Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Ас сЬе епд оЕ сЬе д18еас(оп, ад)иас йе чо!ите оЕ йе геассюп пнхсиге со 100 р! ъч(сЬ Н О, апд адд 05 м ЕЕ)ТА со а бпа! сопсепсга6оп оЕ 5 тм. Ехсгасс йе геас6оп пихшге опсе ъчЬЬ РЬепоЬсЫогоЕоггп апд опсе ъч(сЬ сЫогоЕопп. 5. Тгапх(ег йе аг!иеоиа РЬаае со а ЕгеаЬ сиЪе апд адд 3 м аоебигп асесасе (РН 5.2) со асЬсече а 6па1 сопсепсгадоп оЕ 0.3 м.
Адд 2 чо!шпеа оЕ есЬапо1. 5соге сЬе пнхсиге Еог 30 т(писеа ас 0 С. 6. Кесочег сЬе ргессрдасед 13)ь)А Ьу сепспйца6оп ас гпахипшп ареед Еог 5 т)писеа ас 4'С 1п а ткгоЕипе. 131скагд йе аирегпасапс, апд йеп ъчааЬ сЬе ре1!ес ъч)сЬ 70оуо ейапо1. Сепсг)(08е йе ьо1исюп апа)п, геточе сЬе аирегпасапс, апд а1!оъч сЬе ре!1ес оЕ Э!ъ(А со дгу сп сЬе асг Еог а Ееъч пиписея 7.
131хао!че сЬе Ес!ъ)А 1п 10 р! оЕ Н О. 8. 1п а тссго(и8е сслЬе, ъес ир сЬе Ео!!оъч(пц 1!пас(оп пихшге; 25 пц! гп! агар!сбед сагаес РХА 1.0 01 р!аяпгд 1114А 20 па 1ох !спас!оп Ссп(сег 1.0 р! Т4 ССС4А 11ааае 1 ппп Н,О со 10 01 !Е пеъеььагу, асгд АТР Со а Кпас ъопъепггаиоп оГ 1 гпас. ЪсгЬеп дсгесссопа! с!оп!па Ь паед, сЬе 11цадоп пнхспге гЬоп!д сопсаш ап -1:1 гпо1аг гасю о( рпп'- 6ед сагаес гсСъСА со е!еачед р!аипгд чееаог. 5ес ир а сопсго! геас6оп йас сои!а)пь а!1 сЬе геааепса 11асед аЬоче ехсерс йе атр116ед саг- деС 13)ъ)А.
9. 1псиЬасе йе 1Еаас)оп тсхсигеа Еог 4 Ьоига ас 16"С. 10. Р61исе 5 р1 оЕ еасЬ оЕ йе съчо 118ас)оп пихсигеь ълсЬ 10 р! оЕ Н,О апс1 !сапа(огт а япсаЫе асса(п оЕ сопсресепс Е. со6 со ап6Ьюск геяасапсе аа с)еаспЬед ш СЬарсег 1, Ргососо! 25 ог 26. Р!асе йе сгапаЕогтед си1сигеа оп тед)а сои!а)п)пд !РТО апд Х-Ка1 (р1еаае аее СЬарсег 1, Ргососо1 27) апд йе арргорПасе ап6Ъю6с. Рго1осо~ 7 Сепе6С Епц~пееппц ю~й РСК т н)5 Ркотосос (Ркоч(пвп вч 5т| РАн Анпткввон, Рн)чвкв)тч ок Тьхль 5оп(Ьъчеяегп Мед!са! Септег, Ра!1аь) г1еьспЬеа а гпейог1 то гптгодпсе а!шп1(апеопа!у геяпсдоп епдопыс1еаае ятеа ат йе 5' апд 3' епда оГ а с1опед гпаппиа1!ап сРХА апд то сЬапде аечега! содопа ас йе 5' епд оу йе сРХА со (Ьоье ргеуегеп(!а1!у п(11(хед ш Е. со!г'. ТЬеае (уреа оу епд пюд((1са(!опа аге (гег)лепт!у паед ш епд!пееппд сР(ъ)Ая ог депея Ьеуоге с1оп|пд (п чаг!опа еиКагуог(с апд ргоКагуоьс ехргеьяоп чесгогз (р1еаае аее СЬар!ега 15 апд !6).
