Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 193
Текст из файла (страница 193)
Айег 2-4 Ьоигз, сЬе р1асез аге шочес1 Егосп 42"С со 37чС со зсаЪП1ге апу Еиз!оп рго1ешя 1Ьас аге сешрегашге-зепя6че, апй 61- секя ипрге8пасей лч11Ь !РТ6 аге 1асй оп сор оЕ сЬе йече1ор108 р1акрлез со со1!ес1 ап ппрппс оЕ йе шйисей !из!оп ргосеспз. АЕсег ЕпсиЬасюп Еог а ЕигсЬег 2 — 4 Ьоигз, сЬе 61сегз аге гегпочей апс1 ргоЬей чпй ап6Ъойу ая йезспЬед Еп сЬе рго1осо1. ТЬе р1асез аге сЬеп зсогей ас 4'С ипс)1 йе гези118 оЕ !пппипо1081са! ясгееп!пу аге ача11аЫе. Розсссче р1аг!иез аге гесочегей апй апа1ухей йгйег аз йезспЪей ш йе1а11 1п РгоСосо18 7, 8, апй 9 оЕ й!з сЬарсег апй ш СЬаргег 2.
ТЬгее а1сегпа6че гпейойз со йесесс Ъоипй ап6Ъой!ея аге й!ясияяей: гайсосЬешсса! ясгееп- 108, сЬгошааепсс зсгеепспа, апг1 сЬепп1шшпезсепс зсгееп!08. ТЬе ай апса8ея апй й!яайчапса8ея оЕ йезе гпесЬойз аге йзсиззед ш йе шсгодис6оп со 1Ьсз сЬарсег.
МАТЕР!А15 САС)Т!О)ч): Р1еазе зее Аррепсс!х 12 Еог арргорг!а1е Ьапй!!па оЕ та1епа15 шаг!гед сч!й <! >. Войег5 апс! Бо!сс!!оп5 Рсеазе зее Аррепй!х С Еог сопсропепга оЕ зсосЬ зо1и1юпз, Ьийегз, апд геааепсз. О!1исе зсос!к зо!06опз со 1Ье арргориасе сопсеп1гасюпз. В!ос/апд ЬиЕЕег 10 шя Тпз-С1 ЕрН 8.0) 15() гим ЫаС! 0.05% Еч)ч) Тзчееп-20 20% Еч)ч) Ьаа! Ъогйие зегига А!сегпас!че Ыос)к!08 Ьийегз аге 5% Езч)ч) поиЕас йпей пиПк ог ТЫТ Ьи1тек сои1ашш8 !% Сзч)ч) 8е!айи аий 5% Еъч)ч) Ьочгпе зекшп а1Ъшпш.
Оршюп оЕ )Ье ге!аиче ч!гсиез оЕ сЬезе Ыоеск!08 а8еосз ч аггея )тоги !аЬогасоку со 1аЬокасогу. СЧе кееопипеий 18ас 18е кпчез68асог саггу ош рге!гиипагу ехрегипепи со йесепшие ччЬгсЬ оЕ сЬеки кчог)кз Ьея зч!1Ь сЬе рпшагу апй зееопйагу апПЬогпез сЬас чйП Ье изей Еок зегееши8. 8!ое)к!и8 ЬиЕЕег сап Ье зсогей ас 4'С аий геизей зечега1 Пикез. 5огпшо аггйе <! > зЬои!й Ье аййей со а Пиа! соисепскасшп оЕ 0.05% Егч)ч) со шЬгЬ!с сЬе 8гозчсЬ оЕ ки!сгоог8аиапь.
74.6 СПаргет 74| Встеетпд Ехртея|йоп ЕлЬгаг)ея Ап6Ьойед Рптагу апВЬоду Рог айч)се оп сЬооз)пд ргипагу апй яесопйагу ап6Ъойез, р1еазе зее |Ье шГоггпа6оп рапе1 оп ))5)ЫС АЫТ)ВОР!Е5 )Ы )ММ))ЫОЕОС)САЕ 5СКЕЕЫ)ЫС ас сЬе епй оЕсЬЬ сЬарсег. Мейа !.В адат р)агея ЕасЬ 90-пип Респ' йзЬ зЬои1й сопсаш 30 — 35 ш! оГ адат гпейшп, |чЬегеаз еасЬ 150-пип р)асе зЬои!й сопсаш -50 ш1. ТЬе р1асез гпыс Ье йгу; о)Ьегчйзе, сЬе сор адагозе чй11 рее! оЕЕ |чЬеп сЬе пагосе11и1оье 61сег Ь гепючей. Рзиаду, 2-йау-о!й р)асез |Ьас Ьаче Ъееп йпей Гог ап айй6опа1 1-2 Ьоигз ас 37'С |ч|сЬ |Ьеп 1Ыз я1|дЫ)у ореп |чогЬ сче!1.
