Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 34
Текст из файла (страница 34)
1Е а рагски!аг рптпег ра|г сап Ье Ыеп66е|1, гейеяап Ьой ргипегв. А1|егпа6че!у, 1Е по раг6си1аг рптпег ра)г сап Ье Ыеп66ед, сопвЫег |Ье ровяЬ116у йас попврес16с атпр116сасюп тау Ье |Ье геви1с Егов| вупсЬеяв рптпед чйй йе Еогъчаг|1 рптег оЕопе ра)г ап|1 йе гечегве рптпег оЕ апойег. ТЬе Ъевс |чау со ипгаче! |Ыв ясиасюп Ь со вес ир а вепев оЕ пв|!6р!ех РСКв, еасЬ 1асЫпд опе ргипег ра|г. Ву а ргосеть оЕ е1ив|падоп, Ь ь ия|а!1у ровяЫе со бит! оис тчЫсЬ сотпЬ)пасюпв оЕ рпгпег ра)гв аге гевропяЫе Еог попврес|6с агпр1|6сасюп. 8.
!08 СЬаргег 8л ?и 'чйго Атр!ЕЕ)саг!оп оЕВ?ъ)А Ьу РСЯ тих О)ъ(Ръ РОШЧНИйЕ Орйпла1 геасйоп сетрегашге: 75 — 80 С Орснпа1 геасйоп сопсйсюпя ! 8 тМ МПС!, 50 — 55 тьс КС! (РН 7.8-9.0) К, сйъ(ТРьс 10 — 15 Сллъл К Р(ъСА: 15 пМ Ехсепяоп гасеь (с)ЫТРь7ьесл'епхуте то1еси1е): 150 <60 24 1.25 0.25 75 С 70 С 55'С 37'С 22'С Ргосеьь!ч!су (с)ХТРь!ьес7епхуте то!еси!е): 42 На!ЕЙЕе оЕ епгуте: 97.5 С 5 — 6 пнптеь 95 С 40 гплписеь 925 С 130 пзписеь Еггог гасея Еггог гасеь гапййп8 Егогп 8.9 х 10 ь со 1.1 х 10 "Ьаче Ьееп герогсес) Ъу час!оиь 8гоирь очег сЬе уеагь.
Рог лпоге с(есайь, р!еаье ьее роьйп8 Ьу Раи) Непйеп (1995Ь) оп сЬе пеъчь8гоир Ыопес.гпо1Ъ!о.тесЬс)ь-геа8псь. ° Тпд, а сЬегтоьсаЫе Р)ъСА-с)ерепс(епс Р)ъСА ро1утегаье, ъчаь йгьс Ьо!асес! Егопл сЬе сЬегпюрЬл!к еи1сагуосе Т)тегтиь ал)иаглсиь ш 1976 (СЬлеп ес а1. 1976; Ка!ес!ш ес а1. 1980). 5опле уеагь 1асег, йе епхуте Ьесагпе Еатоиь Еог !Сь ые !п РСП (5айс! ег а1. 1988) апс) ъчаь деь!8пагес) ш 1989 аь Мо!еси!е оЕ СЬе Уеаг (КоьЫапь! 1989), Еог ъчЬасечег йас спау гпеап. ° ТЬе 8епе Еог Таг) (1.аъчуег ес а!. 1989) епсос(еь ап 832-апнпо-аск) ргосеш (М„= 93.9 Ю) сопяьслп8 ол съчо с)отйпь. ТЬе ап~по-сегпнпа1 ге8!оп (геьЫиеь 1 — 290) !ь япн!аг ш ьес!пенсе апс) ягиссиге со сЬе 5'-ъЗ' ехопис!еаъе с)ота!и оЕ тегпЪегь оЕ йе ро!упсегаье 1 Еапн!у оЕ РХА ро!угпегаьеь (шс1ийп8 Е.
сой РЫА ро1угпегаье 1 апс( ге!агеь) Ъасгег!орЬа8е-епсос(ес( ро!утегаьеь) (билтап апс! Млпгоп 1993). ТЬе ргорегс!еь оЕ сЬе 5' — эЗ' ехопис1еаье аге с)еьсг!Ъед Ьу Ъоп81еу ес а1. (1990). ТЬе сагЬоху-сегпзпа! с)огпаш сопсашь а саса1уйсайу спасс!че 3' — >5' ехопис1еаье (геь!Пиеа 294-422) апс) а ро1уплегаье ьиЪъ(огпаш оЕ Тиг) (геьЫиеь 424 — 831), ъчЬоье ьсгиссиге !ь чегу япн!аг со йас оЕ йе К!епоъч Ега8тепс оЕ Е.
