Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 198
Текст из файла (страница 198)
4. Кегпоче (йе агпр о( и!иосейи!оае апд гер)асе ил(Л а (геаЛ Кпр. 3. Кереаг (Л)а ргосеаа ипй) ай йче а(пра Лаче Ьееп иьег(. ТЛеагЬогЬес1 ап((Ьог)у тпау Ье ь(огес( а(4'С )п (Ле ргеьепсе ог' 0.05% Ьч!ч) аог((игп аа)г)е ип(11 иаег( Хог (гпгпипо)ой)са) асгеел)пй. Рго1осо! 4 Кегпо~а! ог Сгорая-геас6~е Ап6Ьосйеь ггогп Апбьегит: ! псиЬа6оп ъий Е. сой 1уэа1е т НЬ РКОТОСОГ О85СК!885 А МГТНОО ГОК КЬМОи!ЫС ГКОМ РОСусСОЫАС апС/хега апг/Ьойеа СЬаг геасс ччпЬ Ьассег/а!-епсос!ес! Ргосе!па Ьу шсиЬа6пк ГЬе апс!аега ипсЬ а Ъассепа/ 1ухасе. ТЬс9 птеСЬо6 оГ абаогр6оп оп/у тчог!са Гог ргерагаСЬопх о/ ап68ега СЬаС сопСаш геЪагтче/у 1осч С!Сегз о/ ап6-Е. соБ ап6Ьойеа. 1Г йе сгеасет/ апс!хегиш сопс!пиеа со диче ап ипассерсаЫу Ь/кЬ 1ече1 о/ геас6оп ит!ГЬ Ьоас сошропепса, 6 8Ьои16 Ье 6лгсЬег рипйе6 Ьу сЬгошасокгарЬу оп а со1шпп йас сопса!па ппгпоЬ11сае6 Е.
соБ сошропепса (Ргососо/ 5Ь МАТЕК!АЕй САС/Т!ОЬС: Р1еаье аее Аррепйх 12 Гог арргорпасе Ьапс/1!пе о/ шаСег!а19 шаг/тес/ ччтсЬ <! >. Войегв апс! йо!66опв Р!еахе аее Аррепйх С Гог сошропепСх оГ 5!ос/е хо!и!!опх, Ьи//ега, апс/ геакепСа. ГС110Се а!ос/с 80101!опа Со йе арргорпаСе сопсепСгаС!опа.
В/ос/т/пе Ьи//ег 10 тпМ Тпя-С! СрН 8.0! 150 шм МаС1 0.0598 Гч/ч/ Ттчеев-20 ЫосК!пв авепс Г С 9б тч/ч ве!асш, Зеп тч/ч Ьолпе ьеппв а!Ьшпш, от 59те тч/ч воп/ас т/петс ш!!Ст/ Ор!шоп оГ сЬе тна вче ч!тепел оГ сЬеяе авепст хаттен Гтотп !аЬотасоту Со !аЬотасоту ЪЧе тесопппевт/ сЬас йе итчеъвва сот сатту ош рте1иптпату ехрепшепь то т!есепвтпе тчЬ!сЬ оГ йети тчотКт Ьеес тч!й йе сЬоаеп рптпату автС еесопт/агу апстЬойеа В!осК!пв Ьи/ует сап Ье всосет! ас 4'С авт/ теорет/ ьечета! Втпеа 5откшв атсае (! > твотт!8 Ье атЫет! со е Вва! соиеевттаиов оГ 0.0598 (тч/ч) со тввтви сЬе втотчтЬ оГ шкгоогвапвпы. СеП техиарепспоп Ьи//ег 50 шм Тпя-С! ГрН 8.0! СО твм ЕТтТА ГрН 8.0! р!!сет-тсеп1!ге апе! я!осе сЬе Ьи//ет ас 4'С !п 50-ш! а!аргоса, /4.26 Ргогосо! 4: Яеточа! а!' Сгоя-геасг!че АпгЕЬог!!ег Етот АпгЫегит: ЕпсиЬапоп гч!гЬ Е, со1г фугасе ! 4 27 Ап!!Ьойе5 Ап6ЬогЕу ргерагабоп йаг 1а го Ье пьесl Еог асгееп!пд Мес!!а ЕВ гпесоигп Сеп1пЕореь апе! Ко$ог5 5огчаИ СЯА гогог ог еди1ча1елГ прес!а! Ес!о!ршеп1 РгоЬе хоп!са1ог арргорпаге Еог хотсапоп оЕ Ьасгепа) се1!а Чес1огъ апс! Вас$ег!а! Яга!п5 Е.
