Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 203
Текст из файла (страница 203)
1987). Резр(се сЬеае аррагепс аъ?чаисадеа, пюзс 1сЬгапеа сопасгиссеь? ш ).дс11 аге по 1опцег ргорадасес? аз ?уаодепа пог зсгеепес? айег шг?иссюп Ьесасье зоше гесоспЬспапь аге ипаЫе со Еопп яаЫе ?узодепз (НиупЬ ес а1. 1985). ТЬе ?псгеазес? апсоипсз оЕ Еияоп ргосеш зупсЬез!геъ?!п ?пъ?исес? !узодесь аге гаге!у оЕ ргасссса! ас?чапсаде япсе ипрппь оЕ сопчеппопа! ЬассегюрЬаде ). Р1аъ?иез соисаш агпр1е ъ?иапс!с?ез оЕ псасепа! Еог с?есессюп Ъу зпсЬега о( ЫдЬ лрессйсьу апъ? геазоиаЫе Псег. 5сгеепшд оЕ 1узоцепз исау, Ьоъчечег, оЕЕег зоспе ас?чапсадез ъчЬеп изшд ргосеспз гшсЬ аз са!шос?и!ш аз ргоЬеа ог ъчЬеп ияпд япаП Пдапъ?з (е.д., сАМР) ъч?сЬ а 1оъч айсшсу Еог йе сагдес ргосесп.
ТЬе ЬсдЬ сопсеисгзиоп оЕ сагцес ргосесп ш ап !ис?исес( 1уездепк со1опу шау ыдш6сапс1у аЫ6 сЬе Ъшйпд ес?иц?Ьг!иш ш Еачог оЕ согпр! ех Еоппасюп Ьепчееп а Пдапс? апъ! сь сагцес апс? Ьепсе гаЬе йе спсепясу оЕ йе ядпа! со йе рошс ъчЬеге и Ьесошез г?есессаЫе (Милле? ес а?. 1990; Милле! !994). А!сЬоицЬ 1узодепа аге по 1опдег гьеб Еог асгеепшд еибге ЪассепорЬаце Х 1сЬгапеа ъч?сЬ сшпшпо1одка! РгоЬеа ог с?оиЫе-асгапъ?еъ? о!сдогшс1еосЫе ргоЬея сЬеу аге гоицпе!у гьеб со аиа?ухе йе ргорегпеа оЕ Еияоп ргосеспз еисоъ?ес( Ьу спйчкЬла1 ЬассепорЬаде гесошЬспапь.
ТЬе ЬассегюрЬацеа гесочегес1 Егош ап шйчсциа! Р1асрле аге илес? со езсаЫ!аЬ 1уюцешс ъ?ег(час?чеа оЕ Е. со1г зсгаш У!090?слг??? ог У?0896??А, ъчЬссЬ сап Ъе ?пс?исег? со аупйеяхе 6лзюп ргосеша ш ърлапппеа зийк(епс сог ЬсосЬегпка! аиа?уяз (р!еззе зее Ргососо! 7). Сепопл!с 0?ъ?А апс! с0?ь?А Ехргеиз!оп 6?лгаг?еи Тъчо суреа оЕ ехргеза?оп !сЬгаПез сап Ье сослзсгиссес? ш р1аяпЫ апъ? ЬассепорЬаде ?. ехргемюп чессогя сР?ь?А апс? депопис Р?ъ)А !лЬгапез.
Рог рго?сагуоск огдапыпя ъчЬозе депоиъеа сопсасп Ееъч шсгопа, сЬеге Ь 1ис1е со Ье да?пес( Ьу сопзсгисбпд сР?ь?А !сЬгаНез ш сЬезе чессогз. 1пзсеас1, гапс1опс!у зЬеагес1 депоипс Р?ъ?А сап Ъе изес1 со сгеасе а 1сЬгагу (Еог с1есаця р!еаае зее СЬарсег 11) ш ъчЫсЬ аП сойпд лес?иепсеа аге ргорогссопаПу гергеаепсес? (ед., р1еазе зее Ъоипд ес а1. ! 985). ТЬе орсипа! ачегаде!епуЬ оЕ сЬе зЬеагес? Егаупепь оЕ РЬ?А илес? со сопягисс ПЬгапев оЕ сЬь ?с?пь? с?ерепь?з оп сЬе яге оЕ сЬе депе оЕ ?псегезс: ТЬе япацег йе депе, сЬе япадег сЬе цепопнс РХА Егаупепсз.
