Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 197
Текст из файла (страница 197)
ТЬе апс|Ьот(у ьо!иссои сап Ье ьтотет( ас 4"С апт) геиьет) ьечега| птеь. 5от)|шп атЯе 46ои!т( Ье атЫет) со а Пиа1 соисепсгаиоп оЕ 0.05ЬЬ (тч)ч) со |пЬтЫ| сЬе 8тотчсЬ оЕ гйстоотьашьть. 18. СстаьЬ йе 61сегь Еог 10 ииписеь Еи еасЬ оЕ сЬе ЬиКегь Ъе1оъч тп сЬе ог|1ег 8|чеп. ТгапьЕег йе 6!сеть |от)|ч|т!иа1!у стоит опе ЪиКег со йе пехс. С)ье 7.5 гп1 оЕ еасЬ Ьийег !ог еасЬ 82-иип 61- сег апт) 15 гп1 Еог еасЬ 138-ипи 6!сег. ТХТ ЪиЕТег сои!а|тбир 0.158 Ьоч|пе ьепип а!Ьиит|п ТЬ(Т ЪиКег сопса|п|п8 О. 144т Ъоч|пе ьепии а!Ъштт|п ап|1 О.
!% Хоп|с!ет Р-40 ТХТ Ьийег сопса|п|п8 0.158 Ьоч|пе ьепии а1Ьшп|п 19. Е)есесс йе аппцеп-ап6Ьот1у согпр1ехеь тч|сЬ йе сЬоьеп гайосЬеииса!, сЬгопто8еп|с, ог сЬеии!ипипеьсепс геа8епс. !САО!ОСНЕМ(САС 5СПЕЕ(ь(ПьСС Стае -1 )тС| оЕ тть|-1аЬе1ес) ргосетп А ог ипптипо810Ь01|п рег 6!сег, Кагбо!аЬе1ед ргосетп А Ь ача|1аЫе Еготп соипиегста1 ьоигсеь (ьрес|6с аспчпу 2 — 100 )тС!!)48). Кас)|осот)|пасет! ьесопт! апс|Ьот!у Ь ачат!аЫе сопнпегстаНу, ог и сап Ье ргерагес) аь т!еьсг|Ьес! |и йе рапе! оп ССАО|О|ОО|Ь(АТ!О(ьт ОЕ 18С аЬоче сп Матепа!ь.
а. И!исе гасбо1аЪе!ет1 !|Паис)ь !и ЫосЬКп8 ЪиКег (7.5 гп! Еог еасЬ 82-ппп 61сег, 15 тп1 Еог еасЬ 138-иии 6!сег). Ь. 1псиЬасе йе 6!сеть Еог 1 Ьоиг ас гоот сетирегасиг, апт1 йеп тчаьЬ сЬетп ьечега1 сииеь сп Т)ь)Т ЬиКег ЪеЕоге еьсаЫ|ьЬтп8 аисогат!108гарЬь аь т)еьспЬет! |п Аррепйх 9. Соиттие ат 5гер 20.
14.20 СЬаргет 14: 5стееп!п8 Ехртеггсоп Е!Ьтат!ег СНКОМОСЕМС 5СССЕЕХС!чС АпиЬогПеа соир1ес1 со ЬогяегабсвЬ регох!Паве !НКР) ог аПса1гпе РЬоьрЬасаье (АР) йас геасс ебсЬ арессег-аресг6с с)есегш!иапся оп ргниагу апПЬогПея аге ачаПаЫе Егогп сопыпегс!а) аонгсеа апг! аЬон16 Ье нае6 ас сЬе гесопппепг)ег) сП!исюп ги ассогг1апсе ебй сЬе шапа!ассигег'ь !пасгисс!опа.
