп!шюйоп ичсЬ сесЬпн!иек кисЬ ак Ьос ксагс РСК ог Ьоояег РСК |чЬ(сЬ 1пшс тЬе оррогсипЫек Еог Ьой попкрес16с Ь(пй!п5 Ъеьчееп о65опис1еосЫе ргнпегк апй йе сегпр!ате РНА апй Еог !оппайоп оЕ ргнпег йтегк (р1еаке кее сЬе |пЕоппасюп ране! оп НОТ 5ТАКТ РСК). Зпуоггпас(оп Рапе!к В.1!3 ия ОЕ ПЧОЯМЕ ПЧ ОЕСНЧЕКАТЕ 1*ООЫ ОЕ ОИСОМЕ)СИОт ОЮ ЫЕО ЕОК РСК Ве1окч (к а Ья о(гесопнпепс1ес1 сос(опк Гог с1еяцпшц о!(цопис1еогЫек йаг аге го Ъе окей гог ксгеепшц рп'- гпаге сРХА ог шапипа!гап сРХА!1Ъгалек апс( йаг сопгаш шояпе аг роягюпк ог" ашЪгцшгу. ТЬе гесогп- шепдагюпк га)се шго ассоипг гЬе па!ига! икаце ог" сос)опк ш Ьшпап цепек апс) гЬе (асг йаг йе кес)иепсе Срб (к ипс(еггергекепсес( ш Ьишап Р)к)А.
Апипо АсЫ Сог)оп '11 йе Вгя пис1еогЫе оС йе киссеей1пц соооп ы С, ые Т сп гЬе госсе рояцоп. к!1 гЬе Йлг пис!еогЫе ос гЬе киссеегциц согСоп Ь С, ике 1 сп гЬе гЫгсС роягюп. 'Тгу го ачоЫ апипо асЫк чпгЬ ях сок!пик В аг аЦ раясЫе. (НЧ1ЧЕКБАЕ РК!МЕКК ()п(чегка! ргипегк аге купгЬейс о!(цопис!еогЫек гЬаг аппеа1 го опе яде ог сЬе огЬег ог" с!опшц ягек ш р1ак- шЫ, рЬацешЫ, ЬасгегюрЬаце Х, апг) ЬасгепорЬаце М13 чесгогк. ТЬеке рпшегк шау Ье окей го агпрИу Ьу рбй ог со кес(иепсе Ъу гЬе сЫеоху шегЬос( апу кецшепг ог" гоге(цп РЫА йаг Ьак Ьееп с!опес1 шго йеке ыгек. 1п асЫЬюп го сопчепгюпа1 япц!е-к!гипс!ес( гегпр!агек, ишчегка! рпгпегк сап Ье икес1 ш кес)иепсшц ргососо1к гЬаг Ьаче Ъееп орг(ш(сес( (ог с(оиЫе-кггапдес( Р)к(А гепгр!агек.
()п(чегка! ргппегк аге сопипегс(а!!у ача(!аЫе гог а цгеаг чапеку ог" чесгогк. ТЬе 1(кгк о(ргипегк ргочЫ- ес( ш гЬе го11омппц саЫек, кчЫсЬ аге Ъу по гпеапк согпргеЬепяче, сочег оп1у гЬе пюкг рори1аг кгапс)агс! чессогк. 'гЧе гесопппепс! гЬаг шчекицагогк счЬо сч(кЬ го агпрИу ог го кес)иепсе (пкеггк с!опес( 1пго гпоге екогепс чессогк, раггки1аг1у сопипегсы1 ехргекяоп чесгогя го геас) гЬе ге!ечапг сага1оця Мокс гекропяЫе сошрашек погч ке!1 ипсчегка! рпгпегк гог ике кчЬЬ йесг оъчп крее(а1(хес( чесгогк. А (А1а) С (Сук) Р (Акр) Е (б!и) Р (РЬе) (б)у) Н (НЬ) 1 (1ко) К (Еук) 1, (Ееи) М (Мес) Х (Акп) Р (Рго) () (б( ) Е (Агц) (Бег) Т (ТЬг) Ч (Ча!) 1Ч (Тгр) У (Туг) СС! ТСС' САТ СА! бб! САС' АТ! АА1 СТ!к АТС ААС' СС! СА! Сб1' ТССЬ' АС! бТ1 Тбб ТАС' Тп/отта(]оп Раве!з 8.11.
