Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 194
Текст из файла (страница 194)
Ап шсиЬагюп гегпрегагиге оЕ 42"С ь иаег( го епаиге (пасггчаг1оп оЕ ЕЬе х гергеаюг ргогегп (еисог!ег( Ьу ЕЬе с!ь837 а!1е1е) апд асичаиоп аугЬе 1угк ргоцгаги оЕЪасгег!орЬаие Х г)ече(ортсиг. 14.10 СБартет !4: $ггеепт8 Ехртея!оп Е!БгаПег а. Оепбу а8!саге сЬе Ясега Еог !.5 — 2 Ьоига ас гоопс сешрегасше !п йе ао!ис!оп оЕ АР-соп- )и8асесс апиЬог1у.
Ь. ЧтааЬ йе Ес1сега аа г)еаст)Ъег) тп $сер 14. с. Ргераге яос1с ю1шюпв оЕ ВС1Р (50 шнапс! !п 100% сбшейу1ЕогпсагпЫе) апгс ХВТ (50 тп8йп! !п 70% 6!шесЬу)ЕотшашЫе). ТЬеае ко!и!!опа аге асаЫе ччЬеп а!отед !п йе г)асс. с1. Ргераге сЬе ВС1Р/! !ВТ Йече1ор!п8 ао1и6оп )иас ЪеЕоге иае аа Ео1!оччя АсЫ 33 )с! оЕ сЬе ЫВТ ю1шюп со 5 пс! ОЕАР ЬиЕЕег апс1 пих счеП. 1!. АсЫ 165 р! оЕйе яос1с ао1ис!оп оЕ ВС1Р. Мсх а8аш. Ргосесс йе ю1и6оп Егош асгоп8 ВВЬС апг! иае И сч!СЫп 1 Ьоиг. е.
В1ос сЬе ччааЬег) Ес!сета оп рарег !отче!я !псиЬасе сЬе Ес!сета ($сер сс) ш йе ВС!Рт!)ВТ т!ече1орш8 ьо1ис!оп (7.5 ш! 1ог еасЬ 82- пип 6!сег, 15 ш! Еот еасЬ !38-пип 6!сег) сот кечега! Ьоига ас гоотп сепсрегасиге. д. К!пае сЬе Ес1сега Ьпебу !п ссчо сЬап8еа оЕН О. Ап шсепае ршр)е со1ог чч111 гсече1ор ас йе ясе оЕ апс18еп-апс!Ьог)у сошр1ехея Соп6пие ас $сер 16. Апс!реп-АпсЕБот1у-Апг!Бог!у-НКР Сотпр!ехег Еосасег) ЕБтпд 4-СБ!ото-1-БЕарБгБо1 а. Сепг!у а86сасе сЬе Ес1сега !п йе НрсР-соп)и8асегс апс!Боссу ю!исюп Еог 1.5 — 2 Боота ас гоош Сешрегатиге.
Ь. ЧтааЬ йе 6!Сета аа гсезст!Ъес) ш 5Сер 14. с. То ргераге г1ече1орш8 ю1шюп, гс!аао1че 60 гп8 оЕ 4-сЫого-1-парЬйо! !п 20 сп1 оЕ кесо!6 гпесЬапо1. !изс ЪеЕоге ихе, пих сЬе ю1и6оп ччБЬ 100 гп1 оЕ !О шм Тпа-С! (РН 75), ! 50 шМ ЬтаС1 сопта!шп8 60 Сс! оЕ 30% Н О . д. В1ос сЬе счааЬегс Ег1сега оп рарег !отче!а апг1 ччааЬ сЬеш Ъпебу !п !О псм Тгь-С1 (рН 7.5) сопсаиип8 150 гпм ЫаС1. е. !псиЬасе сЬе Ес1сега Еог !5 — 20 ш!посек ас гоош сешрегасше !п сЬе 4-сЫого-1-парЬйо! г!ече1ор!п8 ко!и6оп (!О тп! !ог еасЬ 82-пип 61Сег, 25 тп1 Еог еасЬ 138-пип 61Сег). Е.
ЧтааЬ сЬе 6)сета !и ссчо сЬап8ез оЕ Н„О. Ап !псепае ригр1е со1ог чч1!1 т!ече)ор ас йе ясе оЕ апт!Веп-апг)Ьос)у сошр1ехея Вгобпу!асег! прес!еяьрессбтс апВЬойеа апгС ачсйп-соп)и8асегС НКР аге ача8аЫе Етопг сопгптетсса! юитсеа ТЬеу яЬои!гС Ье йСасегС ассогйп8 со тпйчеВиа! тапеуасситетЬ спастисбопа аагС егер Еот спгтаипо!о8сса! асгеешп8 ва т)ететсЬегС аЬоче Еот НКР-соп)а8асегС аабЬойех Ртотосо! 1: Встеептпд Вхртезяоп 1.тЬтаттез Сопзп истет) тп ВастетторЬасе )з Ъесготз 14.11 С1опез оЕ Ьастет!орЬа5е з.
