Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 29
Текст из файла (страница 29)
Рог ехагпр1е, чегу 1ли1е Ьесегодир!ех Гоппа6оп сап Ье оЬчегче6 Ьеьчееп а сагцес чечиепсе оГ 300 пис!еосгцеч ап6 а геГегепсе сеплр1асе оГ 250 пис!еос16ея С)пбег йече с!гсипыапсея йе гасю о! с1еачед со ипс1еачес! ргосЬлсь сап арргоасЬ ллппу. 1Г сЬе Ггацшепсч 6сТГег ч)цплуссапбу ш яге, сЬеу сап Ъе йгесбу лерагасе6 Ьу це! е1ессгорЬогеяч апд 9иап66ей 8. Ехапиие йе гехи!!а со бесегш(ие сЬе соисепсгасюп оЕ геЕегепсе сегпр1асе йас у!е!дх арргохпиасе!у сЬе хаше агпоипс оЕ ашр1!6ед ргос!исс ах сЬе сагцес хесрлеисе.
5ес ир а хесопс1 хег!ех оЕ ашр116сабои геасс)оих (р!еаае хее 5сер 4) сопсалшпц а иаггоъчег гаице оГ сопсепсгас!опх оГ геЕегеисе сешр1асе. 1с ь Ьечс со цепегасе сЬЬ аепеч оГ сНисюгь !голи сЬе арргорпасе сепГо16 6цисюп оГ сЬе гесегепсе Сесар!аге (Ыер 2). 9. Кереас Ыерх 5, 6, аи6 7.
Рог еасЬ агир!гбсасюи геас6ои, шеахиге йе га6о оЕ йе у!е!6 оГ ашр11Еле6 геЕегеисе сеплр1асе со сЬе у)е16 оЕ ашр66лед сагцес вес)иеисе. Р!ос сЫх гасю аца)пзс йе агиоиис оЕ геЕегепсе сегпр1асе асЫес1 со еасЬ агпр!рбса6оп геас6оп. Ргош сЬе геял16иц хсга(цЬс Епе, бесеппше сЬе есрича!епсе ро)пс (!.е., йе аиюипс оЕ геГегепсе сешр1асе йас ц)чех ехасс1у йе хаше 9иапсЬу оГ агир1рбе6 ргос)исс ах сЬе сагцес лес)иеисе ли йе геас6оп). Са1си1асе йе сопсеисга6оп оЕ сЬе сагцес лес)иеисе ш сЬе опц)па! аашр!е.
8.9|3 Сйаргег 8|!и )71(ги Атр1фсаг(оп оТ 0ТТА Ьу РСЙ !МЕ РСК е РСР (|юп|е|нпех сайес$ РЗпейс РСР) ылхесЗ Зп гехеагсЬ ЗаЬога(ог|ех (о г|иапй(у депе е гп 6$йегеп(ЗаЗ ехрге|ьюп о1 депех |$е|ес|е|1 Ьу аггау |есЬпо|оду. Зп апа|уйса| ЗаЬогасо я||3 (о теааиге |Ье аЬип|1апсе о1 рагйси|аг 0Г4А ог РЬЗА хел|иепсеа |п сйп|са! ап|3 |п|йл Ьо|Ь (урех о( ЗаЬога(опеа, |о всгееп 1ог пю|а6опх ап|3 япд|е пис|еойс|е рсйугпсхрЫх РСРаьеь согпгпегс|айу ачаЗЗаЬЗе йиогеасепсе-||е|есйпд (Ьеггпосус|егх |о асор!|(у ърес|йс хес|иепсех ап|1 гпеаялге |Ье|г сопсеп|га|юп а(гпи!(апеоиь!у.
Весаиае |Ье |агде( хег|иепсех аге с|е(ее|ел! |и | де аагпе |па(гогпеп(, | Веге ь по пеес$ со сййк|гаъч а!| с|иоыйл ппд |Ье геасйоп ог |о Зпх(еас|, (Ье Зпх(плгпеп( р|оЬ 6|е га(е о( ассигпи|айоп о| а|прйе|3 0МА очег |Ье соистце о1 ап е дгеа(ег |Ье |п|йа! сопсеп(гайоп о| |агде| хес|иепсех Зп (Ье геас6оп гп|х(иге, |Ье |еъчег |Ье пигп ге||и|ге|3 со асЬ|ече а рагйси|аг у|ей о1 ап|рййе|1 ргосЬлс( (Вес|сег ес а!.
