Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 202
Текст из файла (страница 202)
Ассогйп5 го Ниап5 апг1 !оп5 (1994), йе 1пс1ист1оп ргосеы сап Ье гереагесЕ аа тпапу аа 6че гипеа оп еасЬ р1асе, а1ЕЬои5Ь гпахипшп ехргея1оп ы оЬса1пет1 гп ЕЬе 6гаг и ю ггк1исиопа. Кереаг ЕптЕисг1оиа аге сагпет1 оиг Ьу гешоч1п5 ЕЬе ртогеш-ш6ые5 очег1ау хо!игюи, а11огчш5 йе р1аге го тесочет Еот 1 Ьош ас 57 "С, Ео!- 1огчес! Ьу асыиюп оЕ ЕгеаЬ очег1ау ао1ибоп.
1и а чапаиоп оЕ гйа ргогосо1 Е! 1! 11Ьг1тЕце апд РЬЕЬрр 19951, йе гесошЬгиапг рЬаце ехргеаяи5 йе с1еягес1 Еиаюп ргогегп ы мес1 то Гопп а !агре "шах1р!атрее" оп а!агчп оЕ Е, со!1. ТЬе р!ат1ие аитЕ ип5ег!у1п5 аиаг аге ситес! Егош йе р!аге, г1оипсегЕ Еи а Ьопго5еп1хег, апс! геаиарепоео ги 2х 5155- ! оа8105 ЬиЕЕег Еот ро!уасту1аш1тЕе 5е! е1есггорЬогеяа апг1 1шпгипоЫогг1п5. 5гагг1и5 и! 16 а р!ас1ие, ЕЬегг ргосес1иге геошгеа -5.5 Ьоыа со геасЬ йе ага5е оЕ 5е! е1есггорЬогеяя 11. 15е!есг !Ье йяоп ргоуе1п ш йе очес!ау 50100оп Ьу 1шшппоЫо!!1пц ог Ьу Е5Ь!А-Ыпс!108 аааауа гЕ !Ье от!а!па! РЬаде гчаа 150!аеес! аа с!еасгЕЬес! гп Ргососо! б. ЬЕо 1шшипо!о51са! теасг1ч1гу ог 15ЫА-!6пг11п5 асг1ч1гу аЬои10 Ье т1егестес1 ш йе очеНау ьо1игюи 5етЕче5 Егоиг ЕЬе ип1ггЕесге4 си1гше от !и йе очег1ау ю1ииои Егогп гчЬьсЬ 1РТ0 иаъ опипей рот аяауа 1пчо!чгп5 ЕЬе тЕегесгюп оЕ еигуше асг!чиу, очег!ау ао!игюпа сап Ъе йа1угес! а5а1иаг аи арргорпаге Ьпйег ЬеЕоге апа!уяя 12.
Рппуу йе !3-ца!ас105!с!аае Епяоп ргоЕе!п Егогп ЕЬе очег1ау 501шюп Ьу аЕЕ!01!у сЬгогпасодгаРЬу па|пи сопппегс1а1!у ача1!аЫе !с!15 (е.ц., Ргошеиа Рго!оЯогЬ), ог аа с!еасг1Ъес! 1п СЬаргег 15, Рго!осо1 1. 15!а!ухе !Ье очег!ау ао!01100 Ъеуоге рпг!6са11оп оЕ !Ье ргосеш !о гепюче! РТС. Епуогишг(оп Раве!л 14.47 РЕАЛ)ч310 АКО ВАСТЕК!ОРНАСЕ А ЕХРКЕВЯО)ч) ЧЕСТОР$ Ехргеаа!оп 11Ьгапеа сап Ье сопл!лис!ел) !и р1ааш(д ог Ьас|епорЬаде Л час!оса |Ьа| саггу а а!говд, геди!алел) рго)сагуол!с ргопю|ег апг( а пЬоаоше-Ь!пйпд я|е. А Ее|ч чес|ога аге ача!1аЫе |Ьа| ехргея оп!у |Ье вел)иепсеа оЕ |Ье Еоге!дп рго|е|п (р1еаье аее СЬар|ег 15 ап|1 ТаЫе А3-1 |п Аррепйх 3). Моге соиипоп1у, Ьолчечег, |Ье Еогелдп РЬЕА вес)иепсеа аге с!овес) ш|о а гемпс6оп я|е |Ьа| 1|ел лч!|Ь!п |Ье сойпд аес)пепси оЕ а ргоЬагуодс ог еи)сагуодс депе (ог Егадшеп| оЕ а депе) !оса!с|3 ипшейа|е!у до|чпмгеаш Егоп| йе ргоЬагуог!с ргошолег/г!Ъоаоше-Ъ)изид я|е.
