Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 195
Текст из файла (страница 195)
Кейагд)еьь о1 )Ле тейос| иьед, |т |ь еььепйа! со деч)ье |пс1ереис1епт теьть тЬат ю|о пот ге|у оп йе ьаюпе )гпгпипо!ой!са! юеацепть иьед то )делю|)у йюе с|иле юп тйе йгьт р|асе. Ргогосо! 2: цсгеептц Ехргеггсоп схЬгаг3ег Сопгггисгед |и ВасгеггорЛаце Х ~ессогг 14.гЗ Т$СОС$ВЕЕ5НООТ13зсС А чагзесу ос ргоЫепза аге епсоип1егес1 исзеп иа3пц апссЬод$ее со асгееп ап ехргееасоп 1|Ьга|у $п а ЬассегюрЛаце $. чессог. Сопасдег йе со!3озч1пц ц "сигьед" зч!1Л по роъсссче с!опт ог "Ыееаед" и сй ап аЬипдапсе ос роядчея Сепега! сехга оп 'кп|пипосЛепкьиу сап ргоиде $пь$цЛСь апд я|сиз!опе Со сег|а$п ргоЫепзь $$оЛпесопе апс1 ТЛогре 1982; Наг3ои алс1 Сапе 1999).
° ТЬе апВЬос1у иаед пзау по1 гесоцпгее сЛе апццеп зчЛеп сЛе 1аиег 'ь ехргеееед сп Е, со$!. ТЛ$ь ргоЫегп сап оссиг зчЛеп ьсгееп|пц сог еи3|агуос$с се!! еигсасе ргосеспа сЛас Лаче ап аЬипдапсе о1 роясгапьсабопа! гпод3цзсасюгь аисЛ аа сагЬоЛудгасея!3рсда, агк1 д3аи1цзде ЬопсЬ. ЕасЛ о1 Фее гпод|цзсасюпь аге апс3цеп$с апс3 пос цепега11у ргеаепс оп ргосе$пь ехргеехед |и ЬасСепа. МопоьрессЦ|с ро!уссопа! ап13Ьод$еь йас гесоцп3се си!!у депаиггед, дец$усоау!асед ргосеспь аЛои!д Ье иаед и Лепечег роае!Ые со ачок! йене ргоЫепзя ° С3ае а Т14Т ЬиСсег йас доеа по1 сопСа$п Тиееп. Нопювс десегцепгь сап дсьгирС йе Ь3пд1пц ос 3оиг-азгзпсзу ап11Ьодсеа со ап апзсцеп. Опкйпц Тзчееп сап, Лозчечег $еад Со йе десес3$оп ос ап аЬипс1апсе оС са!ье роя $1$че с3опее дие со йе ассогпрапуспц гедис$1оп 3п яппцепсу.
° ТЛе и ее ос ехсеаа рп глазу ог аесоп да|у албЬоду |и йе всгееп1пц геас$$опв сап !еас$1о СЛе де|есСюп ос 1оо гпапу "роя1Ые" с3опея ТЛеье ссопеь аге ргехипзед со гехи!1 Сглаз Ьспд3пц ос апВЬоду со ргосе3пь йас аге ге1асес$1о йе сгие 1агце1, Ьи1 аге поС сдепзссас Со й О!1ис!пц йе апбЬоссу пзау е13пз$паСе ог гедисе сгоая геасс!опх ъи1Лоис яцп3цзсапс!у ассесс1пц 1Ье Ьспдспц оС 1Ле апцЬоду со 31а сгие сагцес. ° Тоо гпапу роядчеа сап |юпзецгпеа гессесс а ргоЫепз зч11Л 1Ле ЫосЫпц геацепс. Тгу опе ос 1Ле осЛег Ыос3г|пц геацепв аиццеьгед ипдег СЛе Ыосс|$пц ЬиСсег епС|у 3п йе Мазепац 1В1.