сап Ье тесочете6 сбтест1у !гонт зта!пет! 6!тетз айет сЬгопю5еп!с зстееп!пц ЕА1тет аптЕ ратпе !990). ТЬе атпонпь оЕ тпуестюнз ратно!ез гесочетед Ьу тЬе тесопыпепт!ет! шетЬот! — зстар!ттц тЬе 61тетз зч!ЕЬ а зса!ре1 ЫатЕе — ате Ь!5Ыу чат!аЪ!е, тап5!п5 Ьош < !00 то > !04 ррн рет яанзед нпрппт. ТЬе зстар!п5з !тою еасЬ нпрппт ате ннхет! тбтЬ 20-и! а!!т!нотз оЕ 5М, зтотетЕ очеса!5Ьт ат 4'С, апт! йеп тер!атез! ш а зепез оЕ с61шюпз оп йе аррторпате яташ оЕ Е. со!!. ОЕ сонате, пшсЬ 5театет анап!!т!ез оЕ Ъассет!орЬацез сап Ье тесочетет! Ьу йе ттасипопа! шетЬот) оЕ а!!цп!п5 йе яа!пей 61тетз зч!тЬ тЬе от!Ьбпа! р!ат!нез. Ноъчечет, !аде т!напт!т!ез оЕ Ьастет!орЬаце ате пот песеяап1у ап атЕчапта5е япсе тЬе пехт зтер ь то р!агапе-рнт!Еу тЬе тесоптЬтпапт Ьастет!орЬа5е. !Е тЬе штар!п5 шетЬот! и изей зче гесопнпент! сопт!ошно тЬе ттатитюпа1 шейот! оЕ !сеу!пц тЬе 6!тета то тЬе р!ат!нез, езрес!а!1у зчЬен зстееп!п5 !агре сРНА !тЬтапез.
ТЬь ехтта ейотт рточЫез !пзатапсе тЕ тЬе т!ез!тет! тесошЬ!папь Еа!1 то Ье тесочегет! Ъу зстар!нц. Сопттпие аг Всер 1б СНЕМ!ШМ!ЫЕ5СЕЫТ 5СКЕЕМ!ЧС СЬеин1шпгпезсеисе ы йе пюзг зепя6че шегЬот) Еог т)егес6иц иппшпороягЫе р!ас)пез. ТЬе зесопт1агу аи6Ъос1у 1з гурка11у сощнцагес) го еЬЬег АР ог НКР. 1)зе оЕ АР-сощнаасес) аи6- Ьосбез гет)шгез знЬягагез ансЬ аз 1,2-т)1охесапе РЬозрЬагез йаг еип! 116Ь! ас а шахнпшп зчаче1епигЬ оЕ 4бб пш прои т)ерЬозрЬогу1а6оп. НКР-сощпбагет) ап6Ьогбез охЫтхе гЬе зпЬ- а!гаге 1нпипо1, зчЬгсЬ 1и йе ргезепсе оЕ Ьут)гоаеп регохЫе апс1 рЬепо1 ешЬз аи гигеизе 116Ь! еинзяоп чч)гЬ а гпаыпшш аг 428 пгп. чзт)гЬ еиЬег зузгеш, гЬе 116Ьг еипзяоп сап Ье саршгет1 Ъу аигогас)106гарЬу. СЬеин1шишезсеи! с)егесгюп 1з с)н)с)с, ргойкез а ретшапеп! гесогс) оЕ йе зсгееиес) 61сег Еап Х-гау 6!гп ог РЬозрЬоппаае), апс) )з зепзйче 11 — 10 рц оЕ ап6цеп ш а р1асрге саи Ье с1есесгес1). Тзчо рогеи6а! с)гатчЬас1сз аге гЬе шйагес1 соз! оЕ йе геацеи!з апт) гЬе пеес1 со Ыеи6Еу роя6чез ои йе от)а)иа! аВаг р!аге Ъу сопграпаои го ап апгогас)106гагп.
