Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 201
Текст из файла (страница 201)
!и аайиоп, У! 089 )ас)ся а яирргеяяог зКЗ9А Пепе; зЬия, йе агпЬег пипазюп ш йе 5 Пепе (1уая Пепе) оЕ 7.8з) З Ь пос яирргеяяел) зп зЬЬ ясга)и, аПолч!п8 !аг8е агпоипгя оу ЬасзегзорЬа8е-).-епсол)ел) Пепе ргол)исзя !лис! из))и8 !.ас7 6ляюп ргосезпя) зо ассшпи)асе со ЬзВЬ 1ече1я лчлйлп ап !пл)осел! сеП. Рог ал)сПзюпа! шуоппазюп оп Е. соВ язгалпя У )090 апл) У! 089, р1еаяе яее сЬе !пуоппазюп раис! оп РЬА5М10 АХО ВАСТЕК!ОРНАСЕ л. ЕХРКЕ551ОЫ чсСТОК5. МЕТНО0 1. Ма1се а р1азе язос1с оЕ еасЬ оЕ йе гесогпЪзпапз Ъасзег!0РЬа8е(я) оЕ 1пзегеяз иязп8 зЬе гпейос)я с1еяспЬес! зп СЬарзег 2, Ргогосо1я 2-3. ТЬе изег оЕ гЬе я!ос)ся, гпеаяшес1 оп Рх соВ ясгазп "з'1090ЬялИ, яЬои!0 Ье >1Оза рЕи/тп1.
2. Сгозч а 2-гп! си1шге оЕ Е. соБ ясга!п з'1089 зо яашгапоп зп ЬВ гпеспшп сопзаЬз!п8 10 гп)чз МВС1, 0.298 пза!зояе, апс1 агпрк!1!!и (50 )л8/гп!). 3. Е)!!иге 50 )л! оЕ зЬе яазигазес1 си!гиге ъч!зЬ 2 гп1 оЕ 1.В гпесВшп сопла!и!п8 10 зпм МВС1,. ТгапяЕег Еоиг 100-)л! а!н!иоь оЕ йе Й1изес) си1шге зо ЕгеяЬ си!шге гиЪея. 4. То еасЬ оЕ зЬгее оЕ йе илЬея, алЫ 1 х 107, 5 х 107, апл! 2 х 10я р1ас)ие-Еогзпзп8 ишь оЕ йе ЬасзегюрЬа8е язос1с. ТЬе ЕоигзЬ шЬе яЬои1П гесезче по ЪасзепорЬа8е.
1псиЬазе а!1 Еоиг шЬея Еог 20 пипшея аг 37'С со а11озч ч!пь апасЬгпепз. ВП1ше 10 )л1 оЕеасЬ оЕ зЬе Еоиг си1шгея зч!зЬ 10 гп1 оЕ ЬВ гпес)!ит. 1шгпес)!азе1у р!аге а!зсуюзя (!00 )л1) оЕ еасЬ оЕ йе Еоиг с!1!илес) си1гшея оп!о 1.В а8аг р1азея сопсазшп8 50 )л8/ш! агпр1- с!П!и. 1псиЬаге зЬе р1азея !ог 18-24 Ьоигя аз 32'С. А!алчи оЕ сеПя яЬои!П арреаг оп зЬе р1азея шоси!алел) лчззЬ йе ип)пуесзел) си!зше оЕ К со!з у !089. )пуесзел) си!сигея яЬои1с! 8зче пяе зо 50 — 500 со1оплея, перепл)зп8 оп йе с!епя)зу оЕ зЬе огз8)па) яазигазел) си!сиге апл) оп йе ехасз пш!пр1кпу оЕ ЪасзепорЬа8е зпуесззоп. 6. Ыяе пеп1е зоойрк1ся ог !поси1апп8 1ооря зо згапяЕег а яепея оЕ зпсВчЫиа1 со!отея опто гъчо 1.В р!алея йаз солса)п 50 98/ги! агпркз!1зп.
