Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Еог гпоге 1пЕогтайоп, р1еаье ьее Ейе рапе1 оп СОЫТАМ! ЧАТГОН !Ы РСК 1и ЕЬе сйар1ег Ы1годисйоп. Войеуй апе! $0106005 Р1еаье ьее Аррепг!1х 7 Еог сотропеп1ь оЕ ь!осЬ ьо!ийопь, ЬиЕЕегь, апг! геайепйп 011и1е ьЕосЬ ьо!ийопь Ео ЕЬе арргороа1е сопсеп!гайопь. 70х Атр7гЕЕсаЕЕол Ьиууег гЕНТР ьоlийол Г20 тм) сол!аЕлГлВ ай Еоит гЕГЧТРь ГрН В.О! Тгь-С! Г70 тм, рН 7.67 Епкуепей апе! Войегй Уйегтоь!аЫе ОНА ро!утетаье Се!5 Адагоье Ве! Р1еаье ьее 5гер 9.
!х!ос!еьс АС1Г!5 апе! О!коппс!ео6е!е5 Рогччаггу рлтегь Г20 Ггм7 т Н О алс! Вечегье рлтегь Г20 рм7 гл Н О Г20 рто7еь/р!) 01фопис1еог!йе рпгпегь ыей Еог ьег7иепс1пе 07!А ьейшепгь с!опегГ Епго гпоьг согппгоп ргоЕагуогк апг1 еиЕгагуог1с чесгоп шау Ье рикЬаьей сопипегс1айу ог ьупгйеь1гей 1оса11у. Рог г1ега11ь, р!еаье ьее ЕЬе !пЕогшаг!оп рапе! оп 0МЧЕК5АЕ РК! МЕК5 апй гйе ассошрапу1пй гаЫеь оЕ ргипег ьег1иепсеь.
011йопис!еогЫе рпшеш ьупгйеь1гесГ оп ап аигошагей 01чА ьупгйеь1гег сап сапега!!у Ье мед го ьсгееп Ьасгег1орйаце Л р1ациеь ог Гуьей Ьасгепа1 со1ошеь Еп РСК счЕЕЬоиг ЕиггЬег рилйсаггоп. Тетр7а!е ОЬГАь ТЬЬ гпегйод иьеь иприг1ЕгегГ !егор!агеь ойга1пегГ Ьу сгасЫпу Ъасгег1орйаае Л райк!еь ог ггапьЕоггпей Ьасгела1 се!1ь. Еььепг!а1!у ЕЬе ьагпе шегйойь сап Ье иьегЕ го апа!уге Ыга1 0ЬЕАь ш ргогЕисг1че!у гпЕесгей гпапипа11ап ог уеаи се1!ь ггапьЕогшеи Ъу пшйкору честить.
Рог ЕиггЬег йегаг!ь, р!еаье ьее ЕЬе рапе1ь оп А001Т1ОЫАЕ РКОТОСОЫ 5СКЕЕМ!ь10 ЧЕА5Т СОЕОМЕ5 ВЧ РСК апд А001ТГО!ч1АЕ РКОТОСОЫ 5СКЕЕМ!ч10 ВАСТЕК1ОРНАСЕ Л ИВКАК1Е5. прес!а! Ее!01ргпеп1 Ваглег йрь Еог аи!отайс тЕсгорГрепеь Во!7!ой и асет Ьагй Мкгоуийе ГиЬеь Г0.5 тй ог МЕсгоГГГег р7агеь РоьГГГче-гГГьр7асетел! рГреое УЬегта! сус7ег ргоегаттегЕ чЫ!Ь сГеьГгесГ атрййсайол рго!осо! 1Е ГЬе гЬеппа! сус!ег Ь пог ег7и!ррах чгЬЬ а Ьеаге<1 1Ы, ые еЬЬег пипега1 ог1 ог рагаЕйп мах го ргечепг ечарогайоп оЕ!и1иЫ 6огп ЕЬе геасйоп пихгше гЕиг1па РСК.
