Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 180
Текст из файла (страница 180)
рот а согпргеЬепыче с)Ьсикяоп о( тесЬ- осЬ шед ш сЬегпка1 тшацепеык, р!еаке кее Жа1соп ес а1. (1991). Саззессе МиЕадеиек!к 1п йе кнпр1екс Еоггп оЕ саккессе пииацепеяк ( лЧе1Ь ес а1. 1985), а япаП кесслоп оЕ РХА Ь геточе6 6огп сЬе ч6!с)-суре цепе апс) гер!асес1 Ьу а купсЬессс кецтепс о( Р)к)А йас сатпек опе ог пюге пшсасюпк. Саккессе тписацепеяк сап сЬеге(оге Ье изей со )истое)исе япц!е ог пси!слр!е анино асЫк мпсЫп йе сатцес гоне. 1п йеогу, йе тесЬо6 Ь сараЫе оЕ, Еог еханср!е, цепегабпц а сапоп оЕ пшсапск епсойпц аП рокяЫе аннпо асЫ гекЫиек ас а рагски)аг собоп ог лпкег6пц ог с)е!есшц анино асссЬ ас счету роясюп.
ТЛеге аге гпапу кчаук со с)еяцп роо1к оЕ о!лцопис1еосЫек йас саггу ншсабопк ас сЬе Пеягес) ясе(к). А рагски!аг!у ейсссепс тпесЬод Ь со купсЬеыте опе ксгап6 оЕ сЬе саяепе аз а роо! оЕ оццопис1еосЫек чбсЬ ег)иа! нихтгек о( аП Еоиг пис!еосЫек ш сЬе 6ткс ичо роябопк оЕ йе сагцес сос)оп апс( ап ес)иа! пнхшге оЕ С апс) С )п сЬе сЫгс) роысюп (КеЫЬааг-0!кои ап6 5аиег 1988). ТЫк сопсроя6оп ргос)осек а сгипсасес) чегяоп оЕ сЬе цепе6с сос)е сЬас сопсашк оп! у 32 собопк апд уес епсос)ек сЬе епбге кес о( анино асЫк (цсосс апс) цпнй 1990; ПеЫЬааг-О!коп ес а1.
1991). ТЬе кесопд к!ганс) оЕ йе саыессе Ь купсЬеятед кч)сЬ лпояпе ас еасЬ сагцес роябоп. 1поыпе Ь аЫе со Еогт Ьаке ра)гк ь)сЬ еасЬ оЕ сЬе Еоиг сопчепслопа1 Ъакек (Магбп ес а!. 1985). ТЬе ичо ксгапсЬ аге йеп аппеа1ей апд сЬе рори1а6оп оЕ пшсацешс саыенек лк! лцасес1 шсо йе преп-)акче6 чессог. ТЬе геки!6пц рори1а6оп оЕ с(пред саыессез ъч)П шс1иг)е сот)опк кресКу(пц еасЬ оЕ сЬе 20 анино асЫк ас еасЬ сагцес ысе(к).
Нокчечег, Ьесаше оЕ ге<1ипйапсу ш сЬе соце, копье апипо асЫк ипП Ье гергекепсе6 плоте Егесрлепс!у сЬап осЬегк, ап6 П гпау Ъе песеяагу со кег)пенсе гпапу сапсППасек со оЬсаш а сотр1есе со1- !ес6оп оЕ саыенек. 11 оп1у а ялЬкес оЕ анино асЫ киЬксциссопк Ь тес!шгес), П кои!6 Ье когсЬсчЫ)е со сопкЫег с)орспц ксЬеплек сЬас цепегасе оццопис1еосЫек епсойпц крее)6с киЬкеск оЕ анино асЫк апс) ехс!ис(- шц оСЬегк (е.ц., р1еаке кее АгЫп ап6 Уоичап 1992). 1п саяене пинацепеяк, сЬе Егесрлепсу о( рагс(си!аг пшсабопк апс1 о( ПоиЫе апс1 спр!е гпша6опк икиацу с1ечсасек Егот йеогеска1 ргейсбопя ТЬЬ Печ)ас)оп Ь ргоЬаЫу а теки1с оЕ шециацс(ек ш йе е(6с)епсу сч)сЬ счЫсЬ йе Еоиг пис!еосЫе ргесигкогк аге(псогрогасес) лпсо сЬе пшсацешс саккессек.