1псиЬазе опе р!азе аз 32"С апл) йе ойег р!азе аз 42'С Еог 12 — 16 Ьоигя. С1опея йаз 8)че гпе зо со1опзея аз 32 С Ьш поз аз 42 С аге 1уяо8еп!с Еог гесогпЬзпапз ЬассепорЬаВе )сВг11. Ь)яиа1!у, 10-7098 оЕ йе со1ошея зеязел! аге 1уяо8епя. 7. 1поси1азе 2 гп! оЕ 1.В гпес)!шп сопла)пзп8 50 )л8/гл! азпркз1!1п члзЬ !пс)!чЫиа! ЬассепорЬа8е 18711 !уяоВепя. Сгозч йе си1шгея Еог 12 — 16 Ьоигя аз 32 С зч!зЬ ч!Вогоия аргагюп (300 сус1ея/плише !и а го!агу яЬа1сег). В. АлЫ 50 )л! оЕ еасЬ си!шге со 4 гп! оЕ ргеччаггиес) (32"С) 1,В зпес1шгп сопла!и!п8 50 )лц/гп1 ашр!с!11зп.
Сопл!пие !псиЪаз!оп аз 32'С ъч!зЬ ч!Вогоия аВззаз!оп. 14.40 СЬаргег 14: Бсгееи!ггч Ехргеььуоп Е.|Ьгаг!еь 10. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 19. 20. 21. Сгоъч йе си1сигеь ип6! йе ОР „= 0.45 (-3 Ьоигь оЕ тсиЬасюп). А 1МРОКТАЧТ ТЬе ОР„ос СЬе сиПигеь яЬои)6 иос ехсеед 0.5 1-2 х соз Ьасгепа)|п)) Ьесоге )пбис||оп оЕ СЬе !уьоцеиь. ТгапьЕег сЬе си!сигея со а яЬаЫпц ъчасег ЬасЬ ес!ш1|Ъ|асег! со 44'С.
1псиЪасе йе си1сшея сог 15 пнпшеь ас 44"С. ТЬе п|ахнпа! с%с!енсу оЕ !пднсссоп Ь оЬ~а|пе6 Ьу гарнПу га!з!пе сЬе сегирегашге Егоп| 32 С со 44 С. 1с Ь йегеуоге ргеЕегаЫе со сгапзЕег йе си1шгез |о а ъчасег Ъай зес ас 44"С гайег йап со а Ьос-а|г !пснЬасог. Я|а1|е |Ье сн1ыгез ч!аогонз!у !гоги 6|не со йпе 6нг!иа шснЬаиоп ас 44"С, !Е из!их а зсзпс ъчасег Ьай. Незс!пе |о сЬезе се|прегасшез оп1у раг6аПу |пассЬасез йе с1ь857 гергеяог, ъчЬ|сЬ сап а1зо гепашге ъчЬеп сЬе снЬше Ь соо1ед со 37'С (Маис!а! аи6 ЫеЬ 1975). Ноъчечег, йе сопсепсга6оп оЕ гергеыог и соо !оч со ргечепс зупсЬеяз оЕ Сго ргосе|п, ъчЬ!сЬ Ь|п|Ь со ОК3 ап6 ргечепь йпЬег зуийеяз оЕ йе гергезяог.
АЕсег Ьеа|1пц, сЬе сн!сше Ьесо|пез !ггесг!ечзЫу сошгп!!сед со а сус1е оЕ 1убс ЬассепорЬаае хгоъчсЬ. А|Ы!РТС со еасЬ си1шге со а 6па! сопсепсга6оп оГ 10 т)ъс, апг! йеп тсиЬасе сЬе си!шгеь Еог 1 Ьоиг ас 37"С ъч)сЬ ч!Погоня аи!сас)оп. ТгапяЕег 1.5-|п1 а1н)иоь оЕ еасЬ оГ йе ин!исе6 !уходи!с сиЬигеь со съчо т!сгиб|не сиЬея. 1пипейасе1у сепспйде йе шЪеь ас тахиишп яреег! Гог 30 яесопг)я ас 4'С |и а т)сгоЕине. Кеточе |Ье тейши Ьу аьр|га6оп, апг! сЬеп гарЫ!у геяиьрепд сЬе Ьассепа1 ре11еь Ьу чог- сех!пц т 100 р! оЕ!уяоцеп ехсгас6оп Ьибег.
С1ояе йе сара оЕ |Ье шЬея, апд р!асе йе шЪея |п 1!г!и!с1 пбгодеп. Айег 2 ииписеь, гесочег |Ье шЬеь Егогп сЬе 1и!иЫ пЬгоцеп. Но!6 йе шЬея !и опе Ьапг! со ъчапп йет ип61 йе 1уьасея )иьс сЬаъч, ап6 йеп игнпейасе1у а|Ы со еасЬ шЪе 20 р! оЕ 10 тц)т! !уяохуте.
