Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 196
Текст из файла (страница 196)
8. Роо! СЬе гасйоасбче гпаСепа!. 0яна)!у, > 933( опйе гасйо!аЬе! В )лсогрогасед, апс) йе ярес~йс асйчсу ос йе гасйо!айе)ес[ апй йоду ехсеесЬ 10я сргпггпй. Оо пос ясоге гас))о!айе!ед апс!Ьос!у сог рго!олйес) репосЬ Ьесоге няе. Апт(Ьосссе5 Рг(тагу алВЬосЕу Рог яс[ч!се оп сйооя!пй рлшагу япс[ сегоня[агу апВЬосйея, р!саяе яее йе спсогпсайоп ране! оп С)5!ЫС АЬ[Т18ОО1Е5 [Ь[ )ММ() СчОЕОС[САЕ 5СССЕЕ[чс[чС ас сЬе епс[ ос сЬся сйарсег. Гог ЕигсЬег сп[огшайоп оп апВЬогйея, р!еаяе яее сЬе [псолпасюп рапе!я ш Аррепейх 9.
Мейа ЕВ ог 5ОВ аВаг р1асея !пс[ис[е сЬе арргорласе апйЬюИс Еог йе ехргеяя!оп яуясегп ог чесюг шее со сопясгисс сЬе с)31(А ВЬгагу. ЕасЬ 90-псгп Респ' сйяЬ яйои)д сопсаш 30-35 пс! оЕ айаг спегйшп, счйегеая еасЬ !50-лип р[асе яйон18 сопсасп -50 лс1. ТЬе р1асея пшяс Ье с[гу; осйегсч!яе, сЬе сор ацагояе счй! Рее! оЕЕ счЬеп йе пссгосейи1ояе 81сег Ь гегпочес!. 6яна1!у, 2-с[ау-о[8 р!асея сЬас Ьаче Ьееп с[г!ес[ Еог яп асЫнюпа! ! — 2 Ьошя ас 37 С сч!й сЬе!г 1нЬ яййЬс!у орел ччог1с чче11. ЕВ ог 5ОВ аВаг р!агея сопгаттВ 1 гпМ (РТС Р!асея сопсяшшй 1РТС аге гейшгес[ !Е сЬе ехргеяиоп чеонг сагпея сЬе 1ас ргопюсег. Рог асЫЬюпа1 с[есайя оп !РТС-ш8исед ехргеяяюп оЕ ргосеспя, р!саяе яее сЬе гйясияяоп оп Ехргеялоп Нессогя Солса!о!пй ап 1РТС-1п8нс!Ые Ргогпопи сп йе !псгос[нсс(оп со СЬарсег 15.
Ьресса! Ецо!рпсепй А[г тсиЬасогя ргеяес ас 30 С алсс 42 С ТЬеяе аге гейшгес[ сЕ сЬе ехргеяя!оп чессог сагпея сЬе Ьассег[орйайе й р„рголюсег (е.й., РЕХ яепея); осйегсч[яе йе шсиЬасогя аге яес ас 37'С. Гогсеря, Ыилс-елс[есЕ А)еес[[е (1 В-ВаиВе) алс[ суповое Е(ИегЕ счс(Ь счасегргооЕ Ыас[с т[с Е!лейа 1лЫ Ртотого!2: 5гтеептпц Ехртеввтоп ЕтЬгапев Сопвттиететс тп Р!аятЫ Стеетотя !4.17 АГ!Стасе!!и!ояе Г!!Сетя Б!сегв вшсаЫе Еог Ьтптпп8 ргосе)п аптс «ппшпоЫос6п8 1пе1иг1е ппгосе8и!ове 6!сегв Ггее оЕ Тпсоп Х- 100 ГМ|!1!роге НАТЕ ог ет)шча!епс) апт) вирропед п1сгосе)1и1ове Оепча6чев висЬ ав НуЬопт)-С ехсга 1АшегвЬатп РЬаппас)а 8юсееЬ). Иу1оп шеп|Ьгапев апт) еЬаг8етС пу!оп п|ешЬгапев вЬои16 пос Ъе ые6 Сот пппшпо!ореа1 всгеешп8 Ъесаиве о! йе)г роог гесепсюп оЕ ргосетпв апт) Ь|8Ь Ьае)|8гоипт)в. ИшпЬег |Ье 6!сетя ъч)тЬ а во6-!еа6 репса ог Ьа!!роспс реп, тес сЬетп ча|Ь тчасег, ап|1 вап|ЬчтеЬ сЬеп| Ьеьчееп т)гу )ЧЬасшап ЗММ рарегв.