Ночтечет, йеке с)етбасюпк оп1у Ьесогпе кег)оик кчЬеп сЬе анп Ь со лко1асе а сотр!есе капср1лпц о( пина6опк. 1п сЫк саке, П тау Ье Ьенег со Ьатчекс токс оЕ сЬе гписа6опк Егогп йе роо! апс) сЬев со сотпр1есе йе кес Ьу сопчепсюпа! ясе-6)гессес) тшацепеяк. 1н)отти!(он Ране!х 13.82 А1А)Ч1)ЧЕ-ьСА)Ч)Ч1)ЧС М11ТАСЕ)ЧЕЬ! Б А)ап(пе-асано(пц тигацепеяа ы а асЬете ю сЬапце гЬе аигЕасе геяс1иеа оЕ а ргогегп к(П!е ргеаегЫпц Па ипъ)ег1у)пц йгеекцгпепяопа1 аггисшге.
ТЬе гесЬв)г)ие ъчаа ог)ц(пацу с)еяцпег) со гпар йе гиг(асса оЕ а ргогеш йаг аге шчо!чес) ш шгегасгюпа ъч(й огЬег ргогеша ог япаП Пцапс)а (СипшпцЬат апъ) Чгеца 1989; Ваш ес а1. 1991; ъ'ъ'еца 1991). ТЬе апнпо асЫ аеъ)пенсе оЕ йе ргогеш ъчаа аигчеуесг Еог с1гьгега оЕ ЬгцЫу сЬагцес) геаЫиея гуркацу Агц,!.уя Аар, апс) С!и, ТЬе аЫе сЬа(па оЕ йеае геаЫиеа аге гьиаПу ехроаес) го ао!чепг оп йе аигЕасе оЕ ргогеша ъчЬеге йеу сап сопгпЪиге го шгегасцопа ъч(гЬ аиЪаггасея шЫЬггоь, апс1 огЬег Пцапс)я гпс1иецпц ргогешя 5некцгессеъ1 тигацепеяа ъчаа гЬеп иаеъ) со с)е1еге (ог ггипсаге) гЬеае ъчй$- гуре яг(е сЬа)па агъь) гер! асс йепг ъчнЬ а сЬепнсацу шеь яг(е сЬаш йас с!оеъ пог ехгеш1 Ьеуопс! йе )1-сагЬоп.
ТЬе аиЬагншюп оЕ гппосиогь а1апше Еог сЬагцеь) геядиеа оп гЛе аиг(асе цепегацу доеа пос с!ьгирг Ео!8)пц о( гЬе соге оЕ йе ргосеш. Ноъчечег, йе аЬаепсе оЕ ро!аг цгоира Егогп сППса) 1осаПопа пъау аечеге!у согнргопъье Еипсиопа оЕ гЬе ргогеш йаг шчо!че геак1иеа оп йе аыЕасе. А)ашпе-асано(пц тигацепеа)а оЕ сЬагцес! анино асЫа цепегагеа а ауагетаг)с аег оЕ пввапг ргогеша йаг сап Ье аыауеП Еог 1оь оЕ Еипсиоп апг) ачба йе песеьву оЕ цепегагшц, аеъ)иенс(пц, апг( сЬагассепхгпц а 1агце !гЬгагу о( ганг!огп пнвапь.