1|11егпасзче!у, $псгеаее йе сопсепсгадоп ос Тиееп ог сгу апойег попюп|с дегегцеп1 аисЛ аа $4опсдес Р-40 !и йе г$па3пц апд ччазЛспц Ьиссегя ТЛе СегпрегаСиге аС зчЫсЛ йе Ыос3с1пц ппяпц, апд зчаеЛ1пц асера аге сагпед оиС сап Ье спсгеааед 1о аа Л!цЛ аь 50'С. ° 13 рох$13че р1ассиеь аге поз де1есзед, часу 1Ье |псиЬа1юп 13пзеь 'в йе рго1осос. Рог ехапзр1е, 1Ле 3псиЬабоп ос сЛе $РТС-аоасгед Ясен оп сЛе ацаг р!асса сап Ье напед ЬеСзчееп 2 апд 10 Лаисой.
5пудег ес а1. $19о7! герогСес$ йас ап о — 1 0-Ьоиг 3псиЬацоп у3есда а яуза! йа1 ь 5 — 1 0 Влзр ягопцег йап а 2-Ьоиг 3псиЬа1юп. 5$пз$1аг!у, ап очегпсцЛ1 3псиЬабоп зч11Л рппзагу апйюду ог 3псиЬассоп ас 4"С зчог3сз Ьеиег сог яхпе апдЬод3ея еарес$а!1у йод зч11Л 1озч асс|п3су сог апбцеп.
Рго1осо! 2 5сгееп~пц Ехргеььюп Ызгапеь Сопйгыс1ес1 ~п Р!аьтМ Чес1огь м окт с0г4А ивва!вк соглктвглствгл вч РгАкмвк то!лАч икв вхвввкяогл чесгогк о(йе р()С, р(УК, ог РЕХ кепек (р1еаке кее СЬаргегк 11 апд 15 апг1 АррепгПх 3). 1п йе р(УС апс1 р(лК чессогк, лЬе с(3)к)А (к (пкеггед )пго ро)ус1отпц ягек гЬаг!ле лч)й|п гЬе ат!по-гегтша! гец(оп (РУС) ог йе сагЬоху-гегпипа1 гец(оп (р(УК) ог" гЬе Е. соЕ (1-ца!асгокЫаке цепе. А1йоицЬ !лЬгапек сопкггисгед ш Ьой РНК апс) р(лС чесгогк Ьаче Ьееп ксгеепед киссеяйцу чч(гЬ ап6Ъосцек (е.ц., р!еаке кее Не1(тап ег а1. 1983), р()К чесгогк Ьаче когпе адчапгацек.
Р(гкг, Ьесаике гЬе ро1ус1опшц яге гк ачаПаые ш аП гЬгее ггапк!аг(опа1 геасцпц (гашек, апу ореп геагПпц Ггагпе о( а кег)иепсед (гацплепг о( сТлЬ(А сап Ье еая1у лпкеггед (п йе арргорпаге (гате уог ехргекяоп. 5есопд, уияоп ргогешк ш ъчЫсЬ гЬе уоге(цп ке9иепсек аге 1осагед лп гЬе сагЪоху-геппша! гец)оп оу!1-ца!ассоядаке аге тоге кгаЫе гЬап 6ляоп ргосе)пк лч(гЬ лпкегбопк лп йе апипо-сегпипа! гец)оп (цгап1еу 1983).
1п аг 1еакг коте сакек, 6лк!оп ргоге(пк купгЬек(лед ггот гесотЬ(пап!к сопкггисгес1 (п р()К чесгогк гела!и /1-ца!асгоядаке асг!ч(гу (Квйег апд МППег-НП! 1983), лчцдсЬ сап кегче ак а икей1 плаг1сег с1иппц ргогелп рипйсагюп (р!еаке кее СЬаргег 15, Ргогосо1 1, апд СЬаргег 17, Ргогосо1 7). Ехргекяоп ог" 6ляоп ргоге(пк )п ЬогЬ р()С апд РНК р1аяпЫк (к сопггоцед Ъу йе ирягеагп 1ас рголпогег апд гк гЬеге(оге гергеяед ш кгга(пк ог" Ьасгепа гЬаг очегргодисе гЬе (ас гергекког (14 ягалпк).
