Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 178
Текст из файла (страница 178)
ТЛе ЬассепорЬаце ьчаа гоийпе)у цгоьчп оп А1)етьиоиат стрезва, а пьаппе Ьассепшп сЬас Ьай а)ю Ьееп Во!асей Ьу Ехре)о югпе уеага ЬеЕоге. Варе)о опц)пацу сЬагассептеь1 и аа а Рьеийотоиах Ноьчечег, ьчЬеп 6 ьчаа геехавипес) апс1 Еоипй со 6с йе япаП цепьь А)сегоьиоиат, сЬе аисЛогт оЕ йас рарет )СЬап ес а). 1928) патей ьс айег Варе)о.
13.72 СЬар(ег 13: Мигацепев(в Ригвшп8 втйев оп РМ2 РНА аг йе $)п)чегягу оЕ Ноги!оп, бгау вчав вигрпвег$1о Егпг) йаг воте Ьа1сЬев оЕ 1Ье ЬасгепорЬа8е рагПс1ев 1увес) ш ргерагаПче СЕС! Вгаг)!епгв, ге1еаяп8 1Ьегг Ыга! РНА, ччЬкЬ йеп вейтегг1ег)го йе Ьоиогп оЕ 1Ье сепгпЕи8е гиЬев. ТЬе ге!еавег) РВА вчав а пихгиге оЕ с1овег) сгси!аг апг)1шеаг Еогпь апг$ бгау апг) Ьь со!! еа8иев вчеге ехс)гег) Ьу 1Ье рова)Ы!11у 1Ьаг а гевгпсПоп епхуте т(8Ь1 Ье ргевепг е!1Ьег ш йе ЬасгепорЬа8е раггк!ев ог ш 1увагев оЕАВегошаиав.
Новчечег, 1Ьеу вооп пог!сес) йа1 1Ье !шеаг РЬ)А ргос)исег) Егогп с!овег) с)гси1аг Р)ч)А Ьесате ргоВгевячйу вЬоггег г)иг!08 гпсиЬаПот вч)1Ь А)гегатопав си!шге вирегпагапь апг$ геа1(хег)1Ьаг йе АВеготоиав 1уваге сопгашег$ ап ехопис!еаве (1Ье вошсе оЕ 1уяв пав печег йвсочегей. ТЬе ехопис1еаве пав 8)чеп 1Ье пагпе ВАЬ 31 апс) Сгау врепг а Воос) рагС оЕ 1Ье пехг 15 уеагв гчог)с)п8 ои1 гЬ ЬгосЬепивггу апг$ в!те!иге.
АЬповг ечегуйгп8 йаг и е 1спочч аЬоиг 1Ье епауте Ь г)ие го 1Ье и ог!с сагг)ес) оиг ш Ыв 1аЪога1огу ш Ногь1оп. Евра)о ге1игпег)го СЬВе Ьиг!овг сопгасг вч11Ь Еогтег со11еаВиев ш йе Бп(гег)51агев вчЬеп Ье ъчав ЕогЬ)й)еп го ггаче! Егопг СЬВе с(иг!п8 1Ье 19705. ЕХО)Х$$3СЕЕАБЕ И! ТАВЕЕ 13-2 5иЬ51га1е 5ресзйс$1у оЕ Ехопис1еаве $П КЕ515ТАМТ Оа 5ЕМ51Т1ЧЕ ТО ЕХОМОО.ЕА5Е 111 ТУРЕ ОЕ ТЕЕМ1М! ЙЕЕЕЕЕМСЕ5 В!ипг-епг)ег) Кесеяед 3' 5епвКЬ е 5епвп)че К!сЬагг)воп е1 а!. (1964) КкЬагг)воп е1 а1. (1964); ЪЧе(вв (1981) Неп РкоП (! 984) Рго1гийп8 3' гепшпг чА1Ь <4 ипра)гег) Ьавев 5епяиче Неп0соП (! 984); Нопеье! (1989, 1993) Ргоггийп8 3' гегш!пг ЧА1Ь >3 ипра)гег) Ьавев Кеявгапг ип)ея 1Ье 1егпипа1 Ьаве и С. Мовг 4-Ьаве ргоггийп8 3' гегпипг 8епегагег) Ьу геыпс1юп епаупгев аге геыыапг 1о ехопис1еаве П1. Новчечег, гегпиш Вепега1ег( Ьу Ара1, ВааП, Ввр12861, НаеП, апг) Кри!, вчЬ(сЬ Неаче 3' 1о а С гевЫие, аге вепяПче 1о йе епхупве.
