Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 35
Текст из файла (страница 35)
ТЬе ъчах во!Ыг6ев оп соо!шВ апъ) сопбпев йе геадепгв го лЬе Ьоыогп оЕ гЬе гнЬе. ТЬе гетаибпц сотропепгв оЕ ЕЬе геасбоп аге ЕЬеп т(хес) оп гор оЕ йе ъчах Ьагпег. Елнг(пд гЬе депагнгабоп вгер оЕ йе 6гя сус!е оЕ РСВ, 1Ье ъчах Ьагпег гпеЬв, а! (оъч(па йе сотропепь оЕ йе геас6оп го гпегае. ТЬе те!лег) ъчах 6оаь ъо гЬе гор оЕ ъЬе геасгюп пихгиге ъчЬеге 6 поъч ась ав а Ьагггег го ечарога6оп.
Маге евогепс час(а гъ!в оЕ Ьог впагь РСЕ шс1нъ)е ЕЬе нве о( пенгга1ышц пюпос!опа1 апВЬосбев го (пЬгЬ- 6 ро!уплегаве ас6чбу ъ)иг(па йе аяетЫу агЫ ъчаггп-ир РЬаве оЕ гЬе геасгюпв, 'ъъ0ъеп ЕЬе гепърегагиге ъпсгеавев, йе апг)Ьоъ)у ъ()ввос)алев Егопь йе епхуте апъ) ь шасг)чагег( ъ)иг(па йе ъ)епагнгагюп вгер оЕ йе бгя сус1е оЕ РСВ (Ке!!оаа ег а1. !994). Ро!угпегаве-апглЬос(у сотр!ехев аге во!6 Ьу вечега) сопърапъев )пс!иъбпа СЕО)ъ)ТЕСН (Таъ)51агл агЫ 1ТЬ5гагг) апъ( ЫЕе ТесЬпо!о86ев (Р!агшшп Таг) Ро1угпегаве).
А япи'- !аг Ыеа ы нвеъ( Ьу РегЫп-Е!гпег, ъчЬове епхуте, АтрВТао бо1Й, геъ)шгев Ьеаг(па го -93 С Еог -10 тшилев ъ)нг(пВ а врес(а!1у ргоагаттеь) 6гвг сус1е оЕ РСВ го Ьесопле Еи!1у ас6че (ВггсЬ ег а!. 199Еь; КеЬе1гпаппВегхшц ес а!. 1998). 1п апогЬег чапа6оп, Мул" епъЪесЫед т ъчах ЬеаъЬ (Ногъчах ВеаъЬ) Ь ге1еавес) тго йе геасгъоп пнхгнге ав йе ъчах зпе!!я ТЬе пъапнЕасгигег, !пгбггоВеп, с1аъпь 1Ьаь йе аЬвепсе оЕ МВл' ъ(нг(па йе шгба) ъчапп-нр РЬаве оЕ1Ье геас6оп в(цп(6сапг!у геъ(осев попвресл6с рг)тша.
Ногчъгах ВеасЬ аге во!6 ш вечега! Еогпш!а6опв ЕЬас ргочЫе рге<)егегтшес( сопсепггагюпв оЕ МВл' Еог РСВв оЕ вгапъ(агд чо1шпе. Ног вгая РСВ Ь пог еввеп6а! ш ор6пнхес( ягпр!е РСВв 1Ьаг сопгаш а в(па!е раъг оЕ ъче)1-ъ)ев(цпеъ( о118опнс!еогЫе рпгпегв апъ( Вепегаге ЫВЬ уле!сЬ оЕ а вреслбс атр!16ъеь( ргоъ(нег. Ноъчечег, йе пъегЬоъ) согпев гпго Ьв оъчп ъчЬеп попвресгбк атр66сабоп Ь а ргоЫепл — Еог ехагпр!е, ъчЬеп Ееъчег йап 10' соргев оЕ геъпр1аге ЕлХА аге ргевепг ъп ЕЬе геасгюп, ъчЬеп ЕЬе геъпр1аге Ел)ь(А Ь Ь(аЫу сотр1ех (е.В., гпапипа!лап аепот(с (3МА), ог ъчЬеп РСКв соплаш вечега) раъгв оЕ о118опис!еоъЫев (пшрбр1ех РСЦ.