Ечеп ао, гЬе пшпЬег оЕ тигапга цепегагес! Ъу а согпргеЬепяче а1ашпе асан сап Ье ЕогтЫаЫе. Рог ехагпр)е, асано)пц йе аиг(асе оЕ Пыие-р!аяшпоцеп асг(чагог, а 527- авнпо-асЫ ргогегн, тчо)чец йе сопчегяоп оЕ юпъе 134 сЬагцес! апнпо ас)й Го а1апгпе геак$иеа (Веппегг ег а!. 1991). То гег)исе гЬе агпоипг оЕ ъчог)с, сЬагцеь) апнпо асЫа ъчеге соцесгес) шго агЬигагу с1иагегя ЕасЬ с!иагег сопгашеь) Агц, Ьуя Аар, С1и, апъ) НВ геаЫиеа гЬаг!ге ъчиЬгп Пче геаЫиеа о( еасЬ огЬег ш йе рП- гпагу аес)пенсе.
ТЬе сЬагцес) аввпо асЫа гп еасЬ оЕ гЬеае с1иагега ъчеге а(ти!гапеоиа1у сЬапцеь) го а)апгпе геясЬлеа Ъу оццопис1еогЫе-шец(агег( ягекцгесгед тшацепеяя ТЫа ягагецу цевегагеь( а соса! оЕ 64 пшгапь (12 япц!е гншаппв 35 ъ(оиЫея 12 сНР!ея апъ( 5 ъ)иаъ(гир1еа), ъчЬ)сЬ ъчеге гЬеп ехргеьед апг! аьауей ТЬе десьюп го шс1иде ЬьгкПпе геяъ)иеа ш гЫа а1авше асан В с)иеяюпаЫе. АПЬоицЬ )ь РК ь пеаг пешгацгу, йе сЬагцес) цгоир оЕ 1696йпе )а ойеп шчо!чеъ( ш Ьгпсцпц гЬе Ъиг(ес) сЬагце оЕ апойег геасгЬ е цгоир (П)сЬагъЬоп апс! П(сЬагъЬоп 1989). 5иЬацгигюп оЕ Ыацсцпе Ьу а1ашпе свау гЬегеЕоге г)еагаЬ|1гхе йе ргосеш ог геаи!г ш огЬег ипъ(еягаЫе ягисгига! сЬавцеа (п гЬе тигавг ргосеш.
А1апше асаппшц гъ пог 1ог йе Еашг-Ьеагсей ТЬе аигчеушц роъчег оЕ гЬе тегЬос) Персида ов йе ЬгеайЬ оЕ (ь аупоргк сочегаце. Ноъчечег, сопгргеЬепяче асгиг(пу оЕ сЬагцег( геяциея ог счев оЕ сЬагцес( с!иагегя оп йе аиг(асе оЕ а тос)егасе-яхеь) ргогеш тау геъ)и)ге гЬе цепегаПоп, ехргеь)оп, апс! аьау оЕ пгапу пшгапгя РегЬара Еог гйа геааоп, а!апше асаппшц оЕ епггге ргогегпа Ьаа Ьееп гьес! с)цейу Ьу сотпъегс(а! согпрашея ъ епепсесЬ ъ)ече1орес) а гесЬпгцие ъчЬегеЬу а1апше асано(пц ь иаеь) со ъ)еЕгве Еипсгюпа) гног)Еа шчо1чеъ) ш сага!уы апъ( аиЬягаге Ьгпсцпц о( уеая сАМР-г(ерепс)епс ргогеш Ыпаае (6(ЬЬа апс1 Хоцег 1991), со Ыепг(Еу геядиеа гес(и(гес) Еог Ьгпсцпц оЕ гпгег1еиЫп 8 со (ь гесергог (НеЬеь ег а1. 1991), со Ыепг(Еу Ьопнопе-Ьгпсцпц ъ)есегт(панга ш йе Ьигпап цгоъчй Ьопнопе гесергог (Вам ес а1.
