Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 176
Текст из файла (страница 176)
31) га цаег) го ша1се цпг- ог Ъ)е)!гесг!опа1 е)е!ебопа ш а ьеВшепг оЕ с!опт Е)ЪЕЛ. ВА1 31 18 а сошр1ех епхугпе апг) сепгЬ 10 йВеаг а роро!агюп оЕ с)оцЫе-я!гапке) Е)Ъ)А сагВеп !п ап ааупсЬгопоца ЕааЬюп (р1еаае аее йе шЕоппа6оп рапе! оп ВАЕ 31). ТЬе геац16пВ г1е1ег!опа аге йегеЕоге Еаг пюге ЬегегоВепеоца гп яге гЬап 1Ьоае сгеагег) Ъу ргосеьязе епхугпеа ацсЬ аа ехопцс!еаае П1 !Р1еаае аее Ргогосо1 9).
МАТЕВ!АЕ$ САЕ)Т!ОХ: Р!еаае аее Аррепг)!х 12 Еог арргорпаге Ьапд1!пВ оЕ гпа1епа18 шагЬед ипй <! >. ВоЕЕегь апг! Бо!66опх Р!еаае аее Аррепг!)х 1 Еог согпропеп18 оЕ а!ос)г ао1цпопа, Ьцйега, апд геаВеп18. 01!цге 81осй 801цпопа го йе арргорпаге сопсепггапопь. 5х ВАЕ 37 ЬиЕЕег 2.5 м ХаС! 62.5 шч СаС1, 62.5 гпМ МВС1а !00 шм ТгенС! !РН 8.0) г)НТР ао)ипоп оЕ аП Еоиг с)70ТРа, еасЬ аг 0.5 тМ ЕСТА ЕЕ).5 м, рН 8.0) ЕЕЬапо! РЬепо):сЬ)огоуогт 77:7, ~4г) <! > 5огпит асегаге ЕЗ м, рН 5.2) 5исгоае Ве)-7оасппВ ЬиЕЕег ТЕ ЕрН 7.6) Епкугпех апг! В6ЕЕегя ВасгепорЬаВе Т4 РНА ро)утегаае ВАЕ 37 пис)еаае К)епогг ВаВтепГ оЕ Е.
со!! ОЬ)А ро)утегаае ! Веагггсг!оп епг)опис)еаьеь Р!еаае аее 5гера 5, 25, ап0 5 !. 13.62 Ргосого! 1О| бепегаг!оп оу'Ви1!гесс!опа! 5еь оу Ре!ейоп Мисапп Ьу Р!Реьс!оп |ч|й ВАЕ 3! №с!еаге !3.63 Се!5 Ааагоае ае!а Рсеаае аее 5гера 3 аи|С 32. Ааагоье де! !0.87'7 солса!л!пй 0.5 С|87т! ей|гйит Ьгот!де <!) Р1еаае аее 5сер 11. Айагоье Ве! сааг т УВЕ сои!а!и!ой 0.5 щут! еЯ|гйит Ьгот!де Р!еаье аее 5сер 25.
Ргерагайче айагоье ае! Р!еаае атее 5|ер 27. Нос!е!с АсссЬ апс! О!коппс!ео1Ые5 Маг7сег Р74А 1ог ее! е!есггорйогеаса йресса! Ецосргпеп1 5!о ри а ссЬ Яасег Ьасйь ргеаес со 65"С апд со Яе арргорг|асе сетрегасигеЮ !ог геагпсйоп епдолис!еаае сйдеайоп АЕЫ!1сопа! Кеаееп15 5сер 1 оу сЬ73 ргососо! геди!сев сЛе геайепп йасед т СЬарсег 7, Ргососо!а 17-19, ог йе геайепга !|агед т СЬар|ег 3, Ргогосо! 6. 5сер 2 ос сЬ!ь ргососо! геди!ген Яе геайепсз йасед т СЬарсег 7, Ргососо! 9. 5сер 27 оу сЬ!а ргососо! геди!гез сйе геайепса йасед т СЬарсег 5, Ргососо! 4, 5, 6, ог 7. 51ер 30 о! СЬ!а ргогосо! геди!ген йе геайепо йагед т СЬаргег 7, Ргогосо!а 23-26, ог йе геайепса йасед |л СПарсег 3, Ртсосо! 6 ог 8. 5сер 31 оу сЬ!а ргососо! геди!сев йе герело йасед |п СЬарсег 7, Ргогосо! 7, ог йе геааепса йасед |п СЬарсег 3, Рго(осо! 3. 51ер 34 оу СЬ!а ргогосо! геди!геь СЬе геадело йвгед |п СЬаргег 72, Ргогосо! 3, 4, ог 5.