Адд(тюпа! ше(Ьода !ог гпод|уушд йе епгЬ оГ РЫА шо1еси!еа аге деаспЬед !п йе рапе| Ье!оиъ МОКЕ 5ТКАТЕС1Е5 РОК М0ТАСЕ)ъ(Е5!5 ТЬе чаи|а(!оиа ои епс1 гиогППсадоп ог 0)ъ(А аге иитегооя 5ечега| дечег а(га(ед!еызье (Ыа гуре о( атрИсаГюи геасгюи |и я|(е-д!гес(ед импадеиеа|я Рог ехагир|е, Негпь!еу е| а|. (1989) деист!Ье а гпогИег1 (оп и о( (ичегае РСК !п и ЫсЬ йе а(ап!пд р|аяик| чес|ог аис1 (Ье (павел со Ье гонга(ед аге атрППед а! (Ье аате дгие. ТЬе окдоиос|еопде рг)тега соп(а|п (Ье то(а((опа ог тод)Всадила (о Ье !псогрога(ед |и(о (Ье с0ЫА ог депе алг1 ргосеег1 оо(ъчагд (гоги (ъчо ад)асеп! иис!еоддеь !и йе (агдес 0ЫА.
ТЬе алзрИса(юп геасдои ргодосеь Ппеаг ргодпс(ь (гоги йе с|гси|аг р!акт)д 0ЫА. )п(гати!есо!аг Пда((оп о( (Ье ргодпс(а д!чеа г(ье го с)гсо!аг то|еси|ея ъчЫсЬ сап Ье оаед (о (гала(огт Е со!), а ргорогПои о( ъчЬ|сЬ соп(а|и (Ье дев(гед сЬаидеь. ТЬВ гие(Ьод иогКа ъчеП (ог гереатед то(адеиеа(ь о( а ргеч(ооа!у сола(тс(ед ехргеьь(ои чес|ог.
ТЬе ргоседиге ро(еидаку ап(тегь (гоги (ил дгаъчЬаскя йе очегаП яйе Птк о( йе РСК (-4 кЬ) аид ГЬе (епс|епсу о( еопъе (Ьвтоа(аЫе 0ЫА ро!утегаьеа (о адд пира!гед иис!еог(де геядоеа Го (Ье 3 ' епгЬ о( агиркдег! 0)ъ(А. А |опд РСК рго(осо| сап очегсоте йе а!хе Пт)( ргоЫеги (р!еаье аее Рго(осо! 13) (Вагиеа 1994). 5ечега! гегиегкеь то (Ье |апет ргоЫеги аге д(асиеаед |п Фе (и(годогдои (о Рго(осо! 1. Еид тод((!са()оп сап Ье сотЬ|пед ъчКЬ яапдагг1 Ьас(егюрЬаде М13 а((е-прес(йс ти(адеиеяд (р!еазе аее СЬар(ег 13, Рго(осо! 2) (о епас| догиа|п виара Ье(иееп ддтегеи! рго(е)па (С!асКаои алг! ИЧигег 1989) аид (о сгеа(е с0(чА ог депе сЫтегаа иа очег|ар ех(еиьюи (Нопоп е( а|. 1990).