йоге йе шЬеь Гог 15 ииписеь Еи ап ке Ьай. А|Ы 250 ф оЕ 5 М 1чаС! со еасЬ шЬе. М!х йе сопсепь Ьу 6!с)с!пц сЬе я!6е оГ еасЬ шЬе ъч!1Ь а Еспдег. 1псиЬасе сЬе шЬеь Еог 30 иипшея ас 4"С оп а гога!!пц ъчЬее1. СепспЕиде сЬе сиЬея ас тах!тит яреег! Еог 30 пипшеь ас 4"С !и а ппсгоЕине. Р1оас а М|П|роге 61сег (Турец'5, 0.025-)ст роге я!хе) оп сЬе ьигГасе оЕа Респ' йьЬ (150 тт) Г|11ег! ъч!1Ь 1уяоцеп ехсгас6оп Ьийег ас 4"С. ТЫз з|ер !з Ьезс сагг!ед он| )и а согпег оЕ а со!6 гоогп аъчау Егон| 6гаусз.
Та)ье саге йас по !узоееп ехсгасбоп ЬнЕЕег зрП1з очег опсо йе нррег зшЕасе оЕ йе 61|ег, ТгапяЕег сЬе зирегпасапь 6огп сЬе сепспйце сиЬеь со йе иррег ьигЕасе оЕ йе 6!сег. 1)р т 20 6!ЕЕегепс ьагпр1ея сап Ье арр11е|1 со сЬе ьагпе 61|ег. Айег 1-2 Ьоигь ас 4'С, сгапьЕег йе 6!а!урнес( ьатр!еь со ГгеяЬ т!сгоГиПе сиЬеь, ъчЫсЬ сап Ъе ьсогес! ас — 70'С ипи1 пеег)его. Апа1ухе сЬе се1!!уьасеь йгесс)у Еог йе ргеяепсе оЕ РГ4А-Ь!и6!пи ргосеи|ь, Гог ехатр1е, |п гпе|Ьу1а6оп ргосес6оп ехрегипепь, Ьу РХаье 1 Еоосрппс!пн, ог |п де! е1ессгорЬогеяь Р!ъ)АЬ)пйпн аььауь (е1ессгорЬоге6с тоЪ|1иу-ьЬ~6 аььауя) (р1еаье яее СЬарсег 17).
Рняоп ргосе1пз сап Ье роп6е6 нз!пц со|п|пегс|аПу ачаПаЫе а%ииу сЬго|иасоегарЬу Ь!сз (е.а., Ргосо5огЬ Еас7 нппшпоа%шсу аЬзогЬепс, Ргопъеаа) ог аь 6езсг!Ьеб ш СЬарсег 15. Сгн6е 1узасез ог рнп6е6 йяоп ргосе|п сап Ье аыауе6 Еог сЬе ргезепсе оЕ ап епгуп|е ас6чиу аяоссасе|1 чбй сЬе Гоге!ап ргосе|п ог Еог нпшипосЬе|пка! сгоы-геасс|лсу Ьу нп|пнпоЫосс!пц. Рнп6е6 %поп ргосешз сап Ье нзе6 со гаие ап6Ьойез ааа!пзс |Ье Гоге!ап ргосе)и, ъчЬ|сЬ !и сшп сап Ье нзе|1 со сопйги| сЬе |6еппсу оЕ а зизрессе6 сВЫА-епсобе6 ргосе!п (Ьу 6яне зигчеуз ог апа1уз!з оЕ раг6аПу рнпйед 6 ассгопз), |о !пЫЬ~с ап епгуи|е ас6чну, ог ш рнпЕу йе па6че Гоге!Пп ргосен| Ьу а%п|су сЬ|огпасодгарЬу.
Рго1осо! 8 Ргерага6оп о1 Еуьа1еь Соп1а~п~пд Гиьюп Рго1е~пь Епсодед оу Вас1епорЬаце Х: Еубс Ыес6опь оп Айаг Р!а1еь с!5!Он Рвотв!Н5 снсоово вч ВАстсв!ОРНАсв Х ввсомв!НАНТ5 аге Вепега1!у ргерагес( Егот 1уао8епК со!оп)еа оЕ Е, со!к ягакп 1089. Ноччечег, сЬе ргос!исс)оп оЕ1уювепа (гоги 1агве птпЬега оЕ шйчЫиа1 р1адиеа сап Ъе Нгеюгпе апс1 кпау пос Ье аиссеааЕи1 (и ечегу саае (НиупЬ ес а1.