МЕТНО0 Ргерагабоп о1 Тагее1 О!А!А аког 0фе56оп !Зу ВАЕ 31 1. С1опе йе сагаес Егаагпепс !псо ап арргорпасе р1аат!д ог ЬассепорЬаае М13 чессог. !! |Се1есюи ишсаиса аге со Ъе сола|госсе|С йош Ьой сепиии о! Йе сагцес 7374А, Ь ч611 Ье песе|гагу со с!оие сЬе рагеиса! |агнес Е)счСА !и ЬосЬ опеисасюиа счссЬ геаресс со сЬе росуссоишц ясе ш аи арргорпаСе чес!ог. 2. РцпГу сЬе с!оаед с!гси1аг гесошЬ~папс РЬ7А(а) Ъу со1шпп сЬгоспасоагарЬу оп С с!ааеп со1шппа (ог йе|г еди!ча!епС) апд ргес!р!Саг!оп чч!СЬ есЬапо!. Вед!аао1че йе РЬ7А !п СЬе ата11еас ргасссса1 но1шпе оГ Тг!яЕРТА. !с а еяеийа1 со ые Ь!5Ыу рог!Все|С с!осе|С ссгси!аг С|счА !17 со иииии|ае сЬе соиспЬшюи о! соисаиииайи5 КгчА аи|! яиас! Егаашеиса о! Б, сей сЬгогиоаоша1 Е|74А со |Ье соса! соисеисгасюи ог сегииш ш йе геассюи аи|С ! с!1 со е! ил|пасе и!с!се|С с|гси!аг ию1еси!еа, а|ЬссЬ аге |Се5га|СесС Ьу ВА!. 3 с Егош йе ясе о! йе и|с!|.
3. Р!аеас 30 Сса ос йе с1оаед с!гси!аг РЬ7А со согпр!ейоп ъчЬЬ а геаспсс1оп епдопис1еаае йас с1еачеа ас опе епс1 оу сЬе сагаес РЬСА. ТЬса ясе дейпеа йе сопппоп ро|пс Егот счЬ~сЬ сЬе пеьсед с1е1ейопа сч!11 Ъеа!и. Рае ааагоае ае! е1ессгорЬогеа!а со чегсуу сЬас йцеаооп ъчЬЬ сЬе геаспсссоп епс1оппс1еаае 13 согпр1есе. !3.64 СЬггргег 13: Мига8епея!я 4. Рипгу сЬе РХА Ьу ехсгассюп тч!сЬ ап ег)иа1 чо1шие оу РЬепоЬсЫогоуопп. 5ерагасе йе аг)иеоия апгс ог8апк РЬаяея Ъу сепспбг8ас!ои ас тахииши яреег1 уог 3 пиписея ас 0'С т а т!сгобг8е, апгс сЬеп сгапясег йе аг)цеоия РЬаяе со а ггеяЬ т!сгобг8е сиЬе.