1п п|апу чес|огм |Ь!ь депе ь Е. сод !ас7, лчЬ|сЬ сисис(еа 13- да!асгоаЫаае. 1Е йе Еоге!дп аелрлепсеа аге !паеглес) ш йе соггес| опеп|а|юп ап|1 геайпд Ега|пе, а 6|мои рго|е|п !а ргог)осел) йа| сопя|я оЕ (3-да1аслоаЫаае вел)иепсеа 1!п)сел! |о ро!урер|Ые аел)иепсеь епсол)е|3 Ьу йе с!опал) РЬЕА. ТЬе Еимоп ргосеш, МисЬ Еа ауп|Ьеа!аел) ирои ш|!ис|юп оЕ |Ье !ас ргои|о|ег лч!|Ь !ьоргору1+йюда1ассоаЫе, лпау ге|аш ог )оае )3-да!аслоаЫаье ас|пд|у ог |Ье аЬ(1!лу |о |а)се рагс ш а-сошр!егпеп|а|юп (р!еаае аее СЬар|ег 1), с)ерепг(!ид оп |Ье па|иге оЕ |Ье Еоге|дп аел)иепсеа ап|1 |Ье ы|е а| |чЬкЬ |Ьеу аге !паеглес). )паегг!оп оЕ Еоге!дп аел)пепси ш|о д-да!аслояс1аае, ог ш|о ойег рголе!иь шсЬ аа ша1|оаеЬ|пйпд ргосеш, |Ьюгел)ох!п, ог |Ье 8!и!ай!опе-5-!сапа(егаье оЕ 5сБыолота)арогдсит, обеп епЬапсеа |Ье а|аЬ|!иу оЕ |Ье Еияоп рго|еш |п |Ье Ьом Ьас|ег|шп (!(иррег е| а1.
1981; 5|ап!еу 1983; й Оиап ес а1. 1988; дшЫ| ап|1 !оЬпаоп 1988; 1а3|а)1(е е| а!. 1993). Ехргея!оп 1!Ьгаг!еа сопалгисге|3 |п Ьас|епорЬаде Л апс) р1аяиЫ чес|ога йЕЕег йоги опе апо|Ьег |п опе |иа)ог геьресл. 1!Ьгаг!еа сопя!лис!ее( ш Ьас|епорЬаде Л чеслав аге р(асег( оп а Ьас|ег|а1 !алчи, ъчЫсЬ !а ргодгеаа!че!у !учел) л)иг!пд |Ье пех| Ееъч Ьоига аа а па|ига1 сопле|)иепсе оЕ Ьас|епорЬаде дголчгЬ. ТЬе ге|ш1|ш л(еЬпа ь !сапа(еггел) |о пбгосе!!и!оае Ел!леса апс( ьсгеепе|3 Еог йе ргеаепсе оЕ |п|пшиогеас||че и|а|епа1. Ву сопггааг, р1аяпЫ!1Ьгапеа аге шашла!иес) аа лгапаЕогшел( Ъас|епа1 со!оп!еа йа| вша| Ье 1уае|3 ш я|и оп пигосе11и1оае 61|ега Ье(оге ш|гасе!!и)аг Вяюп рголе!па сап Ье асгеепес( лч!|Ь авВЬойеа ог о|Ьег 1!даил(я Ехргеаа!оп 1!Ьгапеа сош|гпс|е|1 !п р1аяпиЬ ЕЬеге(оге аийег Его|и а а!уиЕлсаги г)!аал)чав!аде; йе 1аЬог !ичо1чес) ш депега|шд |Ье гер1!саа оЕ |Ье 1|Ьгагу йас аге иаег) Еог |пииипо1орса! асгеешпд.
