Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 200
Текст из файла (страница 200)
оЕ Ргогосо1 !). Ыве ап 18-Паи8е пеес)1е Со та)се Ьо1ев сп еасЬ 6!гег ш йе васпе 1оса6опв ав йе Ьо1ев ивес1 со )сеу сЬе 6гвс 66ег со сЬе 1аччп. 1псиЬасе сЬе р1асев Еог 2 асЫЬюпа! Ьоигв ас 37'С апс) йеп гегпоче сЬе 61сегв. АНосч сЬегп со с)гу ас гоот сегпрегасиге ав с)евспЬес) 1п сЬе ргесейп8 всер. А 1МРОКТАЫТ Саггу оиг аП виЪвес)иепг вгерв аг 4'С. ТЬе Пгвг вег оЕ СПСегв !в ргоЪес) йгесг!у ъч!СЪ- оис с)епасигас!оп сч!ЕЪ 8иап!сйпе НС! П,е., опвЪПп8 5серв 11-13), счЬегеав йе весопс) вес !в ргосеввес! ав с)евспЪес) !и 5герв 11 14. Р1асе йе весопс1 вес оЕ пшпЬегес1 6с1сегв ш а 12 х 8-1псЬ ЬаЫп8 йвЬ сап!а)пш8 йепасига6оп гю!исюп ас 4"С. А81сасе сЬе 61сегв Пеп6у оп а р!асуоггп вЬа1сег Еог 5 пиписев ас 4"С.
Е)есапс йе с1епасша6оп во!исюп, апс) гер!асе И сч)сЬ ЕгевЬ во!ис(оп. А81сасе сЬе 6!сегв Еог ап ас1й- 6опа1 5 пиписев ас 4 С. Евесапс сЬе весопс1 ЬассЬ оЕ с1епасига6оп гю1ийоп шсо а Пгас)иасес) су1шс1ег. Р11исе сЬе во1исюп сч)сЬ ап ес)иа! чо!ите оЕ 1х убпйп8 ЬиЕЕег сопса(п(п8 йсЬюсЬгебо!. Роиг сЫв во!и6оп гпсо а с!еап 81авв йвЬ, апс) сгапвуег йе 61сегв со сЬе гю!шюп опе ас а сипе, таЫп8 виге йас еасЬ 61сег Ъесоспев сЬогои8Ыу ехровес) со йе й1исес) с)епасигасюп во1исюп сопса)п(пц ййюйгебо1. 12.
Ргогасо! б: Иеифу(п8 ВХА-Ъ(пс)1пд Ргогеспв си Васгег)орабсе Х Ехртевбоп ЕЕЪгаг(ев 14.35 14.36 СЬаргег 14: $стееп!п8 Ехргеяя)оп Е!Ьгаг!ея Кереас |Ье ргосеяя деяспЬед т Ясер 12 Еонг тоге синея, й!нг!и8 йе депагига6оп 801н6оп Ьу а Еасгог оЕ 2 еасЬ гние. ТЬе сопсепсгагюпя оЕ 8напИ!пе НС! )и сЬе яо1и6опя аге сЬеге- Еоге 3 М (Иер 11), 1.5 М, 0.75 М, 0.375 М, 0.187 М, апд 0.094 М. Р)паПу, счаяЬ |Ье 61|егя гсч!се )и 1х Ъ|пйп8 Ьпйег сопганнп8 ййюйгебо!.
Р1асе Ъой яео оЕ ишпЪегед 61|егя (!.е., деиагпгед апд поидепагигед) )и 1х Ъ|пд!и8 ЪиЕЕег сопса!тп8 5% попЕас с1пе|1 инПс. А8!гаге йе 6!сегя Кепс1у Еог 30 пнпнсея ас 4'С. 14. Кшяе йе 61|егя ш 1х Ъ|пйп8 Ьнйег сопга|ши8 0.25% попЕас с1пед пнПс. РгоЬ|пд оЕ1спгпоЬ1!112ес! Рго1еспЯ |а|!В Вас!!о!а13е!ес! Ой!А 1п а сгуягаП!2!п8 йяЬ, адд йе яср-1аЪе1ед сопсасепасед РХА ргоЬе Егот Иер 5 го ясгеетп8 ЪнЕЕег го та)се а ЬуЪпйяаг)оп яо1н6оп (-1О гп1 Еог еасЬ 82-ини Игег ог -25 гп1 Еог еасЬ 138-нни 6!|ег). Орс!ша! ге|и!ь аге ияиа1!у оЬса|песс |чЬеи йе бпа! сопсеисга6ои оу гассю!аЬе!е|1 ргоЬе гярес!Ес ас6ч!|у 2 х 10| |о 5 х! Оя срш/С|8) ш сЬе ясгееи!и8 геассюи Ь -25 и8)ш!. Но|чечег, соисеи|га|юия ая 1осч ая 2.5 п8)ш! саи Ье няед !Е сЬе апюиис оу ргоЬе Ь! ишби8.