Ргппегз 1ог С!оп]пц 518ез |п Вас1ет]орйаце МТ 3/рЕ)С ЧесЕогз ТаЫе 8-7 ргоч|йез а 181 о/ рпшегз | Ьаг сап Ъе изе|$1ог акр]$/у(пй ог (ог зет)лепт|ай гагйег $3]т]Аз с1опе| |пса М13/р(/С чес(огз. ТЬе ассошрапушй ййиге (Е(Вите 8-12) й1из(га(ез (Ье а1|йпгпепо о/ |Ье (Ьез ргппег зет]иепсез а!опй 1Ье ЬассепорЬайе ог р1аып|й зет]иепсе. ТЬезе рпгпегз аге зо]й Ьу Ь)етч Епй!ап| В|о1аЬз, й.ош ъчйозе сага!ой $Ье ййиге Ь гергоейтсей. А герог( риЫ!зйет] |и тъ/ис/е(с Ас|с/з /ГезеатсЬ т|езспЬез а р(/С$8 чапап1 |йа( Ь ргезеп( |п гпапу |аЬога1опез (ЕоЬе1 ес а!.
1989). ТЬе пюга(юп солгав(з о1 а с]е]ейоп о1 (Ье су(ойле пис!ео(Ые 1гогп 1Ье зесолг1 сот]оп о1 (Ье /ас2 йепе, )из( ирз(геатп оПЬе ро!уйп1сег гей)оп. (3|(йси]йез агье ъч тел зег]иепс(пй еййт рпгпегз |Ьа( очег|ар |й~з п|и(айоп. ЕЗЬ)А зет]иепс(пй ъчвйй (Ыз р(/С! 8 пти(ап( ъч|(Ь Ь)еъч Епй]але] Вю|аЬз' течетзе зес(иепс(пц рпгпег 120Ь а 16 тпег ъчйозе 3 ' ел|1 очег!арз |йе пти(акоп, Ьаз Ьееп 2$|(йси]$ ечеп ъчЬеп из)пй сопсйюпз о1 1отч з(т(пйепсу. То ачо|г( апу ргоЫешз, $4ЕВ гесогпшепт]з из(пй (Ье гечегзе зее]иепс(пй рпшег 1233, а 24- п|ег!оса(ет$ )шшес]!а(е)у ирз(геатп (5') о1 (Ье роз)1]оп о1 рпгпег 120!. Рптпег 1201 сап зй(1 Ье изет] ъм1Ь аП з!ш(]аг /ас2 чес|огз, (пс!иб(лй М]3 чес|огз апс( о(Ьег р()с чес|огз (ог м|ЫсЬ йв8 2$е|е(юл Ьаз по( Ьееп 1оип|$.
А 1олчагг] рпгпег (5'ССТПТСССАСТСАССАСС) 1Ьа1 Ь!пгЬ (о Ьас(ег(орйайе М13/р()с чес1огз а| а гей)оп — 40 пис!ео181ез ирз(геагп о1 |Ье ро!у!$п$|ег Ьаз Ьееп герог|е|1 (о рптпе зригюиз!у 1готп а з|(е (л (Ье чес|от зет(иепсез (5(ейепз е1 а!. 1993). ТЫз ргоЫеп| сал Ье ачо|т(ет] Ьу из(пй а рпптег (5'САССАССТТСТААААССАС) (Ьа( Ь~птЬ 1о а гей!оп — 29 пис]еойг]ез ирз1геаш о1 1Ье ро1у||п$сег.