1п а11 оЕ гЬеве савев, Ьог вгагс РСВ Ь Ьевг нвеъ( лп соп)нпсгюп чбгЬ а ЬонсЬъ(оъчп" ргогосо! (р!еаве все гЬе шЕогтагюп ране! оп ТО()СНООИГ(Ч РС((). 1|с)огшаг|оп Рапе1| 8.111 Р!ВО)ъ)$3СЕЕАЬЕ Н К|Ьопис1еазе Н (КХазе Н) сиса))~ез сЬе епйопис!ео1уск йеВгайабоп оЕ СЬе КХА то|есу оЕ РХА-КХА ЬуЬпйя депега1шВ о!)Вог)Ьопис)еог)йез, оЕ чагу)пВ сЬаш )епКйз ъч)СЬ 3'-Ьуйгоху! ап|1 5'-рЬозрЬа1е 1егп|ш|.!с ъчаз 6гя гесоКп|хей апй ьо!асей Егоп| са)(СЬутиз (51еш апй Наизеп |969; Наизеп ап|$51е)и 1970), Ъ|лс и В поъч )споъчп со Ье ргезепс ш а ъчЫе чапе|у оЕ тапипа!|ап 6ззиез, уеаз|з, рго)|агуосез, ап|$ Ыг|ь рагВс!ез. Мапу суре| оЕ се!1з сопсаш тоге йап опе КХазе Н.
1п тапу гесгоч|гизез, ВХазе Н В а|ьос|асе|$ чйСЬ йе пил!66лпс6опа! епхуте Сече|за сгапзспрсазе апй сагпез ош иирог1ап1 Еипссюпз ас зечега! зсацез йиппа сЬе сгапзспрсюп оЕ СЬе ч|га1 Вепоте ш1о РХА.!п еиЬассепа, |с ь Ье!|ече|$ со Ье ге|!шге|$ Еог йе геточа1 оЕ КХА рпгпегз (гоп| 01|ахаЫ ЕгаВтепсз, Сог ргосезз)пК оЕ сгапзспрь ш1о рпгпегз шей Ьу РХА ро1угпегазе! 1о ш|6асе РХА зупйеяз, апй 1о геточе К1оорз йас ргочн$е ясез Еог оррогсипВВс ш|6а1юп оЕ ипгеВи!асей РХА зупсЬеяз ас йе сЬгоп|озоп|а1 оп'- а)п оЕ гер1|сайоп ш Е. со)6 КХазе Н ь ргеяипей со саггу оис ыпи!аг Еиисйопз |п еи$|агуобс се!1з. КХазе Н Ьаз Ьееп герогсей со |псгеазе таг)сей)у сЬе шЬ|Ъ|сюп оЕ депе ехргеяюп Ьу апизепзе о)!Войеохупис)ео1Ыез.
НуЬС)йз Ьепчееп СЬезе о!|аопис)еобйез апй зрес|6с зес)иепсез )п п|КХАз аге зепя6че со йеКгайа6оп Ьу СЬе епхуте. КХазе Н ь ге|!шге|$ Еог ш|6асюп оЕ гер!кайоп ас сЬе опВ)п (оп) оЕ со1|сш Е) (со!Е1)-Суре р)аяп)йз ш Ысго, ТЬе епхуте а1зо зееиь 1о зирргея |пша6оп оЕ РХА зупсЬеяз ас я1ез ойег 1Ьап оп. Х-гау сгуяаПоВгарЬк апа!узь зЬоъчз 1Ьас К со)| КХазе Н сопязь оЕ пчо йоспаиь, опе о( ъчЬ|сЬ сопса|пз ап МКл'-Ыпй)пК ясе етпезЬей ш р-зсгаийз — а Ео)й рге|йо|ь!у гесоап!хей ш РХазе 1. рог 6лгсЬег тЕогтайоп апй геЕегепсез, р)сазе зее СгоисЬ (1990), САг)псегзЬегВег (1990), Нояо|пз)су ес а|.
(|993), )ил|В ап|$1.ее (1995), Капауа ап|$11|еЬага (1995), рйсе е| а!. (1996), ап|$ Сгоо1|е ( 1998). ТЕРМ)В)АЕ Т)СА)ъ)йГЕ)САйЕ Тегп|ша1 |$еохупЬопис!еосЫу! сгапзЕегазе, Тй, а пюпогпепс еплугпе оЕ -510 апшю асЫВ са1а1ухез сЬе а|ЫКюп оЕ |$ХТрз со сЬе 3' сегпит оЕ РХА пю!еси!ез (Еог геч)еъч, р1еазе зее Во11игп ес а1.