ТурссаПу, 5 )г! оГ сои)н8асег! апссгегиш са нае6 Гог еасЬ 82-ппп 61сег ш 7.5 ш1 оу ЫосЫп8 ЬиКег (сч)сЬоис аог!!шп акЫе). Рог ЬггсЬег с1есаПа оп НКР, р!еаае атее йе сп!огшассоп рапе1а !и АррепсПх 9. Апг!8еп-Апг!Ьог!у-Апг!Ьог2у-АР Сотр!ехез Еосагег! !7гте ВС1Р апг! Ь)ВТ а. Сепг!у а8!саге сЬе 6!сета Сот 1.5-2 Ьонга ас гоош сешрегасиге ш йе гю1исюп о! АР-соп- )и8асед апиЪос1у. Ь. чстааЬ йе 6!сета аа деасПЬед !и 5сер 18. с. Ргераге асос)с тю1шюпа о! ВС!Р (50 ш81ш! сп 10088 гПпсейу1!оппапсЫе) апг! ЯВТ (50 ш81ш! ш 7058 сссгпесЬу1уогшагпЫе).
ТЬеае тю!тюпа аге асаЫе счЬеп асогес) !и йе гсаг)с. г1. Ргераге йе ВС1Р)ХВТ Вече!орт8 ао1и6оп )нас Ье!оге иве аа ЕоПочча: АсЫ 33 р1 оГ йе )ч)ВТ ьо1шюп со 5 ш1 о! АР Ъи!!ег апс1 пнх ччеП. !1. АсЫ 16.5 )г! оК йе асос)с тю1нсюп о! ВС1Р. Мсх а8аш. Ргосесс йе тю1н6оп Сгош асгоп8 ПВЬс апс1 иге и чбй!п 1 Ьонг. е.
В1ос йе счааЬегс 61сегк оп рарег сочче!а 1пснЪасе йе 6!Сета (5сер с1) сп сЬе ВС)РЛч)ВТ г)ече!ор!п8 ао!Епюп (7.5 ш1 йг еасЬ 82- гпш 61сег, 15 ш! !от еасЬ 138-пнп 6!сег) Хог аечега! Ьоигя ас гооги сешрегаснге. РПпае йе 6!сетя Ъпебу !и сччо сЬаи8еа о! Н О. Аи спсепае рцгр1е со1ог члП с1ече1ор ас йе ЕПсе о! апщеи-апс)Ьоду согпр1ехея. Соп6пие аг Егер 20. Апг!Веп-Апг!Ьог!у-Апг!Ьог!у-НКР Сотар!ехея Еосагег! !7х!пе 4-СЬ!ото-1-!с)арЬгЬо! 14.22 СЬаргег 14: 5стеетп5 Ехртегбоп Е1Ьгапег 20. 16епг1уу гЬе !оса!!опа оурояг!че со!оп!еа ог, !ушате, сошраге йе дир1каге 61гегы аеагсЬ!пВ Рог со!псЫепг ыцпа1я Рог асгеепа !пчо!ч!па гайо!аЬе!е6 ог сЬеш!!иш1пезсепг ргоЬев, сошраге йе геаи16пц аигога6!оВгаша гч!гЬ йе айаг р!агеа оп а 1!ВЬг Ъох.
Рог асгеепа 1пчо1ч1п5 сЬгопюцепк геацепга гЬаг 1еаче а чыЫе роя6че ген!6ие оп йе 6!сег, саггу оиг йе Го1!оч— !пВ агеры а. Ьау а аЬеег оу 5агап ЪЧгар ог Му1аг 61гп очег йе 6!гегы Ь. Оп гЬе аигуасе оу йе 5агап ЪЧгар, шаг1с йе !оса!!опа оу йе Ьо1еа ш йе 61гега апс1 гЬе !оса!!опа оГ апг!аеп-рояг!че с!опеа чбй г!!Руегепг со1огес1 гчагегргоог" пгаг1сегя 1.аЬе1 гЬе 5агап ЧЧгар со !6епг!Еу гЬе р1асек Ггош и ЬкЬ йе 6!!его ч еге с1епчед. с. Р1асе гЬе йеег оу5агап ЪЧгар оп а 1!ВЬг Ъох, ап6 а1!Вп йе р!асеа сопса!п!пц гЬе ог!В!па! Ьасгепа! со!оп!еа оп гор оГ и.
