Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 15
Текст из файла (страница 15)
О!!до(с|Т) ь йе пехс Ьеас орсюп, апг$ галс|от Ьехагпегя счЬссЬ Ьаче по арес!Кеду апг! депегасе Ъо(Ь !опд апс! аЬогс псо)еси1еа оЕ с0ХА, аге иаес3 лчЬеп йе ойег шейосЬ оЕ рппппд Еал!. А аесопс$ ргппег апс$ а йеппоасаЫе 0Ь)А ро|ушегаае аге 1Ьеп агЫес$ Еог йе аиЬаес|иепс РСК-с1гЫеп ашрИка6оп яер. Роя6че апс3 педа6че сопсго!а аЬои$6 а!ччауа Ье |пс!ис|ес$ счЬеп аессшд ир КТ-РСКя ХедасЫе сои!го!а аге депегасес! Ъу ош$11|пд еааепс|а! сошропепса оЕ йе КТ а(аде оЕ йе КТ-РСК. Роя6че сопсго!я Ьоччечег, аге пшсЬ спсЫег Ьесаиае йеу гес(и|ге асапбаЫВ сЬас сап Ье сгапасг|Ьес$ шсо с0ЫА апс1 агпр|лбе11 лп рага|!е! лч|й йе ашЬепск сагдес аел)иепсе.
Ыеа|!у, йеае асапс)агсЬ аЬоиЫ сола(ас оЕ $споччп ашоипса оЕ а аупйе6с КЫА сгапасг|Ьес$ ш сбсго КЕЧЕК5Е ТКАЬ35СК1РТАВЕ5 05Е0 1Ь$ КТ.РСК ТЬе с|3 асочегу оЕ 0Ь|А-с|ерепс|епс КНА ро|утегааев И 3 970 ао|чес3 йе 3опд-асапс3$од рихх|е о1 Ьгхч сЬе КЬ(А депогпеа о1 сепа(п сигпог Мгиаез сои|с$ Ье сор|ес3 3псо 0НА |и |п1ессес| апс!(ог сгаиаЕогтес3 се|В (Ва!йпоге 1970; Тегш п апс| М| а исаи 3 С 970). ТЬе папсе гечегле сгаплсглр1аъе ъчаа со |пес$ аа а |о1се Ьу )оЬ п Тоохе, ччЬо 8 гас илес| |1 1п ап апопулиось Нечча апс| Ч(ечча ап|с|е |п Ха(иге. МисЬ со йе аппоуапсе о1 рипап ап1$ йе с|е3$дЬс о1 Тоохе, йе пагие а(ос|с апс| с|и!с|с|у Ьесапсе 'колк. ТЬгее 1огпь о1 КЬСА-с|ерепс|епс 0ЫА ро|утегааев аге поил лаась $п ч|сго со саса|ухе сде ауп1Ьеаь о1 0ЬСА соплр|етепсагу со ап кс4А сепср|асе: ° МеялрЕл!!!с еиаутез епсог!егЕ Ьу аиап туе!о(л!ассах!а ч|гиа !АМ!9 аигЕ Вле Мо3оиеу агга!и о1 тис4пе !еи3гет!а сЕгиа ЕМо Мс ).
ВосЬ епхутеа гес|шге ап КЬ(А ог ОНА сетр|асе сМ1Ь ап КЫА ог 0НА рпгпег Ьеаг(пд а 3'-Ьус|юху| дгоир. 1асИпд ап ес3!1$пд 3' — л5' ехопис|еаве аспч|су, ЬосЬ епаутеа аге ргопе со еггог. ТЬе К ча!иеа Еог 1Ье|г с|Ь)ТР сиЬасгасеа аге чегу Ь~ВЬ, 'е сЬе гп|11|пю|аг галде. То епаиге согир|есе сгапаспрдоп о( сетр|аСе К39Аа, В Ь еааепг|а! Со $пс|ис|е а Ь~ВЬ сопсепСгаиоп оГ с|ЬСТРа $п СЬе геасдоп. ТЬе епхугпе епсос$ес1 Ьу АМЧ Ьаа а роччег(и3 КЬ(аае Н аспчсу йа1 сап с3$деас Фе К|ч|А то|есу о1 КЬ(А0НА ЬуЬпгЬ апс$ сап с|еаче йе сепср|асе пеаг йе 3 ' сегпл|пгь о1 1Ье дгои |пд 0НА а!галс| В гечегае 1гапасг|рсаае расьеа г(иппд аупсЬеяа (Ко1еедсг е1 а!. 1988).