5. АгЫ 0.1 чо1шпе ог 3 М яос1шпс асесасе !РН 5.2) апг1 2 чо1шпея пуке-соЫ ейапо1. 5соге йе сиЬе Гог 10 пиписея ас 0'С, апс1 йеп гесочег йе РХА Ьу сепспбс8ас!оп ас тахипши яреес! уог 10 пипшея ас 4'С !и а писгобг8е. 6. Реточе йе яирегпаСапг, апг1 ччаяЬ СЬе ре!1ег оу РХА сагебг11у гч!СЬ 7098 ейапо1 аС гоопг сепсрегасиге. Ргу йе ре11ес ас гоот сегпрегашге, апг1 сбяяоЬче и !и ТЕ (РН 7.6) ас а сопсепСгагюп ос 1 Сс8!)с1. 5гоге СЬе РЫА аг — 20 С. 7.
1и а т!сгоуи8е СиЪе, пих: 1шеаг1гегС СССЧА 11 !г8/р!) Н,О 5х ВАЬ 3! Ъоугег '! Н! 48 ос !3 рс 1Э!ярепяе 9 )с! оссЬ!я пихшге гпсо еасЬ ос яечеп яерагасе тссгобг8е сиЪея. 8. Ма1се а яепея оГ яечеп сгчого1о Й1ис!опя ос ВА1. 31 !и 1х ВА1. 31 Ьийег. Епхупсе с6!шюп ь Ъеяс сагпегс оис Ьу р!ас!08 яечеп а1!г)иося (2 Сс1) ос 1х ВАЕ 31 ЬиКег оп йе яиггасе оса ргесе оГ Рага61т 1ут8 оп а Ъес) ог" ке ог оп а со!6 Ыос1с. Ряе а сбярояаЫе иисгоргрессе 6р со иих 2 р! ос йе ВА1.
31 ргерагагюп ипгсег Сея! счссЬ сЬе 6гЫ с!гор. 1)яе а угеяЬ 6р Со Сгапяуег 2 )с! оС йе пихсиге со йе пехс !!гор, апгс а8асп пих. Сопбпие ш сЬгя саяЬюп ип61 сЬе епхуте Ьая Ъееп асЫе6 со а!1 ог' йе с!горя. 'г'ггог)с!п8 г)и!сИу, асЫ 1 Сс! оуеасЛ 01 сЬе 1аы ых с6106опя со ых ог йе писго638е сиЪея сои!а!и!п8 йе 1!пеаг РЫА Ье!п8 сеясег1. Ро пос агЫ епаугие со йе яечепсЬ сиЪе. Мояг соиииегсса! ргерагас!опя ог ВА1. 31 аге яорр!гесс ас а сопсепггаВоп ог' -1 шпг!ВЬ 0.05-0.1 оои ос гпояс сошшегс!а! ргерагаОопя ог" ВАЬ 31 В шйгсгепг со е88еяс 1 р8 о! а 2-сгЪ яе8шепс оу !гпеаг РСчА со Сгаяшепся <200 Ьр го сеп8й. 9. !псиЬаСе а11 оуСЬе тссгобг8е СиЬея (гпс1исбп8 СЬе СиЬе сЬаг гесе!чег1 по епгуте) Гог 30 пиписея ас 30'С.
1О. АсЫ 1 р1 01 200 гпМ ЕСТА !РН 8.0) со еасЬ сиЬе, апд сЬеп Ьеас йе сиЬея Сог 5 пиписея ас 05оС ВА1. 31 гегСшгея Саг' !ог асг!чВу аигС Ь йпегоге согпр!есе!у шЬгЬЬед Ьу ВАТА. ТЬе епгупге В аЬо шасссчасегС Ьу Ьеас!п8 сог 5 шсоогея аг 05'С. ! !. М!х еасЬ ос йе яатр1ея счссЬ 3 Сс! 01 а8агояе Ве1-1оасбп8 Ьийег апс1 апа1ухе йе ыге 01 сЬе РХАя Ъу е!ессгорЬогея!я сЬгоиВЬ а 0.89Ь а8агояе 8е! со пса!и!п8 0.5 Сг8! т! есЬ!6!ит ЬгосиЫе. АВВаУ1Щ ВА1. 31 Ас11и1У Моы сопииегсга1 ргерага6опя ог" ВА1. 31 сопсасп ссчо Ыпе6са1!у гВя6псс гостя ог" йе епхуте: а уаы Гопп апг! а я!осч гост (р!еаяе яее сЬе !и!оста!!оп рапе! оп ВАС зс).