Ниаку, а де1е(юи сап а!ьо Ье |и(годост 8 (и(о а с1о ив! (гадтеи( о( РХА Ьу чае о( (пчегае РСК аиг! (и о окдоиис|ео(к|е рг)тега йас аЬи( йе деа(гед г|е|еПоп епдро!п(а (|гпа| е( а!. 1991). Ргогосо! 7: Оепег!с Еп8!пеег!п8 гч!ГЬ РСК 8.43 МАТЕК1Ас$ А 1МРОРТАЫТ То гег7исе 1Ье сЬапсе о1 сопГапнпаГгоп чч!ГЬ еходепоиа ОНАа, ргераге апе( иае а арес!а! аес о1 геааеп15 апс1 ао!ибопа 1ог РСП оп!у. Ва!се аП а!аааччаге 1ог 6 Ьоига ас 150*С агнГ аи1ос!аче аП р!аабсччаге.
Рог гпоге (п1оггпа1(оп, р!еаае аее 1Ье рапе! оп СОЫТАМГЫАТГОН Пч( РСР !п 1Ье сЬарГег !пГгоеГисбоп. САГ7Т1О!х: Р1еаае атее Аррепс!Гх 12 1ог арргорпа1е Ьапе!!!пд о1 та1епа!а тагЬес! чч11Ь < ! >. Впйегб апс! Ьо!о6опб Р!еаае атее Аррепс!!х 1 1ог согпропепП о1 51ос(с ао1и1гопь, Ьийегь, апс1 геадеп15. Р!1и1е 5!ос!» ао1иоопа 1о ГЬе арргорпа1е сопсеп1гапопь.
10х Атр!(1(са((оп Ьи((ег с(НТР ьо!ипоп (20 та77 соп(агпгпд а!1 Тоиг с(НТРь ГрН 8.0) Епгугпеб апс! ВоЕЕегб Арргорг(а1е геь(г!споп епс7опис!еаьеа ТЬегтоь(аЫе ОНА ро!утегаае Се!6 Аеагозе ог Ро(уасгу!агоре 8е! <! > Р!еаае аее 51ер 5. Ммс!е1с Асн15 апс! О!коппс!ео611еб О!!8опис!ео((с(е рптег 7 (10 Ра77 и ТЕ (рН 8.0) апс( О!!8опис1еоГ!с(е рптег 2 Г70 иае) гп ТЕ (рН 8.0) Роя(1гче сопсго! Е7ХА Тетр(а1е ОНА ТЬе Гешр!асс ТГГГА сои!П Ье, Гог ехашр!е, а с!опт аепе ог с77(ч(А Гп а чессог ог аепошк 77ГГА. Чесгогб 'чес(ог ЕГНА с!еачес( чч!ГЬ Яе арргорпа(е геа(г(сс!оп епгуте(57 апс7 ригг((ес( Ьу 8е! е!ес(горЬогеаь 11 йе геасгксее( чесгог 17гГЛ саге!ее сошраг!Ь(е Гептпш ГЬа1 сап Ье Паагее( Го еасЬ осЬег, иае ауха1гпе РЬоарЬасаае Го гегпоче йе 5'-РЬоарЬаге агоира апе! гшрргеаа ае!1-Пааг!оп (р!саве аее СЬаргег 1, Ргогосо( 20Ь прес!а! ЕГ1о1ргпеп$ Вагпег 1(рь (ог аи1отапс т(егор(реГГ(пе с(еч(се М(его(и8е ГиЬеа (0.5 т(, ГЬ(п-ччаПес( Тог атрИгсапоп! ог М!его(!Гег р1асеа Роы((че-с((ьр!асетепс р(реое ТЬегта( сус(ег рго8гаттес( чч(ГЬ с(еь(гес( атр((Т(са((оп рго1осо( 11 йе ГЬеггпа! сус!ег Га пег едшрред чч1й а Ьеасее(!Ы, иае егйег пипега! оа ог раса(бгп ччах Го ргечепг ечарогабоп о(Пцшг( йош ГЬе геасбоп гпгхшге диг(па РСП.