ТЬеве епхутев вЬои10 йеге(оге Ье ачоЫег) гчЬеп АеыВшп8 гепгр1агев Еог ехопис1еаве-П)-Ьавег) г)е!ег)оп апд РМА ве9иепс(п8. 3' гепшш 01!ед чч)1Ь а-1Ью г)еохупис!еогЫев Ршпеу ег а1. (1981); О!веп апг) Ес)саге)п (1990) Кеявгапг Ехопис!еаве )П оЕ Е. соВ геточев 5' пюпопис!еогЫев Егогп йе 3'-Ьус)Тоху) епсЬ оЕ с)ир1ех РВА,!еач)п8 ргоггийп8 5' гегпипг (К)сЬагг)воп апг$ КогпЬег8 1964; К)сЬагс)воп ег а!. ! 964). А1 37'С, а $)т)1ег$ пшпЬег оЕ 5' пюпопис)еогЫев аге геточесг с$ипп8 еасЬ Ьгпйп8 ечепг. КевесПоп оЕ Р)в)А пю1еси!ев йегеЕоге оссигв ш а д)вгг)Ьиг)че апг$ г)иая-вупсЬгопоив ЕавЬюп.
ТЬе ЕачогаЫе ЫпеПсв оЕ й8евгюп апг) йе пппшшгу оЕ яп8!е-вггапс)ес(3' 1егпшн го аьас1с 1ес$1о йе г)ече1ортепг оЕ тегЬосЬ ( Ц го Вепегаге яп8!е-в!гаги)- ес$1егпр1агев Еог РЬ)А вес(иепсш8 (5гпКЬ 1979; Сио апс$ Ъ'и 1982; 5ог8е апг$ В1шс)еггпап 1989; Ы апс) Тис)сег 1993) апг$ (2) го ргос)исе ишйгесПопа! вегв оЕ рго8геввбче г)е1ег)опв ш рори1агюпв оЕ 1гпеаг Р)4А гпо!еси1ев м(1Ь опе геявгапг (3' ргогпк)ш8) гегпипгь апс) опе вгьсерПЫе (Ыипг ог 5' ргоггийп8) геппгпив (Неш1соП 1984, 1987, $990; НоЬеЬе! апг$ РоЫ 1986). 3 1егпиш йагаге геяв1апг го ехопис!еаве П! сап Ье Вепегагег) Ьу й8евгюп гч)1Ь сеггаш гевгпсгюп епхугпев (вес ТаЫе 13-2), Ьу й8еяюп и41Ь А ехопис!еаве, ог Ьу "га)1ш8" члй гегпипа1 г(еохупис1еогЫу1 ггапвуегаве. 1п)оттаПоп РапеЬ 13.73 Ехопис!еаяе П! ь а 31-1сР 81оЬи!аг рготеш, епсос)ет) Ьу тЬе хй цепс оГ Е.
со)1, тчЬ)сЬ Ьая Ьееп яет)иепсет) Гцаропто ет а1. 1988). 5игрпяпц1у Гог яисЬ а япа1! рготеш, ехопис!еаяе П1 рояяеяяея пийтр1е сага!утк асттчЖея. ° А 3'95' ехопас1еаяе йат т)ецгас)ея доиЫе-я!таит)ет) РХА ГЕПсЬагйоп ет а1. 1964). ° А 3 ' рйоярйотопоеятетаяе (ЙкЬагс)яоп апс1 КогпЬегц 1964; Вгит1ац апт1 КогпЬегц 1972) тЬат гепточея а пшпЪег оГ 3' тепшп1 Еготп т)оиЫе-я!таит)ет) РЫА, шс!ийпц 3' рЬоярЬоц!усоа10еЬут)е апс) 3' рЬоярЬоц!усо1ате геяЫиея ГЕог геч)еяч, р!саяе яее РоетясЬ апс1 СиппшцЬаш 1990). ° А пис!еотИу1 Аут)то1аяе ситПпц 5' то арипп)с!арупшЫ)шк ятея ш РЫА ЕЪтте)яя 1976, 1981; Чте)яя ет а1. 1978). ° А ротчетуа! ехопит!ео!уНе ттЬопис1еаяе Н ГКе11ег апт) СтоисЬ 19721 ЪЧе)яя ет а1.