ЕВ адат р!асез |чпЬоис агпр)сд!ш аге изей ш сЬе зсгеешпд ргосейше Ьесаим Е. со!|'у1090)ойдо дго|чз з!о|ч1у |и сЬе ргеьепсе оГ|Ье ап6Ь)опс. ЕВ гор адагоье Ме)с сЬе сор адагозе Ьу писто|чачшд Еог а зЬогс репой оЕ сапе апй сЬеп соо1|пд со 47'С.
Рарепзе сЬе |по1сеп сор адат аз 3-ш! а))с)иосз ) Гаг 90-ппп р!асез) ог 7.5-п|1 а)|сиоп )Еог ! 50-ппп р1асез) |и зсеп1е сиЬез. Р1асе |Ье а))г)иосз |и а 47 С Ьеа6пд Ыос)с ог и асег Ьай со ргечепс |Ье сор адат |топ| де11|пд. прес)а! Есрпргпеп1 А|г тсиЬатог ргеье) Го 42 С Си)!иге )иЬеь Еь)ег!)е 73 х 700 тт) Гогсерь, Ь)ип)-епдед А)еед)е !78-Ваиде) апд ьуппде у|дед сч!)П ъча)егргооЕ Ь)ае)с дгаччтВ !п)с !)пода )п)с) М)тосе))и)оье ГЕ!)егя Г61|еш зшсаЫе Гог Ь|пйпд ргосе|п апй |пппипоЫосйпд шс)ийе ппгосе1!и)озе 61сеш Ьее оЕ Тпсоп Х- ) 00 )М|11|роте НАТЕ ог ег)и)ча)епс), апй юрропей шсгосе1101озе йепча6чез юсЬ аз НуЬопй-С ехсга )А|пегзЬап| РЬаппас|а ВюсесЬ). Ну)оп гпегпЬгапез апй сЬагдей пу!оп шеп|Ъгапез зЬои!й пос Ъе ыей Гог ишпипо!од)са) зсгеешпд Ьесаизе оГ |Ье)г роот гесепйоп оЕ ргосешз апй ЫВЬ Ьас1|дгоипйь.
ЫишЬег йе 61|егз |ч||Ь а зой-!еас! Репе|1 ог Ьа11ро|пс реп, |тес сде|п чйсЬ счасег, апй загкЬчкЬ сЬеп| Ьес|чееп йгу ЪС|Ьасшап 3ММ рарегз. Сигар |Ье зсас1| оЕ 6!сеть ш а1шп)пшп Ео|1, ап|1 зсеп1тае |Ьесп Ьу аисос!ач|пд ас 10 ро )0.70 )сдГсшт) оп 1п)шй сус1е. АЕМ)бопа! Кеацеп$5 5|ер 7 оГ )П|я рго)осо! тес)и)гея )Пе геадеп)я )Ея)ед !и СПар)ег 2, Рго)ото! 7. 5)ер 77 оГ ГП)ь рго)осо! гет)и)гея )Пе геадеп)я 7|я)ед |л СПарсег 2 Ргососо! 2. ЧесЕогд апе) Вас$ег)а! Яга)пд Вас)ег)орПаде Х ехргеььуоп 7|Ьгагу Сопзсгисс а сРЫА!|Ьгагу )п ап арргорпасе ехргезяоп чегхог аз йезспЬей ш СЬарсег 1! ог рпгсЬазе сЬе 1)Ьгагу |то|п а сопипегс1а! вирр!)ег.