()аиа11у, шая |ег сор!еа оЕ р!аяпЫ 1!Ъгаг!еа аге дго|чп оп пигосеНи1оае 61|егм апс( аечега! гер1!саа аге |Ьеп депегалел( Ьу !лапа(егг!пд |Ье со!оп!еа !п ыпл |о Егей и!!лосе!1и1оае Ел!леса (р1еаье аее Рго|осо! 2). ТЬ!ь В а 1аЬогюш ргосея |Ьа| сап Ье гереалес) оп1у а Еелч Вгиеь ЬеЕоге йе со!оп!еа оп |Ье шаагег 6!лег Ьесоше япеаге|1 Ьеуоп|1 гесодш|юп. Со!оп!еа дголч!вд оп |Ье гер!ка 6!|ега аге !урнес( апл) асгеепел( |чиЬ а !аЬе)ел) 1!дапл( арес!6с Еог йе депе ргог(исл оЕ ш|егеа|. С1опеа йа| геас| чч!|Ь йе 1аЬе1ег) 1!дапл) аге гесочегес) Егош |Ье шая |ег 66ег апл( апа1ухег) Еигйег. А1йоидЬ лЬеае ргосел(плей аге еаау |о ассошр1!аЬ ччЬеп оп1у а Ееи с1опеа аге |о Ье ьсгеепей |Ьеу аге!од!ал!са!1у л)ешапл(!пд |чЬеп!агде 11Ьгапеа сова!агшд оЕ 10' ог пюге со!ошеа аге |о Ье асгеепей Рог шоьл ригроаем |ЬегеЕоге, Ьас|егюрЬаде ехргеяюп час!оса аге |Ье чеЫс!ез оЕ сЬоке Еог (шшипо!од!са! асгееи!пд оЕ 1агде 1!Ьгапея ТЬе чам ша)оп|у оЕ сРЬ)А ехргеяюп 11Ьгаг!еь аге сопл!лис!с|3 ш Ьас|егюрЬаде Лдг! 1, Ьь с1оае ге!аВчеа Лд|18-23, ЛХАР (ог |Ье Л7АР Ехргеаа ог ЛХАР!! |1епчадчеа), Л7!РЬох, ог ЛОКР8.
ТЬеае Ьас|епоРЬадеа саггу опе оЕ глчо шо|3!6ес) Е. соП !ас7, депеа. Лдл! ! апл) ЛОКР8 соила!п а сошр!е|е сору оЕ |Ье !ас7. депе лч!|Ь а с1опшд ь!ле !оса!ел) 53 Ьр иралгеаш оЕ |Ье |гапа1адопа1 |епишадоп со|1оп. сРЬ)Аь шаег|е|1 ш йе соггесс опеп|а|юп ап|1 геайпд Егап|е аге ехргеяе|1 |о у(е16 6лмоп ргосе(па |чЬоае аиипо сегииш сопмьл оЕ )3-да!аслоаЫаье лег(иепсеа ап|3 |чЬоае сагЬоху! |егпиш сопл!ьг оЕ Еоге|дп аел)иепсея Лгеслога ьисЬ аа Л7!рЬох ап|1 Л2А1л соп|аш а Егадшепг оЕ |Ье !асЛ депе зрапи(пд |Ье ргоию|ег-орега|ог ап|1 |Ье апипосегпипа1 епсойпд геддоп (П1шапп ес а1.
1967). сРЬ)Аа шаегсел( ш|о |Ье ро!у1|п1|ег аге ехргеааег) аа а Еиыоп рго|е!п сопл!ал!ид оЕ йе апипо-|еппша1 6 апипо ас!й оЕ 6-да!аслоаЫаае Ео!)о|чей Ьу сагЪоху-|егпипа1 Еоге!дп ье9иепсея 35|!|Ь Ьо|Ь гуре| оЕчес|огм аоше оЕ йе Еоге|дп аел)иепсеа с)!ар!ау апидепк ер|- гореа |Ьа| сап Ье с(елеслел) иа!пд арес!6с апВЬойея Вас|епорЬаде Л чес|ога ше6 Еог |Ье сопалгисг!оп оЕ ехргеьяоп 11Ьгапеа иялаПу (ЛОКР8 !а ап ехсер|юп) Ьаче а пш|ап| сору оЕ йе Л гергеяог депе (с1ь857), |чЫсЬ епсос(еа а гешрегагпге-аепа!л!че гергеяог ргосеш, ап|1 |Ьеу саггу ап ап|Ьег ипл|а6оп ш |Ье 5 (!уа!а) депе. Ас |ешрега|игеа |Ьас |пасбча|е |Ье гергеааог (42 С), |Ьеае Ъас|епорЬаде Еоггп р1ал)иеь оп алга!иа оЕ Е.