ТЬия йе ЫВЫече| о1 КЬ|аые Н асдчпу аюоо!асес$ мхй сЬе аяап гечеье сгапасг!Рсаае 1епсЬ со аирргеаа йе у|еИ о1 с0НА апс$ геасг|сс 1ь |епд|Ь (1ог ЕигФег с|ела|!я р!еаае аее йе 3пЕогтасюп рапе| оп К!8014()ССЕА5Е Н), ТЬе тилле епаугпе ь Еаг Ьеиег аЫ1ес3 1ог КТ-РСК Ьесасье 3(а КНаае Н асВМ(у Ь оэтрага1ве|у ъчеа|с (Сегагг| ес а|. 1997).
Носчечег, |Ье Мо-МсЧ епхугпе геасЬеа шах|тот ассм1у а1 а |оъчег сеплрегаилге (37'О сЬап ЕЬе ачап епхуте (42'С), ччЫсЬ гиау Ье и а!!ВЫ с3$аас|чапсаде д сЬе КЬ(А сеплр$асе Ьаа а ЫдЬ г|едгее о1 аесопс|агу алгос(иге. ° Ыагюапса о1 Мо-МЗУ сечете 1гапасг!рсаае 1(лас !ас(г КА(аде Н асс! !(у.
5ечега! еисЬ еиаутеа аге сюИ соттегс|а33у (е.д., 5иреьспрс 1гопл С|Ее ТесЬпо|од|еа ап1$5(гаса5спрс 1гогп 5сгасадепе). ТЬе гиосйдес| гечегае сгапаспр(аась Сгапасг|Ье а дгеаСег ргорогдоп о1 СЬе сепзр1а(е то|еси|еа апс$ аупСЬеяЬе 3опдег с0$4А псо|- еси|еа 1Ьап йе и43с3-суре епауте (Сегагс$ е1 а|. 1988, 1 997; Ко1еихкх е1 а3. 1988; Те!еаи|са|су апс! СоЕЕ 1993). 1п асИ|1юп, сЬеу аге сараЫе о1с0Ь(А аупйеаь ас Ь~ВЬ сетрегасигеа (ир со 50'С |п ялгпе сааеа), ччЫсд Ь ап ас|чапсаде ччЬеп сЬе сегпр|асе КЬ|А Ь гис3сес| $исо аесопс|агу асгиссигея ° ТЬегтоасаЫе Тй 0А(А ро!утегаае, ччЬ|сЬ Ь епсос|ег3 Ьу сЬе 1ЬегторЫ33с еиЬассепиги ТЬегтил (ЬегторЫ|из апс! ехЫЫь гечегае сгапасг|рсаае ас1м(у |п 1Ье ргеаепсе о1 Мил" (Муега апг$ Седапс! С 991).
ТЬе сЫе1 ас|чапсаде ос ияпд ТгЬ ро|утегаае |и КТРСК ь 1Ьас Ьосд РЬааеа о1 Фе геасдоп (гечегае сгапаспрс|оп апс| агпрйдса1юп) аге сагг|ес| ои1 |п 1Ье аате геассюп 1иЬе (Муеь ес а!. 1994). |и оиг Меи, сЬь $псгеаае 3п сопчеп|епсе Ь по1 аи8)с|ел! со сотрепаасе 1ог сЬе г3|аас|чапсадеа о( КЬ ро|утегаае, ъчЬ|сЬ аге йас йе ачегаде япе оЕ йе с0НА аупСЬеа|аес3 Ьу ТСЬ Ь оп|у -1-2 $сЬ, 1аг !еаа СЬап сап Ье асЬ|ечес3 ъч|СЬ Мо-МсЧ гечегае Сгапвсг|р(аае (-СП КЬ); |и асИ31!оп, 1Ье иае о1 Мпл Ь а ччоглу Ьесаиае о1СЬе !оччегес3 Яс|е|$(у о1 0$4А аупйеяа |и Фе ргеаепсе о1 1Ыа са1юп. Е|па33у, Т(Ь саппос Ье иасх3 едй о!!до(с|Т) ог галс|от Ьехатега аа рпгпегд впсе СЬе ЬуЬпсЬ чч$33 Ье ипЯаЫе аС СетрегаСигеа а1 ччЬ|сЬ йе йепиоаСаЫе 0НА ро|утегаае ь ас1ве. Ргогосо( 8: Атр!г()саг(ол оЕ сЕ)ЬТА белегагег( Ьу йенегге ТталкПр6ол о) т)!ХА 8.49 Егопь а с!опт, тпгасес( ае8тепг оЕЕЬе гаг8ес Е))ъ(А.