соП асса!и У7090Ьаг!К ТЬ!г чгга!и сап Ье оЬсагаеа Егот 5ггасааепе, Е1Ее ТесЬпо!оагез, ог гЬе АТСС (и~лч.агсс.ога). МЕТНО0 1. Сгочч а 100-гп! сц1шге оЕ Е. со6 агга)и У1090Ьгг!Я го аагцгагюп !и 1 В шес1пци. 2. Нагчеас йе сеПв Ьу сепГНйлда1юп аГ 5000д (5500 грш 1и а 5огчаП СВА гоГог) Еог 10 пипцсеа аг 4'С. 3. Кеацкрепг! гЬе сеПв ги 3 гп! оЕ сеП геацарепа!оп ЬцЕЕег. Егееке апг! гЬагч йе гшарепаюп аечега! гппея апс) гЬеп ьошсаге П аг ЕцП роъчег Еог ых рег)ог!ь оЕ 20 ьесопг!я еасЬ аг 0'С. 4.
Сепгг!ЕцВе гЬе ехсгасг а1 шахцпшп арен Еог 10 пппцгеа ас 4'С ги а ш!сгоЕцВе. ТгапаЕег гЬе ацрегпаГап1 Го а Егер ГцЬе. йоге ГЬе 1уааге аà — 20 С. 5. !цаг ЪеЕоге цяпа йе 1уааге, сП1цге гЬе ргерагаг)оп оЕ апг)Ьог!у йаг га со Ье цаег! Еог асгеешпа 1:1О ичгЬ ЫосЫпа ЬцЕЕег. 6. Аг)д 05 ш! оЕ1уьаге Еог ечегу пи!ППгег оЕапг)Ьог!у ргерагаооп го Ъе ргосеааед. 1псцЪаге йе пцхгцге Еог 4 Ьоцгь аг гооп1 гегпрегагцге оп а а!оъч1у гога!)па ччЬее1. ТЬе ггеагег! апг1Ьог)у гпау Ье Яогег! аГ 4'С гп ГЬе ргеаепсе оЕ 0.05аУа (ччпг) аойцш агЫе пил цаег! Еог ппгпцпо!оа!са! асгеешпа.
Рго1осо~ 5 Кегпо~а! о1 Сгоьь-геас6че АпМЬойеь ггогп Ап6ьегцгп: АЙ~ п Ыу СЬгогпа1оцгарЬу т Н1В РКОтОСОЫ АОАртю гкОм Ов )Ает гт АС !1904), огвск!вев А мгтноо !ог гешоу!пк ап6- Ъ061ех гЬаг геасг гу)гЬ Ьасгепа1-епсойег1 ргогешх Ьу рахх)пк а сгибе ргерагаггоп ог" ппшцпок10Ъ- ц1!пх 1ЬгоцеЬ ап аЕйп)гу шагпх Ъоцпй со Ьассепа1 ргогешя ТЬ)х ргосег1цге сап а!хо Ъе цхег1 хе1)Ь ехггасм ог сц1гцгей се!1х ог 6ххцех 1о гешоуе сгоха-геасппк апГ!Ъ06!ея 11 !х ог" сошае сгцс!а! ГЬаг гЬе ап6кеп ог" шгегехг по! Ье ргехепг ш ЬЬе ех1гасг аггасЬе6 го 1Ье со1шпп. МАТЕЮА15 СА1)т1ОЬ): Р)еахе хее Аррепб)х 12 тог арргорпа1е Ьапб!!пк о1 гпа1епа)х тагхе6 чл1Ь <1>. ВптТегь апг1 йо!611опь Р!еахе аее Аррепб)х ! 1ог сотропеп1х о1 х1ос!г хо1цпопх, Ь01гегх, ап6 геаееп1х.