)ассар |Ье ясас1| оЕ 61сеш |и а1ипипшп Го|1, аптс яеп!ые сЬеш Ьу аюос!ачш8 ат ! 0 ря 10.70 1|8!ею|) оп 11|)шг) сус1е. Р!авссе Ьох аптГ С!аяв Респ тГ!ЗЬ УУЬагтап ЗММ раретв, тп а вСае)г ргераге опе СЧЬасшап ЗММ рарег Еог еасЬ 6!сег р1ив а Геъч врагев. |Чгар |Ье всасЬ оЕ рарегв сп а1ипипшп Со|1, ап|1 всеп! Ье сЬетп Ьу аисос!ачсп8 ас 10 рвс 10.70 1|8!еп|т) оп 11ошт) еуе!е. Чес1ог8 апд Васют!а! Ягаспь Р!аятпЫ ехртеввсол !|Ьтату Сопвсгисс а сВИЛ!1Ьгагу ш ап арргорпасе ехргешюп чеши| ав т)евсг)ЬегС |п СЬартег 11 ог ршсЬаве сЬе 1!Ьгагу Егош а сопипегеса! вирр1|ег. Ас!Й11опа! КеацепЬ 5сер 79 оГ ГЬГя ргосоео! тег)и!тех сЬе теа8епсв !!всетГ т Ртосоео! т.
МЕТНОО Ргерага6оп оЕ Майег Р!а1е8 апс! ЕсИегь 1. 1)ве всеп1е Ыипс-епт)ет) Гогсерв (е.8., М611роге ГЪгсерв) со р1асе а всеп1е ппгосе1!01ове 6Ьег, пшпЪеге|1 вЫе т)отчп, оп ап ЕВ (ог 50В) р1асе. Кегпоче йе 61сег стоп| йе р1асе, |пчегс 11, апт1 гер1асе )с, пигпЪегет! ят!е ир. 2. Арр1у йе Ьассепа |п а япа11 чо!шпе оГ 1н)шг! (<0.5 гп1 сопса)п)п8 ир Со 20,000 Ьассепа Сот а 138-шип 61тег, <0.2 гп1 сошасп)п8 ир со 10,000 Ьассепа Гог ап 82-ппп 61сег). 5ргеат) йе !нр|Ы очег |Ье впгГасе оГ |Ье 61сег вчссЬ а всеп1е Ьепс 81авв го|1.
1.еаче а Ъогт!ег 2 — 3 ппп ччЫе ас сЬе ет!8е оГ йе 61|ег Ггее оГ Ьассепа. 5соге сЬе р1асев ас гоотп сетпрегашге ип61 а1! оГ сЬе 11тсиЫ Ьав Ъееп аЬвогЬей 3. 1пчегс сЬе р1асев апс1 спспЬасе йетп ип61 чету япа!1 !0.1-ппп 06агпесег) со!оп)ея арреаг !8 — 10 Ьоигв). Стоят со1ошев сопса|пш8 ехргеяюп чегтогв саггутп8 сЬе )ас ргогпосег ас 37"С. Стоге со!ошев сопташтп8 ехргеяяоп чессогв саггу1п8 сЬе ЬаесепорЬа8е )ч р» ргогпосег ас ЗО"С со ргечепс |Ье ехргеыюп оГ 6|Поп рготе!пв. Ргерагабоп оГ Йер!1са Нсег8 4. 'т'|тес а пшпЪегей, всеп1е ппгосе1!и1ове 61сег Ьу соисЬ|п8 Ь, пшпЬегет1 яс1е пр, со сЬе яигГасе оГ а ГгевЬ а8аг р1асе еопса|шп8 йе арргорпасе ап6Ъ|обс.).еаче сЬе 61сег Ы сопсасс тчссЬ сЬе вигГасе оГ сЬе а8аг. ТЬе пшпЪегв оп йе вес оГ гер11са 61сегв вЬои!й соггевропг! |о йояе оп |Ье тпавсег 61|егя.
5. С)ве яеп1е Ыипс-епдет! Гогсерв со геточе йе |павсег 61|ег Вепс1у Ггогп опе оГ йе а8аг р1асев (5сер 3) апт) р!асе сс, со!опу яЫе пр, оп йе всас1| оГяеп1е ЖЬасшап ЗММ рарегв. 14.18 СЬартег )4т Бстеетп8 Ехргетт!оп ЕтЬгагтет СагеЫ1у р!асе сЬе аесопй соггеаропт!!п8!у пшпЬегей счессет! 61сег пцтЪегес) а!с!е с)отчп оп сор оГ йе гпаасег Исег, Ьетп8 сагебт! пос со точе йе 6т1сега опсе сои!асс Ьаа Ьееп тат)е. Р1асе а спк!е оГ ЗММ рарег оп сор оГ сЬе 61сег запсЬч!сЬ, Р1асе сЬе Ьоссот оГ ап етпрсу Реги' йй оп сор оГ йе ЗММ рарег апт) ехегс Ьапт! Ргеяшге оп йе аапйч!сЬ. ГЛе ап !8-8ац8е пеетПе со та1се а сЬагассегтапс тес оГ ге8!асса!!оп Ьо1еа !и сЬе 6!сета тчЬПе йеу аге таис)ъч!сЬед со8есЬег. Сепбу рее1 йе 6т1сегв арагс. Тгапауег йе гер!ка 61сег со йе р!асе пает) Гог тчесс!п8 (8сер 4).