ТЬе рег(есс агапе)агс( ъчоп16 ййег 1и аеопепсе Егопг йе сагеег К)ъ(А Ъу ои1у опе ог пчо Ъааея геоп!тес! Ео сгеасе опе ог гпоге поче1 геаггкг)оп яге(8) ш йе атрВЕгег) сТ))ь)А ргос!пега. ВогЬ сЬе сатане! К!хА апс) йе агапс(агс( 8Ьоп18 Ье аЫе со Ье атр!16ес1 илгЬ ЕЬе аате ра)г оЕ рг(тета (Вес1сег-Аиъ)ге апъ1 НаЫЬгос1с 1989; ъъгап8 ег а1. 1989; С11!!!апс) ег а!. 1990; 5)еЬегг аис1 1.агпс1с 1992).
Айег агир176са6оп, гЬе си о РСЙ ргос(исса аге с!18- г(п8шаЬес) Ьу г68еагюп илгЬ геагпсгюи епгуте(я) апс1 а8агояе Ке! е1ессгорЬогеяа (1ог геч(еъч, р1еаае аее Вес)сег-Апг(ге 1993). Г>еиега6п8 а регЕесс асапг)агс( геошгеа с!ега11ес) р!апп(и8 апс( сопя(с!егаЫе !аЪог. Мосс !инесе)Пасоса ЕЬеге(оге аесс!е Еог !игегиа! агапс1агсЬ йас Еа!1 аЬогг оЕ рег(есгюп, Еог ехапгр1е, а с1опес) ае8тепс оЕ сЕ)!ъА ЕЬас саи Ъе аИес! )и чагуш8 с)паис)г)еа го йе КЬЕА сегир!аге, ог, !еаа с)ес)гаЫу, а сотр!еге1у пиге!асей, епс(о8епоиа КТхА прес)еа йаг сап Ъе атр!16ес1 оп1у ъчЬЬ аерагаге рг(тета.
5псЬ пирет(есс сои!го!я гиау Ъе та!ос!огоцз го рпгьга, Ъпг ЕЬеу аге сегса)и1у ргеЕегаЫе го ио сои!го!8 аг а11. Ас!еаас ЕЬеу ргоь 1г)е а теапа со пъеа7шге йе очета!1 ейкгепсу оЕ гечегае сгапъсПр6оп апс1 агпр!16саиоп апс) ргон(с(е 7юте 1исбсаг7оп оЕ йе срга!Ьу оЕ йе КХА ргерагасюп. МАТЕВ1А$5 ~ !МРОКТА!ъ1Т То гег(исе йе сЬапсе о( солтагп(лаПоп ъи(ЕЬ ехо8елоиь ОНАа, ргераге апг) иае а арес1а! ъег о( геа8епся апг1 хо!и!юла Еог РСК ол!у. Ва1се аП 8!аъъъчаге Еог 6 Ьоигь ас 750'С апс1 аигос!аче аП р1аъг1съчаге. Гог тоге(л(огтабоп, р!еаье ъее ЕЬе рапе! оп СО!ъ(ТАМ!(ъ(АТ(О!ъ(1Ы РСК (л ЕЬе сЬаргег 1лсгодисПоп, САОТ!О!ъ(: Р1еаае аее АррепгВх 72 Еог арргорла!е Ьапг!11пК оЕ пъасела18 тагЬе6 ъч)ЕЬ <1>.