) 996; С|Ьлюп е| а1. ) 9 1996; Ргеегпап е| а!. 1999). ТЬе Зп|6а! сопсеп(гайоп о1 |агде| хег|иепсех сап 6|еге1оге Ье ехр 1гас6опа! сус|е пип|Ьег (С,) ге|ЗЫгед |о асЫече а ргехеп( |ЬгехЬоЫ о( агпрйсайоп. А р|о( о1 Зод„о1 (Ье |пЫа! сору пип|Ьег о1 а 1е| о1 к|ап|$агс$0ХАа у|е|л|а а яга|дЬ( 3|пе (Н|дисЫ ес а|. 1995). ТЬе |аг де| хес|иепсеа Зп ап ип$споъчп кагор |е пъау Ье еаъйу |Илапйес$ Ьу | п|егро|айоп |п(о |Ьь Яапс|аг|3 сигче. 0пЗ|$|е о|йег 1огпь о1 с|иапй(арче РСР (р|еаве еее |Ье $п|пхйлс|юп |о Рго|осо! 15), |п(егпа! яапс|агс|х аге по| ге||Ыгес| |п геа! Игпе РСР. ТЬе аЬ! ! |(у |о л|иап61у |Ье агп рйе|1 0| ЗА 8 л ппд |Ье ехропеп|$а$ рйаве оНЬе РСР, ъчЬеп попе оНЬе согп- ропепЬ о| |де геас6оп аге ЗипЫпд, гехий |п ап 'кпргоче|3 ргес|аюп |п Зйе сйлап|йайоп о| |агде( аесрлепсех.
Ву соп(г|ь( со гпе(Ьск|х 6|а( гпеахиге |Ье агпоип| о( рго||ис| ас |Ье епс3 от' |Ье геас|юп, геа! Ягпе РСР ь по| айес|ес3 со а ядп3йсап| ех(еп| Ьу ъ| Здй( час|а(!оп х |и |Ье согпропепь о1 |Ье геас6оп апсЗ ь !ель хепх|йче |о сй (егепсеа |и |Ье ейс|епсу о1 агпрйса|юп. ТЬе еагйех| о1 (Ье геа| 6п|е РСР Зпа(плгпепЬ ихесЗ а Яиогогпе(ег солр|ес1 (о а йъеггпа| сус|ег (о пзеааиге |Ье епйапсегЗ Яиогеасепсе Ьу с3уеа |да| |п(егса|а|е Зп(о, ог Ь|пс1 |о |Ье дгоочее о1 с3оиЬ|е-х(сап||ел! 0$ъЗА. 0иппд |Ье "ехропепйа|" рйаае о1 а РСР, | де агпоип| о( агпрййесЗ ргобис( ауп(Ьех|хес3 |и еасЬ сус|е |псгеая е|Нп а с|иаа|деогпе(пс(ахЫоп (р!еаее зее |Ье рапе| оп РСР 3|ъ| ТНЕОРу |и |Ье Зпихк|исйоп |о|В|а сЬар(ег).
ТЬе у|е||3 о| агпрЗЗйег$0ЬЗА гпау (Ьеге1оге Ье ейгпа|ед а| апу ро|пс 1гогп (Ье агпоип( о1 Яиогеасепсе его!(- (егЗ Ьу с|уех хисЬ аа е(ЬкЗЗигп Ьгогп|йе (НЗдисЬЗ е| а!. | 992, $993), 5УВР Сгееп ! ()А||иъчег е| а!. | 997а), ог сег|а|п охахо|е уеЗЗоъч с$егЫа|Ыеа (Зайщлго е| а!. 1995). Весаихе о( йъе Ыдй аепа!(Зч|(у о( Яиогопъе|пс л|е(есйоп, геа! Ягпе РСР 'ь сараЫе о| гпеаеиг|од |Ье |пйа! сопсеп|гайоп о1 (агде| 0МА очег а гапде о1 йче ог ях огл|ега о( гпадп|юде (Нек3 е| а!. 1996; Ъу|иъчег е| а|. | 997а).
