Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Верагасе ЧЬе атр116юед 0)ъ(А Егопч 1Ье гехЫиа1 чЬегтоссаЫе РХА ро1угпегахе апд с1ХТРс (р1еасе атее Ргососо1 3). ТЬе РМА сап поъч Ье 1|8асед со а Ыипт-епдед честог ог а Т честог, ог Ь сап йцеютес1 гдсЬ геюспссюп епгутпею апд 68атед то а честот гдЧЬ согпрадЫе Чегпнш (р!тасе сее РгососоЬ 4, 5, апд 6). ЕОЧ)ЧЕ У!ЕЕ05 ОЕ РЧ)Ы-ЕЕ)ъ)СТН СЕОЬЧЕ5 Мапу о( ЧЬе ргоЫетх ън!ЧЬ !оън уюе|сЬ оНи||-|епВЧЬ с|опех аге дие Чо йе!пе(Еюс|епсу о( Йе течеье Чгапаспрч|оп яер. 6 йе КМА ь деВгадед ог 6 йе 5' епд от' ЧЬе ЧагВеч гпК(ъ)А ь псЫп СС, гечеье Чгапаспрсасе пъау Ьаче д|ЕЕюси!Чу юп Чганегс|пд йе геси!Ьпи яаЫе сесопдаюу аспас!отея ТЬе уюе!с! от' с!опех сап Ье епЬапсед Ьу опе о( йе Ео!!оъчвд тейодя ° Саттуюпд овс Фе тенеты югаписпрюаюе геассюп аю ЬюаЬег Еетрегайюгех (ир Чо 55"С ъч4Й тпиппе генегсе Чгапсст!ргахе), ог иае а ЧЬегтоатаЫе гечегхе Чтапест!рсаъе (е.ц., ТЯ ро!утегаъе, КесгоЧЬетп).
° Ргасбопасюпд ЕЬе еРА)А ртодисЬ оп адагосе ог ро(уаа у(аюпюде ее(х Ье(оге Ьопюро1утепс Чаю!|па апд атр!|Еюсас|оп. ° lпеогрогаппе тосййед Ьахех, сисЬ ах 7-деага-дСП, *Йат гедисе сесопс1аюу аттис!иге (ЧнссСоп!08ие еч а!. 1988). Веаг юп пхпд чЬач чЬе шсогрогадоп оЕ 7-деага-дСТР |пчо йе 6гя-хчгапд с0)ъ)А ргодисс тау |псгеасе ЧЬе е(Еюс|епсу о( йе агпр! Иссадоп стер, Ьис Ь гпау а!со Ыос)с хиЬссх)иепс с1еачаде оЕ ЧЬе атр!!Еюед РЬЧА Ьу яюгпе геяпсс!оп епгутея |пс|ийпВ А)и|, Оде|, Н)п8, 5аиЗАЧ, Асс(, ВатпН1, ЕсоКЬ Ехт), 5а(Ч, апд 5тпа!.
Ноъчечег, РЬЧАс гпод!Еюед чдЧЬ 7-деага-СТР аге с1еачед е(Еюс|епс!у Ьу Асае1, НюпдВЬ апд ХЬа!. ° Саггуюпд оис дне сус(ес оЕБпеаг атрИсадоп оп йе д(А)-Чаю!ед с0)4А чдЧЬ ЧЬе Вепе-срес|Еюс рптпег Ье(оге адд|пВ ЧЬе с|(Т) адар!от-рпгпег (Койег 1992). ° Ригюуу(пд ЧЬе Саю|ес3 апсЕ атр(юдюеюМ 0)НА Ьу е(есюторЬогесюх ЧЬгоицЬ ап аВагосе от ро| уаоу|атйе ие). ТЬе )опцехс то!еси!ес аге ЧЬеп гесочегес| Еготп ЧЬе де) апс| сиЬ|ессед Чо а хесопд гоити| о( аюпр!|Еюсасюп их!08 ЧЬе адар!от-ргипег апс| ЧЬе аепе-арес|6с рпгпег.