АЕЫЖопа1 Кеацеп$5 51ер 9 оЕ ГЬгь рго!осо! тау тес!и!ге ГЬе геаеелть !Гь!егЕ гл Сйаргег 5, РгоЕосо! 2, алгЕ Сйар7ег б, Ртогосо! 70. 8.74 СЬарсег 8г гп 'сгссго Атр!г1гсас!оп ос" Р)с!А Ьу РСК МЕТНОО Ьсгееп!пц!пе!!сгсе!Еса! Васют!а! Со!оп1еь ог Валет!орЬаце ), Р!ас!пе5 Са1си1асе йе пшпЬет ос Ьассепа1 со1оп)ез ог Ъассег)орЬаце Х р1ас!иез йас аге со Ье зсгеепей Ргераге йе арргорпаге ашоипг ос шазСег пих; апа1уяз оу еасЬ со1опу ог р1ас!ие тес!и)гез 25 )с! о! шазсег пих; 1 т! оу таз!ее тсх сопсатзг 10х ашр1гпсагюп Ьиггег !00 и1 20 гпя зо!Шюп оГ уоиг с!ХТРз 50 и! гопчагс! Рпгоег ! игоо1е гечегзе ргипег 1 пию!е Н,О со 1 сп) Р)зрепзе 25-)с! а!1с)иосз ог" йе тпазсег ппх шсо сЬе арргорпасе пшпЬег ос ашр1сВса6оп сиЬез. !Ззе а зсеп1е 200-)с1 ргрепе 6р !НОТ а соосЬрк1с) со соисЬ еасЬ Ьассепа1 со1опу ог ЬассегюРЬаде )с р!ас)ие.
Хог)с)пц с)икИу, игазЬ йе р)репе 6р ш 25 ф оу тпазсег пих. Р! саве вее сЬе раис! оп ТКОСЗВЕЕ5НООТ1ЫС Со!!очаиК 5сер 9. С!озе сЬе сара ос сЬе сиЪез. 1псиЬа!е йе с1озес1 сиЬез гп а Ъо)!!пав сча!ег Ьай сот 10 пппшез !Ьассепа! со1отпез) ог 2 пиписез (Ъассег)орЬаце )с р1ас!иез). 'сЧЬеп зсгееи1оц Ьассепа! со!ошез, Ь!з!горогсаис пос со з!ошр оп сЬсз яер, гчЫсЬ Ь тес!шгес1 го 1гЬегасе аосг с!спасите йе Рагс !егор!асез апс! со сиасичаге ргосеазев аис! иис!васев. ВассепорЬаае з р1ас!иез, Ьу сои!газ!, с!о пос аЬчауз тес!и!ге Ьо1!ша. 1и сотое ргососо!з (е.ц., р!еазе зее Егогушаи 1993), шс11ч1с!иа) р!ас!иез аге !гааз!аггее! йгесс!у шсо сагир!осе геасиои иихгшез, счЫсЬ аге сЬеи овес! иигоейасе!у ш сопчеииооа1 РСК.
1о ош Ьаос1з, Ьосгечег, Ьо1!ша уог а зЬогг игое ЬеГоге гЬе асЫ1сюп ог' Тасг РЫА ро!ушегазе нпргочез сЬе сопязгеосу о! сЬе шесЬод аис! еиЬапсез сЬе у!ей о! ашр!11!ее! Ргос!исг. 'гсЬ11е йе !иЬез аге )псиЪа6щ, 61!иге сЬе тес)и)ге6 ашоипс ос Тас) РЫА ро1утпегазе со а сопсепстабоп ос 1 ип)с/а ш 10 шМ Тпз (РН 7.6). йоте сЬе 61!и!ее! епхуше оп ке ип61 пеедей А!!осч йе зашр1ез (!гош 5сер 4) со соо1 со гоогп сегпрегасиге.
