Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 181
Текст из файла (страница 181)
РЬР1асезпепс сап а!зо Ье ргечепсе|1 Ъу ияп8 сигу|пел зисЬ аз ЬассепорЬа8е Т4 РХА ро!угпегазе Гзчозза! 1974; Кип)се1 1985), зчзЬ)сЬ Лазе по 5'-3' ехопис1еазе асбчну, ог 5ез)непале 18сЬепа 1989), и|16сЬ саппос геасП!у гегпоче йе ЬуЬпгПге|1 гпша8ешс рпгпег Ггогп зь сегпр!асе. ° Роет а ЬуЬгЫ зиЕГ! с!епс!у зсаИе со а!1озч ефс!еиг рпт)ие оГ РЬГА луп сйезь Ггот йе 3' сепшпсь оГ йе о1|8опис!ео|Ые.
!Г йе пз)зтассЬей пис1еосЫе ь соо с1озе со сЬе 3' сеппшиз, сЬе 3' зе8тепс оГ |Ье о!|8опис1еоийе чйП Ъе ш|айе со Еогт а зсаЫе ЬуЬп|1 чйсЬ йе саг8ес РЛ)А апй зч|П йегеЕоге Ье яьсер6Ые со ехопис1ео1уск йе8гайа6оп 1Е, Еог ехазир1е, йе К1епо|ч Ега8пзепс ь изей ш йе рппзег-ехсепяоп геасйоп ГО|Пап| апй 5пзнЬ 1979а,Ь). 1п а|Ы~юп, ап зпсгеазе ш йе Ггес)пенсу оЕ рппип8 ас шсоггесс 1осасюпз пи8Ьс оссиг Ьесаизе |Ье ипЬуЬгЫ|гей 3' ге81оп оЕ сЬе гпша8ешс о1|8опис!ео|Ые ь по|ч Егее со аипеа1 со шсоггесс ясез оп йе сезпр!асе. То зирргем |Ьезе еЕЕессз, Ьепчееп 10 апй 15 ре|Гесйу тассЬе|1 шк1еосЫез аге гез)и)гей ас йе 3' сеппшы оЕ йе пина8епк о1|8опис!еосЫе.
° Ве)гее ол ра!Епйгот!с, гезсегасей, ог зеф-сотр1етеисагу зез)иепсез йас ш)8Ь| Гопп зсаЫе зсгиссшез. ТЬе 8геасег сЬе росепсза1 Еог якЬ зсгисшгез, йе 1о|чег йе еГПс)енсу |чзй зчЬкЬ сЬе о1|8опис!еосЫе чйП ЬуЬпгПге со зь саг8ес зез)иепсе зп йе сеспр!асе РХА.!п ехсгете1у гаге сазез, йе зесопйагу зсгиссиге оЕ |Ье о!|8опис1ео|Ые Гог зь сои|р1епзепсагу саг8ес зес)пенсе) )з зо 8геас йас ишсапь саппос Ье оЬсаше|1. С)пйег зисЬ сзгсшпяапсез, Ь зпау Ье песеяагу со саггу оис пшса8епеяз чйй а пшсЬ 1оп8ег зупйебс о!з8опис!еосЫе зчЬозе 5' апй 3' сепшш ехсепй зчеП Ьеуопй (15-20 пис!еосЫез) йе ргоЫепз ге8з)оп.
5сгеешп8 гесозпЬзпапь Гог сЬе с!еыгей тисапсз )з йеп сагпей оис зчзй а иилсЬ япаПег о1|8опис!ео|Ые Г17 — 19 пис1еосЫез) йас сагпез сЬе росеп6аПу пияпассЬе|1 Ьазез зп йе сепсга1 роясзоп. ТЬе залпе 8епега1 8шйе1шез арр!у зчЬеп йея8шп8 рпшегз Гог гье ш РСК-Ьазей зпейой оГ ясей)гессей тша8епеяз. Нозчечег, ап а|ЫЬюпа1 йея8п Геашге ь гес)и)гей и Ьеп ияп8 а РЬ)А ро!утегазе ысЬ аз Таз) йас сага!угез йе сегпр1асе-ш|1ерепйепс а|Ы|иоп оГ а пис1ео|Ые ГсьиаПу айепояпе) со сЬе 3' сегпипсь оГ йе аизр!гйей ргойисс (р!еазе зее сЬе зпЕоппасюп рапе1 оп зАО Р)з)А РОП'МеВА5Е зп СЬарсег 8).