сей Р!ъ)А ро1успегаье 1. ТЬе геьЫиеь сййса! Еог сага(ус!с асйису аге сопьегчес( ш ЬосЬ ро1утегаьеь (Сог гетеъчя р1еаье ьее )оусе апс! 5селсх 1994, 1995; Рейейег 1994; Рег!ег ес а1. 1996). ° ТЬе сЬегта1 яаЬПКу оЕ Тад РНА ро!угпегаье Ь йои8Ы со геьи1с Егогп !псгеаьед Ьус(горЬоЪ!с!су оЕ сЬе соге оЕ сЬе епхуспе, ппргочед ьсаЫПхасюп оЕ е!ессгоьсайс Еогсеь, апс1 епЬапсес! шсегассюп ъчссЬ ьо)чепс спо1еси!еь, сЬле со сЬе ргеьепсе оЕ асЫ!с!опа! рго!ше геысЬлеь оп йе ьигЕасе оЕ сЬе епхупле (Кпп ес а1.
1995; Кого!еч ег а!. 1995). ° ТЬе епхуте ог!8(пайу !ьо1асеъ) Ьу СЬлеп ес а!. (1976) ъчаь япайег сЬап сЬе Еий-!еп8сЬ Таг) ргосеш, Ьас) ь! л8ЬПу ЙКегепс саса1уйс ргорегйеь, апс( ш ай ргоЬаЬл!йу ъчаь а ргосео!уйс Ега8тепс сЬас !ас)сес) рагс оЕ йе апнпо-септпа! с!оташ. Еп Т. адиайсил, Таг) ро1утегаье !ь ехргеыес! ас ьисЬ 1оъч !ече!ь (0.01-0.029ч оЕ сЬе сейи1аг ргосеш) сЬас сопнпегс!а1 ргос(исйоп Ь пос а ч!аЫе ргороясюп. ТЬеье с!ауь, сЬе епхуте !ь ргосЬлсес) й огп чегяопь оЕ сЬе?Ьл! 8епе сЬаг Ьаче Ьееп еп8!пеегес) ьо аь со оЬса!и Ы8Ь 1ече!ь оЕ ехргеьяоп ш Е.
со)8 Моьс оЕ сЬеье а1сегасюж шчо!че лпоййсасюп оЕ йе РХА ьес(иепсеь сЬас ргесес)е апс) нтпейасе!у Еойоъч сЬе шуйайп8 АТС сос)оп (е.8., р1еаье ьее Еп8ейсе ес а!. 1990; Ъаъчуег ес а1. 1993; 1ьЫпо ес а!. 1994; Реьа! апд РЕаК1е 1995). 5!псе йе с1опеь пьес( Ьу чайоы сопнпегскй спапиуастгегь тау Ьаче Ьееп епЬйпеегес1 ш ЙКегепс ъчауь апс1 япсе сЬе ргососо1ь пьес) Еог рипйсасюп оЕ сЬе епгугпе тау а1ьо Ье ЙКегепс, ргерагасюпь оЪса!пес) Егот ЙКегепс тапи(ассигегь до пос песемап!у с)ейчег Ыепска! гели!ся Ноъчечег, Ьотетас(е Тол) ро!упсегаье, ъчЬкЬ Ь ь~пр!е со ргераге (Епйейсе ес а1.
1990; Р!исЬего 1993; Реьа( апс) РЕай1е 1995), !ь сонь!ьсепс!у оЕ Ь!8Ь срлайсу апс! ьЬоъчь Пн!е ЬассЬ со ЬассЬ чайасюп. Ргерагайопь оЕ Тац РХА ро!угпегаье сур!сайу Йьр!ау йе Еойоъч!п8 ргорегйеь: Еп(оста(!оп Раис)г 8.109 ° То шгдасе О)ъ)А аупсЬеяя Таг) ро1угпегаае, 1йе ойег О)ъ(А ро1успегааея гес)и|гас а рпшег (Ьас ь аппеа1ед со сЬе сешр!асс асгапд апд сагпеа а Ьудгоху! Вгоир ас !са 3' епд (р1еасе аее Ргппега |и (Ье шсгодисдоп со Ргососо1 1). Оипп8 сЬе ехсепяоп геасдоп ш Ыпо, Таг) ро|угпегаъе гепючеа о68опис!ео(Ыеа саггу|п8 а 5'-Ьус|гоху1 Вгоыр (Ьас аге аппеа|ес| со сЬе сешр!асе асгапд аЬеад оГ сЬе Вгочдп8 хсгапд.