со6 (ьисЬ аа У!0906||()2) йа| саггу ап ап|Ьег ялрргеяог (лирР). 5|гали У!0906||(В |3!ар!ауь ас(йдопа1 ргорегл!еа йа| аге ше6л! ш )шшипо!од)са) ьсгеепшд: И сагпеа а р!аашЫ (РМС9) |Ьа| епсол)еа |Ье !ас гергеяог, ап|1 || В л)ебс!епл |п |Ье ргол)исг оЕ |Ье 1ои 14.48 СЬарсег 14: Бсгееп!пц Ехргелл?оп 1л6гапел депе, ап АТР-с?ерепс?епс епг?оргосеазе (Еог гечлеъч, р1еаае зее Соссеяпап апс? Маипгб 1992). ТЬе аЪзепсе оЕ а Еипссюпа! ?оп ргосеазе ехсепс?а йе Ьа!Е-ПЕе оЕ гпапу ?3-ца1ассояс?азе 6ляоп ргосеспя А ге1асес? аьзш оЕ Е. со??, У!089, ш аъЫПсоп со сЬе!оп псисасюи, а1зо сагпез а пшсасюп лп ?с??А, ъчЬссЬ Пгапсаскацу шсгеааез сЬе Егес!иепсу оЕ 1узодеи(хасюп Ьу ЬассегюрЬаце ?.. 1п асЫЬюп, Ьесасье У?089 !ас?сл а аирргеяог сйъ?А депе, сЬе апсЬег пшсасюп си йе 5 депе (1уяз депе) оЕ ).дс?1 Ь пос хирргеяей ацочппд!агде апюипь оЕ ЬассепорЬаде ).-епсоъ?ес? депе ргос?исса (сис1ийпц ?асЕ 6ляоп ргосешз) со ассштш1асе со ЫдЬ 1ече1а ъчиЬ- ш ап !пс?исег? сеП, Рог ЕигсЬег г?асада оЕ йе ргорегс?ез оЕ ).дс?1, ).у18-23, 7.2АР, ) Улр!.ох, апс1 ).ОКР8, р1еазе зее сЬе шсгоъ?исс!оп со СЬарсег 11 апс? Аррепйх 3.
ЫЬгапеа оЕ ЬассепорЬаде ) езсаЫ?яцек аз 1уаодепа сп Е, соП Ьоас зсга(п У?090 о(уег росепиа! ай апсацез Еог асгеешпд оЕ ехргеяюп ПЪгапея ). депогпеа (пЬег?сеь? аа рагс оЕ йе Ьоя-сеП сЬгоисоюик пъау Ъе споге всаЫе депепсацу сЬап депошез ргорадасес1 Ьу 1уск ш(есцоп, апс1 йе гергеяюи оЕ зупсЬеяз оЕ росеппацу сохк 6ляоп ргосешз псау Ье споге соспр!есе ш седл сопсашшд оп1у опе шседгасес? сору о( йе гесоспЬшапс депоше сЬап ш!уцсацу ?пЕессес? седа сЬас гарЫ1у ассшпи1асе спапу Ьипъ?гес?з оЕ сор(еа оЕ йе Еыюп депе. Ехргезяоп оЕ 6ляоп ргосесп сп а 1уеодешс со1опу сап Ье ал пшсЬ аз 20 сипел Ь(дЬег сЬап йе 0.25 6по!е оЕ сагдес ргосеш сурссацу ехргеззес? сп а ЬассепорЬаде р!ас?ие (1.асопсЬе ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