!и сЬе ог!8!па! деясг!рс!ои оу йЬ шесЬод (Я!иЯЬ ес а1. 1988), ро!у(|11;дС) |чая тес! ая а поиярес|йс согире6сог. Но|чечег, 1оъчег Ьас)|8|оипдя аге Яепега!!у асЬ!ечед ячЬеп яопкасед, деиаснгед яаЬпоп ярегш ог са!Е йушня РЫА Ь ыес!. !с Ь рояяЫе |Ьас сЬе ргеяеисе оу |огне РНА Ь!пд|и8 — Ьгяои ргосешя ч61! Ье шая)сед Ьу аиу РЯСА, яуисЬе6с ог сошр1ех, |Ьас Ь ыед ая а со|ире6- сог. Яеия6чпу со чагюия Ыос)с!и8 геа8еиь янсЬ ая яа1пюи ярепи РЕСА, ро1у!ЙЕОС), ро1усА), аид о|Ьегя яЬои16 Ье еясаЫ|ъЬес! |и Яе! ге!агдас!оп аяауя ог Яоибичеясеги Ыоп|и8 !р1еаяе яее СЬарсег 17) Ьеуоге сРС4А ясгееиш8.
1б. ТгапяЕег йе 61|егя со йе гайо1аЬе1е|1 ргоЬе 801нсюп |и сЬе сгуягаПпди8 д!яЬ. 1исиЪасе |Ье 61сегя сч!гЬ 8еис1е а8!сасюп оп а госа6п8 р1агЕогт Еог 2 — 12 Ьонгя ас 4 С. ТЬе |оик соп|роасюп нусЬе Ьспйпууясгееиш8 Ьиууег мед Ьеге Ь ян!|аЫе Еог гиапу РНА-ргосе!и !псегас6опя, Но|чечег, !и юп|е саяея, |с и|ау Ье иесеяагу со а|1!ыс йе сопсеисгабоия оу ъаЬ аид гиа8иеяиш юия со сои!они со йе ори|па! сопйсюия Еог Ъ|ийи8 еясаЫЬЬед ш Яе! гесагдасюи аыауя ог осЬег и|е|ЬосЬ.
Ап аЬегиа6че со йе Ь~ийи8 Ьиууег гесошшепдед Ьеге Ь а Ьиууег сопСа!и|и8 25 шМ НЕРЕЯ гРН 7.9))25 шМ С4аС1/5 шМ МЯС1|)0.5 шМ РТТ гЯ!иЯЬ 1993). 17. 18. Кереаг Ягер 18 гуч!се пюге. Ресапг йе 6па1 |чаяЬ ЪнЕЕег. Аггаи8е сЬе датр Игегя ои а яЬеег оЕ Яагап ЪЧгар. Сочег йе 61гегя |чПЬ апо|Ьег яЬеес оЕ Яагап Югар. АРР1у а|1Ьеяче !аЬеЬ сиаг1|е|1 сч)гЬ гайоас6че !и)с ог сЬеин1ши!неясен| таг)сегя го яечега1 аяуиниегпс !оса6опя ои йе Яагап 1Ягар.