Сиггепйу, |Ье Игпй о1 с|е|ес|юп ъчйеп йиогеасеп( с|уех |юсЬ аз 5УВР Сгееп 3 аге иае|3 За -10-1(И) сор|ее о| |егпр$а|е 0ЙА |п (Ье яагйпд арес|гпеп (Н|д лсЬ| е| а!. 1993; Ъу|йъчег е| а!. 1997а). Сепепс 0ЫА-Ь|п|3|пд с|уех хисЬ а~ е|Ы|$в|п Ьгогпйе апсЗ ВТВР Сгееп ! аге ип|чегха! ргоЬеыЬа( с$е|ес| апу ЯоиЬ|е-х(сап||ел! 0ГЧА депега|е|3 |йлппд РСР, Зпс|ереп|3еп( о1 |Ье (еп|р|а|е ап|З рг(гпега иаецу |п (Ье геас|юп. Весаике п|апу пю|еси|еа о( |Ье г3уеа сап Ь|псЗ (о еасЬ 0МА рго|йлс|, |Ье Зп(епх|(у о( ядпа| депега(егЗ ь Ь|дЬ апд ь ргорог|юпа! |о йле СоСа! тая о1 0МА депега(егЗ с|ос|од (Ье РСР апсЗ ь Зпл|ерепс|еп( о| |Ье пи|пЬег о( ())леь о1 пю|еси|ех ргог|исе|3. НЗдЬ Зече!х о1 хепх||м|у аге асЫече|3 оп|у |и геа| йгпе РСРь (Ьа| депега|е а япд|е апърййсайоп ргсиЛис(.
~4опхрес|йс ап|рййсайоп ог |Ье 1оггпа|юп о1 рг|гпег-гЗЗгпегх сап депега|е а|до|Исаи( еггогх в г|иапй(у(пд хгпай пигпЬегх о1 (агде| гпо|еси|еа ъчЬеп ипЫегаа! |3уее аге иж$ аъ герог|егя Зп |Ле ъчога( самоед | Ье его|пей йиогеасепсе пъау Ьеаг $$6$е ог по ге|айопхЫр |о |Ье агпоип( о1 яагз|пд |агде| 0МА ог (о (Ье апюип( о| 6|3!-Зепд|Ь ргос|ос( р го|3 осе|3.
5ечега! гпе(Ь|кЬ Ьаче Ьееп г|ече!орел! |о сопйпи йле арес|йс|(у о1 (Ье асор!(йе6 ргос|ись о| геа$6гпе РСРя ° Ме(йпд геп|рега|игея А| |Ье еп|3 о( |Ье РСР, |Ье |Ьеппосус|ег/Яиогопъе|ег сап Ье ргодгатгпегЗ |о депега|е а |Ьеппа! |Зепаилгайоп сигче о1 |Ье агпрййес! 0$ъ(А апг3 |о гпеаъиге Зйе пъейпд (егпрега|иге (Т ) о| |Ье РСР рго|3ис((а). ТЬе айаре о1 |Ье гпе|йпд сигче !о|3|се(еа ъчйе(Ьег |Ье апзрЗЗйегЗ ргог|ис(ъ аге Ьогподепеоиа апс$ |Ье Т ргоч|с|ех геаахигапсе Яла( Зйе сопес| ргогйлс| Ьгь Ьееп арес|йсаЗЗу агпрйе|3. Рпгпегсйгпегя ъчЫсЬ депега(е и юсЬ оНЬе Ьас|сдпюпс| поье |п геа! Ягпе РСР, Ьесасье о1 6|в г хйог( Зепд(Ь, депегайу г|епа(иге а| и юсЬ Зоъчег |е|п рега| игеа ап|3 сап еая|у Ье с! !яйпдй яйед 1гогп йле агпр!Зйес$ |агде| 0|ъЗА |Рк|е е| а!. 1997).