1п тапу сазез, йе ас!сП6опа! пис1еосЫе чйП пос Ъе сотр1езпепсагу со йе сегпр!асе зпапй. То геяоге йе соггезропйепсе Ьесъчееп сЬе РСК ргойисс апй йе саг8ес РЛСА, |Ье о1|8опис!ео|Ые зЬои!й Ъе йея8пей зо йас |ь 5' епй Ь ипгпесПасе!у ргесейе|1 оп йе сетр!асе зсгап|1 Ьу а йеохуйупигПпе гезк!ие ГКшрегз ес а!.
1991). Ап айепояпе геяйие аййей Ьу сЬе РХА ро!утегазе йоез пос сЬап8е сЬе анино асЫ зес)иепсе апй с)оез пос шсегЕеге чйсЬ сЬе изе оГ |Ье атр!|Пес! !)ззА аз а те8аргнпег ш а зиЬзез)иенс гони|1 оГ РСП. 1п тапу сазез, тша8ешс о!|8опис1еобйез сап Ье йея8пей зо аз со шсгойисе а пезч гезспсбоп зне ог е!ишиасе ап егйзс)п8 ясе 1осасе|1 с!озе со |Ье ясе оГ иинаиоп. ТЬь ягасе8у аПочь сапсП|1асе с!опез со Ье зсгеепес! Ьу гезспс6оп епгугпе с)еача8е аи|1 йегеЬу Еас|1насез Ыепбйсасюп оГ пилсапсз. А соизрисег рго- 1п(ог|па6оп Ране!3 13.83 8гагп епис1ей Ргипег бепегасог регпнь шчеъ|18асогь со йесегпнпе ъчЬейег ап о118опис1еосЫе сап Ье |$ея8пей сЬас Ьо|Ь (псгойисеа а йеягей пинабоп апй а1сегл а пеагЪу гелсг(сс(оп ясе (ТигсЫп ап|1 Ьаъч1ег 1999).
Ап а!сегпас|че тоге роъчег(и) орбоп Йас Ь лп|$ерепйепс оЕ сЬе Рсъ|А лес)пенсе пеаг |Ье ясе оЕ пп|сасюп |пел съчо рптега: опе со тиса8еп(хе йе саг8ес ясе ап|$ апосЬег со ге|поче а попеыеппа1 ипирле геасг(ссюп ясе ш йе Е)ап)с(п8 чессог лес)иепсел (Реп8 апй Н(с)со!оЕЕ 1992). ТЬыпесЬой сап Ье ехсепс(ей со Ьш!й Ьо|Ь тисасюпл шсо а яп8)е!оп8 "гпе8арптег" йас сап Ъе |пей ш а ъесопй РОК со 8епегасе а !аг8е апюипс оЕ пшсасей йоиЫе-асгапйей Р)ъ(А (Капипапп ес а1. 1989; Ьапйс ес а1. 1990; 5айаг апй 5опнпег 1990, 1992; Ке апй Май(лоп ! 997). ТЬе леъ)пенсе оЕ пшса8епк о!18опис1еос!йел хЬои!й Ье апа(улей Еог |Ье аЬ1!(су со Еопп Еогсшсоиы аса- Ъ)е ЬуЬпсЬ ипй ге8(опл оЕ |Ье сетр1асе то!еси)ел ойег йап йе саг8ес лес)иепсеы Моъс сопш|оп1у ача|Ь аЫе рго8гапь Еог сотршег апа!уж оЕ Р$4А аециепсеа сап Ье сией со |сап росепба! гпша8епк рг(тегз Еог Ееасигел лисЬ ал Ьа(гр|п Еоппасюп, |$ипег Еоппабоп, росепба! ЕаЬе аппеа!1п8 яссы рояс)оп ап|1 пигпЬег оЕ тига|)опИплегс(опы те!с|п8 сеп|регасиге, ап|1 ыаЬ~Рпу оЕ 5' ап|$3' еп|Ь.