Тгапауег йе тпаасег 61сег, со1опу аЫе цр, со а ГгезЬ а8аг р1асе сои!а!и!п8 йе арргорпате апттЬютк. !Г тет!штат!, тенета! герПсаа сап Ье итат)е Гтого а а!и8!е тиаасет 6!сег. Нотчечег, !Г сЬе тпаяет 6!сет ь со Ье оаетС со гоа!те тиоге сЬап стчо тор!каа, геспсцЬасе Ь Гот а Гетч Ьоцта со апотч сЬе со!отцеь со те8еиегате. ОеиетаПу, и Ь Ьеас то ига)те оп!у !что гер!каа Гготп а яо8!е тпаяег со ачота ртосцепы саоает) Ьу аптеапи8 оГ тЬе со!отцеа.
Переас 8серь 4 — 7 цп6! а!1 йе тпавсег 6!сета Ьаче Ъееп гер!касет1. !пт!цсе йе ехргеаа!оп оГ а Пепе с!опет! шсо ап ехргеза!оп чессот саггу!п8 йе 1ас ргопюсег аа т!еаспЪет! Ъе!о~ч. а. 1псцЬасе йе р1асеа (таз!ест апт! гер!!саа) ас 37"С цпИ со!оп!еа ! — 2 пцп !и йатпесег Ьане арреагей Со!оп!еа оп сЬе таасег р1асеа Пепега11у геасЬ йе т!еа!тот! яке пюге гарЫ1у.
Ь. А11очч йе тпаасег р1асеа со соо! со гоот сетрегасцге оп йе 1аЬогасогуЬепсЬ, итар йет !и р1авпс 6Ьп, апт! атосе сЬепт ас 4'С цпИ йе тети!се оГ йе Гттцпо1о8!са! асгеепа аге анат1аЫе. с. Тгапзуег сЬе гер!!са 6т1сега пцтЬегет! а!т!е цр со ГгеаЬ а8аг р1асез, ргетчагтет) со 37"С, сои!а!п!п8 1РТС ас а сопсепсгасюп оГ 1 тМ. 1псцЬасе йе !РТА-сопса!п!п8 р1асеа Гог а ИгсЬег 2 — 4 Ьоцгя й То !ит)цсе аупсЬеяа ш ехргеьяоп нес!оса сЬас саггу йе Ьассег!орЬа8е Х ра ргопюсег !е.8., йе РЕХ нессогя р1еаае аее Аррепйх 3), сгапауег йе 61сега со а аепеа оГ ргетчаппет) а8аг р!аСев апт! !псцЬаСе йет Гог 2 — 4 Ьоцга ат 42'С. Ргосе88спд Н1ег8 Гог!тппшпо!оетса! Бсгеептпд о1 Со!опсе8 "тЛе Ыцпс-епт!ес) Гогсерь со гетине сЬе шсгосе!1ц1оье Исега Ггопт сЬе р1асеа апт! Р!асе йет оп т)атр рарег сосне!а т а сЬеитсса! Г'ите Ьоой Сочег сЬе 6!сета ит!сЬ ап шнегсет1 р!аас!с Ьох.
Р1асе ап ореп 81ааа РеСп' йьЬ сои!а!и!п8 сЫогоуопп цпс)ег йе Ьох тч!СЬ йе 61Сегя Ехрове йе Ъассепа1 со!оп!еа оп сЬе 6!сета со сЫогосопп чарот Гог 15 пцпцсея 10. ТгапаГег йе 6т1сегь со Респ' йаЬеа ог 81ааа стаут сои!а!и!п8 ТЬ)Т ЬцГГег. !псцЬасе йе Гт!сета Гог 30 пипи!ей ас гоот сетрегасцге. 12. Кереас Зсер 12 ца!и8 ГгеаЬ ТЬГТ Ьцйег. 13. Тгапауег йе 61сегя опе Ьу опе, со а 8!ааа сгау сопсатптп8 ТЬ!Т Ъцууег.