ТАВЕЕ 8-7 Рг||пегз (ог М13/РЕ)с 0|аест|оег СООе Ое Рагмггъс 5еоиев|се Ое Рюмеа ЧестОа (отъчагт] 1огтваге] /огтчагд гечегзе гечегзс /огюаге1 /огтчагй Евт рптвег |ввр рвяйввь, р)свю Еее |Ье свггеьрвва|вз свесь |и 8|артс 8- | 2. мва|ттеа, п|ть реппивюв, (твш хеп евз)вва Вю|вьь, |вс. (о|998/99 |Реп ев8)авд Вю!вьв св|5|вз, р. 1 |6) 5 1 5 5 | К К | ААЕАвсь твАсс Ать тсвтятвтютвтввмпвтвмссюятмсмптслсясявв мсявст юяссимпяси тсмвстсвьь сссввввятсстст~ вяв свясствсявввттвсмпьтввсютввссв сютпясмсв СМСЯСЯССПМСАС ттссмсстьяссвьмвс Е Н кр в н| 5 А РЬ 25 р сюмстмсссп па 2 САВСЯСИАСССП Пь св в ствввммссст з сюсястмссстптвс * т рр 5 Я 1 2 ЮСЬЬММСА ПЮАСЯСЯВЬЯ 4 врк! 5 Н| Кр 5 | Е Р| тсврввттвтюввмттвтвюсыятмсмптвАсясяввямсявстятвАссятвАтвсвссмвстюсмвсствсмюсвАстстявяымссссвввмссвявюсвмттсястыссвтсвтттвсмсвтс*твястввэвмссст смсясясствясяс ,спмвты сссвсмс к вв т" 5 тв | 5 юр|зтриот 9 Е161$|ЕЕ 8-12 Ро|81юпз о1 5уп1Ьейс Рг|шегз ()зеи (о Ое1егш|пе 1Ье 5ее(иепсе о1 0(ъ(А С1опее$ |п(о Чапоиз 5$(е: о1 шр18 ап|$ шр19 Гог зреойс рптпег зее]иепсез, р|еазе зее ТаЫе 8-7.
(Мос(!йег], ъчв(Ь регш(зз)оп, 1гогп (я)еит Епй1апг( Вю|аЬз, |пс. 1©1998/9! Ь)еъчт Епй(апг] Вю1аЬз Са(8!ой, р. 116].) М13/р(/С иппегза! рг|шег АМ ! 3/р(/С М)З/рВС М)З/р(/С М)З/рсС шр19 81320 рплтсг глр18 ВР29 ргппег 5'21(6ТААААС6АС66ССА6Т)З' 5'й(6ТТТТСССА6ТСАС6АС) 3' 5'2$(С6ССА666ТТТТСССА6ТСАС6АС)3' 5'2$(ААСА6СТАТ6АССАТ6)З' 5'2$(А6666АТААСААТТТСАСАСА66А)3' 5'2$(С6АС66ССА6Т6ААТТСССС)З' 5'2$(С6АС66ССАСТСССААССТТТТТТТТТТТ)З' ВЛ16 СЬаргег8:!и Ч(гчсАтр)фса((оп оу)3ХА ЬуРСтт Ргппега Еог С)оп)пе !п Вас1ег)орЬаде ).д110 апг! ).2111 Чес1ога ТаЫе 8-8 ргочгйеа а )!81 ог" рг(тета (Ьаг сап Ье саед уог акр))ту)п8 ог )ог ае9оепс)п8 гаг8ег ОХАЕ с)апет) тпсо ЬасгепорЬа8е )81 ! 0 апт) Х8(! ! чесгоге. ТЬе ассоптрапу)п8 88оге (Е)8пге 8-13) )))иаггагеа 1Ье !осайопе о( 1Ье айса соггеаропсйп8 го ейеае рптпег ает)пепсеа оп 1Ье ЬасгепорЬа8е Вепоше.