° Р(иогехсеп(3у /айе!егТ ойдопис|ео(||Те рго(лек. Тъчо гпе($ю|Ызаче Ьееп 6ече|оре6 |и ъчЬ~сЬ йиогевсепйу ЗаЬе|ег3 оЗЗдопис|еойл|е ргоЬеа аге сии |о с|иапй(у |Ье а|поип( о1 !де |агде| аес|иепсеа депега|е|3 Ьу геа| йп|е РСР. Зп еасЬ саче, |Ье Яиогехсеп( ядпа! |а депега(егЗ айег ех(епяоп о( |Ье ойдопис|ео|к|е Ьу Та|1 ро!угпегаае. ТЬе а(гепд|Ь о1 |Ье ядпа! ь (Ьегейлге ргорог|юпа! |о |де ап|оип| о( (Ье |агде( 0|ъЗА ап|3 ь пос |пйиепсегЗ Ьу |де ассипъи|айоп о1 попарес(йс ргобис|а хисЬ ль рпгпег-сйгпегд ъчЫсЬ с$о по| ЬуЬгкЗ|хе (о |Ье ЗаЬе|е|3 оЗЗдопис|еойс|е ргоЬе.
Ргогосо! !57 Оиапг(гаг(че РСК 8.95 ° Т))е Та(|Мап те(йо(1 оугеа! рте РСК (НОПап(3 ес а|. 1991; Ыча|с е1 а|. 1995), ийей ап о1|В ли ос)Войске (Ьа1 аппеаЫ со ап |п1егпа| йе||иепсе ъчТЫп (Ье аптрИес| 0МА (гацгиепс. ТЬе ойцопис|еойс|е, ийиайу 20-24 Ьаъе|йп )епц(Ь, ь )аЬе)ес) ас опе еп(3 ъч(Ь а Яиогейсепс цгоир (Раис < Нех ог Тес) ас |Ы 5' еп(3 апс| а ||иепсЬ- (пц Вгоир (ияиа1|у Тагпга) ас |15 3' епй ъчЫСЫ5 Ыос3(е(1 ъчсЬ РО, МН, ог а Ыос|сес| Ьайе. ТЬе 1ЯЬе!ес) ойцопис!Войс)е 'ь а(3(30(3 1о (Ье РСК соцесЬег чнсЬ рпгпегй ге()и!ге(3 со ссйче Ите аптрИса1юп о| 1Ье 1агцес не(|иепсе. ЪУЬеп ЬоСЬ СЬе Яиогенсепс апс| ()иепсЫпц Вгоирн аге ргейеп1 |п с1ойе аррояСюп оп СЬе |исае( ЬуЬг|с(!Кайоп ргоЬе, апу егпьяоп 1гогп (Ье герогсег ссуе с)нипц СЬе соигйе о1 геа| с!гпе РСК Ы аЬйогЬес| Ьу СЬе ()иепсЫпк ((уе, апс) СЬе Яиогейсеп1 епиййюп ь |оъч Аъ СЬе геасСюп ргокгеййей, ап(3 (Ье аиюипС о1 СагВеС 0МА 1псгеаЯЕ5, рГОцге55!ЧЕ(у Вгеатег ()иапййей от Ой Воине!0066е ргоЬе ЬуЬТ|сйхе 1о 1Ье ссепаси гес) сагВес 0 МА.
Ноъчечег (|нипц СЬе ехСепя оп рЬайе оНЬе РСК сус|е, (Ье 5'а3' ехоп ос)еаъе асйч|(у о1 (Ье СЬеггпояаЫе ро3угпегаае с1еачеа (Ье ЯиогорЬоге йоги Яте ргоЬе. Весаине сйе ЯиогорЬоге Ы по |опцег |и с|ойе ргох)гп|(у Со СЬе |рлепсЬег, К Ьец)пй Со Яиогенсе. ТЬе |псепй|су о1 Яиогейсепсе Ы |и сйгесС ргорог6оп 1о СЬе атоип1 01 Сагцет 0МА йупсЬей|хес( с)иг|пц СЬе сснлгйе оНЬе РСК.