1985). Аа ап а1сегпас)че, а !уг(с ЪассепорЬа8е шЕессюп сап Ье еасаЫ18Ьес! е(йег (и аоЕС а8агоае (сЬ18 ргососо!) ог ш 11диЫ си!тге (Ргососо! 9). Р01!оъч(и8 шс1псег1 ехргеаяоп, йе Еияоп ргосе(п саи Ье гесочегес! Егогп йе 1пЕессес1 ЬассеПа1 се11я !п 8епега!, йеае ргососо18 аге гпоге чегаа61е, геди)ге !еаа 1РТСЬ апс1 у)е16 тоге Еияоп ргосекп йап шс1исес1 Ьассепа! 1уювепя Носчечег, сЬеу гедтге а Вгеасег акпоипс оЕ гесоспЪкпапс ЪассепорЬа8е йап 18 пеес$ес! со еасаЫ(аЬ !уаовепя 1п асЫтоп, 8геасег ассшпи!апои оЕ йе Еияои ргосе(п 1и йе Ьоас се!!а тау, (и гаге сааея йагирс 1упс ехргеаяоп ауасетя ТЬ15 ргососо1 ччаа ас)ар!ее! Егогп Ниап8 ес а1. (1989) апс! Ниап8 апс1 1оп8 (1994).
сч1АТЕК1А1.$ ВсгЕЕегв апс$ во!оЕ!опв Р1еаае атее Аррепс))х ! Еог соспропепса оЕ а!ос(с ао!ипопа, Ьийегя апс) геа8епси 01!иге а!ос)с ао1ипопа со !Ье арргорнасе сопсепсгапопя Соппоl очег)ау ю)ипоп (б т1 геди(гес! Еог еасИ гесотЬспап1 р!адие апаlугеЯ !О гпМ М85Ос 0.5х 1В тес!!шп Рог ап 18 шейши гескре, р1еаае аее Аррепйх 2. Авек аосос!ач!пв све 0.5х тейшп, юрр!егпепс и ачй ! м М850 со Ьпив кь 6па! сопсепсгавоп со !О икм. Рог еасЬ !50-пип аваг р!асе, б го! о11РТС очек1ау ао!шгоп ы гес!шгей 1РТС очег)ау ао!ипоп Н2 т1 гедисгес( Еог еасЬ гесотЬспапс р!адие апа1угеЯ 05х 1.В шейшп 5 пъМ 1РТС !О шм М85О„ Рок ап ЬВ шейшп кескре, р!еаае аее Аррепйх 2.
Айег аосос!ачспв йе 0.5х шейош, барр!ешепс и кчЬЬ ! М !РТС (2.38 8 оу!РТС ш а 6па1 чо1огпе о1 10 ш! оу Яеп!е Н,О) апс! ! м М850 (24.6 8 оГ М850 7Н,О кп а 6иа! чо1шпе оЕ !00 т! оу асеп1е Н О) со Ьппв йекг 6па! соосепсгавопа со 5 аис! !О гпм, геаресиче1у. Рог еасЬ 150-шпк аваг р1асе, 12 ги1 о( !РТС очег1ау ао!овоп В гедшгей М85О4 7НаО Л м) 5М Ртогоси! ЬЬ Ргерагаг1ои оу Еугаеег Саигат!и8 Рияои Ртогетя Еиуесиои ои А8ат РЕагег 14.43 10. Рсешоче йе р!асеь Егош ЕЬе !пспЪа1ог апс1 !гапауег йе очег1ау ао!и!юпа 1010 шсЕ1ч!с!па! яег- 1!е 10Ъея ТЬе Еияоп ргогеги Ь ге1еааес$ Егоиг 1пЕесгет1 се!1а аг ЕЬе рошг оЕ!уяа аис1 с166ика гига йе очег!ау ао1игюп. Мост оЕ йе Ъасгепа! с1еЪг1а геша!па ги гЬе ацагоае апс1 с$оез пос сопгаиипаге йе очег1ау Бо!и!гоп. Ак ишсЬ ак 200 05 оЕ Гияоп ргоге1п сап Ье ргос1исес! рег 150-гиги р!аге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