Ноъчечег, 5'-рЬоарЬогу1асед о1|8опис1еос!деа саппос Ье д|ар1асед Ггопс сЬе сеспр!асе асгапд оЕ ОНА Ьу Таг) ро1ушегаае. ТЬе епхугпе ы пос аЫе со сопсшие хупсЬеа|з ъчЬеп 6 епсоипсега а с1ериппасед Ьаае ш (Ье сегпр!асе. Оериппас|оп оссига ас а яцп!6сапс гасе ъчЬеп О)ъ)А Ь спсиЬасед ас ЫВЬ сешрегашгея ъчЬЫЬ гпау р1асе!ипйа оп сЬе 1еп81Ь оЕ ОЫА сЬас сап Ье агпр1|6ед Ьу?а() ро!ушегасе (Вагпеа 1994). ° А)! егьепда! спеса1-Ьспйп8 а|сеа ш (Ье апппо-сегпппа! 3' — э5' ехопис1еаае аиЬдоша|п оЕ Таг) Ьаче Ьееп е1ппшасед Ьу ппгсадоп (Кпп ес а1.
1995; Кого!еч ес а|. 1995). Весасье оГ сЬе 1ас1с оЕ а ргоо6 еадш8 6шсдоп, сЬе гасе оГ и~япсогрогаиоп оГ д(ъ)Тра ь ЫВЬ ш РСВа саса|ухес| Ьу Та() (ог Ьу осЬег (ЬеппоссаЫе ОТСА ро1ушегааеа ГЬас а!ао 1ас|с ап ейип8 Ьспсс|оп) (Т1пс|а|! апд Кип|се! 1988). Маге сЬап 5096 оГ сЬе ОХА аппо!еси1ез ргодисед айег 25 сус!еа оЕ Таг)-дг|чеп агпр!|6сасюп оГ а 200-Ьр Ега8шепс сап Ье ехрессед со саггу шисас|опа оГ опе югс ог апосЬег. ° Оиг!пц СЬе ргь( уеагя Все епхупсадс апд рЬуяса! ргорегдеа оГ Тас| Лаче Ьееп аигпгпагыед Ьу гпапу 1 геч!еъчегя !пс!ид!п8 СЬа апс| ТЫ||у Д993), Ве! апс| МаЛЬиЬап| (1994), Рег|ег ес а|. (1996), апд Рапп!п6 апд С!ЬЬа (1997).
ТЛеае ген!еъча ргочк1е согпргеЛепяче !!аЬ о( рппсагу ге(егепсеа Ггогп ъчЫсЛ Фе да(а 1п (Ьь !п(оппадоп рапе| аге с1епчед. ° А питЬег о( сопмпегп|а! ргерагасюпа о( Тас) аге ачас|аЫе (Ьа( |ас|с 5 ' — +3 ' ехопис!еаае асдису, ТЛеае,' йсййе йе 5(о6е! Ега8шепс (Рег(с|п-Е!шег), а пигпЬег о( де|есюп чапапй, агк! а пигпЬег о( а!се-д!гес(- ед гписапса (Мег)сепх ес а|. 1995). |и Вепега(, (Лесе епхушеа аге |егь ейс!епс апд !еаа ргосеаа!не сЬап Тас). ° ТЬе с|опед депе Гог Таг) О(ъ(А ро!угпегаъе1ос Т ас|иадсих асса!и уТ1 ь ана8аЫе Егогп АТСС (40336). ТЬе ргоа апд сапа оЕ |гю|адп6 апс! рис|(у!пВ Тас! ро!угпегасе Еог !и-Лоиае иае аге д!асиааед |и |п(еИ|- Вепс ап!с!еа Ьу 5ес1его6 (1993) апд Непбеп (1995Ь).
Но%пап-(а КосЬе 1пп сиггепду Лах !еВа) г(ВЛСа ! очег РСВ апд Тас! (Ой. Расепь Ф05352600 апд ЕЕ4889818). Ноъненег, (Ьь рсь!акоп гпау сЛапВе !и ЕЛе сйиге Ьесасье Но%пап-(а ВосЛе'а с!а!ша аге ипдег сЬаПеп8е. Мапу !инесс!Ва(ога Ьане !и сЬе | раас Ьееп ъчагу о( рип(у|п6 (Ле!г оъчп тас! Ьесаиае о( (Ле ипсегса|псу аЬоис ънЛас сЛеу сап апс1 сап- | пос до ъч!8соис гипп!п6 а(ои! о( сЛе расепс !аъч.