Соп6пиа! гергекяоп (к ипроггапг го ргечепс сопк6ги6че ехргеыюп оу(оге(цп рголелпк, ччЬкЬ аге угес(пепл!у Сохк Со Е. соП (Агпапп ел а!. 1983; Сей|пц апс1 цатЬгоо)с 1983). Р!акпидк епсосцпц сохк ргоге)пк сап гЬегеГоге Ье ргорацагед апд агпр1Жед ипс1ег сопд)- 6опк гЬаг ацочч оп!у пппипа1 ехргеккюп ог' йе гик(оп ргоге(п. Махипа! купгЬек(к ог" гЬе гик!оп ргогелп (к ггапяепг1у (пдисед Ъу ехрояпц гЬе си1плге го!РТС Ьегоге (ттипо!оц)са! ксгееплпц )к ипдегга)сеп.
5ечега1 ехргеккюп р1аяпЫк Ьаче Ьееп декспЪед гЬаг саггу гЬе)г олчп сору ог йе !агля цепе (е.ц., р1еаке кее цгаг)с 1987). Ехргекяоп ол кес)иепсек с1опед (п йеке р1акплЫк (к г(цЬг1у геци1агед, гецагд1еы ол гЬе кгга!и о(Ьасгепа икед. ТЬе РЕХ гатцу ог р!акт!дк а1ко сопгалпк ро1ус1отпц ягек лп аП йгее геасцпц ггатек ас йе 3' сегтшик ол а уияоп депе согпрокед оГЪасгепорЬаце Х его кес)иепсек апд Е. го(г' (ас2 ке9иепсек (5гап!еу апд 1иа!о 1984). Ехргекяоп о( его-!л-ца1ассок(даке уияоп ргогелпк Рк сопггоцед Ъу йе ЬасгепорЬаце Х ра ргопюгег, лчцдсЬ сап Ье гергеккед диппц цголчгЬ апд аплрППсабоп ог йе р1аяпЫ Ъу гЬе ЬасгепорЬаце Х с1 цепе ргодисг. ТЬе РЕХ чесгогк аге поппаПу цголчп аг 30 С лп а Ъасгепа1 кгга(п саггулпц а деуесг(че ЬассепорЬаце Х ргорЬаце гЬаг купгЬеяхек а гетрегагигекепк(г)че с1 цепе ргос1исг. Тгапяепг ехргекклоп оГ гЬе 6ляоп ргогелп 1к лпс)исес1 Ьу галяпц йе гетрегагиге ог" шсиЬа6оп го 42'С Ъе(оге !ттипо1оц(са! ксгееплпц.
А1гЬоицЬ с)иапг(га6че согпраг(копк Ьаче пог Ьееп сагпед ош, и !к с1еаг йаг еасЬ ог йеке гЬгее (апп!(ек ог'р!аяпЫк сап ейюлепс1у сцгесг йе купйеяк о(1агце с)иапг!г!ек ог" 6ляоп ргосе(пк Рго|осо! аП 5сгееп)п8 Екргезя)оп ЕЕЬгаг|ея Сопя!снеге|! т Р!аят!|Е Ъесгогз 14.15 Еир со 40ауа оЕ гЬе гога! ехггасгаЫе се11и!аг ргосе|п). |Аг!ЕЬ!и апу опе ьупегп, ьп|а!1ег Епь)оп ргогешь аге ехргеьье6 го Ь!8Ьег 1ече!ь гЬап 1аг8ег Еиь)оп ргоге!пь апс) аге с)е8гас)ег! !еьь гар!с)1у Ьу се1101аг ргогеаьеь, регЬарь Ьесанье гЬеу п|оге геай1у Еогш ргес|РПагеь ()спо|чп аь !пс!ня!оп Ъод|еь; р1еаяе ьее СЬаргег 15, Ргогосо! 8) ипгЬ)п |Ье се11 (5)ап1еу апг) 1цх!о !984).