!)!!иге хгос)г хо!06опх го 1Ье арргорг)а1е сопсеп1гапопх. СеИ !ух)х Ьиггег 0.1 м аойшп Ьогаге (рН 8.0) 1 м ЫаС1 Вгепвге гве се11!уяа Ьыйег цяпк а 0.4а-рго В!гег, апй агоге аг гоого сегпрегагцге. Арргохцпаге1у 100 ш! от се!1 1уав Ьцйег Ь ге0шгед рег 1 11гег от Ьассепа1 сЫгцге. ХаОНЛ М <!> тпх-Ьиггегег) хайпе (ТВБ) апг! ТВБ сопгат)пд 0.2/ !чггЫ хоспигп агбг!е <1> тпгоп Х-700 Епгугпев апд Войегв Ьухохугпе 1Ле а то!еец!аг Ь1о!оку Кгаое оу !уюхупге. Аоо ао1Ы 1уаохуше со ааяаг!уж оу Ьасгепа1 се!1я Рапсгеа6с Ржаве ! АгЫ ао1Ы Р)4аае 1 го гЬе Ьаегепа! се!1 1уьаге го о)кеаг сЬгопююгпа! Р)4А. ! 4.28 Ргогосо! 5: Яеточа) оГ Сгоя-геасгве АпгГЬог))ег о~от Аибгегит: АГГ) и1гу СЬготаго8гарЬу !4 29 Ап1!1уос1ге5 АпВЬоду ргерагапоп йаГ га Го Ье пьес) Гог асгееп1пВ ТЬ)а ргогосо1 мог)га Ьеаг ггЬеп няп8 ап !8С Ьасбоп, ргерагед Ьу сЬгошагоВгарЬу оГ гЬе апбаепнп оп ргосеш А-5арЬагоае.
Рог а шегЬог) оГ ргоге)п А-5ерЬагоае сЬгогнагоагарЬу, р1еааа аее Наг!ош анг) !.апе 0999). Мейа Сгогчй глесоигл Опе 11гег оГ агом й гпейшп арргорпасе Гог гЬе В. соб ягаш оГ сЬоке Ь ге9шгей Сеп1г!ГАВ апг! Ко1ог5 5огчаП С5А гогог ог ес)ива1епГ 5огчаП 55-34 гоГог ог едигча)епГ прес>а! Есгогргпеп1 СЬготасоВгарбу со1игпп А 5-ш1 р1аагк ауппае р!н88ед чай 81ая гчон! ог а Вю-Каг! Ро1у-Ргер со!шпп и ашгаЫе. СуапоВеп-Ьгот1г)е-ас1ва1ес) 5ербагоье 4В ГАтегаЬат РЬаггпагба В1осесЬ) ог АП~-Се1 10 ГВ)о-Вас)) Чес1ог5 апс! Вас1ег!а! Ягагп5 Е.
соИ яга)п пьес) аз Ьоаг Гог ргерагапоп оГ ехргеЫоп ВЬгагу МЕТНО0 !. Сгогч а 1-10ег сц1шге оГгЬе арргорпа1е яга)п оГЕ. сой 1е8.,'г1090йгВЯ, ХЬ1-В1це, ог Г)Н1) 1о аГа1)опагу рЬаае. 2. Кесочег йе Ъассепа Ьу сепгг)ГцВаг)оп ас 4000е 15000 гргп гп а 5огча11 СВА госог) Гог 20 пцпшеа ас 4'С. 3.
Роцг оГГ гЬе шес1ппп, апд яапс1 гЬе сеп1г)Гцае шЬеа 1п ап шчеггес) рояпоп го а1!огч гЬе 1ааг 1гасеа оГ шес)1цш го г)гаш агчау. 4. Кеацарепд гЬе ре11ег гп 100 гп1 оГ се11!уяа ЬцГГег. 5. Ас)д 200 ш8 оГ 1уаоауте, апд гпсцЬаге гЬе Ъассепа1 ацарепяоп 1ог 20 пцпШеа а1 гоот гегпрега1цге. б. АсЫ ! ш8 оГрапсгеабс !9Ыаье1апс1 200)г! оГТг)Гоп Х-!00. 7.