Рог ЕигЧЬег хиВВехс!опя р)еасе сее йе рапе! ас Йе епс| о( Рготосо| 8. Рго1осо! 10 КарМ АгпрИ~са6оп о1 3 с0МА ЕпсЬ ляг!лт СОМА ссомг5 тнлт слск 5нТслсмсс5 сояяе5яомсл!мс со сЬе 3' ге8)опт оЕ йе со8пасе шКМА оссиг шЕгет)иепг1у ш о!18о(дТ)-ргппед сРМА 11Ьгапеы Нотч апс1 лчЬеп СЬехе гапдех агье дипп8 сРХА аупсЬех)а апс1 с!оп)п8 )х пос )гпочтп Еог сегса)п. РоаяЪл1гдеа )пс1иде гапдотп Ьгеа)са8е оЕ 6гас-асгапд сРХА, Еа)1иге оЕ йе РХА ро1утпегаае со теасЬ сЬе епд оЕ йе сегпр1асе асгапд с1ипп8 аупсЬеых оЕ йе аесопд хсгапд оЕ сРМА, рппип8 оп шсегпа! ас1епу!асс сгассы ог с1е1едоп оЕ 3' лет)иепсет ад)асепс со ро!у(дА:дТ) сгассл дипп8 с1ошп8. Рагда1 сРХАт сЬас!ас1с 3' ге81опа аге сопипоп лп гапдош Ьехашег-ргипед сРМА!1Ьгапеа Ъесаиае сЬехе рпшегх аппеа1 ас шапу роясюпа )п сЬе шВХА.
3'-ВАСЕ геасдопа аге гьет1 со ьо!асе ип1сполчп 3' лет)иепсеа апс1 со шар йе 3' сегпши' оЕ шВМАы Еог ехагпр1е, лчЬеп шчеас)8асога аге Еасет1 чч)сЬ пш!6р!е шВХА хрес)ех сгапхспЪед Еготп а ып81е 8епе, апып8 Егош с66егепда1 ро!уадепу!асюп. 3'-ВАСЕ 16ке )шпиге 1!1иасг)оиа яЫ)п8, 5'-ВАСЕ, гессшгеа )соотг!ед8е оЕ а япа11 ге8)оп оЕ хет)иепсе лч)сЬ)п е)йет йе саг8ес ВХА ог а рагда1 с!опе оЕ сРМА (Р18иге 8-6). А роро!асюп оЕ тпВХАа ь сгапаспЬед )псо сРХА мчсЬ ап адар!от-рптпег сопяапп8 ас Ва 3' епд оЕ а ро1у!Т) сгасс апд ас Вх 5' епс1 оЕ ап агЬлсгагу хециепсе оЕ 30-40 пис1еосЫеы Вечегае сгапхспрсюп ылхиа!1у Ео!1олчед Ъу сччо ялссеаяче РСКы ТЬе Естес 1а рптпет1 Ьу а Вепе-хрес)Етс лепте о118апис!еосЫе апт1 йе апс)хепхе (дТ)адарсог-рпгпег.
!Е песеахагу, йе ргодисса оЕ йе Елгхс РСВ сап Ье сьед аа сегпр!асеа Еог а аесопд, пеасед РСВ, лчЬ)сЬ ь рпшес1 Ъу а 8епе-арес)Етс аепае о118опис!еосЫе )псегпа1 со йе 6гас, апс1 а хесопд апсьепае о!т8опис1еосЫе лчЬоае лес)иепсе ь лт1епдса1 со сЬе сепсга1 ге8)оп оЕ сЬе (дТ)адарсог-рпгпег. ТЬе ргодись атпр!тбед ш сЬе аесопд РСК аге ьо!асед Егогп ап а8агохе Ве!, с1опей апд сЬагассег)хед. ТЬе Ео1!оичп8 ргоСосо1 )а Ьааед оп а пюс66саСюп Ьу лЛт.!.
СЬеп (б!ахо-ЪЧе11соше) оЕ йе шейода 6гя деьспЪед Ьу РгоЬшап ес а1. (1988) апд е!аЬогасес1 )п 1асег риЫЫадопа (е.8., р1еаае аее РгоЬтпап 1995; 5сЬаеЕег 1995; Веара1оча ес а!. 1998) МАТЕК!АЕ6 А сМРОВТАМТ То гедисе сЬе сЬапсе ос соплам!пат!оп тч!СЬ ехо8епоть ОМЛя ртераге апд иае а хрес!а! хеС оЕ геа8епта апд ао!одопа Еог РСЯ оп!у. Ва)те а!! 8!атячаге Еог б Ьоига ат С 50 С апд аитос!аче аП р!ахс!съчаге, $-ог тпоге !псогшас!оп, р!еаае хее йе рапе! оп СОМТАМсМЛТ!ОМ сМ РСВ !и йе сЬарсег !псгодисс!оп.