Ноъчечег, (Веге аге аечега! 1псегпес х!(еа дсас о6ег иае- ,' й! !п(оппабоп оп дс!а сарк, е.6., Лир:ЕАъъъач.ргошеда.сот. ТЬе Л!а(осу оЕ (Ле расеп( д!хрисеа Ьесъчееп Но%пап-(а-ВосЛе, Сеиь !пс., апс! Ргоше8а ь гесоипсед |и Неъча апс| сяечча ап!с!ех Ьу О!сЬоп (1994, 1996) апс! АЬЬои (1996). | 8.110 СЬаргег 8: 1п (гЬго Агар((угсаг(оп оЕОМА Ьу РСй НОТ 6ТАКТ РСК Ног вгагг ь а пъегЬоъ( го ор6т(ае гЬе у(е16 оЕ йе г)еягед атрВЕлеь( ргоъЬлсг ш ро!угпегаве сЬат геасгюпв апй япш1гапеоы!у, го внрргея попврес(6с апър116сагюп. ТЬгв Ь ъ)опе Ьу ъч)гЬЬо!4!пВ ап еыепгъа! сотропепг оЕ ЕЬе РС — йе Его ро1утегаве ог Мал', Еог ехатр1е — нп6! ЕЬе геасг1оп пнхплге Ьав Ьееп Ьеагеь) го а гетрегагнге йаг шЬгЬль попвресгбс рг(т)па апс1 ргипег о118отег(хагюп.
!п йе 6гвъ с(евсг(рбоп оЕ Ьоъ въагг РСК (Еъ'Аъ)ш!а е1 а1. 1991; Ег!)сЬ ег а1. 1991; Ми!!ь 1991), Гегпр!аъе (3)ь)А апс) рптегв ъчеге пнхеъ) гоВегЬег апъ( Ье!6 аг а гегпрегагше аЬоче йе гЬгевЬо!6 оЕ погьрес(6с Ьлпдша оЕ рпгпег го сегпр!але.
А(! оЕ гЬе сопъропепгв песеяагу Еог ъЬе ехгепяоп рЬаве оЕ гЬе РСВ ъчеге гЬеп асЫеь) ехсерл ЕЬе йегпювгаЫе ро!угпегаве. ТЬеппа1 сус!ша ъчав (пи1агеь( айег гЬе 6па) асЫ(г(оп оЕ гЬе (3(ь)А ро!упъегаве го йе ргеЬеагеъ( геасгюп пнхгнге. ТЬе е!ишпа6оп оЕ йе ъчапп-ир РЬаве ргесеъ((па ЕЬе 6гя сус!е оЕ РСК геъ(исеъ) лЬе орроггиш6ев Еог попврес(6с аппеа!(пВ оЕ о118опнс!еогЫе рпгпегв, ъчЬегеав ъЬе аЬвепсе оЕ Тл!ъ1А ро!утегаве ас6гАгу ргечепгед ехгепяоп оЕ т)япагсЬеь( рпгпегв. ТЬе оп8!па1 теъЬоь) ъчав ъ)116си11 Ьесагье ЕЬе геасгюп гп)хлнгев ъчеге аяетЫеъ) ш гнЬев ъчЬове Геплрегагнге ъчав ъпалпгашес) Ъу а Ьеагшц Ыос1с. ТЬеве ъ)аув, Ьог яагг РСВ ыпоге еая!у ассопър!ьЬед. ТЬе пъовг рори1аг тегЬоь) ЫчоЪев сгеа6пц а РЬуяса! Ъагпег оЕ ъчах Ьеьчееп сопъропепь оЕ гЬе геасъюп. Рог ехапър1е, йе ргипегв, МВл', ъбъ)ТРв, апъ( ЬнЕЕег сап Ье пихеъ( ас гоопь гетрегагнге ш йе Ьоггот оЕ йе геаспоп гнЬе апъ( гЬеп сочеге6 нАЕЬ те1геъ) ъчах (е.а., Атр!пчах РСВ Сета Егози РегЫп-ЕЬпег ог а сотъпегсъа1 ъчах йаг те1ь ал 1оъч сегпрегагнге [те!гша рошг = 53-55 С) ).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