1991; Еог геч(еъч, р!еаае аее 55геца 1996), со гпар аппцепк ер)гореа оп Ьшпап цгоъчй Еассог (Пп ес а1. 1992), апъ) со аыгцп сеггаш Еипсцопа со рагггси1аг ягисшга! ъ)оташа оЕ Пыие-р!аяшпоцеп асцчасог (Веппегг ег а1. 199 Ц. Асас1епнс! аЬогасоНеа Ьаче наес( ЕЬе гесЬпкцие ш а гпоге 1ип)геь) ъчау, Еог ехатр1е, го ргоъ)исе ъ)егацег) гпара оЕ Еипсгюпа! геяс1иеа ш шсцчЫиа1 Поташа ог аиЬПоташа оЕ ргогеша апг) го еча1иаге гЬе сопгПЬигюп о( ййегепг яде сЬаша го гЬе яаЪг1Пу апъ1 Ео1сцпц оЕ рагцси1аг ъ(оташа гп ргосе(па оЕ1споъчп аггисшге. Рог рыроаеа аисЬ аа гЬеъе, а!ашпе асано(пц геташа йе те!Под оЕ сЬоке; рарега Еоипг)еъ( оп йе гесЬв)г)ие сопцпие го Ъе риЬЪЬес) аг йе гаге оЕ аечега! а гнопгЬ.
13.82 СЬаргег !3| Мисаеепеззз МЕЗТАСЕЬ)1С ОЕ!СОМЕ)СЕЕОТ!ОЕй АП тесЬойз Гог ясекП|ессей тиса8епез)з ге|!шге йе изе оГ опе ог июге тша8еизс о1|8опис1ео|Ыез со а)сег йе саг8ес зез)пенсе. 1Г йезе оП8опис!еосЫез аге соггесс!у йея8пей, йе йеыгей гпшапь чйП Ье ргойисе|1 гйй еазе апй еЕГзс)енсу. !Г пос, сЬе узе!й оГ пзисапыпау Ъе ипассерсаЫу 1оис О!|8опис!еосЫез изей Еог сопчепсюпа! !поп-РСК) ясекПгессе|1 гписа8епеяз тиас| ° Ве сотр1етепсагу со ГЬе арргорпаге зсгаий оГ ГЬе саг8ес РХА. ° Ве зифс!епИу !оид Г>20 пис!ео|Ыез) со аппеа) зрес)узсаИу со ГЬе гагдес зег)иепсез. Рг)тегз саггу|п8 пчо ог тоге Ьазе ялЬяЬшюпз зЬои!й Ье ас 1еазс 25 пис1еосЫез ш 1еп8сЬ.
° Сатгу |Ье т)зтассЬезЕ ЬалеГз) |и сЬе сепсег, йгь ргочЫш8 10-15 Ъазез оп енЬег яйе йас ре|Гесйу тассЬ йе сегпр1асе зсгап|1. Ейк)епс шсгос!ис6оп оЕ шзегпопз, с)е!есюпз, ог зиЬзйси6оиз >3 пис!еосЫез ш яге гес)шге рптегз сЬас Ьаче аз ппкЬ аз 30 пис!еосЫез сотр!езпепсагу со |Ье сегпр!асе оп еасЬ зЫе оЕ йе пшса6оп'з а|се. зззЬепечег роза)ТПе, йе са1си!асей |Ьегзпа) зсаЪ|!|Вез оЕ йе йир1ехез Гоппей Ьепчееп йе саг8ес РсзА ап|1 йе 5'- апй 3'-|спи|па! геЬйопз оЕ |Ье ишса8ешс оП8опис!ео|Ые зЬои!й Ье ес)иа! со опе апосЬег.
Рог шГогтасюп оп са!си1абп8 йе зпе!сш8 сепзрегасше оГ оП8опис!еосЫез, р!еазе зее йе шсго|Ьлсбоп со СЬарсег 1О. ° Соасат а 5'-сеттта! ге81оп ЕЬагуогтз а регуесг ЬуЬгЫ и зй |Ье сетр1асе, зо |Ьас РЬ)А зупсЬез)з )ш6асе|1 Егот ап ирзсгеат рпгпег |1оез пос еая1у сПзр!асе сЬе пшса8епк оП8опис1еосЫе. Арргохииасе)у е)8Ь| со сеп регуесйу зпассЬе|1 пис!ео|Ыез аге гез)и)гей со ялрргеы гПзр!асеспепс оЕ |Ье оП8опис!еос)йе Ьу |Ье К1епо|ч Гга8пзепс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