1978). ТАВЕЕ 13-3 Ехопис)ео1уПс АсПч11!ея оЕ Ехопис)еаяе Н1 ЙеАст1ОН СОНО1т1ОН5 ЕмхчмАт10 Аст1татч Йеееаемсе5 Ехопис1еаяе П1 тетвочея ях пис1еотЫея Егош тЬе етн1 оГ а т)ир!ех апд гешашя Ьоипт1 ая а яаЫе сошр1ех. 70 тпм ХаС! ат 5'С Ропе1яоп апс1 Хи 11972) Ап шша) Ьитя оЕ ехопис1ео!уПс аст191ту гепючея ях пис!еотЫея Гуош тЬе евт) оЕ а т)ир!ех. ТЬ)я ы Г011отчет) Ьу а 5!отчет тате оГ ртоцтсяятче Ьут)то!уатт. 50 гпм ЫаС! ат 5 С Ропе1яоп апт) тяти 11972) Ехопис1ео1утк йцеяПоп Ь яупсЬтопоы Гог -250 пис!еотЫея авт) Ь ртосеяя)че. Ат яатигаппц ептуше сопсепттатюпя, 5' шопопис1еотЫея аге тешочет) ат а гасе оГ -100 пис1еотЫеяуш)п!3'епт).
23-28'С ъчи ет а!. 119768 НоЬеЬе) (1993) Ехопис1ео1ут)с йцеятюп Ь йятпЬ06че апт) т)иая)-яувсЬгопоия. Ат яашгаПпц ептуше сопсептгатюпя, 5'-тпопопис1еотЫея ате гешочет) ат а гасе оГ -400 пис!еотЫея/ш)п! 3' епт). ТЬотпая апт) О!)чета 1!978); НоЬеье1 11993) 37 С Ехопис1еаяе 1П Ь 1вуиЬ|теи Ьу ттаС! яптт аьр1ауя тиахииа1 асичтту 1и Ьиссетя соита1гавц 15 тМ Тпя-С! 1рН 8.0) авт1 6.6 тпМ М8Ст . На ептутпаис атыву Ь детестайе 1и 1тШТетя соптаЫЫ8 300 тпМ НаС! 1НоЬеьс! 199Я, ТЬВ сопятецатюв оГ асПЫПея, тчЬ)сЬ аге сага!утес) Ьу а япц1е асПче яте !Же)яя 1976, 1981), В сопяятепт ит)тЬ цепет)с т)ага шйсатшц тЬат ехопис1еаяе ПГ ась ъптЫп тЬе се11 ая рагс оЕ йе рго1тагуотк Ьаяе-ехс)- яоп гера)г ратЬтчау ГЙоцегя апт) Чте)яя 1980).
Ехопис!еаяе Ш яирр1тес1 Гтогп тпоят сопипегста! тпапиЕастигетя ь риттТтет) Егопт а я!тати оЕ Е. соЕ сопташшц а сЫтпепс р1аяпЫ ГрцСЙЗ) йат сагпея а 3-1тЬ Егацтпепт оГ ТЬе Е. соц цепоше епсотпраяяпц ТЬе хй цепе ГЙао апс1 Йоцегя 1978). Ехопис1еаяе П! соптатпя а Ьоипс) йча1епт саиоп 1Ьат ь гет)шгет) Еог аст)ч1ту. ТЬе рш)Пес) епгутпе с)оея пот тес)шге Мптч ог Мцтт ш тЬе геасПоп ЬиГГег ип1ея Ь Ьая Ьееп ехрояес1 то ЕР'1А. Сат' сап рагиа11у яиЬятПите Еот Мцт' Гог ТЬе ехопис1ео1уПс астпцту оЕ ехопис1еаяе П! ГКоит 1989). ТЬе шесЬап)яш Ьу тчЬ)сЬ ехопис1еаяе П1 т)ецгат)ея РХА ехопис1ео!уПсацу 'ь айестет) Ьу тешрегасиге, йе сопсептгатюп оГ шопоча!опт саттоп, апт) тЬе сопсептгаПоп апт) ятгисшге оГ йе 3' тепшш Гр!еаяе яее ТаЫе 13-3).