!с?еацу, сЬе яке оЕ сЬе Егацплепь зЬои!с? Ье арргохипасе!у опе-Ьа!Е сЬе ргеъ??ссес? яхе оЕ сЬе депе. ТЫз яхе гапде гес?исеа сЬе сЬапсе сЬас сЬе сойпд аес?иепсеа оЕ сЬе депе оЕ шсегезс ъчП! Ъе ргесес?ес? Ьу ирзсгеаш сегпипапоп зеъ?иепсез. А япи1аг асса!еду сап Ье гьес1 ъч?сЬ еи?сагуодс огдашяпа ысЬ аз уеазса, ъчЬозе цепогпеа аге согпрагаПче!у япаП апс? сопяя ргеъ?опипапс1у оЕ сойпд лес?иепсез. ТЬе ргоЬаЬс1пу (Р) оЕ сгеацпд а гесошЬспапс сопсаш?пд йе аес?иепсеа оЕ сЬе цепе оЕ ?псегеас ?и сЬе соггесс геайпд Егагпе апс? опепсасюп Еог ехргеаяоп Ея Р= яге оЕ сЬе сойпд геуоп оЕ йе депе оЕ спсегея ((п 1сЪ) яхе оЕ цепогпе (ш)ъЬ) х б ТЬе Еассог оЕ б са?ъеа спсо ассоипс сЬе Еасс сЬас а учеп РВА Егаупепс сап Ье шзегсеъ? шсо йе чессог ш съчо роаяЫе оьегаасюпа апс? сЬас оп1у оие оЕ сЬе сЬгее росепсса1 геайпд Егашез Ь соггесс Еог ехргеаяоп. ТЬе !пуогтагЕоп Рапе!л 14.49 ргорогьоп оЕ с1опел ехргеляи8 |Ье раг|ки1аг Еияоп рго|еш ыЬеп 1: 1/Р.
Рог ехашр1е, 1п а Вепоиис !3!9Л ехргеаяоп 1|Ьгагу, йе ргорогл)оп оЕ гесоп|Ь)папь сараЫе оЕ ехргеаып8 а Еияоп рго|еш епсос!ес! Ъу а Вепе |чЬоле сос)1п8 ге81оп ь 1.5 )сЪ |и !еп8|Ь 1а ргес))с!ел) |о Ье: бепоте яле 11|Ы 0|8апигп Ргорогиоп 4.0 х!0| |.4 х |0| | хх |0| |. | б х 10| |:5.б х |О" !:7.2 х |Ол Е. со0 Уеалл РГ050р)|1!а 1п йеогу, |Ьеае Егес!иепспь ж|!! Ъе апаше|1 оп1у 1Е |Ье с1опе|1 Вепопис РЕ4А Ега8шепгл аге соп|ЫегаЫу ыпа11ег !<5098) |Ьап |Ье яае оЕ йе сог)!п8 лес!иепсе оЕ 1п|егел|, !п ргас|ке, Ьо|чечег, |Ье Егел!иепсу оЕ рояле с1опел ыюгпежЬас Ь)ВЬег |Ьап ехрессей А)гЬоиВЬ гЬе геаюпл Еог гЬ)а ошсоше аге по| ипс!егл|оой а роя|Ые с1ие сошел Его|и |Ье оЪ|егчагюп |Ьа| а Ь18Ь ргорогьоп оЕ с!опел ьо)иге|1 Егогп Вепош)с Р)4А ехргеьюп 11Ъгаг)ел Ьу 1шпшпо1081са! лсгеепш8 с)о по| луп|Ьеяхе Еияоп ргосешл (с ого апс! 34|аи8 1984; Рх1|аупа1| е| а1.