Сепсг)гиде йе сиЬез Ъг)е!)у со с1ерояс а11 ог" йе !)и)с) 1п йе Ъоссогп апс1 сЬеп асЫ 1 )с! от йе сИисес1 Тас! РЫА ро!утпегазе со еасЬ гиЬе. 5е! ир ссчо сопсго1 геассюпз. 1п опе геас6оп, пк1ис1е а11 оу йе соспропеппя ехсерс йе сешр!асе РХА. 1п йе осЬег геас6оп, шс1ис1е а гесошЪгпапс Ъассег!орЬаце ) р!ас!ие ог сгапзтогшес! Ьассепа1 1узасе сЬас Ьаз ргечюиз1у ргос1исе6 а роябче тези)с ш сЬсз аззау. ТЬе сгацпгепс ашр116се6 1п йе роя6че сопсго1 геас6оп зЬои16 Ъе !агат йап сЬе Ггарпепс ехрессес! 1п сЬе сезс геас6опз. 5иссеззГи! ашр116са6оп ос йе !атлет, сопгго1 угарпепс ргоч)с!ез зотпе авзигапсе йас йе йеппозсаЫе РХА ро1упгегазе сз сараЫе ог ашрИу!пд Егарпепсз ог" йе арргорпасе! епфЬ. !т" сЬе йеппа1 сус1ег с1оез пос Ьаче а Ьеасес! 11с), очег1ау йе геассюп ппхсигез сч)сЬ 1 с1гор (-50 р1) ос 11кЬ1 пипега! о)1. Р1асе йе !иЬез ш СЬе СЬеппа1 сус1ег.
Акр!1гу йе пис1ек ас)с!з ияпи йе с!епасита6оп, аппеа1шК, апс1 ро1утпепха6оп !ппез апс! сешрегасигез 1!згес) ш сЬе саЫе. Ро!ушег)гас)оп пеа!!пав 2 ппп ас 72'С гп ас 50'С ТЬезе сипев аге зшсаЫе гог геасиоиз аыегоЫед ш гЫп-м а11ес1 0.5-ш! сиЬез аис1 1осиЬасес! ш йегша! сус1ел зисЬ аз йе Рог!с1п-Р!шег 9600 ог 9700, Мазсег Сус1ег !Ерреис!огг), аос! РТС !001М! КезеагсЬ).
Т!гоез аос! сепгрегасигез гоау иеес! со Ье вс1арсес! со зшг осЬег !урез оу ес!шргоеш аис! геасиоп чо! шпез. Рготосо1 12т Яартд СЬагастегтаадои от'Р)ъ(Ав С1опед ти Ргойагуодс Тестов 8.75 9. 'ъъг|тЬдтаъч а ватпр1е (5 — 10 р!) Ггош тЬе тевт теастюп ппхште апд йе соптто1 теасдопв апд апа1уге йетп Ъу е1естторЬогетдв йтоиВЬ ап аВатове Ве1. Ве вите то шс1иде 0МА тпатЬегв оГ ап аррторт|асе в|ге.
$(аш тЬе Ве! иг((Ь етЫд|иш Ътотп|де от 5УВК бо1д то ч|виа1тае йе 0)ъ)А. А яксеяйт! агпрККсатюп геастюп вЬои!д у|е!д а таад(!у чпйЫе 0ХА Кацшепт, ХопгесогпЬшапт РСК ргот1ись ъчт11 Ье ес(иа! то |Ье 1епйтЬ от РХА Ьетъчееп тЬе 1осат|опв оу тЬе 5' теппаи' ой йе Ьчо рпгпеш тп !|те с!оп|ой честог. КесоптЬтпвпт РСК ргодись 981! Ье тЬе вшп оу (|) тЬе !епйтЬ оГ тЬе тпвеп апд (0) тЬе д|втапсе Ъеьчееп тЬе 5' тепптш оу ьчо рпгпеш тп !|те честит. !Т песеыату, тЬе Ыепдту ой тЬе Ьапд свп Ье сопйппед Ьу тевтпстюп шарр!пй апд 5ошЬетп ЬуЬт|д|ват!оп. ТЬе тесЬп|9ие сап Ье еая1у адартед то всгееп !агйе пшпЬегв ой Ьастепа| со|ошев ог Ьастег|орЬаде М)3 с1опев Ьу ветдпй ир РСКв ш 96-ъче!! пнсгодтег д|вЬев (Ттоъчет !996).
ТКОЫВЕЕ5НООТ1МС ТЬе сЫе( саивев о( 1а|| иге ъч!(Ь йь гпетЬод аге (|) йе адд!т!оп о( тоо гписЬ Ьастепа! |увате, ъчЫсЬ птау а(тег йе 'юп|с Ьа1апсе о( йе геасйоп апд (й) йе асос|епта! |пс!ивюп о( а8аг (га8шептв |п (Ье геастюп ш(хтиге, ъчЫсЬ тпау |пЫЫ! аптрййсайоп Ьу тЬе йептювтаЫе 0ХА ро|уптегаве. Бесаиве оп1у а (еъч Ьипдгет| пто|еси|ев о( тепър1ате 0ХА аге гес|Ыгес|, ачо!д очег!оад!08 (Ье геасйоп ъч|тЬ тептр|ате ъчЬеп вагпр!!па р|асйлев алс| со|оп|ев. ТЬе аЬвепсе о( а РСР ргосйлст |п йе соптго! апд тевт геасйопв пъау !пд!сате (Ьат тЬе |пвегт и в!гпрЬ тоо ' !аг8е то агпр!!(у ейю|епт|у.