ТЬеае рпшеге аге Ео)8 Ьу Хетч Еп8)апд В)о)аЬЕ, тгош тчЬоае сага!о8 ТЬе 88пге Ь гергодпсес). ТАВЕЕ 8-8 Рпшег 5ег)пепсеа 1ог Вас(ег)орЬайе ЯВИВ апг! )ВИ1 ОеаЕСТЮте Ое Рагмгюо ЧеСтОа СООЕ 5ее)!те!чсе Ое Ргамеа Рот ртаоет тьер роятюпа р)ееее еее тЬе соттеероагйаа седее )ь Р)аоте 8-! 3. Мое)Вес), те(тЬ Рспатпюгп (того Ггепе ЕЯВ)пас) Вю)аЬе (Ю! 998/99 Ьгете Еоа)аьс) Вю)пЬЕ Сага)оа, Р. 117). А Хд(1О !ей Ь527 Ь) т'9 "1 Есора !пий484 1 таете рпве Га~ па Есоо пасматтспасстаапма сттттаеасматтспасстааттмотссмастамттстптостпппссстаам*ямтестсптмассксстст тааопссттстпптапат ттс топо оп ~ е 2 В Хдп1 (ей Е с)857 8100 т!9П! ЕсоЕ)! lас2 течегве 1опчагб 3 Где е т Ппп ее (топеепГ а Есаа! аатоасьесспстсстаьжсссо аотаасапсаястсстаапосссотспатятсоасаампсспастапасассаатсастпсспппсспаттаатстаататсем аа Рпе о! 4 Е!СЕ)ВЕ 8-13 Роа!1!опа о1 5уп(Ье1!с Ргипега Е)аег! 1о Ое(егпппе 1Ье 5ег!оепсе о1 ОЫА С!опег! !п(о Чапопа 5!1еа о1 ХАМИВ апт! )ВИ1 рог арес)1)с рпгпег аег)оепсеа, р!еаае аее ТаЫе 8-8.
(Мог))()ег), чт)(Ь регш)88)оп, (тогп Ыееч ЕЯВ!апт! Вгп)аь, )пс. (©1998/99 Ыетч Еп8)апг) Вго)аЬЕ Са1а)оа, р. 117!.) 48!О )ей апп ХВГ 10 г)8ЬГ апп ХВг)1 )ей апп 48Г! ! г)ВЬГ апп (огччагт) течете (огюагс) гечегее 5'т)(АССААСТТСАСССТ66ТТАА6)3' 5'д(СТ"!АТСА6еТАТТТСТТССА666ТА) 3' 5'е)(66Т66ССАССАСТССТ66АСССС6)3' 5'т)(ТТСАСАССАСАССААСТ66ТААТ6)3' ссЕГЕссЕ)Ь)СЕй 8.118 СЬарсег 8| 1п Ъ'с(го Атр((у|гас(оп оу УМА Ьу РСК АЬЬоп А, 1996.
КосЬе Еасеь сЬаг8еь очег Тас) расепс с1аип. №шге 382| 660. Ада!! Х., Ко Т., Ко8а С,, Кьо К., ба1|аЫ у., апд Яио1|а|ча К. 1995. Р!ЕЕегепс!а! йьр!ау апа1уяя оЕ 8епе ехргеыюп !п дече!ор|п8 етЪгуоь оГ Хепориз 1аеиз. В!ос16т. В!орЬуь, Асса 1262: 43 — 51. АЬоКаь Н. апд ЕгИо!а М.!. 1993, 1псегЕегепсе оЕ РСК япрВВса6оп Ьу сЬе ро!уапипеь, ьрегпипе апс1 ьрепшйпе. РСК МейогЬ Арр!. 3: 65 — 68. А|е11о 1..Р., КоЬлпшп 68,, Ып УЧ|., ЬВьЬю У., апд Кш8 6.1..
1994, !деп68сасюп оГ пш16р!е 8епеь ш Ьойпе ге6па! репсусек а!сегед Ьу ехрошге со е!ечасед 1ече1ь оГ 81исоье Ьу ияп8 тКХА 6!ГЕегепс!а! Йьр!ау. Ргос. №К Асад. 5с|. 91: 6231-6235. Арсе А.Х. апд ЯеЪегс Р.Р. 1993. АпсЬог-!!Васед сРМА !|Ьгапеь: А сесЬп!с)ие Гог 8епега6п8 а сРХА !|Ьгагу Еог |Ье итипейасе с1опш8 о( сЬе 5' епдь оЕ тКХАь. В!оТесЬпи)иез 15| 890— 893. Аь!ашйь С. апд де !оп8 Рй 1990. Н8асюп-(пдереп|1епс с1оп!п8 оГ РСК ргосЬлсь (1.!С-РСК).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
