Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 173
Текст из файла (страница 173)
А ша)ог 6!зас(чапгаае !з (Ьаг йе гесЬп!г(ие Н ешр!пса!. Аг ргезепг, йеге аге по а1Вог!йшз сараЬ(е оЕ ассигаге1у ргейсбпВ йе пшпЬег оГ соп(огшегз оЕ а зеишеп( оЕ япВ1е-зггапдед Е7ХА ог йе!г е1ес(горЬогег!с ргорегбез. Се1з сопгапипВ пш16р!е Ьапбз сап (ЬегеЕоге Ье ййки1( го !пгегргег. Р!па1(у, 55СР !з сараЫе оЕ 6егесг!пц а1гпозг !00аха о( пшгагюпз, Ьиг и шау гес)шге а чапе(у оГ е1есггорЬогегк соп6!г!опз Ео 6о зо. ТЬе Го1!озч!па ргососо! оЬ(агпес1 Егош Т)арЬпе (7ач!з (с)п!чегз!(у оЕ Техаз Вои(Ьзчезгегп Мейса1 Сепгег, (уа11аз) дезспЬез ВВСР апа1уяз оГ а зеВшепс оГ Ьшпап Вепош!с ЕЛА. МАТЕК!Ас$ СА(77!ОХ: Р!еазе зее Аррепз!!х 12 Еог арргориа(е Ьапд!!пд оЕ та(ег!а!з таг(зев зч!(Ь <! >.
ВНГГег8 ап(Е Яо!о(!опВ Р!еазе зее Аррепг(!х 7 Еог сопзропеп(а оЕ з(ос(з зо106опз, Ьийегз, апг( геааеп(з. О!!и(е з(ос(г зо!01!опз Ео (Ье арргорг!а(е сопсеп(га(!опз. 70х Атр((йса((оп Ьийег г((ч(ТР зо(и6оп (РСК цгаг(е) соп(а(п(пц ай Еоиг с(А(ТРз, еасЬ а( а сопсеп(гайоп о( 7 т(ч( (рН 7.01 Рогтат(с(е-(оас((пд Ьийег <!> 5исгозе де(-(оас((пц Ьийег (Ьийег гуре 0 70х ТВГ е1ес(горИогеяз Ьийег (7зе ТВВ аз а ччог(з1п8 ЯгепВГЬ о( (х (89 гпЯ Тпз-Ьогазе, 2 пзМ ЕНТА) (ог ро!уасгу!аш!Ве Ве! е!еспорЬогеяз, Пе о( гЬе (х ТВЕ сопсепсгапоп ргоч(з(ез гЬе песеззагу Ъийеппа розчег. ТЬе рН о( ТЬе Ьийег зЬоа!Й Ье 8<и! с Ь Вепега(!у поз песеяагу со аз()изг гЬе рН;!юзчечег, сЬес(з гЬ(з чапаЫе ъчЬЬ еасЬ пезч ЬассЬ о( 10х ТВЕ згос(с ргерагез( зп гЬе 1аЬогасогу. (7зе гаа загпе згос(з о(10х ТВВ со ргераге ЬогЬ йе Ве! апз( гае гаппгп8!эийега ВгааП гВ((егепсез зп юпк ззгепВГЬ ог РН ргоз(асе Ъа((ег йопь ГЬаз сап Вгеаз!у з((ззагг ГЬе ОЫА Ъапг(з.
Еп2у(пеь апс! ВНГЕегВ Кезгпсйоп епеутез (орйопа0 ТЬеггпоз(аЫе 0НА ро(утегазе 7аз( ОНА ро1упзегазе ь гасопипепдес1. Нос!е(с АсЫВ апс! О1(коппс!еоЕЫеВ Нитап делит(с (ОНА (о Ье зсгеепес( Еог роги( гпигайопз Оызо!че гЬе РХА аг 10 (з8(пз! (и ТЕ (рН 7.6). О((Копие(ео(зс(е рптегз, Гогччагс( апс( гечегзе (35 (гм еасоф т ТЕ (рН 7.6) Вайоас(1че Соп7роопс!8 (и-ззР(г(СТР (3000 С((тто(е, 70 тС((т() <! > Ргососо! 8: Е)егесс/оп оу Мига!/онь Ьу 55СР анд НА 15.55 Се!5 Асгу!атгде:Ьаасгу1атгде (29:1%) сн/ч) <1> Мапу шчезВВасогз изе ргсгпас(с сопнпсгсса! зо1идопз оЕ ассу!агпЫе апс( Ь(загсу!апс(ае (с.а., Асгу!оце1, ВЕ)Н). Носчсчег, йе Ьезс гсзо1шюп оЕ сопЕоппегз и оЪсашсс! Егогп сЬс Нус!го! (п(с зспез оЕ це! псаспсез (Мо!!пап' сс а!.