й 1бепг!Гу йе агеаь сопга!пшц гЬе роя6че со!ошея ап6 ггапаГег а аеВшепг оГ еасЬ рша6че со1опу го 1 ш! оу ЬВ шейшп сопга!шпц йе арргорпасе ап6Ьюбс. 1псиЬаге йе си1- гигеь Рог 12 — 16 Ьоига аг йе арргорпаге гепгрегагиге. е. Кеер гЬе аЬеег оу 5агап ЪЧгар, иЬкЬ ргочЫеа а реппапепг гесогд ог йе !оса!!опа ог гЬе роы6че со1ошеы ТЬе со1оге6 ароь оп йе ог!В!па! Игега уас1е г1и!ге гарЫ!у. 21. Кереаг йе ргосеаа оГ р1аг!пц апд асгееп!пц ип61 а Ьошоцепеоиа рори1абоп оу иппшпороя !6че со!оп!ег Ь оЪга!пей 22. Ча1Ыаге йе с1опеа !ао1агед Ьу нпшипо!оа1са! асгеешпц иапо опе ог' йе шегЬоба 6!асиаае6 ш ГЬе рапе! оп ЧАЕ!ЮАТ!ОХ ОЕ СЕОМЕ5 15ОЕАТЕО ВЧ 1ММЕ!МОЕОС!САЕ 5СРЕЕХПЧС аГ ГЬе епс1 оу Ргогосо1 1.
Рго1осо! 3 Кегпоча! о1 Сгою-геас6че Ап6оойеь 1гогп Ап1ьегит: Рьеидоясгееп~пц Вчвкхг мктноо5 слн в8 О58о то хтмочт лгхт|воо185 |Ьаг геас| ъч!1Ь Ьасгепа1- ап6 РЬааеепсобед ргоге)пх Егогп ро!ус1опа! аега: ° ЕисиЬае(пд йе апс(хегит ъч(й ттгосе11и!охе у|1Гега |о ъчЬ|сЬ попгесо|пЪ|пап| Ъасгег(орЬаае р1аг)иех Ьаче Ьееп ггапаЕегге6 (|Ьь рго|осо!). ° ЕисиЬат!пд Гйе апт(аегит ъч!й а 1ухате оЕ Е. соИ Ьоаг се!18 ргюг |о асгееп!па (Рго|осо1 4). ° СЬготагодгарЬу оЕ |Ье апгьегит оп а геяп го ъчЬгсЬ Е. соЕ ргоге!пх Ьаъ е Ьееп соча1епС1у аГ(асЬед (Рго|осо1 5). 1| 18 по| еаау |о ргейс1 ъчЫсЬ оЕ гЬеае гпейосЬ ъч!П у!е16 |Ье ор|ипшп ап|ьегшп Еог ипгпипохсгееп!па ригроаеа; йиа, |поте |Ьап опе гпе|Ьод п|ау Ье гег)шгед го Егее ап ап|ьегип| оЕ стиха-геасг(па апг!Ъ06(ех.
Рог еха|пр1е, |Ье асЬогрбоп |пейо6 |1ехспЬе|1 (п |Ьь ргососо1 ъчог)га оп1у Еог ргерага|юпх оЕ ап68еги|п |Ьа| сопга!и ге1а6че1у!оъч г!(ега оЕ ап6-Е. соЕ апг!Ъоб!ех. 1Е йе сгеагей ап|ьегшп сопг!пиеа со егче ап ипассерсаЫу ЫцЬ!ече1 оЕ геасгюп ъч!1Ь Ьоа( соп|ропепьв Ь 8Ьои16 Ъе Еиг|Ьег ри66е|1 Ъу сЬгошасоагарЬу оп а со!шпп йаг сопгаиь пппюЪ1!)ге6 Е. со1|' соп|- ропепь (Ргогосо! 5). МАТЕК!АЬ$ СА()ТЮ)ъ): Р!еахе хее Аррепб!х 12 Еог арргорпа1е Ьапб!!пи оЕ та1епа!8 таг)ъе6 ъч!1Ь <1>. ВиЕЕегв апс! Ьо!61!опв Р!еахе хее Аррепб!х 1 Еог соп|ропепЬ оЕ хгос)ъ хо!06опа, Ъи((егехч апд геаиепга.