А гурка1 ргогосо1 Е01!оччз. а. Сепг!у а61гаге йе 61гегз Еог ! 5-2 Ьонгз 1п гЬе АР- ог НКР-соп)ицагет) ап6Ьос1у ао1нгюи а! гоош Гегпрегагпге. Ь. ЪзтазЬ ГЬе Ягегз аз с)езсг)Ьес) ги 5гер 14. с. Ргераге гЬе сЬепи1ниииезсеп! зиЬзггагез ассогс)1иц го гЬе шапнЕасшгег'з Еизггнс- 6опз. г1. 1пснЬасе г!ге зчазЬет) 6!сета гп йе сЬеии1ппнпезсеп! зиЪягагез Еог 1-5 ииингез (апаш, сопзи1! йе шапнЕасгпгег'з гесоиипепс1агюпз Еог оргипа! ехрознге гнпез). е. Еугаш гЬе ехсезз зо106оп 6ош йе 61геия апт1 нпгпесбаге!у тчгар йе 61гегз ш Вагап чзтгар. Еуо по! а1!озч гЬе 61гегз го т)гу ош.
ЕзгаЫ)зЬ ап ангогат)106гаш (р1еазе зее Аррепс6х 9). Турка11у, гЬе шгба1 ехрозше и 1 пипнге. ТЬ)з !игегча1 ргочЫез епоиаЬ 1пЕогша6оп го езгаЫ)зЬ гЬе ргорег ехроягге гине. Сопбпие аг Вгер 1б. 14.12 СЬаргег 14: 5сгееиюий Ехргеьь!ои ЕюЬгагюеь 16. 1депНу тЬе!осадопь о1роьйче р1аю)иеь ог, !Е гладе, согпраге тЬе ю)ир1касе 61тегь, ьеагсЬ!пй 1ог сошсЫепс яйпа1ь.
Рог ьсгеепь !пчо!Ыпц гасбо!аЪе!ед ог сЬепи1шшпеьсепт ргоЪеь, сошраге йе геьи16пд аитогад!ойгашь тчпЬ йе айаг р!атеь оп а 1!5Ьт Ьох. Рог ьсгеепь !пчо!ч|пд сЬгопюдеп!с геайепть тЬат!еаче а ч!яЫе роядче геяс1ие оп тЬе 61тег, саггу оит тЬе Ео11отч)п5 ьтерь: а. Ьау а ьЬеет оЕ 5агап ТАюгар ог Му1аг 6!ш очег йе 6!тегь. Ь. Оп йе ьигЕасе оЕТЬе 5агап ТАюгар, шаг1с тЬе 1осатюпь оЕ тЬе Ьо1еь !п тЬе 61тегь апс1 йе 1осадопь оЕ апт!йеп-роь!т!че с1опеь тч|тЬ сбйегепс со!огед ччасегргооЕ шпаг!гегь.
ЬаЬе! йе 5агап !Угар то ЫепдЕу йе р!атеь Егош тчЬкЬ йе 61сегь тчеге с1епчед. с. Р1асе тЬе ьЬеет оЕ 5агап Тугар оп а 1!5Ьт Ъох, апд а!!цп йе р!атеь сопса!п)пй йе ог!5|па! ЪастепорЬаце 7 р1аю)иеь оп сор о1 и. д. !депдЕу тЬе агеа солта!п!пй тЬе роядче р!ас)ие, апю1 гешоче а р1ий оЕ айаг Егош йы агеа иь)пц йе 1агйе епс1 оЕ а Раьтеиг р!Ретте. ТгапьЕег йе р1ий то 1 ш! оЕ 5М сопта!п!пц 2 дгорь о1 сЫого1опп. е.
Кеер йе ьЬеет о1 5агап ТУгар, тчЬ!сЬ ргочЫеь а реппапепт гесогд оЕ йе 1осатюпь оЕ йе роьтттче р1аю!иеь. ТЬе со1огес1 ьрогь оп тЬе ог!5!па! 61тегь Еаде ю)и|те гарЫ!у. 17. А)!отч тЬе ЬастепорЬайе рагпс!еь то е1ите Егогп тЬе айаг р1ий Еог ьечега1 Ьоигь ат 4'С. Меаяэге йе йег оЕ йе ЪастепорЬадеь ш йе е!пате, апд йеп гер1асе йетп ьо аь то оЬташ -3000 р!аю)иеь рег 90-пип р!ате. юьеьсгееп тЬе р1аю!иеь аь деьспЬед аЪоче (Егош 5тер 4 опъчагд), апд гереат йе ргосеьь оЕ ьсгееп!пц апд р1ат!п5 ип61 а Ьошойепеоиь рори1атюп оЕ пппшпороядче гесоптЪюпапт ЬастепорЬайеь !ь оЪташес|.