Сочег йе гасПоас6че 1аЬеЬ |ч!|Ь ЯсоссЬ Таре со ртечеи| соисапниабои ччиЬ сЬе гаеПоас6че !и|с оу йе 61ги Ьо!дег ог |и|еияууш8 ясгееи. 20. ЕягаЫЬЬ ап апсогад!08гарЬ ая деяспЪед !и Аррепйх 9. 21. Р!с)с роя6че р!ас)иея, апд геясгееп |Ьет чч!гЬ ярес|6с апд попярес|6с ргоЬея ая д!яспяяед |п йе шсгоднс6ои го сЬся ргососо1. Н!|егя и|ау Ье гергоЪе|1 Еог осЬег РНА-Ь|ийи8 ргосе|п сРС4Ая Ьу гереа6и8 йе деиасшасюп! геиаснгасюп сус1е 15серя 11 — 13), ьФисЬ еууесс!че)у ге|иочея йе ргоЬе бош сЬе 61сегя. 22. ЪЧаяЬ йе 61|егя Еог 5 ишшгея аг 4'С ш а!аг8е чо1шие (25 гп! Еог еасЬ 82-ппп Игег, 60 т1 Еог еасЬ 138-нни 61сег) оЕ Ь)пйп8 ЪпЕЕег сои|а!п!п8 1 тМ ййюсЬгепо1 апд 0.25% попЕас |1пе|1 пнП|. 14.38 СЬаргег 14| $ггеетлц Ехргея(ол ИЬгаггех оЪ|аше|1.
Весанае |Ье Гоге(цп сЕ)Ь)А хе|!пенсе га 6|хе|! |о йе сагЬоху1 сегш(пна оГ (3-ца!ассояс(ахе, |Ье агап|(агс! шесЬог( (пчо!чех ргоднспоп оЕ !ухоцепа ш Е, со1|' асга|п У!089 апг! |пднсдои оГ |Ье 1асх. Гпяоп ргосе(п Ьу 1РТС (М(егепс(огГ ес а1. 1987). А1|егпапче1у, Гняоп ргосе(пх сап Ье ргерагег! Егош !(с)н(с! (Конце 1992) ог р!асе сн!|нгех (Ннапц апс! )опц 1994) оЕ асгаш г'1090 |Ьас Ьаче Ьееп 1уска!1у шЕессе|1 сч(сЬ Ь(цЬ пш16Р1кЬ4ех оЕ |Ье гесо|пЬ|папс ЬассепорЬаце.! п йе Ео(- !осч(пц ргососо1, пюйце|1 Егош цпус)ег ес а1.
(1987), 8(пцЬ ес а!. (1989), ап|1 8(пцЬ (1993), 1уяи цена оГ (пс((ч(с(на! гесошЬшапс ЬассепорЬацеа аге цепегасес! ас 32'С апс! сЬеп ехрохед ЬПейу со Ь(цЬ сегпрега|нге (44'С), |чЬ(сЬ |паспчасех йе сЬеггпо1аЪ|1е гергеыог апд (пс(нсех а гони|) оЕ 1уск ЬассегюрЬаце шЕесс(оп (Еог |ноге дега(!я р!еахе хее йе |псго|1нссюп со СЬарсег 2). Вуп|Ьеях оГ йе Еияоп ргосеш епсос)ес! Ьу |Ье гесогпЬ(пап! ЬассепорЬаце Ь спс!псе|1 Ьу сгеапиц |Ье се!!а сч(сЬ 1РТС. МАТЕК!АЕЬ СА()Т1ОЫ| Р!еахе аее Аррепс(!х 72 1ог арргориасе Ьапд1|пц оЕ гпа!ег(а(а гпагЬес( ипй <1>.
ВоЕЕег5 апг! ао!оЕ!оп5 Р1еахе хее Арреиг!1х 7 Гог сотропеп!а о! хсосЬ 80!и!1опа, Ьи(1егя апд геацеи!я 731!псе а!оскс ао!опона со |Ье арргорпа!е сопсеп!габопя !РТС (7 М) Арргохнпасе!у 40 р! о( 1 м 1РТС ы ге9|аге6 рег 1у|оцеп (пг)нсег(. Еухоцел ех|гасдол Ьи//ег 50 |пМ Тпа-С! (рН 7.5) 1 |пМ ЕЕ|ТА (рН 8.0) 5 и|М г(106оСЬ|е!со! 50 08/|п! рЬепу1|пебсу!ан!Топу! 6ног|ае (РМЕР) <1> Аг(6 РМЕЕ со сЬе 1уаоцеп ехсгассюп Ънцег )нас Ье(оге |с Ь наес) )и 5|ера 15 аис) 18. Арргохпиасе!у 100 п|1 о( 1усюцеп ехсгассюп Ьн((ег ы иеег(ег( рег 20!уаоцепа )пг(наес). А/аС! (5 м) 5Соге СЬе ао!н6ои оГЫаС1 а| 4'С.