О|!Ше 8!ос)ъ хо!06008 1о йе арргорпа1е сопсеп|га6опх. В/ос)г)пЕ Ьиууег 10 |пм ТппС! (рН 8.0) 150 шМ ЫаС! 0.059о Ь(ч) Тъчееп-10 Ыос)ъ|пв авепс (198 ъч!ч Ве!аип, 39о ъч)ч Ьомпе веги|и а!Ьипнп, ог 598 ъч)ч поп!а| с(г|е|) пиПь) Оршгоп оЕ |Ье ге)авче ч)ггпу от |Ьехе авепь чапек Егогп!аЬога|огу |о 1аЬога|огу. ъъге гесогпшепъ( йа| |Ье (пче|68а|ог саггу ои| рге! пгппагу ехрепгпепыо |)егегш(пе ъчЫсЬ от |Ьеш |чог(ьх Ьеаг ъчпЫЬе сЬохеп рп|пагу апг) яесопг(агу апвЬо|вес В!ос)ъ(пв Ьийег сап Ье згогед а| 4'С ап|) геиае|( хечега! 6|пег. 5оъ(1пш аг)|(е <! > |ЬоиЫ Ье а~Ыед |о а Впа1 сопсеп|гаиоп от 0.05ОА (ъчгч) |о шЫЬ|| |Ье вгоъч|Ь от гшсгоогвапыпа 14.23 74.24 СЬартет 14: Яетеептц Ехртеыоп 7(Ьтат(ев Ап1! Ьос!!ец Апт!Ьог)у ргерата6оп 76ат )а Со Ье овесу (от вегеепспц Ме(1!а ЕВ ацат р)атев ВасЬ 90-пип Респ тпвЬ вЬои1й сопсагп 30 — 35 пй о! ацаг спей!шп.
ВасЬ 150-пип р1асе вЬои!й сипса!и -50 ш! о( ацаг шей!шп. ТЬе р1всев пшя Ъе йгу; осЬегсч!ве, сце сор ацагове ы1П рее! о6. шЬеп сЬе шсгосеци1ове 61сег ы гепгочес). Бвиацу, 2-йау-о1й р!всех сЬас Ьаче Ьееп йпей (ог ап айтцсюпа! 1-2 Ьоигв вс 37'С вч!сЬ сЬе 1Ыв вПВЬс!у преп гчог(г ъчеП. ЬВ Сор ацагове Ме!с сце сор ацагове )ивс Ье(оге ые Ьу ш!егоччач!пц Гог а вЬогс репой о! сапе апй сЬеп еоо!гпц со 47'С. 77!врепве сце пю1сеп сор ацаг ав 3-ш1 аППимв ((ог 90-пип р1асев) ог 7.5-пс1 аПииосв (Кот !50-пип р!асев) сп всея!е шЬев.
Р!асс сЬе аПг)посв сп а 47'С Ьеаппц Ыос)с ог гчасег ЬасЬ со ргечепс сЬе сор ацаг (гош цеПшц. прес!а! Ес!о!рспеп1 07(стасе!!о!оье 66егв Ецсегв вшсаЫе Гог Ьшй(пц ргосесп апй иппшпоЫоишц спе!ш)е пЬгоееци1ове 61сегв Ьее о! Тпсоп Х- 100 (Мсцсроге НАТЕ ог ес!шча1епс), апг1 виррогсес! и!сгосеци1ове йепчайчев виеЬ ав НуЬопй-С ехсга (АгпегвЬагп РЬаппаеса ВюсееЬ). 74у!оп псегпЬгапев апй сЬагцей пу!оп спепсЬгапев вЬоиЫ пос Ье ыей Сог !гпшипо1оц!еа! всгеепшц Ьесаиве о! сЬесг роог гесепсюп о! ргосеспв апй ЬсцЬ Ьае)сцгоипйв. А4Ы!1!опа! Кеаееп15 57ер 7 ог' СЬ(х ртотосо) тес)и!тев 76е теацепп 1(втег( тп СЬартег 2, Рто(оео) 7. Втер 2 от" СЬга ртотоео) тес)огтев сЬе теацепп !(втег7 тп Ртотоео! 7 ог СЬ!х сЬартег.