5оп|е рго8гагпл сап са1- си1асе сЬе ргейссе|$ асаЬ11)су (дб) о( 5-Ър ъч(пйоъча асгоы |Ье!еп8|Ь оЕ ап о!|8опнс1еосЫе-сетр!асс ЬуЬгЫ. 0118опис!еосЫеа ъчЬоле 3' репсатегл Ьаче Аб ча(иел Ьесъчееп — 6 ап|$ — 10 )сса1(то1е ияла1!у ргочЫе йе п|ахппшп у|е! й оЕ тисасюпа (Р|есЬосЫ ап|1 Ншел 1994), ргеянпаЫу Ьеса|ье сЬе ЬуЬп|Ь Еоппес! Ьу йе|г 3' епсЬ (1) аге лсаЫе епои8Ь со со|прегьасе Еог йе т(ыпассЬ(еъ) |п |Ье сепсег оЕ йе о1|8опис1еосЫе Ьш (2) аге еи(6с|епс!у и|ьсаЫе со лирргесь Еа1|е рг)т(п8 (гоги оп|чаи|ей ясеы $Е песесьагу, йе лрес16сау оЕ ЬуЬгЫЬа6оп о( йе пшса8епк о!|8опис1еосЫе сап Ье сЬес)сей е|йег |п а Р$4А-лес)иепсш8 геассюп ш ъчЬкЬ сЬе о68опис!еосЫе ь сией аа а ргнпег ог Ьу ехсепй)п8 йе ргппег ш йе ргелепсе оЕ а ата)1 апюипс оЕ опе 1аЪе1ей йХТР апй Еош нп1аЬе!ей й$4ТРл апй йеп й)8елс(п8 йе ргойисс ъчпЬ арргорпасе гелсг)ссюп епху|пеы ТЬе раиегп оЕ гайоассйе ЬапсЬ ъч)!! гечеа! ъчЬейег рпгпш8 Ьал оссигге|$ ас сЬе |$еягей ысе ап|1 |Ье 1еп8|Ь со ъчЫсЬ сЬе рптег Ьал Ьееп ехсеп|$ей (Хо11ег апй 5писЬ 1984).
Ноъчечег, сель оЕ сЬ)ь суре аге 8епега11у сагпей оис оп1у ъчЬеп й(ЕЕ|си!6ел аге епсоипсеге|1 ш оЬса|п|п8 |Ье |$еягей пнлсабоп. 1п 8епега1, йе!а|8ег йе яке оЕ сЬе п|шасюп со Ье сопыгиссей, |Ье!оъчег |Ье еуйс(енсу оЕ о1|8опис1еосЫе-й)гессей пнпа8епеыы Рог ехатр1е,!аг8е йе!ес(опл ((.е., йе!епопа оЕ лечега) Ьипйгей пис!еосЫел) аге 8епегасей чй|Ь -50-Ео!й 1оъчег еЕЕлс(енсу сЬап тисас(опл шчо!чш8 оп1у !оса! сЬап8еь ш лес(пенсе. ТЬ)л шеЕЕлс(епсу алеппо Егот съчо юигсеы Р(гас, |Ье аЪ|!Ьу оЕ сЬе пшса8еп|с о!|8опис1еосЫе со Сопи лсаЫе ЬуЬп|Ь ъчпй |ъчо ъерагасе лес(иепсел оп йе сеп|р!асе Р)ъ)А йесгеалеа ал а Еипспоп оЕ йе йыапсе Ъесъчееп |Ье съчо ле|рлепсеы 5есоп|$, сЬеге Ь ап (псгеалей ргоЬаЪ|! пу сЬас йе о! |8опис1ео|Ые ъч|!1 ЬуЬпйхе со |псоггесс аеъ)непсеа оп сЬе сеп|р!асе Р!4А.