1993), счЬ(сЬ аге зо10 нпс(ег сЬе !гас(е паспе оЕ МРЕ (Мнсадоп Ресессюп ЕпЬапсепсепс) Ьу РМС Вюргосйси (КосЫапй Ма!пс). Аттотит регьи/Тасе (70;4 и/ч) <! > С/усего/ С)зс а Ь!ВЫу риг!Есссс Вгас(е, зисЬ аз У!сгариге (Е!Ее ТесЬпо1оВ(ез), Р!еаза зес йс шЕоппадоп ране! оп СсгСЕКОС ТЕМЕО (/ч/,Н,/4,/4 -сесгагпе/Ьу/ейу/епеоВат/пе) <! > Е(ессгорЬогсяз-угас(е ТЕМЕ/3 и ю10 Ьу шапу шапиЕассигегз спс1ийпВ 5(Вша апс( Вю-Кай ТЕМЕР Ь ЬуВгозсорк апс( зЬоиЫ Ье зсогсс( ш а с(ВЬс!у зса!сс( Ъои1е ас 4'С. ТЕМЕ(3 а изсс( аз ап ас()нпсс саса1узс Еог сЬе ро1ушепхапоп о/ асгу1апсЫе. прес!а! Е41п1ргпеп1 Вагпег Ирь Еог аисотадс ткгор/репог Во///пВ-чча/ег Ьай Е/ес/горЬогеьдь р/а/еь, а/аьь Пио 40 х 40 ст) пдй 0.4-тт ьрасегь Се!-дгу/пВ арраса/иь С/аьь сар/Вагу СиЬе !дгаип-оио ог Мкгорсреоог и4й де/-/оаоВпд Врь Нат//соп ьуг/пае ог Раьсеиг рсрепе М/сгоуиде сиЬеь (0.5 т/, йсп-снаПед Еог атрапкадоп) Роь/с/не-д/ьр/асетепс рсрепе ТЬегта/ сус!ег ргодгаттед ио/Ь деягед атр//Е/сас/оп ргососо/ Н йе йегспа! сус(ег Ь пос сс(и!Ррес( н(сЬ а Ьсассс( у Ь изс с!сЬсг 1(ВЬс псшега! о(1 ог рагаЕВп счах со ргсчспс ечарогасюп оЕ 1!циЫ Ьогп сЬс геасдоп шсхшге с(иг!пВ РСК.
расее Ьа/ЬЬ> ргеьес со йе арргоргса/е сетрегасигеЬВ Еог геьсдсдол епдопис!еаье д/Веьс/оп (4гЬа/тап ЗММ В/Сег рарег МЕТНОО АгпрН1сабоп о1 1Ье ОНА 1о Ье йсгеепес1 аког Ро!п1 МШа6оп5 1. 1п а ьсеп1е 0.5-т1 гп(сгоЕиае сиЪе, пнх сп йе Е011оиг(па огдег: ! шас с(ЫТР зо1шюп 191 10х ашрИсаг(оп ЬиЕЕег 2 н! 35 НМ 5'-оЬВопис!соСЫе зо1иСюп 1 н1 (35 рпю1сз) 35 НМ 3'-о((Копие!соСЫс зо1иНоп 1н1 10 НСс Р! (а3ир)с1СТР 1 н( Ьшпап Вепопнс ))ЫА !О Н!(!00 пх) сЬегпюзсаЫе Е)ХА ро!ушегазс 1-3 сспссз НО Со 20 Н1 (а-зар/с(СТР ы (псогрогасеа сп йс РСКз со 1аЬе! йе апср!сйес! Р!(А ипсЕопп!у. зср-1аЬс1сс( о!(Коппс(еосЫс рпшегз сап Ъе ыса ш р!асс оЕ (а-зср1с(СТР со ргос(исс ап спс(-1аЬс!сс( ()ЫА. !Е роя!Ыс, зес ир сопсго1 геассюпз ияпВ пчо Е)НА заспр!сз )спосчп со сопсасп а11е!ез сЬас й//ег (п зес(иепсе Ьу опе ог !ноге Ьазе ра(гз апс( сЬас аге (спосчп со газо!чс оп 55СР Ве!з.