1974). ОЕ СЬе зечега1 епхугпез йас аге сараЫе оЕ йВ суре оЕ сеп|р!асс-шйереп|$еп1 РХА зупйез|з, сеггп1па! сгапзЕегазе ь Ьу Еаг сЬе |по|с е(6с|епс: 'ъъгЬегеаз РХА ро|утегазез якЬ аз СЬе К!епоъч ЕгаВтепс оЕ Е. со)|' РХА ро1угпегазе ап|$ Тал) Ьаче йе аЬ~!Кусо а|Ы з)пц)е пис1еосЫез 1о РХА зиЪзсгасез, сегпппа! сгапзЕегазе сап, шн$ег СЬе пКЬС сопй)6опз, саса1ухе йе айгбсюп оЕ Ьипйгейз оЕ пис!еобйез. !п пю)еси!аг с)опшК, сегпипа! Сгапз(егазе В поъч сией сЬ|ейу со сага!ухе СЬе а|Ы|6оп оЕ Ьогпоро)утепс 1а|!з со з)пВ)е-зсгапйей РХАз Вепегасей ш 5'-ВАСЕ а|н$3'-ВАСЕ геассюпз. ТЬе епхуспе ъчаз ш сопзЫегаЫу Вгеасег йегпапй а Ееъч уеагз аВо ъчЬеп сРХАз ъчеге гоийпе!у еъ)и)ррей ъчКЬ йб са|1з апй с!опей |пса йС-са|1ей р1азгпЫ чессогз.
ТЬ|з Са)!шК ъчаз а1ъчауз а п|еззу геас6оп, й|66|си)с со сопсго1, япсе сЬе Ыпес|сз оЕ йе са!1)иВ геассюп аге ъчопйег6л1!у о|$й, ап|$ ойеп сбзазсгоия апй ыпсе йе еаг1у сопипегс|а1 ргерага1юпз оЕ йе епхугпе ъчеге ойеп сопсапипасей мпсЬ Ьой епйо- ап|$ ехопис)еазез. Нопюро!утепс |а|1)иВ Ео11оъчз еп6ге!у ргесбссаЫе $ипе6сз ъчЬеп а!! зиЪзсгасез аге ргезепс |п сЬе геас6оп ас ЫВЬ сопсепСга6опз ап|$ ъчЬеп а11 Сеппш| аге Ыеп6са!. Ноъчечег, ъчЬеп Еасей ый а зеС оЕ ЬегегоКепео|ь 3' сегпиш, йе епхугпе ьч!! 6гзс саса1ухе йе гарЫ са))шК оЕ гпо!еси!ез саггу!ид 3'-ипра|гей ехсепяопз, СЬеп Ыипс-епйей гпо!еси!ез, апй 6па)1у, чьей Кгеаг ге1ис|апсе, пю!еси!ез чйй гесеяей 3' Сегп|ш|. 1п йе сазе оЕЫипс-епйе|$ |по!еси1ез, сЬе сгис|а1 гасе-)ип|6пВ |сер ь йе а|Ыпюп оЕ СЬе 6гы пис!еосЫе: В1ипс еийз йас аге с)агпрей зЬис Ьу СсС Ъазе ра|гз аге роог зиЬзсгасез, ъчЬегеаз Ыипс епйз псЬ ли А:Т аге пюге реппВяче апй аге са|!ей |поге гарЫ!у ап|$ зупсЬгопоиз!у, |Е йе епхугпе Елпйз а Ыипс-епйе|$ пю1еси1е ъч|й а Егауе|$3' сегпипиз апй саса!ухе| йе а|Ы|сюп оЕ а япК!е пис!еосЫе, ы|Ъзе|!иепс е)опВасюп оЕ СЬе Ьоп|оро)утепс са|! ъч|11 ргосее|$ гарЫ!у.
ТЬе пюге ЬесегоВепео|ь сЬе рори1ас|оп оЕ сепшш, 1Ье |поге с)и)г)ъу апй азупсЬгопо|ь йе Ыпескз оЕ йе са)!)пц геас6оп. Тепгппа! сгапзЕегазе Ьаз зсгапае ге|!шгегпепся 11 В шЬСЬ|сей Ьу п|апу оЕ сЬе сасюпз гоис|пе1у |псЬн$- ей ш геас1юп ЬиЕЕегз, шс!исбпВ апипотшп, сЫогЫе, апй рЬозрЬасе юпз (Еог гетечг, р)еазе зее Во!!шп 1974). Моя геассюгь аге сагпей ош ш сасойу!асе (|$ипейу! агзешс асЫ) ЬиЕЕегз (Каса ес а1. 1967), а)СЬоиВЬ 100 |пМ Тпз асесасе (рН 7.2) ь а!|по|с аз апой.