ТЬе сопле|)пенсе оЕ сЬеле ейессл ь |Ьас |Ье еЕЕлс(енсу оЕ "1оорш(!оор-оис" тиса8епеял Ь Еаг 1оъчег йап |Ье еЕЕ(с)енсу оЕ пплса8епеяь оЕ опе ог съчо соп6рюил пис! ео6йея Ригйеппоге, йе ргорогйоп оЕ с!опел йас саггу а!сегал)опл ас ессор(с ясел и 8геас!у шсгеалей. Рог сЬезе геалопы |с и о(сеп песеыагу со лсгееп рисаиче 1оор-ш1!оор-ош пппапь Ьу ЬуЬгЫЬаиоп ъчпЬ о!18опис!еосЫел сЬас аге сотр)етепсагу со сЬе йеягей йе1есюп11паегсюп)ипсиоп ("рояс|че ргоЪеа") ап|1 ъч(сЬ о118опис)еосЫез сЬас аге соп|р! еп|епсагу со йе |1е1есей ъеъ)пенсе ог Йе лсагсш8 шлеяюп рошс ("пе8- а6че ргоЬел") (р!еаае лее ТЫ8реп ап|$8иые!1 1992). Бпа!!у, Ьесасье оЕ йе Ь~8Ь Егес)иелссу чйй ъчЬкЬ шсоггесс ппнасюпь аге сгеасе|1, Ь Ь еяеп6а! со йесеппше йе сотр1есе лес(пенсе оЕ йе лписа8еп(лей РЬ(А (пос )гьс сЬе ге81оп Йас и сЬе р!ание|1 саг8ес).
13.84 Сйартет 13| Мигаеепетй 6ЕЕЕСТ1ЫС АСА1ЫЬТ ЪЧ! ПЭ-Т|РЕ ОЫА ! М $1ТЕ-011хЕСТЕО М13ТАСЕь)Еь1$ ТЬе Ггеъ)пенсу оГ шисасюпа 8епегасес1 Ьу о1|8опис1ео|Ые-шесйасед шисайепеж чат)еа Ггош >0,19а со пеаг1у 509я дерепйп8 оп сЬе сотпр1ехйу оГ йе спшаьоп апс) сЬе ипс)ег1у)п8 еуйс(енсу оГ йе шесЬоь) |ье|1, 1п с1ааяса) оййопис1ео|Ые-шесйасед пнпайепеяя а Ггасйоп оГ йе мч!д-суре ЬассегюрЬа8е М13, РЬайешЫ, от р1аяпЫ Р)ъ)А ч611 еасаре пшсаьоп ап|1 ъчч11 8епегасе поппшсапс со)оп!еа ог р!аср|ея юшес)гпеа ш сопят)етаЫе пшнЬегя А япн1аг ргоЫеш аг(аеа ш РСК-Ьаает) пшсайепеяа ъчЬеп с)оиЫе-астап|)ет) р!аяпЫ РЛ)Ах аге гьес! аа сешр1асеа (е.8., р1еаае аее мъте!пег ап|1 Спаса 1994; мъте!пег ес а1.