1п ассйс!оп, зсс ир а сопсапнпасюп сопсго1 сп счЬ(сЬ по сспср!асс ()Е(А Ь асЫес( со сЬс гсассюп. 2. 1Е йе сЬеппа1 сус1ег Ы пос Есссес/ иисЬ а Ьеасед 1(с(, онег!ау йе геассюп ппхсигеь иг(сЬ 1 йор (-50 /с!) оЕ 1(КЬс пнпега! о(1 со ргенепс ечарогапоп оЕ сЬе ьагпр!еь с/иппи гереасес1 сус1еь оЕ Ьеаппц апд соо1(па. АЬегпадне!у, р1асе а Ьеад оЕ рагаЕЕсп снах !псо йе сиЪе сЕ иь(па а Ьос ьсагс ргососо!. Р1асе сЬе сиЬеь (п йе йеппа1 сус1ег.
13.54 Сйартег 13| Митаеепезтз Аитр!1уу йе пис1ек асн!з ияпд йе т!епатигат!оп, аппеа11па, апт! ро!угпепаатюп типев апй тептрегатигез 1)втес! ю йе таЫе. Рог айчке оп йеппа1 сус1ег ргоцгаптв, р1еаве зее СЬартег 8, Рготосо1 1. ТЬезе топе| аге ян|аЫе !от 50-91 геас|юпв аяешЫе|1 |и гЬ!и-|чейз 0.5-п|1 |иЪез апд |пси- Ьа|ей |и |Ьеппа! сус!еп висЬ аз |Ье РегЫп-Е!|пег 9600 ог 9700, Мав|ег Сус1ег !Еррепг)огу), ап|! РТС 100 !М) КевеагсЬ).
Типез апй |еп|рега|игез п|ау пеед |о Ье адар!с|) |о вш| ойег |урез о!ет)и!Ршепг апг) геасйоп чо1шпез. Ргерага6оп о1 йе 55СР Се! 'ччЬ11е тЬе йеппа! сус1ег ргоагапт 15 гипшпа, ргераге а 5.5% ро!уасгу1апт)т!е ае1 соптагп|пц 10% (чуч) п1усего1 |и 1х ТВЕ це1 Ъиууег. М|х йе геадептз Ьу йепт1е ввч)г1!пй ог зтйппй. ТЬ|в чо1шпе о! Ве! во!шюп В заур|с!епс !от опе ро!уасгу1атпЫе Ее! о! в|апйаЫ з!хе !40 х 40-сп| р!агез |ч||Ь 0.4-пип врасегз).
ТЬе чо!игпе ойЬе Ве1 во!ийоп сап Ье !псгеавет) ог т)есгеавег! аз пеей ег! Гог о|Ьег Ве! ыаез. ттве |Ье ваше зтос)в оу тох ТВЕ 8е! Ьийег то ргераге еттоиВЬ тх ТВЕ Ве! Ьийег |о 01! Йе сап)о оу Йе е1ес|горЬогеяз аррагашв. АззетпЫе апс! таре тоаетЬег тччо 40 х 40-спт ц!авв е1естгорЬогеяв р1атев чвчтЬ 0.4-пип зрасегз. То оЬташ п|ахппшп гею!игюп оу з!п8!е-зтгапдег! О)в)А сопуогшегв, й ь ипрогсапг |о иве "йип- ВеГ' зрасегв |Ьа| аге !ея |Ьап ог еииа! |о 0.4 гп|п ш |Ь|с1|пея, А|Ы 100 )т! оу ТЕМЕ)Э то тЬе йе! зо!итюп. М|х тЬе зо!итюп Ьу аепт!у зтч)г1!пп тЬе йав1|, апт) рош тЬе пе1.
тЧог)г |)шсИу ав Йе асгу!ап|Ые ю!и|юп чй!1 ро!убег!ге гарЫ1у. Рог !пз|гис|юпз оп роипп8 Й|п Ее1в, р!еазе все СЬар|ег 12, Рго|осо! 8. АвветпЫе тЬе ро1уптег)тес! це! Ыто ап е!естгорЬогеяз аррагатиз ас гоогп тептрегатиге. И1 тЬе Ъийег тап)сз тч)тЬ 1х ТВЕ Ве! Ъийег птас)е утоп| йе ва|пе втос1| ав йе йе! во!итюп. (Орт)оиа1) 1Г йе атпр11йег! Е))ч)А Гтааптепт га то Ье т)1йевтет1 ичтЬ а гевтгкбоп ептупте, гепюче йе РСК тиЬев йотп тЬе йепиа1 сус!ег ат тЬе епй оу тЬе тип апй р1асе йети ои ке. Вет ир йе Го!10|и)ий геягктюп епгугпе т!1аевт)оп: 1псиЬате Гог 1 — 2 Ьошв ат тЬе тегпрегатше арргорпате Гог тЬе гевтпстюп ептупте.