Ногпоро!утепс са)!шВ геасйопз сЬас ше |$ТТР ог йСТР аз ялЬзсга1ез аге сагпей ои1 ш СЬе ргезепсе оЕ Сол'| Мил+ ь сЬе ргеЕеггей соЕассог Еог Ьопюро1утепс са)!)иц геассюпз шчо!|НпВ ро)утес|ха|)оп оЕ ригше гезЫиез. 8.112 СЬнР|ег 8: Еп Т(Его АтР!фсаг!оп оу РЕ|ЕА ЬУ РСК Тегпнпа1 станк(егаке ь ехргеяей ш рте-В апй рге-Т 1утрЬосусек апй Ь гоисше1у |ней ак а тат(сег Еог сегса!и сурек оЕ!еи)сет!а аг!к!пВ 6 от тЬеке се!1к. Риг(пВ гпасигасюп оЕ сЬе инни|не куксет, ТйТ тей!асек йе ехрапяоп апй гбчегя6сасюп оЕ сЬе Т-се11 гесерсог герегсо(ге Ьу айй!п5 сегпр!асе-(пйерепйепт пис1еосЫек апй йЬгир6пц Ьопю!оВу-й!тес!ей гесогпЪ|пасюп (Еог геие и, р!еаке кее 6616!1ап ес а1. 1995).
Рог геле|чк оЕ йе ню1еси1аг Ъ|о!оду апй епгугпо1оВу оЕ сеппша! сгапкЕегаке, р1еаке кее СЬап5 апй Во!1ип| ( 1956). ТО(3СНОО!АЕЫ РСК ТоисЬйо|чп РСК Ь а ятр!е спесЬой со орснпые у!е!|Ь оЕ агпр116е|1 Р(9А |чЬеп йе те!с(п5 сеп|регаи|ге оЕ ЬуЬп|Ь Ъеьчееп йе о!1цопис!еосЫе ргипегк апс! сЬе|г сагВес ке|р|епсек ь пос 1|по|чп чйсЬ сена|псу, Еог еха|пр!е: |чЬеп сЬе рптегк Ьаче Ьееп йек(Вней сгот апппо асЫ ке|!иепсек счЬеп атр6(у(пВ тетЬегк оЕ а пш!65епе Еапн1у счЬеп |Ье гетр!асе РХА Ь ехтгете1у сотр1ех апй оссир|ек а!аг5е ке|1иепсе красе счЬеп атр)!ЕушВ Р(к)А !тот а крес|ек осЬег йап тЬас Еог |чЬЫЬ йе ргнпегк |чете йек!Вней |чЬеп ик!п5 ргнпегк сиота!пшВ "ишчегка!" Ьакек кисЬ ак шояпе.
1п а11 оЕ йеке с|гсшпяапсек, тшкгпатсЬек Ьестчееп йе о!15опис)еос!йе рг)тегк апй сЬе сегпр! асе РНА сап Ье апск(расей, |чнЬ йе росепйа! со депегасе ипйеягаЫе попкрес(6с агпр!|6сасюп ргойисся Веса|не пеЫ|ег |Ье пшпЬег, тЬе 1осасюп, пот сЬе туре оЕ йеке нняпассЬек ь!спотчп, К ь пос рокяЫе со са!си!асе Егоп| 6гкс рппс|р!ек ап аппеа1!пц сегпрегасиге йас |ч(1! тахнпйе йе у|е!й оЕ йе йеягес! ап|р!|6сас|оп ргойисс тчЬ((е пип~шсйп5 попкрес|6с рг(ттп5. 1пксеа|1, |Ье орснпшп аписа!шВ сетрегасиге ппьс Ье йесегнппей егпрйсса!1у. Опе гпесЬой оЕ ор6нпгасюп шчо1чек кессш5 ир а кепек оЕ РСКк йас аге аппеа1ей ас йЬЕегепс сегпрегасигек Ьис аге Ыепска! ш а!1 ойег гекресск.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