ВоЕЕет5 аист Ьо1обоп5 Р1еаае аее Аррепг!!х 7 Еог сотропеп!8 оЕ а(ос(с ао!и6опа, Ьи((ега, апс! геадепса. О!!осе а!ос!с ао!и!!опт Ео йе арргорласе сопсеп!га!1опь. 70х Атрййса6ол ЬиЕЕег СИогогогт <!> с()ъ)ТР Г20 тм) ао)идол солта)л)лд аП Гоиг с()ъ)ТРь ГрН 8. О) Ейало! МКСЕ (50 глм) РЬело):сЬ)огоЕотт Г7: 7, ч)ч) <! > Р!аселта) )Т(ъ)аде ГлЬГЬ(тот (20 ил(та)Р)) Р!еаье атее ЕЬе (п(оииаПоп раие! оп 1ЫН! В!ТОК5 ОГ КНхагъ |и СЬаргег 7. Е02угтъе5 апс! ВсгЕЕег5 йечегье Егалзсг(ргаае ГК)ъ)А-с)ерелсГелг Е))4А ро(утегазе) Р!еаае гее йе рапе! оп КЕътЕК5Е ТКАЫ5СК!РТА5Е5 О5ЕО 1!ъ( КТ-РСК (п ЕЬе Епггойосгюп го йь ргогосо1. ТЬегтоагаЫе Е7)ъ)А-гЕерелс)елг Е))4А ро)утегазе Таг) Еъгсп ро1утегаъе Ь ЕЬе ггапдагъ( апг( арргориаге епгуте Еог ЕЬе агпрЬВса6оп игаса оЕ тояг Гостя оЕ КТ-РСК Иоиечег, ъчЬеге е!опсаПоп Егот 3'-ппяпагсЬе8 рг1тегь Ь ясиресгей а йегпюьгаЫе Е7ГСЛ ро!утегаье ъчЬЬ 3'ъ5' ргоо(геаг7(пс асПчну тау Ье ргесеггеъ7 (СЫапс ег а!.
! 993). Се15 А8агоае ог роЕуасгу)ат)сГе 8е! <1> Р!еазе гее 5гер 8. 8.50 СЬаргег 8: Тп (г(гго Атр!фсаг(оп оТРХА Ьу РСЯ (х(ЦС(ЕГС АСНЬ аг)д О! АКОГ)ИС!ЕО114)ЕВ Ехо8епоия геуегепсе УХА Р!саяе яее 5гер 2. ОГ(8опис!ео((г)е рлтегя Еог яул(ЬегПя оЕ сР)ь)А: ОП80(г(Т) ъ я ъ я (1 00 08)т!) гп ТЕ ГрН 8. О) Е(апг)от Ьехапис!еоНг(ея Г1 т8)т!) гп ТЕ ГрН 8.0) Селе-яресгу(с о)18опис!ео((с(е (20 рм) !п Н О Г20 рто!ея)р)) ТЬе Пепе-ярес(6с о1г8опис!ео)Ые яЬои16 Ъе сопър!егпепсагу со а )споъчи яеъ)иепсе (и йе гаг8ег тКМА.