ТЬгее а1гегпа6че шегЬос!ь го с1егесг Ъоип|1 ап6Ъойеь аге с)1ьсиььес): гайосЬеп|ка! ьсгееп|п8, сЬгоп|а8епк ьсгееп!п8, апс) сЬепп1шп|пеьсеп! ьсгеешп8. ТЬе аг!чапга8еь апг! Жьас)чапга8еь оЕ йеье гпегЬос)ь аге йьспььег! ш йе !и!го|!исг!оп го гЬ!ь сЬаргег. )ч!АТЕИАБ САЕ)Т!О)з): Р!еаье ьее Аррепйх 12 Еог арргорпа!е Ьапдпп8 оЕ гпа)епа)ь шаг)сед яч!ЕЬ <! >. Войег5 апс! Бо!цйоп5 Р1еаье ьее Аррепйх 1 Еог согпропеп!ь оЕ ь!ос1с ьо!ибопь, ЬиЕЕегь, апг) геааеп)ь. ОПп!е ь!осП ьо106опь !о ЕЬе арргорпа!е сопсеп!га6опь. В!ос/с)пд ЬОЕЕег 10 шм ТгЬ-НС1 !рН 8.0) !50 гпМ ХаС! 0.05заз !ч)ч) Т|чсеп-20 20згз Еч/ч) Ее|а! Ьоч|пе зепнп А)|егпапче Ыос)с!п8 ЪиКегя аге 59о (зч)ч) попЕа| г)г)ег) пнП| ог ТППТ ЬиКег соп|аш|п8 )заз Езч)ч) Пе)аПп апг) 5заз Еч|)ч) Ьочше зегшп а!Ьшшп.
Ор)пюп оЕ ге)аггче чншея оЕ |Ьеяе Ыос)Пп8 а8епм чапая руоп| )аЬога|огу |о 1аЬога|огу. |уе гесошшепг) |Ьа| йе |пчея68а|ог саггу ош рге!нп!пагу ехрегнпепп |о з)егегш)пе |чЬкЬ оЕ |Ьегп |чог)яз Ьея| зч)гЬ ЕЬе рп|пагу апг) яесопг)агу аппЬойея |Ьа| чПП Ъе ыеП Еог ясгеешп8. В)ос)с)п8 Ьийег сап Ье погед а| 4'С апд геыеП зсчега! шпез. 5ойшп аг|8е (! > |ЬоиИ Ье аз)г)ег) |о а Ппа! сопсеп|гаПоп оЕ 0.059з 1|ч/ч) |о шЫЬ|г |Ье Вгоч|й оЕ ш)сгоог8ап!зшя. СЬ!огоуогт <1> ЕугПь ЬиЕЕег 100 |пм Тпз-С! !рН 7.8) 150 н|м 24аС! 5 шм МПС), !.59о (зч)ч) Ьоч|пе зепнп а1Ьипип 1 )|8)ш! рапсгеаПс Рмаяе ! 40 щ'ш)!уяохуше А|Ы Р)з)азе ! апд !уяохуше |о |Ььз ЬиКег )ы| ЬеЕоге ые |и 5|ер ! !. КеаВепгь Еог с)егесг)оп оЕ ап68еп-апПЬос)у сотр!екегн Кеадепгь Еог сЬготоВеп)с ьсгееп!пВ нк!Ь а!)за!Епе-рЬоьрЬа!аье-соп)идагес) апГЕЬос)у КеаВепсь Еог сЬготоВеп)с ьсгееп!ОВ зчЕГЬ Ьогьегас))ьЬ-регок)с)аье-соп)иВа!ес) апг|Ьог)у КеаВеп!ь Еог сЬетЕ!ит)пеьсеп! ьсгеегПпВ рог а Пзг оЕ геа8еп|я пееПег) Еог йе ьсгееп!п8 шайо|1, р!саяе зее 5|ар )9.