УАЕ|ОАТ!ОМ ОЕ СЕОМЕ5 15ОЕАТЕО ВУ 1ММШЧОЕОС!САЕ 5СКЕЕМ)МС ТЬе Ыепййсатюп о1 !тшипоюеастве с!опеь Егот ехргет|оп ПЬюалеь сапиот Ье та)юеп аь ргоо1 тйат тйе СОМА о1 |птегеьт Ьаь Ьееп |ьо!атед. ТЬе ьрес)йюс|ту о1 апЯэод|еь )ь иечег аЬьо!иге апд |Ье ерюторе|ь) гесойиыед оп тЛе рготе|п )ь иьиайу иидейюпед.
Еиг|йег теьть аге тйеге1оюе гею|икед то чайдате тЬе )депт)ту о1 тйе )и|1|а! |ьо- | |атеь, !и десгеаь)пй огг|ег о1 ьтю!пйепсу, тйеье теьть )пс!иде: ° Оетольладол гйаг ГЬе ргогейл елсою1ею1 Ьу |Ье с|олею1 СОХА дюьр1ауь ЕЬе союгесю Ьюо)офса) ог еюиутагюс асдчюту. ТЬюь теьт иьиайу юес)и)геь йе |ьо!а)|оп о1 Еий-!еийтЬ СОМА с1опеь апд ехргеьь)оп юи рюо|юаюуойс ог еи)юаюуот)с честить тйа) с|о пот йепегате Еиь!оп рюотею пь.
! и оп|у а 1ечч саьеь Ьаь й Ьееп роьяЫе то с|ептоиьтюате тйе арргорлате епхугпат!с ас|Мту |и Еиь)оп рготе|пь ьупйеяхес! юп Ьас|егюрЬаде хйтт т честогь (е.ц., йгейу |исйегаье !ю|е ТУет ет а|. т 984] апд сат Ьга|п ц!итагпате десагЬоху|аье [Каийпаи ет а!, т 9881). ° Сотрагюьол оЕ гйе атюло асюд ьею)иелсе оЕ гЬе ргогеюл ючюТЬ |Ье атюло асюд ье9иелсе дедисею1 Ьот ГЬе ьеюуиелсе оЕ 1Ье с)олед СОХА. Ат ргеьепт, тЫь теьт сап гаге|у Ье аррйею|, ь)псе тЬеге |ь иьиайу по аюиюпо аск| ьею|иепсе ачайаЫе 1ог рготе|пь ччЬоье йепеь аге с|опед Ьу )пзгпипо!ой)са! ьсгееп!ий. Нотчечег, аь йе сага!оц от' Ьиюиаи йепеь )ь соитр|етед, тЫь теьт ь|эоиЫ Ьесогпе юоит|пе. ° Оетолягатюол дюаг тИе юиьюол ргоюеюл ехргеььед Ьу ЮЬе с|оле сал Ыос)ю гЬе тгегасююол Ьегючеел Яюе рил'- Лед ргогеюл оЕ юлгегеьг алю1 а ьрес!Ьс алдйою1у.
Еог ехаптр|е, тйе йюьюп рготе|п сои|с! рюотест ап епгуте 1гопт |пас|Хатюп Ьу ап апПЬоду. Айетайче|у, йюе 1иь|оп рготе|п сап Ье пьес! аь а Пйапд |и ай)и|ту рипйсайоп о1 ап апПЬою|у (е.ц., р|еаье ьее Еагпьйаию апю! котЬЕюе!д 1 985). ТЬе ай|и|ту-рипйюед аийЬоду )ь тЬеп иьею! аь а ргоЬе )и ъчеьтегп Ыоть о1 рию|Еюед апт)йеп. Бпайу, йе Еиь)оп рготе|п гпау Ье иьею! аь ап |юпптипойеп то га|ье апйЬоюйеь )Лат сап Ье теьтес| 1ог йте|г аЬП|ту то Ыпд то, ог |пЫЬЬ тйе аст|ч|ту о1 тйе рготеюл о1 юптеюеьт. Еою тйе ргерагатюп о1 Еиь)ол рготе|пь, р1еаье ьее Ргоиэсо!ь 7, 8, апг| 9 |и тЫь сЬартег апс| СЬартег 15. ТЬеье теьть аге Ьу по юпеапь тЬе оп1у опеь йат юпау Ье иьед то ча|Иате с|опеь )ьо|атед Ьу |ттиио!ой|- са| ьсюееп|пд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