Еп2угпе5 апс! ВоЕЕег5 Еухохуте (7 0 глц/глц Тс!аао!че ао1|6 1уаогугпе (гпо1есн1аг Ь|о!оцу 8гас)е) ас а сопсепсгасюп о(10 юцг|п! 1и 10 п|м Тйа-С1 (рН 8.0). ТЬЬ го!нооп аЬои1|( Ье Гге|Ыу ргерагег( Сог нае |и 5сер ! 5. Мес!са 1В ацаг р!асеь солгагл!лц 50 рц/т! атр!с!!!!л ЕВ тес6игл 18 тег!|ит солса!л!лц 50 рц/т! атрк!Рдл ГВ тесВит сол|аттц 70 тМ МВО ЕВ тееВит солса|л|лц 70 гпм МВС!, 0.2% (|ч/ч) та!сохе, алд 50 рц/т! атргсг!!!л прес!а! Ес!шрспепЕ А!г !лсиЬагогх ргеьес Го 32 С алд 42 С Ыг/и!д л!|гоцел <1> М!!!!роге Е!!сег(х) С|ген!аг |58-пнп 61|ега (М|!1|роге суре Ч5, 0.025-игп роге яге 6Иега) аге ые|1 со еца1уге сЬе!уаасеа.
Аа |папу аа 20 1уаасеа сап Ье 6(а1угес) рег 61сег. 5Ьа/г!лц |чагег Ьай ргехес со 44"С А асаск Н,О ЬасЬ аес ас 44'С |ч61 огпаПу хайке |(а аЬаЫп8 |часег ЬасЬ |а пос ача|1аЫе. Тоо|Ьргс/гх ог 1лоси!адлц !оорь Ргогиси! 7л Ргерагазюп оЕЕуяагея Сап лат/п8 Раязоп Ргогетл: Еуяь оЕ Со!оплел 14 39 АЙЙЕ!опа! ВеадепЬ 5гер 7 о/ й/я ргозосо/ гес/и/гея йе геаВепзя!ля!ел/ зп СЬарзег 2, Ргососо! 3. Чес$ог5 апс! Вас1ег!а! Яга!п5 ВасгепорЬа8е 'лазу 7, )8778-23, )ЛАР, апиз )2/рЕох гесотЬ/папг ТЫя ргозосо1 Ьая Ьееп орз)пззхел) Еог а ЬасзегюрЬа8е х8з) З гесошЬзпапз зЬаз ехргеыея а гесогпЬлпапс йяоп ргозелп (Ыепззулез) Ъу шейол)я оиз!заел! ш Ргозосо! 1 ог 6 ог Ьу ЬуЬпсПлаПоп апл) Р)9А яел)иепсе апа!уя!я).
КесоилЬзпапь сопясгисзел) лп шапу озЬег ЬасзегюрЬа8е ) ехргеяяоп чесзогя сап Ье шее зо епаЫЬЬ 1уяо8епя еыепиаПу ая л)еяьзЬел) Ьеге. Е. соП ягга/пя У7090Ьяс!К апс/ у/ОВ9 ТЬеяе ялга)пя, лчЬзсЬ аге ача)1аЫе 6ош з1зе АТСС (лчлчлч.ассе.ог8), аге ша)пза)пел) оп ЬВ а8аг р!алея сопзалп!п8 50 и8/ш! ашрссП!лп. ТЬе У!090 апл) у!089 гага)пя саггу пшопюпя )и зЬе )оп Вепе, лчЬзсЬ епсодея ап АТР-л)ерепл)епз ргосеаяе. Риязоп ргозешя ехргеьел) ш йеяе еагазпя аге оузеп гпоге ясаЫе гЬап зЬояе ехргеяяел) !и язгазпя 1асуап8 зЬЬ лпизаПпп. У)089 сагпея зЬе )з/)А пшзазюп, ъч!з)сЬ дгашаз!саПу зпсгеаяея зЬе Егел)иепсу оЕ 1ую8епзлазюп Ьу ЬасзепорЬа8е Л.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