1псцЬаге йе Ъас1епа1 ацарепяоп Гог 1 Ьоцг аг 4"С, ог цп61 йе гцгЪ)г))гу с!еага апг) гЬе ч)асояГу Йесгеааея 8. Сеп1г)Гц8е гЬе Ьасгепа) 1уаа1е аг 8000е (8200 грш ш а 5огча11 55-34 гогог) Гог 20 шшц1еа аг 4'С. Сагебг1!у г)есапг йе ацрегпагапг 1пго а ГгеаЬ Г)аа)с.
9. Ас))цаГ йе рН оГ йе ягрегпаГапГ Го 9.0 ъч)ГЬ ! ГгГ ЫаОН. 1О. Вегегпипе гЬе сопсепггаг)оп оГ ргогегп гп йе 1уааге цяп8 йе Ьогчгу, Вгас)Гогс), ог огЬег те1Ьог) оГ шеаацгешепг. 14.30 СБаргег 14: Ясгеетп8 Ехргеггюп Е!Ьгапез 11. СЬП1 гЬе ехггасг го 0'С, апг! йеп Ь1пд гЬе Ъасгег!а1 ргоге!па го суапо8еп-ЬготЫе-асг!гагег! ЕерЬагоае 4В ог го Агй-бе! !О ассогсПп8 го йе тапиГасгигег'а шаггисПопа. 12.
Вегоге иве, ециП!Ьгаге йе ЯерЬагояе 4В ог АГП-бе! 10 гесПп сои!а!и!п8 соп!и8агей Е. соП ргоге!па !п ТВЯ сопга!шп8 0.288 (и 1г) еос1!ит ак!с!е. 13. Ые 1 т1 о6 ьегг1ей чо!ите ог гееПп соир1ег! го Е. соП ап68еп гог еасЬ пиПфгагп о11цб ргогеш го Ье риг!Пей Ъу аП1п!гу сЬготаго8гарЬу. М!х йе 1аб апй йе соир!ег! гес4п апг! шсиЪасе Гог 12-18 Ьоига аГ гоот ГепгрегаГиге оп а го!а!!п8 ггЬее! г!ег!се. 14. Еоас1 гЬе к1иггу !пго а сЬготаго8гарЬу со1шпп. Кесогег гЬе апг!Ьоду Ьу иааЬ!п8 йе со1шпп ж)гЬ ТВЯ. СоПесг !гасПопа (0.2 со1шпп чо!ите еасЬ) ипП1 йе О!Э г1гора го кего. Роо1 гЬе Ггасг!опа сопса!и!пц апг!Ьоду, апг! а!иге йе роо1 аг -20'С ипП1 П !а иаег! !ог пптипо1о8!са! асгееп!п8. Рго1осо! 6 ИепИу~пц 0МА-Ь~пйпц Рго1е~пь ~и Вас1епорЬаце Х Ехргеььюп ЫЬгапеь омкттмн~тлкч Рыл ивклкиьв сонвткслстю |н влстт|иовнлск тхкксвяон чсотокь сап Ье асгеепед ъч|й аупсЬеск о68опис1еос)деъ со !денс)ту с1опет соггеаропйп8 со арес16с Р!ъ)А-Ъспдш8 ргосеша (Яп8Ь ес а1. 1988; ътспаоп ес а1.
1988). ТЬе тпесЬода аге мету япи!аг со сЬоае иаед тот 1ттипо1о81са1 ъсгеепш8 от ехргеясоп ПЬгапея ехсерс йас йе п)сгосеПи!оке 6!сеть саггуш8 нпиюЪ|1|хед ргосеша аге асгеепед ъчссЬ ллр-!аЬе!ед доиЫе-асгапдед РМА гасЬег йап ъч)сЬ ап6- Ъойея 1п)с)аПу, асгееп)п8 ъчаа сагпед оис ъчиЬ гайо1аЬе1ед доиЫе-асгапдед РХА саггуш8 а яп81е Ъ)пйи8 ясе !Яп8Ь ес а1. 1988). Ноъчечег, ип|1ег сЬете ссгситясапсея йе я8па1 Сгот а роя 1ссче с1опе ъчаа ойеп ъчеа1| ап|1 еая1у ъчааЬед Сгот |Ье тт!сег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