Чес1отц апс! Вас1ет!а! Ята!пц Ваетег(орИаце 7. чеетог ()ве сЬе ехргевяоп чессог апй Ьассегий всга!п сЬас став ыей со ргойиее сЬе сссЬ)А 1гЬгагу о! гпсегевс. МЕТНОЕх 1. Оп сеп 1В ацаг р1асев, р!асе оис попгесогпЬйпапс ЪассепорЬаце Х во ав со оЬсасп веппсопПиепс 1усйв ог' сЬе Ьассепа! 1аччп (р!еаве вее СЬарсег 2, Ргососо1 1). 2. Ргераге нпрппп оу с!се 1увес1 1асчссв оп пигоееПи!ове 61сегв ав йевспЬей ш Ясира 5 — 12 оу Ргососо1 1, Ьис оппсппц сЬе сгеаспсепс слсЫРТС. !с Ь пес песеыагу со )геу сЬе 61сегв ав йевепЬей ш Ргососо1 1, цсер 8. 3.
131!псе сЬе ргерагапоп ог апВЬойу сЬас !в со Ье ивес1 !ог всгеетйпц 1:10 ълсЬ Ыос)с(пц Ьийег. 4. 1псиЬасе сЬе 61сегв Рог 6 Ьоигв слсЬ сЬе й11исей апВЪойу. ТЬе сгеасей апВЬойу гпау Ье всогей ас 4'С сп сЬе ргевепсе ог" 0.05%> (чт)ч) вой(игп аксйе ипп! овей гог пппсипо1оц(са! всгееп(пц. ТЬЬ гпесЬой сап Ье айарсей еаы1у со гегиоче апс(-Е, соП апсгЬой!ев Ьу рвеийовегееп!пц о! Ъвссепа1 со!ошев. Оп пагосеци!ове 6!сегв, евсаЫЬЬ Ьаесепа1 со!ошев сцас саггу сЬе егпрсу ехргевяоп чессог (р!еаве вее Ргососо! 2). ТЬеп (оцогч сЬе сеП !уяв апй 6! сег гчавЬ!пц ргоеессигев йевег!Ьей сп Ргососо! 2, цсерв 10 — 16.
Еапацу, сгеас сЬе апсЬегшп ав йевспЬей ш цсерв 3 апй 4 аЬоче. Ртогоео! 3: Яеточа( оТ'Стоге-телег(че Апг(йогТ(ез (г'от Алиаетипи Рзеиг(озетееп(пй 14.25 АЕТЕКЛ(АТ(ЧЕ РКОТОСОЕ: А(35ОКВ1Л(С АЛ(Т!ВО(31Е5 ЪЧ!ТН ЕЧ5АТЕ5 ОГ ВАСТЕК1ОРНАСЕ-1Л(ЕЕСТЕ(3 СЕЕЕ5 ТЛ)ь гпе(Лог( (о асЬогЬ апйЬог((еь (йа( геас( чч((Л Ьас(ег(орйайе-епсог(ес( ргоге(па (пчо(чеа (псиЬайпй йче ь(т(рь о( п(ггосейи!оае (3 х 10 сгп) (п а!уьа(е о( Ьас(ег(орйайе-!п(ес(ег( сейа ТЛе!уаа(е 'ь ргочЫег3 аа а согпропел( о( ьечега( сото гпегс(ай у ача) 1аЦе Ыйа (Лат соп(а(п тпасег!а)а гег(и(тес( (ог ап гпипоьсгееп(пй о( р(аг(иеа, (е,й., р1еаае аее 5(га(айепе'ь ркоВ(ие (тпгпипоасгееп(пц К$( ог Монайеп'к РЛайейпг(ег 1гпгпипоьсгееп(пй $0$).
Ме(Ьог( 1. 1псиЬа(е Тече (3 х $0 сгп) Кира о( п((госейи!оье (п а (уьа(е о( Ьас(ет)орйайе-1п(ес(ес( се)йп 2. Кетпоче (Ле ь(г!ра (гогп (Ле (ужасе апс$ !псиЬа(е (Ветл (ог $ Лоиг а( гоогп (етпрега(иге (п ЫосЫпй Ьийег. 3. $3$)иге 1 — 2 гп( о( (Ле апйЬог)у ргерагагюп ): )0 $п ЫосЫпц Ьийег апг( )псиЬа(е и4(Л опе ог' (Ле й((ега (ог 20 п Ели(еа а( гогип (еп1 рета(иге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