ТЬе я1осч Гост ь а ргосео1у6с де8габа6оп ргос)исс ог' йе Гаяс сост. ТЬе гасе ас счЬссЬ ВАЕ 31 й8еяся Р1ЧА ь а Сипссюп ос йе ргорог6оп ос йе уаы апгс я!оъч !опля !и сЬе рагиси1аг ргерагасюп оусЬе епхугпе сьей Рше ргерагасюпя осйе саяс сопи аге ачаВаЫе (ЪЧе) ес а1.
1983), Ьис йеу аге ехрепыче апг1, !и апу саяе, сЬеу Сгег)иепс!у гсесау ипо йе я!осч сопи г1шсп8 ясога8е. То ргеяегче ВА1, 31 сп йе уаяс гост, гсо пос Сгеехе сЬе епхуте, апс! ясоге Ь ас 4'С. Весаияе йе гасю оГ Гаяс апс! 5!осе гостя оГ ВАЕ 31 чапея !гоги ргерага6оп со ргерага6оп, и !я еяяеп6а! со асьау сЬе асс!чссу осйе рагски!аг ЬассЬ осепхугпе йас гч!11 Ье ияегс со Вепегасе с1е1есюпя. 12.
Ехапнпе йе це1 Ъу ()Ч т!!шпшапоп, апс1 т!есегш(пе йе т!1!исюп оЕ епгуше )игс аийк(епс со т!(цевс йе Р)х(А со сЬе рошс тчЬеге оп1у а ыпеаг оЕ япа!1 (200-Ьр) Егацшепса 13 т!есессаЫе. ТЬта тИис)оп оЕ ВАЕ 31 тч(11 Ъе наес( )п СЬе !агце-яса1е йцеаВоп (цсер 15). АоосЬег тчау то сЬес1т йе ртоцгеаь оЕ сЬе ВА1 31 йцеттюп а со тес ор а )агце-яса1е йцетстоп тгтсЬ ВА1. 31 апт( со тч)тЬ8гатч а!нтиотт ас чагюю с~пег ЕасЬ оЕ тЬете а1)с)иота Ь йеп йцеьтет) чт)тЬ а гетсг)стюп епгутпе сЬас Неачеь сЬе сагцет Егацтпепт течега1 сипеы Аг сЬе йцегтюп тч)сЬ ВА1 3 т рго- сеетЬ, йе геттг)ссюп Етацтпепст йтарреаг ю а т)егтпет) оп1ег. Кпочт)пц сЬе ыге антс псар роятюпь оЕ йе гетсг)сс)оп Егацгоеттты )с ь ром)Ь)е со етсипасе сЬе гасе оЕ ВАЬ 3 т йцеьтюп.
ТЬе аптоштс оЕ епгутпе атЫет1 то йе 1агце-тса1е йцеы (Ье1отч) ьЬоо18 Ье ытЕВс)епт со йцеьс <20ОА оЕ йе 1еоцсЬ оЕ йе сагцес Етацгоепт тп сЬе Етгтс 5 тп)потея оЕ сЬе геасноп. Ьагее-Вса!е 0фе56оп ччто ВАЕ 31 13. М!х: 1)пеаг)гет) РНА (т ттц)тт1) НтО 5х ВА1. 31 Ьо((ег 20 тт1 240 01 65 01 1псиЬасе йе пихспге тп а тчасег Ьай ас 30'С.