АГ1Й6опа! Кеацеп16 5Гер 5 о( Яга ргогосо! геди(геа ГЬе геаееп(х !Гасес! т СЬарсег 5, Ргогосо1 2, СЬар1ег 72, Рго1осо! 6, ог СЬар(ег б, РгоГосо( 70. 5(ер б о( ГЬ(а рго(осо! гедиггеа Яе геа8еп(ь !!5(ес( !и Ргогосо! 3 о( Яга сЬарсег. 51ер 2 о( ГЬ!а ргососо( геди!Геь ГЬе геа8епсч !Га(ес3 гп Ргососо1 6 о( ГЬ!а сЬаргег. Ргосого! 7: бепес!г Епе)пеег!пч и!сЬ РСК 8.45 6. 1Е гп)пега! о11 счаз изег) со очег1ау сЬе геасйоп (5сер 3), геточе сЬе ос1 Егопс сЬе загпр1е Ъу ехггасгюп ъч!СЬ 150 )с! оЕ сЫогоуогпс. ТЬе агСиеоиз рЬазе, зчЫеЬ сопсас па йе атр116ееС ВЫА, ип!1 Сопп а пасе! 1е пеаг йе гпеписиз. ТЬе гпкеПе сап Ье ггапзуеггегС со а ЕгезЬ сиЬе ълсЬ ап аисогпаас писгорсрепе. рог тапу ршрозез, Еог ехатр1е, рипйсаооп оС' сЬе атр!сугегС РгчА ияпа а Сепсг1соп писгосопсепсгасог ог с!оп!па атр110саНоп ргогСиесз, Ь Ь г)еягаЫе со геточе йе ос! !того сЬе затр1е Ьеуоге ргосеее11па. А 1МРОССТАМТ Оо пог аиегпрг сЫогосоггп ехсгасоопз !и писгог1сег р!агез.
ТЬе р!аз6с изес! !п йезе р!асез Ы пос гезиаапс со огаап!с зо!чепся 7. Рог зиЪзегргепс с!оп)па, с1еаче сЬе ЕТЫА Егаапсепс ас сЬе гезспссюп з!сез р1асес)1ог !оса!ее)) ас сЬе 5' епс)з оЕ йе ргипегз (чч)сЬ )чоге! апг1 Н)пс!111 сп сЬе аЬоче ехагпр!е). РипЕу йе йаезсес1 Егаагпепс из)па ае! е1ессгорЬогеаз ог и1сгаЕс1сгас)оп (р1еазе зее Ргососо! 3). 8. 5ес ир йе арргорпасе !!пас!оп геассюп ъч)сЬ йе г)ез)гес) чессог 1ТИА. 1)зе а гпо1аг гас!о оЕ шзегс со чеесог оЕ 3:1 сп сЬе 11цасюп геасЫопз.
Весаизе оу йе епог гасе оу йеппозсаЫе Во!А ро!утегазез, сс сз чегу ипрогсапс со чесс(у гЬе зециепсе ос йе атр!сугегС ВЫА айег с!оп!па !псо сЬе ехргеззгоп чессог. е есЬх)!ит ягиабоп Ео!г) сапа 8.48 СЬарсег 8: !п (71(го Атр|фса(Еоп оЕ Е)А!А Ьу РСЕ( ашр116сасюп ь асЬ|ечес$ Ьу иа|пд аепае апс3 апсьепае рг|шега сагдесес|со вес)иепсеа ш йе с0ЫА. $п пюя сааея шчеабдасога апп со депегасе а Елгас а!галс! оЕ сЕ))ч|А йас ь аа |опд аа роаяЫе апс$ солса|па а ЫдЬ ргорогсюп оЕ пю|еси|ев согпр!епсепсагу со йе сагдес КЬ|А. 5упйе6с депе-арес|Елс о$|допис|ео!Ыез сЬа1 Ь|пс)со йе 3'-ипсгапа!асес! гед(опа оЕ йе сагдес шК)х|А аге 1ЬегеЕоге сЬе ргппет оЕ сЬоке.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