'тЛе К!ттч!Реа со гетпоче сЬе геаЫце оГ сЬе со!оп!еа Гготп сЬе ацгГасеа оГ йе 61сегя Тгапауег япаИ 8гоцра оГ 6!сета со Респ' йаЬеа сопса!п!п8 1уа!ь Ъцйег (6 т! Рег 82-пцп 6!сег, 12 т1 рег ! 38-пип 61тег). тттЬеп а11 оГ йе 6!Сета Ьаче Ьееп ацЪтпег8ед, атас)с йе РеСп' йаЬеа оп а го!агу р1асуопп апт) а8!саге сЬе 1уа!а ЬцГГег Ьу 8епс1е госасюп оГ сЬе р1асГопп. Еуяь оГ сЬе Ъассепа! со!оп!еа са)сея 12 — !6 Ьоцга ас гоотп сетрегасцге. Ргогосо! 2т Бсгеепт8 Ехргеььтоп Е|Ьгагтеь Саит!гассет( т Р1аьттг( Ъестагь 14.19 0е1ес6оп о1 С!опеь Ехргеьь!щ Еоь!оп Рго1е!п А сМРО|сТАМТ Во пос аПосч йе 6|сеть со т(гу оис с)ипп8 апу ос сЬе ьиЬьет)иепс ьсерь. АпПЬойеь Ьоипт( поиьрес|ПсаПу апс( гечегь! Ыу со счет 8|сеть Ьесогпе реппапепс|у ассасЬет| П йе Ясегь т)гу оос.
|с Ь а|ьо еььепс(а! сЬас сЬе Я|сеть т(о пос п|с1т со опе апо|Ьег тчЬеп йеу аге ! типегьес( (и сЬе чагюиь Ьос(егь апс( апс!Ьот(у ьо!ос(опь. ТЬ|ь ргоЫепт сап Ье гп|п(гп!хет( Ьу йийп8 сЬе ясегь (пто ьгпаП ЬатсЬ- еь (е.8., Пче Исеть рег ЬакЬ) апс| иь(п8 а ьерагасе |аг8е реги йьЬ Еог еасЬ ЬассЬ.
ТЬе Реги йьЬеь сап Ье ьтас)тес( оп Сор ос опе апо|Ьег оп а ь!оъч!у гота8п8 р!апоггп ьЬа(тет. 15. тСЕЬеп а11 оЕ йе 6!сеть Ьаче Ъееп с|пьет), сгапьЕег сЬет опе ас а сИпе со а !геьЬ ЪассЬ оЕ ТХТ ЬиКег. Айег сгапьЕег, аЬКсасе йе ЬиКег апс) 6!сеть Пепс!у Еог а ЕЬгйег 30 ииписеь ас гоот Сегпрегатиге. |Е песеььагу, |Ье Ятеть тау Ъе тетпочес( Еготп сЬе Ьапет ас ЙЬ пахе, тчтаррет( ти 5атаи СЧтар, аттт( ьтотет) Еог ар Со 24 )таить аС 4 С. 16. ()ье Ыипс-епс|ет| Еогсерь со сгапьЕег сЬе 6Ьегь !пт)|ч|с)иа11у со 81аьь сгауь ог Респ' йьЬеь сопсатшп8 Ыос)4|08 ЬиКег (7.5 гп! Еог еасЬ 82-иии 61сег, 15 гп! Еог еасЬ 138-тип! 61сег). ЪстЬеп а11 оЕ йе 61сегь Ьаче Ъееп ьиЬтпег8ед, а8иасе йе Ьийег ь1осч!у оп а госагу р1аКопп Еог 30 иппитеь ат гоопт Сеитрегатиге. 17.
С)ье Ыипс-епс)ет! Еогсерь со сгапьЕег сЬе 6!сеть со ЕгеьЬ 81аьь сгауь ог Респ' йьЬеь сопсатшп8 сЬе ргииагу ап6Ьо|1у т!|1исет! тп Ыосрпп8 ЬиКег (7.5 гп1 Еог еасЬ 82-пип 61сег,! 5 гп! Еог еасЬ 138-иип 61сег). 1)ье сЬе 8геасеьс тНипоп оЕ апс|Ьос!у йас 8|чеь ассерсаЫе Ьас148гоипс1 уес ьс|!1 а!1осчь т)есесс!оп оЕ 50 — 100 р8 оЕ т!епасигес) апс|8еп. 'тСЕЬеп а1! оЕсЬе 61сегь Ьаче Ьееп ьиЬ- птег8ет), а8|сасе сЬе ьо!ос|оп Пепс!у оп а го!агу р1асЕопп Еог 2 — 4 Ьоигь ас гоопт сеитрегасиге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