14. Ъйп1е йе пихсиге га тчагштпц со 30'С, ргераге а тес оЕ е!цЬс писгоуице сиЪеа, еасЬ сопсашшц 5 )т! оЕ 200 шм ЕСТА (рН 8.0). 1.аЬе1 сЬе сиЬеа 1.5 ш(писеа, 3.0 ш!писеа, 4.5 ш)писеа, есс. 15. АтЫ 36 )т! оЕ йе арргорпасе Й1исюп оЕ ВАЬ 31 (р1еаае аее цсер 12) со сЬе геас6оп пйтсиге ргерагес1 Еп 5сер 13. Е'титсИу пих сЬе епхуше Ьу сарр!пц йе ят!е оЕ йе сиЬе, апт! сЬеп гесигп йе сиЬе со йе тчасег Ьай тес ас 30'С апт1 асагс а асортчассЬ. 16.
АС 1.5-пипШе тптегча!а, Сгапяуег 45 )т! оЕ СЬе геасСюп пнхСиге Со йе арргорпаСе!у !аЬе1ет! пнсгобтце сиЬе. 5соге йе шЪеа оп ке ип61 а11 оЕ сЬе аашр1ея Ьаче Ъееп со1!ессей 17. Неас сЬе сиЪеа Еог 5 ш(писеа ас 65'С со )пасВчасе сЬе ВАЕ 31. 18. АтЫ 5 )т! оЕ 3 м тот)1шп асесасе (рН 5.2) со еасЬ сиЬе, 101!отчет! Ъу 100 )т! оЕ !се-со!6 ейапо!.
М)х йе сю!исюп Ьу чогсехшц, апт1 итоге сЬе сиЪеа оп ке Еог 20 — 30 ш)писем 19. Кесочег сЬе ЕтХАя Ъу сепсг!Ьтцас)оп ас шахпгпнп преет) Еог 10 штписеа ас 4'С. Ветпоче йе ятрегпасапь, апт1 ъчааЬ сЬе ре11еп тч)сЬ 200 р1 оЕ)се-со!6 70охо есЬапо1. Сепспйтце Еог а ЕшсЬег 2 ппписеы 20. СагеЬт1!у гегпоче сЬе аирегпасапса, апт1 асане! сЬе ореп сиЪеа ат гоош сетпрегасиге ип61 а11 оЕ йе есЬапо! Ьаа ечарогасес1.
Ртаао1че еасЬ оЕ йе ре!1еп тп 23 )т! оЕ ТЕ (рН 7.6). !Во!а6оп о1 Тгопса4ес! Тагее1 Ггаегпеп$5 21. АтЫ со еасЬ оЕ сЬе Е))х)А ргератапопы 0.5 тпМ т)ттТР то!ююп 10х ро1утпегате Ьо(ует ЬастепорЬаце Т4 РЕ4А ро1утпегаье (-5 ойь) 3 и! 3о1 та) 1псиЬасе йе геасВопа Еог 15 ш!писеа ас гоотп сешрегасиге, апт1 сЬеп атЫ -1 )т! (-5 иосси) оЕ сЬе К1епотч Егацшепс. Сопсшие сЬе шсиЬапоп Еог а йгйег 15 ш(потея ас гоош сегпрега- сше. Рготосо! 10: Бепегаттоп о! В)тЕиестсопа! 5етт от" Ое1ег(оп Мигапо Ьу Осцеьпоп тчЕЕЬ ВА| 31 ЕЧис1еате 13.65 Ргогосо) 1О: с епегаг)оп оу В~йгеспЪпа1 Веп оу йе1ег)оп Мигапсг Ьу Р1еегпоп и 1гЬ ВАР 31 №с1еаге 13.б7 33. 1Г йе геап1га аге ааг)агасгогу (Ье., 1Е гЬе гагаег Егарпепга Еа11 чч!гЬ)п гЬе с1еягес1 иге гапке), ргс1с а 1агае пшпЪег оу 1пйчЫпа! ггапагогшед со!оп!еа ог р1ас!пес апс1 с1егеггп)пе йе яге ог йе !паегга ак беасг!Ъес) аЪоче. Ргеаегче гЬоае сп!гпгеа йас саггу гесогпЪ1папга ог" йе деягеб яке.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