САНТ!ОМ: Р1еаае аее Аррепепх 12 Еог арргорпате Ьапд1!п8 оЕ шатег!а!а шаг)сед чч!СЬ < ! >. ВстЕЕег8 апт! Бо!обоп5 Р1еаае аее Аррепд!х С Еог согпропепга оЕ атос!т ао1ипопх, ЬиЕЕега, апд геа8ептя О!!ите атос)т ао1ипопа Со СЬе арргорпате сопсептгапопя 70х Агпр!!Е!саттоп ЬиЕЕег СИ!оготогт <!> 8.61 7Меоррр АГЧичеА ТТТТТТ абар1сг-рптег 1 7Медррр ААеАеА ТТТТТТ абар1сг-рпвпег 1 вециепсе-врес|ас абар|сг-рпвпег 2 с циепсе-врес(ас ар|ог-рпп1ег 2 АААААА абвр|сг-ргипе ТТТТТТ абаргог-рпгпег Оиепсе-врес~ас ар1ог-рпгпег 2 ТТТТТТ абар1сг-рпгпег с|еаче абар1ог-рпгпегв ве|1Л гев1псиоп епвугпев ТПттт "" Е(С()КЕ 8-6 Ое(егт(па((оп о(1Ье 3' Епд о3 тКНА Оь|п 3 -ВАСЕ ТЬе ь1га(е5у (гпоччп аь 3'-ВАСЕ (ь иьед (о гьо|а(е ип|споччп 3' ьег(иепсеь апд (о гпар 1Ье 3 ' 1егпип! о! тКЛ(А.
(А) ТЛе (дТ)„-адар(ог-рпп1ег (гергеьеп(ед Ьу йе Ыас)г аггочч) (ь аппеа|ед (о 1Ье роро|а(|оп о( гпКНА. Е(гь(-ь1гапд ьупйеь|ь (рпгпед Ьу (дТ), ) )ь асЛ(ечед иь|п5 гечегье 1гапьслр1аье апд дЛ(ТРь. (В) 5есопд-ь(гард ьупйеь|ь гь рлгпед Ьу а ьег)иепсе-ьрес(((с ргипег. (С) Агпр)(Вса()оп гь сопдпиед |п йе ргеьепсе о! йе ьециепсе ьрес(3(с рпгпегь апг! а ргипег сотр|етеп(агу (о йе агЬКгагу адар1ог ьес(Меосе, (о Вепега(е ьи38с)еп( ргодис( (ог с(оп(п8 (п(о а р|аьгп|д чес|ог апд 3ог ьиЬьег|иеп( ьег(иепс(п5. с3(ч)ТР 320 тм) ьоlи0ол сол1ат(л8 аП 3оиг др)ТРь (РН 8. О) Р|асел(а! Я((аье (лЬ(Ь3(ог (20 ипдь)р!) Р|еаье ьее 1Ье |пуоггпа1грп рапе! оп !НН!В)ТОК5 ОЕ КНА5151п СЬвргег 7.
ТЕ (РН 2.8) Ет)купзе5 апд Вььйет5 Кечегье (гальслр(аье (К(ч(А-дерелс)ел1 0(ч)А ро|углегаье) Р|еавс все йе рвпс! оп КЕТ(ЕК5Е ТКАЫ5СК!РТА5Е5 ()5ЕО !)ч( КТ-РСК га Ргогосо! 8. 5х Яечегье (гальсг(р!аье Ьиууег Ви52 СЬаргег 87 Тп Тг|!го Атр(фсаг|оп о) Е)3)А Ьу РСК А иве с|)цо(бТ) абар|сг-ргнпег 1 1о ргнпе 1пе вупйевв с1 агв1-в1гапб с0В|А Ьу гечегве 1гапвспр1аве В гегпоче гпл(ЧА апб ипивеб рпгпег-абар1сг 1 апб иве а вресйс абар1ог-рпгпег 2 1о рпгпе вупйеов с1 весспбв1гапб с0|еА ТТТТТТ абар1сг-ргвпег 1 агар()(у йе 3' веоиепсе с! йе гпйг|А ив!по йе вециепсе- врес)ас абар1сг-ргвпег 2 апб абаргог-рпгпег 1 Ргогосо1 107 КарЫА«пр/фсаг!оп о/3 «Т)ЫА Епдз 8.63 ТЬегтозсаЬ/е Г)/4А ро1угпегазе Таг/ РЫА ро1упгегазе Ь сЬе зсапс1агй апй арргорпасе епауше Гог йе апсрИсайоп зсаде оЕ шозс Соппз о( КТ-РСК.
Ноч«ечег, зчЬеге е1опдасюп Егогп 3'-пвяпассЬей рпгпегз 1з зизрессей, а сЬелпозсаЫе РНА ро!упсегазе к(сЬ 3'-+3' ргоо6еасбпд ассийсу гпау Ье рге(еггей (СЫавд ес а1. 1993). Се! д Ада«озе ог ро/уасгу/апнде деl <! > Р!сазе зее дсер 6. !х/ос1е1с АспЬ ап(1 О1фопцс!ео1141ед Адарсог-рнтег ЛО рм) (5 САСТССАСТССАСАТСС 3') «л Н О (70 рто/ез/р!) ТЬе айарсог-рлгпег Ь ыей гп соп) ипсйоп кЬЬ а депе-зресс6с зепзе рлгпег со ашр)1(у а рагйси!аг сагдес сРЫА.