Веуоте Ьед!пп)пд сЬе ьсгеешпд ехрепшепс, йесепп|пе сЬе шег о! сЬе ЬассепорЬаде зо1исюп аз йезспЬей |и СЬарсег 2, Ргососо1 1. Е. сод Р)6егепс Ьассепа1 Ьоа иташз изей ш ехргеююп зсгеепшд тес)и)ге й)ЕЕегепс дго|ч|Ь шейа. Рог ехагпр!е, Е. со!| У |0900|6)), ячЫсЬ Ь сопипоп1у изей ав а Ьозс ьсгаш Еог сР)4А )|Ьгапез сопвсгиссей ш Хдс) ), сагпез а гписа6оп |и йе )ои депе счЫсЬ епсойеь ап АТР-йерепйепс ргосеазе. Рияоп ргосе|пь ехргеззей |и сЬезе ьсгашз аге ойеп п|аге зсаЫе йап сЬозе ехргеыей ш ясгашз!ас)йпд |Ьсз пи|сасюп. ТЬЬ зсгаш а1зо сагпез а р1азп|Ы )РМС9) сдас епсойез сЬе lас гергеюог апй ргечепсз зупсЬеяз оЕ росеп6а!1у шхк Ыяоп ргосешз !топ| сде )3-да1ассоьйазе рго|посег.
ТЬЬ р1аяпЫ а)зо сагпез а зе!ессаЫе |паг)сег ) апср"). То епюге адашзс 1оья оЕ |Ье р!азшЫ, дго|ч Е. сей зиаш У1090ЫИК |и гпейа сопса|шпд 50 идгш) агпр|- с|!1|и )ехсерс |чЬеп зсгеепшд, р)сазе зее посе |чпЬ ЕВ адат р)атея аЬоче). Е, сад зсга)пз ВВ4 апй ХЕ1-В1ие, вЫсЬ аге изей Еог иппшпо)одйса! зсгеешпд оГ!|Ьгапеь сопзсгиссей )п хХАР апй Ьз йепчабчез, сагту а !ас)ч депе апй а |е|' шаг)сет оп ап Р' Еассог. ТЬезе ясса|па зЬои!й Ье дго|чп ш |пейа соп|аш|пд 12.5 ид)ш! Се|гасус1ше.
ВеЕоге р!асшд |Ье Ьозс встаю со Ье изей, Ьесоше Еапи1|аг |ч||Ь сш депосуре ап|1 апу ипнр|е дгоипЬ гесрпгегпепсз. Ргогосо! 1г Всгеепгпб Ехргехпоп ЕЕЬгаг!ег Сапхггисгег( гп Васгег(орЬаче Х Ъесгогг !4.7 МЕТНО0 Р!а1!щ Вас!ег!ор!!аде 7 1)япи а яике со!опу оЕ ЕЬе арргорпаге агга(п оЕ Е. со!г ах (поси1иш, ргераге а р1аг(пВ си1- гиге ах дехспЪег1 Еп СЬаргег 2, Ргогосо1 1. Са1си!аге йе пшпЬег оЕ р1агех йаг иг61 Ье гес(шгег1 !о асгееп йе 1гЪгагу, аххипппц 0.5 х 10" го 2 х 104 р1аг!иех рег 90-пип р1аге ог 0.5 х 10» со 5 х 104 р1ас!иех рег 150-пип р)аге. АггапВе а хег оЕ яеп1е гиЪех (13 х 100 пип) гп а гас)с; ихе а ЕгехЬ гиЬе Еог еасЬ р!аге.
1п еасЬ гиЪе, пих 0.1 ш1 оЕ йе р1аппц Ъасгепа чч!ЕЬ 0.1 ш1 оЕ 5М сопсаш!пц йе г)еягед пишЬег оЕ р1агргеЕогш)пд иппх оЕ ЕЬе Ьасгег(орЬаде Х ехргеах(оп ПЬгагу. 1псиЬасе ЕЬе !пЕессег( Ьасгепа Еог 20 пппигех аг 37'С. !ттипо!оа(са! асгеешпи ког!га Ьеаг игЬеи ЕЬе деиягу оЕ р!а9иеа Ь 1огч. ТЬе со!ог ргог(исег( Ьу йе сЬготоаеик геасгюи и тоаг шгепае аг гЬе ехрапгппц ег(ие оЕ ЕЬе р!а9ие.