РерепсПп8 оп йе ехрег)теис, о68о(ПТ)... гапъ)от Ьехапис1еогЫея, ог Вепе-яресъ6с апПяепяе о68опис1еогЫея сап Ье гьед ая рлиъегя Еог яупгЬеяя оЕ Еъгяг-я!ганг) сРМА (р!еаяе яее йе Ыгго0исгюп го йъя ргососо)). 5еляе алс( алг(яеляе о!18опис!еог(г(е рлтегя Еог атр66са0оп оЕ сЕ)(ъ)А Ьу РСК ТЬе ргнпег сье6 ъо Вепегаге сРМА гпау а1яо Ье ияег) ая гЬе ап6яепяе рпгиег ш йе атр66саПоп яга8е оГ агапе)аге( КТ-РСК. Ноъчечег, йе яресъбсКу оЕ агир66сабоп сап Ье )тртчс6 Ьу ияп8 ап апПяепяе рпгпег йаг Ыпеь ъо ап иряггеат яеъ)пенсе ш ъЬе ъаг8ег ъгапяспрь. Вой яепяе апъ( апПяепяе ргинегя аге Вене-яресъбс яупъЬеък о68оиис)еогЫея, ъчЫсЬ яЬои!6 Ье 20 — 30 пис!еогЫея ш !еп8гЬ ап6 сопгаъп арргохипасе!у е9иа! пшиЬегя оЕ гЬе Егюг Ьаяея, ччй а Ьа!апсеь) сПягг(Ъш!оп о( С апъ) С геяЫиея, апъ) а 1оъч ргорепягу го Еоггп ясаЫе яесопе(агу ягтсгигея 'чъгЬегечег рояяЫе, ые ярес(6с оПВопис1еогЫея гЬаг Ыпъ) го яе9непсея 1осагеь) ъп г66:егепг ехопя оГ йе ъаг8ег КМА ая яепяе апе) апПяепяе рптегя Еог апърП6сагюп о( ъЬе сРМА ргоъ)исг.
(и гЫя ъчау, атр66саъюп ргос1ись Пеггче4 Егогп сРМА апъ) сопгаиипагш8 Вепопък ЕъМА сап Ье еая!у сПяип8шяЬей Рог Гнгйег ъ)есаПя, р!еаяе яее Рея8п оЕ 0118опнс(еогЫе Рппъегя 1ог Ваяк РСК ш йе шггобисПоп го йь сЬаргег. Ваяея епсогПп8 геягпсгюп яиея сап Ье агЫеП го йе 5' ъегпнш оЕ йе яепяе апъ( апъьепяе рптегя ияее( ъп РСК (р1еаяе яее Ргососо! 5). ТЫя аъЫПюп Вгеаг!у Еасъ!иаъея с(ошп8 оГ ъЬе агирППес) ргос(исг. 068опис!еогЫе рпъпегя яупгЬея(хеь) оп ап ашогпаъес) РМА яупъЬея)хег сап ВепегаПу Ье сьег( (и ягапъ)агъ) КТ-РСК ъчъйюиг ГигъЬег рип6саПоп. Ночгечег, апър66саъюп оГ 1оъч-аЬипъ)апсе тКМАя и ойеп слоге еЕ6съепс (Е йе о68опис1еогЫе рг! иъегя аге риг1Еъеь) Ьу сЬготаго8гарЬу оп соиииегс(аПу ачаПаЫе геяпя (е.8., МЕМ5С)КВ, МЕМ ЫП.
5с)енсе Ргоъ)исгя) ог Ьу Пепашлп8 ро!уасгу(агпЫе Ве! е)есггорЬогеяя, ая Пеясг(Ьег) ъп СЬаргег 10, Ргогосо1 1. () яе Пъе Го!!оъч)и8 гогпъи(а (о са(си(а1е Йе то(еси(аг ъче)ПЫ о( (Ье о! фопис(ео(к1ея: А4„= (Сх 289) 4. (А х 313) 4. (Тх 304) 4 (С х 329) ъчЬеге С = пипъЬег о( С геягйъея )и Йе оППопис!ео(Ые А = пипйег о(А геяЫиея Т = питЬег о( Т геяЫиея С = пигиЬег о( С гея!Пиеа ТЬе агат то!еси!аг чче)ПЬ) о( а 20-гиег ъч!П Ье -6000; 100 рто)ея о( йе 0118опис(ео66е ъъя11 Ье ес)и)ча(еп! 1о -О.Ь щ То(а! Кс)А Г100 р8)гл!) гп Н О ог Ро!у(А) НАГА (10 р8)т!) и Н О Тога! КМА ехггасгее( (гоги сеПя ъч(гЬ сЬаоъгор)с а8епь ы ВепегаПу гЬе гегпр)аге оЕ сЬоъсе Еог КТ-РСК !ог шКМАя йаъ аге ехргеяяей аг шоаегаы го Ь)8Ь аЬииъ)аисе (Е)ейКе еъ а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