АггЬепшя р!отя оГ йе тешрегатиге т)ерепс)епсе оЕ йе гасе оГ ехопис1ео1утк йцеятюп Ьу ехопис1еаяе П1 ш тЬе ргеяепсе оЕ Мцт' яЬотч а тгапяПов ат 25 — 30'С ГНев1)соЕЕ 1987; Коте 1989; НоЬеые! 1993), яиццеятшц тЬат йе ептутпе ехытя ш ттчо сопЕоппаПопа1 я!атея. 1п опе ятате, тчЬ)сЬ ртет)опипатея ат тетпрегасигея <25 С, ехопис1еаяе П1 Ь1пт)я т)цЬт!у то РХА апт) ячог)ся тп а ргосеяяче Гайюп. Ат тептрегашгея >30'С, тЬе ептуше Ьая а !отчет асПчатюп епегцу апс) Ьут)го1ухея рори!аПопя оГ 3' сеппшт тп а йятпЬиттче Еайюп ГНоЬеье1 !993), Са" юы яаЬт1гхе ехопис!еаяе П1 ш )п 1оъч-тегпретатиге сопГоппатюп !Котя 1989). ТЬе аст)ч)ту оЕ ехопис1еаяе П1 Ь шЬ)Ытет) ат тешреташгея )п ехсея оЕ 46 С ГНоЬеЬе! 1993). ТаЫе 13-4 1Ьтя яотпе оГ тЬе арр1каПопя оГ ГЬе ептуптатк асттчшея оЕ еховис1еаяе !П то пто!еси1аг с1овтпц. 13.74 СЬарсег 13: МисаЕепезсз ТАВЕЕ 13-4 Рзез оГ Ехопнс1еазе ВВ !и Мо1есн!аг С!оп(ик ЕсчхчмАусс Й|Асг|оя 1.1555 ЙЕГЕКЕ|ЧС55 Ехопнс)ео1удс й8ездоп оГ донЫе-зсгапдед РХА Гго|п Ьз 3' евд.
гезессед то!есн1ез аге сьед ° аз шЪзсгасез Еог!аЪе1|п8 геассюпз ° аз гетр!асса Гог РХА зег)непсш8 !атез авд Ъейа)с (1984) 3т!|Ь (1979); Рно апд С|го (1982); ЪаЪе(с ес а!. (1986); НоЬеье! апд РоЫ (1987); 3ог8е апд В!!пдеппап (1989); Неп!1|оГЕ (! 990) ° ш п|арр|п8 гезспссюп ясез Ъу ехопнс1еазе/ЬуЪгЫЬадоп Ы апд Тнс1|ег (1993); Тагсо( (1992) ° Гог сЬегпка1 ог о)!8опнс1еос!дейгессед ншса8епеяз Я|огс!е апд Ыа|Ьапз (1978); Ыа(гатауе авд Ес1|з|еш (1986) ° со е!ни|пасе рпгпегз Егози сотр1есед РСВз ЕЬн ес а!. (1991) Ехопнс1ео1удс й8ездоп оЕ донЫе-зсгапдед РНА Егот |ь 3' епд |п согнЪ|пасюп ннсЬ а яп81е-зсгапд-зрес|Вс пнс!сазе знсЬ аз 5! (Ргососо! 9).
со Вепегасе зеь оГ не|сед де!есюпз Неп| Кой (1984, ! 987, 1990 Ь НоЬеье! апд РоЫ (1986) РеСегз апд ВашпеЬСег (1986); Нагон ес а1. (1973) со тар 8еведс таг1|еь апд герешье зег)непсез В1ос1|а8е оГ ехоп~с1еазе 1П й8езноп Ъу !314А Ъ|пйп8 ргосе|пз. со 1оса1ые ргосет-Ъ|пйп8 ясез Рд! еу апд Че(пгганЪ (1978) Ргог!ос(1оп оГ (5)езсес! Ое)ес)опз Ьу 01ее51!оп зч)ГЬ Ехопис)еазе Н! Неп()соЕЕ (!984) дезспЬед а гпесЬод счЬегеЬу сЬе донЫе-зсгапдед РЫА оГ гесотЪ)панс р!аяпЫ, РЬаВет(д, ог ЪасседорЬаВе М13 гер)канче Гост РЫА ь д!Вез!ад нчсЬ ьчо гезспссюп епхутез н|Ьозе з!сез оГ с1еачаце ЪосЬ 1|е Ъенчееп опе епд оЕ сЬе саг8ес РЫА апд йе Ъшйп8 ясе Еог нпЫегза1 рптег. ТЬе епхуте йас с1еачез пеагег |Ье саг8ес зес)пенсе ишя Вепегасе енЬег а Ынвс епд ог а гесемед 3' сегпнпня сЬе осЬег епхуспе гпнзс Вепегасе а 4-пнс1ео|Ые ргосгнйпц 3' сегт!пнз.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