Ъуе!1-1ао1агег( гпшшпороя6че р!а9иеа гЬегеуоге йар!ау а сЬагасгегьис г(па-6!ге рапегп. гЧЬеи р!а9иеа сгоих! аиа(иаг опе апогЬег, йегг шаг рЬо!оау Ьесопгеа Егаашепгег(, ап6 гЬе (пгепягу оЕ со!ог аг гЬе сопггиоп Ьогг(ег Ьеичееп ад!асепг р!а9иеа ь агеаг1у гебисей Ногчечег, иппшпороя6че р(аг!иеа сап агг11 Ье гесоишгег) аь !опа аа югпе ропгопа оЕ гЬеи Ьогг1еш г)о пог та1ге сопгасг ъчгЬ гЬе Ьогг!его оЕ пе(дЬЬог(пд р!ациеа. 'чЧЬеп йе г(епягу ехсеег(а -300 р!ациеа/ст', гЬе Ьогг)ега Ьеичееп ие(аЬЬоппц р1аг(иеа дпарреаг апг! апг1иеп-роя!(че р!аг)иеа Ьесогпе !псгеаяпа!у спйгси!г го (г)епг(Еу. ТЬе пшпЬег оЕ р!асргеа рег р1аге и(чеп гп гЫа аргер аЬоиИ гЬегеЕоге Ье геаагг(ег( аа гЬе иррег 1ипп Еог !пипипо!оа(са! асгееп!иа. 1.
2. !пг!пс!!ол о! Рго1е!и Ехрге66!лп ол И$ег6 ХишЪег ЕЬе шггосеПи1охе Пг!гега чч!ЕЬ а хой-!еаП репе!1 ог а ЬаПрошс реп. (чае 61очеа го Ьап- сПе ЕЬе 61гегх Ъесаихе хЬПп оПх М!! Ргечепг ЕЬе сгапхЕег оЕ ргосеша. Воа)с йе 6!сегх ш 10 шм 1РТС Еог а Еегч пипигеа. (Ле Ыипг-епг)ег1 Еогсера (е.В., М(И!роге Еогсерх) го гегпоче ЕЬе 61- гегх Егогп ЕЬе хо106оп, апг) аПогч йегп го г!гу а! гоош сешрегашге оп а рас) оЕ К(шьпрея Кешоче опе р1аге а! а гппе 6ош ЕЬе (псиЬагог, апг! г!и(сИу очег!ау П чч(й ап! РТС-ппргеипагес1 ппгосеПи1оае 61гег. 130 пос шоче ЕЬе 6!гег опсе сопгасс Еа гпаг1е ипгЬ ЕЬе р1аге.
Риг йе р1аге ш йе 37'С шсиЬагог апг! гереаг йе аЪоче ргосег!иге ипЕП аП р!асеа сопга(п а ппгосеПи1оае 61гег. ТЬе еаяеаг гчау го р!асе гЬе 61!ее оп гЬе р1аге гч(гЬоиг !сарр(пи аи ЬиЬЫеа ь го Ьо1гг Ь Ьу (га е66ея Ьепйиц и а11аЬ11у ао гЬаг гЬе т1гЫ!е оЕ йе 61гег та(геа сопгасг чпгЬ гЬе сеигег оЕ гЬе р!аге. ЧЧегг(иц асгюп йеп ри!14 йе 6!гег оп!о йе р1аге.
11 Ь гшроггапг го р1асе Ег1гега оп йе р1агеа опе аг а гиие ао гЬаг гЬе гепгрегагиге оЕ гЬе р1агеа Воеь пог г(гор Ье!очг 37 С. ТЬе игокгЬ оЕ ЬасгепорЬацеа Ь аечеге!у гесагг(ег) аг гетрегагыеа <30"С. 1псиЬаге йе р1агеа Еог аг!еааг 4 Ьоига аг 37"С. Еуиг(па рппгагу асгеешпа оГ а 1гЬгагу, гг Ь ойеп гИ6си11 го спаипцшй иппшпогеасггче р1а9иеа Пот Еа!ае рояичеа. ТЬе йе9иеису к(гЬ гчЫсЬ Еа1ае рояпчеа арреаг ггерепг!а оп аечега! Еасшгя шс!игбп6 йе саге га(гегг 1и Ьапг(!ша гЛе 61гегя гЬе сЬагасгепгпса оЕ гЬе рагиси!аг апгпегши, апг( гЬе шегЬог) иьег( го г(егесс апщеп-апг(Ьоду сотр!ехеа, 1п иеиега!, сЬгопюиеик тегЬог(а оЕ г!егесиоп у(е!д Еегчег Еа1ае рояичеа ЕЬап гаспосЬеписа! тегЬоба апг( сЬепп1ит1пеасепг гпегЬодя Кчеп АгЫ го еасЬ гиЪе 2.5 ш1 (90-пип р1аге) ог 7.5 ш1 (150-пип р!аге) оЕ шо1геп гор аВагоае, апс) ипшесПаге1у роиг гЬе пихгиге опто ап 1.В айаг р1аге. ЕпсиЪаге йе ЕпЕессес) р!асех Еог 3.5 Ьоша аг 42'С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