1994; Сох|а ес а1. 1996). То а!!ейасе сЬеае сНГтси!с(ея шесЬо|Ь Ьаче Ъееп <сече)орет) со с)еасгоу поптпыапс РЫАа ае!есс)че1у |и касто ог шрргеаа йе 8гоъчй оГ ъччЫ-суре с1опея 1п Ьой сааея Йе пес ейесс ь со )псгеаае Йе ргорогьоп оГ пшсапс с! опеа ш |Ье гесошьшапсь гесочегес) айег ясе-йгессей пшсайепеяя ТЬеае ае1есьче тпе|Ьой аге оГ райки(аг ча1ие ъчЬеп аьегпрс|п8 со (ао!асе Уй|ТГ|си1с" |пшапь йас аге 8епегасес! ъччй !оъч ерйс(епсу |и рптпег ехсепяоп ог РСКа (е.8., 1агйе |1е)еьоп п|шапь апт) пш16р!е ро|пс пппапь) от ъчЬеп ияп8 роо!а оГ оййопис1еосЫеа со 8епегасе тпапу шисассса япш!сапеоиа1у ас а с)ерспес) 1осаьоп ш йе сагйес Р)4А. Бе!есйоь 1п ЧИго Резсгиссуоп оГ Рагепса( Гетр!асе и!ГГ| Ррп! ТЬе геаст)сс)оп епхуше Ррп! с1еачеа с)оиЫе-астап|)ес) Р)4А арес|Т|са1!у ас йе |пейу!асе|1 аес)иепсе С""АТС (Гас)са апс) бгеепЬег8 1975, 1977; бе)ег апс) Мое!псЬ 1979). Р!аяпЫ апс! ЬассепорЬайе РЛ)Аа !ао!асес) Гго|н а!пюя ай сопьпоп1у шее а|геша о( Е.
со1| Ламе Ьееп Ги11у тпейу1асе|1 |и чп о Ьу йе епс(ойепогь Раи шесйу!аае ап|1 аге сЬетеГоге аепайтче со Неама8е Ьу Ррп1 (МсС1е!1апь) апъ) Ые1аоп 1988). Непшпесйу!асеь) Р)ъ)Аа ате с)самед Ьу Ррп1 ас аотпеъчЬас 1оъчег ей|с|енсу. Ву сопсгая, РХА аупсЬеягес) ш чпго ияп8 йе Гонт сошепйопа! ъ)еохупис1еосЫеь ь ипшесьу!асес) апъ) йеге(оге сошр1есе1у геяасапс со с!еача8е. Сопаес)иенс!у, Ррп1 сап Ье наес) ас сЬе епс) оГ ясеюйгессес! пшсайепеяь со ъ)е8гаъ)е геа!ъ)иа1 шесьу!асеь) ъчч1йсуре сетпр!аьь апъ) со еппсЬ Гог ипгпейу1асес! Р)ъ(Аа аупйеа!тет) ш чнго. 5е!есьче ъ)еасгиссюп оГ ратепса! сешр1асеа Ьу Рри1 Га наес) сЫейу аа а шесЬос) со гйяпГесс с)оиЫе-астап|(еъ( РГ4Аа аупсьеа!тес) т)игш8 РСК-Ьааес) пшсайепеаь (е.8., р!еаае аее Ропсе апс) Мко1 1992; ъътешег апт) Спаса 1994; Сояа ес а!. 1996; ъ'ътап8 апс) Ма1со1гп 1999).
АпосЬег ъчау со асЫече ЬюсЬешка1 йасппппайоп а8а!пас йе сешр1асе ягап|1 В со )псогрогасе шесьу!асес) пис1еоаЫе сг)РЬоарЬасе шсо йе пппапс асгапй ъ)иг)п8 аупсьейа ш чйго. ТЬе пшсаш астап|) съем!! тЬеп Ье ргосессе|1 айашас сййеайоп ъч(сЬ геяпсьоп епхушеа аисЬ аа Н)са1, 5аиЗА1, апс1 М|р1, ъчЬьсЬ М!! с)ейгас)е сЬе ип|посййес1 рагепса) сешр1асе РНА шсо япа11 Ггайшепса (е.8., р1еаае аее Чан|)еуаг ес а1. 1988; НоГег апъ) КиЫеш 1993). Юеасгисс(оп оГ Рагепса! Уетрlасе ьп(Г| (угас!1-РА(А С!усоау1аае| Пзе Кио)те! Месйоту 5(п81е-астап|)еь) сешр!асеа оГ ЪассепорЬайе М13 РЫА, 8епегасеь) ш а асса!и оГ Е. сой саггу|п8 ип8 Иш пшсайопа (р!еаае аее йе рапе!а оп РГГТ ап|1 РХб) сопса|п 20-30 огас|1 геаЫиеа (п р!асе оГ сЬуш)пеа (5а8Ьег апъ) 5ьаия 1983).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