Еог )пЕоппа|юп оп сопнпоп)у изе|! гпейо|Ыо |!е|ес| апПЬойез, р!еаза зее |Ьс )пЕоппаПоп ране! оп Е)5ПЧС АЫТ!ВОР!Е5 Пз) !ММЕЛЧОЕОС)САЕ 5СПЕЕГч)ГчС. Рог Еиг|Ьег Пе|аПя, р)заза яаа |Ьа |иуопиа|юп рапаЬ гп Арряиспх 9. 5М 5|иге 5М а| гоо|п |еп|рега|иге. Епзсай еасЬ а!и!ио| айаг ые |о ге|!исе йе розПЬПЬу оЕ соп|аш|па|юп. ТА)Т ЬОЕЕег ! 0 шМ ТгЬ-С! !рН 8.0) 150 шм ХаС! 0.059о Еч)ч) Т|чееп-20 Арргомгпа|е!у ) П|ег оЕ ТХТ ЬиЕЕег Ь ге|)и!гег) рег )0 ПЬегз ясгеапе|!.
5|иге Т)з)Т ЬиПег а| гоон| |а|прага|иге. ИгаьЬ)пВ ЬиНегьг ТЕчу ЬОЕЕег соп!а)п)пВ 0.1/ Езч)ч) Ьоюпе ьегит а!Ьитгп ТА)Т ЬОЕЕег синга)пгпВ 0.17з ЕзчАП Ьоипе ьегит а!Ьит)п апс! О. 15й Ечуч) А)оп!с)ег Р-40 ТЬезе ЬиКегз зЬои!д по| сон|а)п зойшп ах|Па. 14.16 Сйарсег 14с 5сгеетпй Ехргеяя[оп Е[йгаг[ея ссас[!оасйсге Сопсроопс[5 сяя[-1аЬе1есЕ ргосе)л А ог сся)-!аЬе[ес[ (ттилоВ[оЬийп (орпола[) <1> Вас[(о(ос((ласес[ яесопс[агу алс(Ьос[у <1) С)яе й|я апс[Ъос[у К с[асяс(!пй сЬе апс]йеп-апс)Ьос(у сопср!ахея сч!сЬ а гаа!о[айе!ед яесопс[агу апссЪос[у сп 5сер 19. КАОЮЮОПЧАТЮЬ[ ОЕ ! ВС А ЪЧАЕСЫ![с)С Рег[олп СЫя ргосес]иге ЬеЫпс[ арргорла(е яЫеЫ)пц )п а соггесС! у чеп(ес1 сЬетр са! [игле Ьоос]. ТЫя те(Ьос[ сап Ье ияеВ со гасйо[аЬе[ ап )иС 1гассюп 1ог ияе ая а яесопс[агу апс!Ьос[у. 1.
Ргераге 1еС 1госп апСьегигл Ьу рго(е!и А-5ерйагояе сЬгогпа(оцгарЬу ая с[еясг!Ьед Ьу Наг!очч апс1 сапе (1999). О!!исе СЬе 186 чч!(Ь 50 псм яосйигп рЬоярЬасе (рН 7.5) со оЬ)а!и а йпа! сопсепсгасюп о11 гпфгп!. 2. То 50 Р[ о1 сЬе ййлес1 !еС, ай1 4 Р[ о( сяя! (яосйигл сяя! 10 глСйл[). 3. АсЫ 15 и! о1 сЫогагп[пе Т (2 тфл! 1п 50 псм яосйигп рЬоярЬа1е [рН 7.5]). 4.
[псиЬа(е (Ье геас Вол 1ог 90 яесопсЬ а( гоот 1еглрегасиге. 5. АсЫ 50 н[ о1 яосйигп гпе(аул!йсе (5 тй)ш[ !п 50 гпм яосйит рЬоярЬасе [рН 7.5]). 8. Арр!у йе яо!ийоп со а 5-гп[ сойхлп о1 5ерЬас[ех С 25 (ес[и[йЬгасес[ [п 50 гпм яосй игл рЬоярЬасе [рН 75]) (р!еаяе яее Аррепсйх 8). 7. Со!!есс 0.5-гп[ Егасйопя нпй! а!! о1 йе гайоасйч(у Ьая е!и(ес[ ( — 3 гп!).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