1984; 5иус!ег е| а1. !986). Веса|ье ехргеяюп оЕ гЬеае с!о|лес) Вепел и |1ереп|1еп| оп ггапасг)ргюп Егогп йе !аса ргои|о|ег, К леепь 11)се!у йа| йе с)опеа сапу ош-ор Ега|пе шлепюпа апс! йа| ггапл!агюп оЕ йе Еоге|8п ле|рлепсел Ь 1011!алел! а| ап |псегпа! шейюшпе содоп. Маге гаге1у, йе Еоге)8п лел!иепсел шау саггу я8паЬ гЬас сап л)1гесл лгапасг!рлюп апс! |гапл!а|юп ш Е, со)Ь Аа |Ье яае оЕ еи)сагуол)с Вепошел |псгеалеы йе !гас|юп |Ьа| и оссир)ес) Ьу сойп8 бел!иепсеа |Ьппуь с)гашаг)са11у, апл) |Ье ачега8е!еп8й оЕ шг)1ч)с!иа! ехо|ь л)есгеалел Со -200 Ьр ЕСо 1983).
ТЬе Ыеа оЕ лсгеепш8 Вепош)с РЕ4А ехргеаяоп 11Ъ|аг)ел йеп Ъесоп|ел ипкЬ )ея аигасьче. 1п йе сале оЕ йе шашша!)ап Вепоп|е Е3 х 1Ол Ър), гесоилггисгюп ехрепп|епь ли88елл йас || жои1|! Ъе песеьагу |о лсгееп а 11Ъгагу оЕ а| 1еаа| 107 с1опел Еачега8е яае 200-300 Ьр) |о л)елесг а гесо|пЬ|пап| ехргеляп8 а раг|ки1аг ериоре ЕКи|Ьег е| а1. !982). Ечеи |Ьеп, оп1у ерьорел епсо|1е|1 Ьу Р)чА ле|1иепсел сопгашел! ж1|Ь)п а яп81е ехоп жопЫ Ье л!егеслей ТЬе гье оЕ сРЫА 11Ъгаг)еа |01чел йеле ргоЫеиь Ьу соила!Ыа|ш8 йе сойп8 аес)иепсел оЕ |пйчЫиа) Вепел ш|о яп81е с!пиеа апл) е1ишпаьп8 |Ье поп ргойлсг)че лсгееи!08 оЕ с1опел |Ьа| сопя|| оЕ ш|гоп алле! гереш1че лес)иепсел. Магпша1|ап сРЫА! |Ьгапел изей Еог !пипшю1081са! асгееп108 и|шаПу Ьаче а соп|р!ехьу оЕ а|!еаы 10" ш|1ереп|1еп| гесо|иЬ~пап|ы 1п 11Ъгаг)еа силла!гас!ел! Ьу попс)1гесл)опа1 с!опш8, оп1у оие гесошЬ|паш |и ых |ч)11 саггу ап шлея ш |Ье соггес| опеп|аьоп апс) Егаше Еог ехргеляои.
Ножечег, ш!|Ьгапел еагаЫ)лЬес! Ьу л!!гесс)опа! с1ошп8, йе ргорог||оп оЕ илеЕи! с!опел плел |о опе ш |Ьгее. Мол| с!!гесс)опа11у с1опес! 1|Ъгапел аге соплггллсгес) Ьу гапл)ош рп|пш8 ОЕ сРХА ауп|Ьеял га|Ьег |Ьап Ьу о!180(с!Т) рг!ш)п8, Каис)ош-рг)шес! !|Ьгапел сои|а|и а Ь|ВЬег ргорогиоп оЕ лес)иепсеа |Ьа|!|е ложагл) |Ье 5' ге81оп оЕ |Ье шКЪ)А аллл! |ЬегеЕоге жои)л! Ье ехрес|е|1 |о ехргеь ерьорел |Ьас |пар |о |Ье аиипо-|егпипа! бел)иепсел оЕ |Ье рго|еш, |чЬегеаа ехргеляоп 1|Ьгапел Вепегалес) Ъу 01180!|)Т) рппип8 аге 11)се!у |о Ье епг)сЬес! Еог ерьорел 1осасес! ш йе сагЬоху-|егиипа1 ге81опл оЕ йе гаг8ег рго|еш.