1п йь саве, а ргерагабоп о( йеггповтаЫе 0ХА ро|угпегаве сараЫе о( ашр!((у(пц !оп8ег тепър|атев сап Ье овес| !пвтеад от' сопчептюпа! Тас) 0МА ро|угпегаве. АЬегпатпе|у, а рпгпег врес(йс то йе !иветт сап Ье ивед |и р|асе о( опе о(йе настиг-врес!Вс рпгпегв. ТЬе опептадоп о((Ье с|опес| ве8гпепс | ъчйЫп йе честог сап Ье авсегтапес| Ьу ив|п8 ап !пвеп-врос!йс рпгпег ъч!(Ь рпптегв (гопт еасЬ ой (Ье ЯапК(08 ге8!опв ой (Ье честог. А00ШОМАЕ РКОТОСОЫ $СКЕЕМ|МС УЕАКТ СОЕОМ1Е5 Ву РСК Адд!1|опа1 Матетда!в Во)!тп8 и атег Ьай уеавт со(оп|ев Ме(Ьод 1. 0ве а втеп|е 200-р| р!репе др то тгапвтег а вгпай атоипт о( а уеавт со!опу йат Ьав Ьееп дгоъчвп8 тот 2-4 с1аув то ап агпрййсадоп тиЬе сиота!и!08 50 р| о( РСК гпавтег гп|х (р|еаве вее 5(ер 1 о( (Ье пта|п рготосо|).
Кевиврепс| йе се! Ь Ьу р|ре| Впд ир апс1 с1оъчп йне спев. 2. Во!! (Ье виврегеоп о(уеавтсе!!в (ог 5 ш!потев. гп Ргосеес1 ъчв(Ь 5(ерв 5 — 9 о( йе ша|п рготосо!. 5огпе |пчевт Ватогв (еВ., р|евве вее Них|чу ет а!. 1990; 5айе ет а|, 1991) ош(т йе Ьой(пй пер апд ргосеед тйгест|у то РСК айег виврепд(пе тйе сейв (и гпавтег пхх соптшп|пй а йепповтаЫе 0ХА роХшегаве. Ойег |пчевййатогв (ппй ет а!.
1 995) |уве йе се(ь ъчтть вушо(уаве ье|оге веп1пе ир Фе РсР. тп оиг ехрепепсе, йе ьойпй пер (псгеавев йе ейтоепсу о! РСК, ъчйегеав спичей)пе се|К то врйегор|ави ъч(тЬ вугпо|уаве Ь иппесешагу апс|, (и оиг ЬаптЬ, й(чев еггайс гехи|и. 8.76 СЬартег 8: 1п %тга Атр11)тсапап ау О)хЕА Ьу РСК АООЗТЕОМАЕ РКОТОСОЕ: 5СКЕЕМ1МС ВАСТЕК!ОРНАСЕ Е Е!ВКАКЗЕ5 5сгееп|пВ Ьастег|орЬаВе х ИЬгапеа 1ог с|пиеа О1 $птегеат ь иана!!у сагпед оит ассогд|пц 1о 1Ье Вептоп-33ач$5 птейос| о1 ЬуЬг|д|садоп ЕВептоп апс1 $3ач35 1977). Ноъчечег, РСК сап аЬо Ье иаед то Ипс| оит игЬетЬег а алчен ИЬгагу сиота па а деягед с|опе апд то асгееп с$3$4А 3$Ьгаг|еь |и а атеридае ЕаьЬ|оп 1ог опе ог гпоге тагеета Ее.е., р|еаче аее СЕ|6)п ет а1, 1993; $5гае! 1993; МсАИпдеп апс$ $Сгахчетс 1994; )АгатапаЬе е| а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