Во1Ь 1Ье 1|ЯЬ(Сус1ег ап(3 СЬе Рпйпт йуяепт сап ийе Яиогоцеп!с Ьут)го!уй!5 Со с3е1ес( гпи|йр|е РСК рго|3исС5. ТЬе пигпЬег о1 1агцесй СЬа1 сап Ье |!етесСе|1 ягпи|сапеоий|у |п а япц|е РСК Ьай |псгеайе(1 гесепс|у (ЬгоиВЬ СЬе ине о1 0аЬсу|, а ипМегаа| с)иепсЬег СЬа1 сап гер|асе Татга а1 1Ле 3' епс| 03 Та||Мап ргоЬей (МайагаЬай е1 а|. 1999). ° 8|пату )лу(лг!с(!Кайпа ргойен |аЬе|ес| ъчСЬ сйЯегепс Яиогейсеп1 туей сап а|60 Ье ийе(3 Со (3!Яегепйате СЬе рго()ос(5 о( геа| 1иие РСК5 (Сее е1 а|.
1 993; СМ(ичег е1 а|. 1997а Ь). Ву (Веги не|чей, 1Ьейе ргоЬе5 его)1 оп |у |оъч |ече15 о1 Яиогейсепсе. Ночечег, ъчЬеп ЬгоицЬ( |и(о с|ойе ргох!го|ту Ьу ЬуЬпйнайоп со ас))асепс Весрлепсей |п а сагцес 0МА с)иппц (Ье соигйе о1 геа| Итие РСК, (Ье Яиогейсеп1 с|уей асс |и аупегцу Со кепегасе а роъчег(и) Яиогейсепс егп!55!оп. В|па|у о$)цопис!0066е ргоЬей |аЬе|ес| чу|Се (3)Яегепт ЯиогейсепС Вгоирй сап аЫо Ье ийес| |и соп! лпсСюп ъч!(Ь а гпи(йсо!ог с|етесСюп йуйтегп |п СЬе слцЬССус!ег Со йсап агп рйЯес| неупепсй о1 0МА 1ог гписасюпй о( ро|уптогрЬ|йгпй. Ойцопис(Войс)ей сЬас (оггп а гпЫгпассЬед ЬуЬТ((3 ъч!ТЬ (Ье сагцес 0МА пте11 ас а |оъчег сегпрегасиге сйап (Ье соггейроп6!пц регтесс|у птассЬе|! ЬуЬп|3.
ТЬе ге5016пц сййегепсей |и иле|Яиц 1ептрега1иге аге 506|0)епс со с$156пци!5Ь Ьеичееп сагцес 0МА5 саггу|пц ъч)1(3-суре ог гписап1 йес|иепсеа (сау ап(3 'ъъйсичег 1997; Вегпагс) е1 а|. 199В). |МВТКОМЕМТ5 ЕОК КЕАЕ Т|МЕ РСК ТЬе |Ьгее гооат рорн|аг геа| 6н|е РСК (пати|о|апта аге тйе СепеА|пр 5700 5ейиеосе Оетес6оп 5уатеит а~И йе АВ| Рпяи 7700 5еянепсе Оетесйоп аул|его (Ьо|Ь нтагйетаа Ьу РегВн-Ейнег Вюлуаегни апа Гйе ицЬ(С)с(ег (о|агнетой Ьу Косйе). ТЬе СепеАгир 5700 йултеит сопя|ли о1 Ьчо |очгн|пеп1а — ап орйсз| Иетастог аой а Сенин|и р РСК 5уче|п 9600— чйоле астана ага соонйпатей Ьу ялйчаге. Ор 1о 96 РСКа сан Ье гни а(нтнйапеона!у, апа |Ье асснию1атюп о1 аитрййеа ОМА ат еасй сус|е о1 Ич геас6оп В |па|ингой йо|н йе |огана|ау о1 тЪюгеасепсе а|и|пей Ьу 5ТВК | Сгеен ог ТаяЫап ргоЬеа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