То п|ахипие |Ье сЬапсе оЕ с)егес|108 а с!опе Ьу 1шшипо1081- са1 ргоЬея |папу шче|08а|огл лсгееп а сошроя|е 1|Ъгагу сопсаш|п8 а гергелеп|аИче иих|иге оЕ сРЕ4А с1оллеа Вепегагес! Ьу еасЬ лпе|Ьо|1 оЕ рг)ш108. 14.50 СЬарсег 14: 5сгееи)ид Ехргея)оп 616гаг)ел Е)ВИЧС А)ЧТ1ВОО1ЕВ ИЧ 1ММ11)ЧОЕОС1САЕ ВСКЕЕ)ЧИЧС СЬоох)пВ ЕЬе Апс)Ьос)у $6еа))у, ап апс)Ьос)у илес) Гог лсгееп)пд оГ ехргеяюп 1)Ъгапеа хЬои)6 Ье ро1ус1опа1, аЬ|о)исе!у лрес|Тлс Еог сопсоппасюп-шс)ерепт)епс ер)горел йас аге сдлр)ауес) оп ЪосЬ пас|че апс) с)епасигес) Гогшв оГ сЬе ргосеш, оЕ ЫВЬ сост, ап|1 оЕ |Ье )дб с1ая.
ТЬ)а согиЬьпасюп оГ ргорегс)ев и гаге1у Еоипс) ш а япд)е апсьегши, апс) |с Ь ойеп песеяагу то асгееп ехргеяюп 1)Ьгапел |чЬЬ ргерагасюпл оГ апВЬойеа |Ьас аге Гаг бои| Ыеа). То с)есегш)пе ъчЬесЬег йе ача|1аЫе ЪассЬел оЕ апсьега аге |шоаЫе ае ргоЬея аепа! Й)исю|ь оГ еечега! шт)ерепс)епс апсьега лЬои)6 Ье сел!ел) Гог сЬе Го))о|ч)пд ргорег6еы ° Кеасг)ч)суит)с)т с)те ргосет ау тсегелс ои а и ел|его Нот. Репа)атее) ргосеша сгаплЕеггес) 6ош ап Ю5- ро)уасгу)ашЫе де) аге 11)се)у со йар)ау шапу оГ йе ааше ер)горел ал сЬе содпасе Гияоп ргосеш лупсЬеяхес))п Ъассепа.
ТЬе Еоге|дп ро)урер|Ые лес)пес|сел оЕ шоас 6|аюп ргосеша аге ип!1)се)у со Ео)6 |иго сошр)есе!у пас|че асгиссигел апй айег сгапаГег со а п)|тосе))и)оле 61сег, гпау ипт)егдо 6|гйег с)епасигасюп. Апсьега |Ьас Га|) со |$есесс |Ье ргосеш оЕ )псегеес оп а |ее|сети Ыос аге ргоЬаЫу арес|Т|с Еог ер)серел йлр!ауес) оп1у оп йе пасЬ е ргосе)п апс) сЬегеГоге и|ау Ье ипеи)саЫе ал ргоЬеа Гог ехргея)оп 1|Ьгапея ° 5рес)Яс |ттииоргес)р)саг)ои ау а ро!урертЫе ау с)ле р ге|))стет! л)ее Егот т Ысго |галл)айоп геассзоп| рг)тетЕ васЬ с)ле лате т))ХА илес) со соил|гас| с)ле ехргея)оа ВЬгагу. Ап апСьегши геасипд Ыгопд)у ш сЫ| сеет шиас Ье Йгессе|$ рпспап1у ада)пес ероореа сЬас аге с))лр)ауес) оп ипи|ойбе|$, апс) ргоЬаЫу ипЕо1дей ргосешя С1еаг)у, апсьега |Ьас гесодп! ге о! )долассЬагЫеа ог осЬег гпойЕу|пд дгоире Еоипс) оп еи)сагуос)с ргосе)пл аге оЕ по ча)ие Еог лсгееп)пд ргодагуоск ехргея)оп )|Ьгапея ° ргот)асс)оп оу итеа)с от ип т)е теста Ые ядие)л лч)теп геассет) лч) т)т )гассет)а ехргегл зад с)ле летГиеисел оГ г)те честог а)оие.