Айаг агпр!гбсайоп, сЬе йеягей ргойисс сап согвргае аз !ас!е аз 1ча апй аз гвисЬ аз 1009а оГ сЬе соса! уге1й оЕ РЫА. 1Г песеыагу, сЬе усе1й о( йезпей ргойисс сап Ье ипргочей Ьу зессшд ир а зесопс( гоипй оГ ашр!16сасюп иявд йе айарсог-роше« апй апойег депе-зрессбс зепзе рпгпег йас Ьгп«Ь со а зег(иепсе сч(сЫп сЬе агпр1г6ей зедшепс оГ сагдес РЫА. Айег сЬЬ зесопй гоипй оГ пезсей агпр!г6сасюв, а1«поя а11 оЕ йе ргойисс йесессей Ьу есЬЫшгп ЬгогпЫе зса(шпд сопсагпз зег)иепсез соггезропй!пд со сЬе 3' гед(оп оЕ йе йеягей ОКНА. О!(допис!еосЫе рпгпегз зупсЬеяхег1 оп ап аисогпасес( РЫА зупйеяхег сап депе«а!1у Ье изей (п зсапйагг1 КТ-РСК зч(сЬоис Кшйег рипбсасюп.
Нозчечег, ашр!с6сайоп о( 1оъч-аЬипс(апсе шК 1Аз ь ойеп пюге еГЕсгепс !Е йе о1(допнс!еосЫе рпгпегз аге рипбей Ьу сЬгогпасодгарЬу оп сопипегс(аПу ачас!аЫе геяпз (е.д., ЫЕЫЯОКВ, ЫЕЫ Ъй. дсгепсе Ргойиссз) ог Ьу с(епашлпд ро1уасгу!агпЫе де! е!ессгорЬогеяз, аз йезспЬей гп СЬарсег 1О, Ргососо! 1. (дТ)с -Аг/арсог-рлтег (70 )см) (5' САСТССАСТССАСАТССА(Т), 3') т Н О (70 рто!ез/00 ТЬе о!сдо(йТ) гед(оп о( сЬе (с!Т) с -айарсог апсыепзе ргипег Ыпйз со сЬе ро1у(А) ' сгасс ас сЬе 3' епй о( шКЫА, !еачшд йе айарсог зес(иеппсез иврасгей. Ригшд ашрИкасюп, сЬе айарсог зес(иепсез аге сопчегсей со с(оиЫе-зсгапйес( сРНА йас, ш сЬе ехагпр!е д!чеп (п сЬЬ ргососо1, В ег(шррей чйсЬ гесодп(- Воп ясез Гог ХЬо1, 5а11, Асс1, Ник11, апй С1а! гезспссюв епхугпез.
Селе-зресгйс зепзе о/!Колос/ео((де рптег (70 РМ) гл Н О (7 0 рто/ез/р/) ТЬе депе-зресг6с зепзе рпгпег зЬон!й епсойе а (исозчп гед(оп оГ зес)вовсе оЕ сЬе сагдес гпКНА, зЬоиЫ Ье 20-30 пис!еосЫез гп 1епдй апй сопсагп арргохшыие1у ес(иа! пшпЪегз оЕ сЬе Еош Ьазез, к1сЬ а Ьа!- апсей сбзспЬийоп о( О апй С геяйиез апй а!очг ргорепясу со Еопп зсаЫе зесопйагу зсгисшгез. Рог ЕигсЬег йеса(1з, р!еазе зее Реядп оГ О!(девис!еосЫе Ргипегз Еог Ваяс РСК ш сЬе гпсгойисйоп со сЫз сЬарсег.
Аз газсиыей Ье!оъч, гезсгкйоп ысез аге аЬчауз йеядпес( гпсо айарсог-рпшегз. Но нече«, сЬеу сап а!зо Ье (псогрогасей шсо йе деве-зрес«6с о!сдопис1еоййез. ТЬгз айспйоп депегасез агпрИей сРЪ)Аз саггу(пд гезспссюп ясез ас Ьой епйя счЫсЬ сап Гас(!(гасе с!оп(пд. То(а/ К/з/А (700 рд/т/) т Н О ог Ро1у(А) КА/А (70 щ/т/) и Н О Тоса1 КНА ехссассей йогп се1!з к(сЬ сЬаосгорк адель ы депега!(у сЬе сепгр!асс о( сЬоссе Еог КТ-РСК (Ней!се ес а1. 1994) Сог гпКЫАз йас аге ехргеыес( ас гпос1егасе со ЫВЬ аЬипйапсе. Ро!у(А)' (з ргеЕеггес( аз а сешр!асе Гог а!1 6зппз о( КТ-РСК счЬеп сЬе сагдес шКЬ(А ь ехргеяей ас!осч аЪипс(апсе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