Ап6|ега йои)д Ье сеасес) Ьу асгееп)пд слчо шсгосе)1и1оее 61сегы опе сопсаиипд ипрппь оЕ поигесогпЬ~папс р!ат)иеа ог со)оп)еа Гогшес) Ъу сЬе чессог а1опе ап|1 йе осЬег сопса|шпд ипрппса оЕ а япа1) Егассюп Ге.д., 1 — 5000 р)ас)иел ог со)оп)ей оЕ сЬе ехргеяюп 1|Ьгагу |Ьас и со Ье лсгеепес). А тепел оЕ Й)исюпа сопсаш|пд )иютчп апюипь оЕ сЬе пассие апс) с)епасигес) )Ьо)!ес)) апддеп !20 рд со )00 пд) оГ шсегеы аге трос!ее) опто а аерагасе Гс)сег.
ТЬе йгее Ес!сегл аге йеп сш |псо еесс|опы МисЬ аге лсгеепес) лч)сЬ йЕЕегепс сИисюпл оГ ап6|егшп. ТЬе аип Ь со 6пс) а й)шюп |Ьас йлр)аул а ЬсдЬ 1ече) оЕ лресйк геасйчьу |чиЬ йе ап6деп Ьис с)оеа пос геасс поплресз6са))у лч)сЬ рго1|агуоск ргосеиь. Тур|са)1у, йе саиде оЕ Й)исюпл илес) |п йЬ иьс Ь 1:200 — 1;5000 Еог ро!ус1опа) апсьега, )дСт Ггасс|опы аас)ск Вш|Ь, апс) аГ6пиу-рипбе|1 ап|Ьега апс)1:)Π— ):100 Еог шрегпасапс бш|Ь Еготп с)опес) ЬуЬгЫошаа дго|чп ш чГсго. $6еа)!у, йе апВЬо6у йои16 Ье сараЫе оЕ с)есессшд ал )и|1е ал 50 — 100 рд оГ аподеп ш ап агеа йе ыле оЕ а япа11 Ьассепа) со)опу.
ТЬе аиюипс оГ апс)деп ргеаепс )п со)ои)еа ап|1 р)ас)иее ехргеаяпд 6ляоп ргосеша час)еычЫе1у |$ерепйпд оп сЬе сох)с|су оГ |Ье Гияоп ргосеш, )сл гасе оГ |1едгас)ас)оп, апс) Ьа рЬуяса) |саге. Нолчечег, ап апсьегшп сараЫе оГ |$есессшд ае 16с1е аа 50 — )00 рд оГ т)спасите|1 ап6деп аЬои)д а1)олч а11 Ьис йе тполс )аЫ1е оЕ Еияоп ргосе)пл со Ье гесодп)тес). ВосЬ ро1ус)опа) апсьега апс) пюпос)опа) апс)Ьойел сап и|еес сЬе аЬоче спсепа, апс) Ьо|Ь Ьаче Ьееп пает) еиссея6л11у со Ыепс|Еу гесои|Ьшапь йас ехргея с)опет) лес)иепсел оГ шсегелс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