!Ох ТВЕ Ве! Ьийег 29: !% асгу!ашЫе:Ь|засгу!ашЫе во!шюп !Озч апипопппп регя|1та|е 8!усего1 НО Ргерага6оп о1 Бапчр!ей Кот ЯСР Е!ес1гор!тогейтй РСК ю1ийоп !Ох те||ос|!оп епзуше Ьийег гевтпсйоп еитугпе !2-50 оп|и) НО 5 Н! 4 и! 2 и! 29 и! !О ш1 !8 ш1 0.5 ш! 10 ш! 6!.5 ш! Ргогого! 8г ЕЛегегг(оп оу Мигаг(опл Ьу 55СР апг( НА 13.55 ТЬе аЫП(у о( 55СР Пе!а со геео|че ро|пс гпи(адопа апд ро(ушогрЬьгпс г1еегеачех ас а Еипсбоп о( йе ыае ос РЬ)А Ега8шепс.
ТЬе с!шр!ехл ччау Со гехи!че хег)иепсе д((сегепсеа |п )опПег РС9А Ега8гпепсх (а со й8ехс сЬе доиЫе-асгапдед РЬЛА Ьесоге е!есггорЬогеа(с чдй а гехсг(сдоп епхугпе (Ьас ргодисех Ега8- гпепсх 200-300 Ьр !п |еп8сЬ. ТЫа асга1е8у 'ь есрес(аПу Ье|РЬП ччЬеп асгееп(п8 Еог ро1угпогрЬ~ыпх |п 1Ье !псгопа ос а Пепе ог Еог делесс(п8 тисадопх йал геыде |п |оп8 ехопа. Н(Ье РЫА лег)иепсе о( йе Па8- гпепс ь (гпои п, йеп ап арргорпасе геяпссюп епхугпе сап Ье к$епЬ Пег! ччПЬ еахе.
П йе РЫА хег)иепсе 'ь по1 )гпоччп, йеп а гапдопл ассопгпеп( ос епхушеа (е.8., А!и|, ЕИе1, НаеПН Н|пП, Мер!, ПхаП йас гесо8паес 4-Ьр сег)иепсех тау Ье иаед. С|еачп8 йе Р)9А чд(Ь а Ьалсегу о( Егегрлепс|у сисдп8 епхугпех иЛП ойеп геаиП !п йе ро1пс гпислдоп(ро! ушогрЫхш Ье|п8 1оса1ег$ ас д(Е(егепс д!ссапсеа (гоги йе епг$ о( йе РХА апс| $п Ега8гпепь ос д)Пегепс а!аеы ВосЬ Ееасигеа сап айесс йе па8гасюп ос (Ье гехи(с!п8 а(п- 8!е-асгапдед сопсоппега Ьу 55СР Е(паПу, д)8еадп8 а 200-300-Ьр РЬ|А |псо Ьчо ог пюге ыпаПег Ега8- гпепсх ЕоНоъчед Ьу 55СР апа!ус(х чч|П ойеп геао(че ап олЬепчье ипдесессаЫе плисадоп. Р$101е еиЬег 1.5 )с! оЕ йе ог!8!па! РСК (Егогп 5(ер 3) ог 5 $$! оЕ йе гехсг(сл(оп-епгуше-д(8ехсед РСК (Егош 5(ер 8) лпсо 20 Сс! оЕ хисгохе Пе!-1оаеПпП Ъийег.
Е)!)исе япи1аг а1нрлоса шсо 20 )с! оЕ ЕоппашЫе г1уе пих. ТЬе лашр1еа гП!исед лпго Еоппашгде дуе пих счлП Ье депасшед, лчЬегеаа сЬоле гН|шег$ шсо лассале Пе!-!оагПп8 Ьиссег лчлН геплаш доиЫе-аггапдед апд легче ал сопггоЬ. Во(1 1Ье ЕогшашЫе-соплашш8 хагпр!еа Еог 6 пиписея апд 1Ьеп р!ипПе йе сиЬеа сВгесс!у ш1о ке. 10. Ьерага6оп апс! Апа!у515 оЕ 0)ЧА Егарпеп15 Ьу ЮСР Се! Е!ес1гор1тоге515 с)ае а Раасеш рлрепе ог а Напи1соп ауг!08е со ччааЬ оис (Ье лче!!х оЕ сЬе ро!уасгу!агпЫе Пе1 лч((Ь !х ТВЕ Пе! ЪиЕЕег. чСг(СЬ а дгаччп-ои( 8!ахх сар|Пагу сиЬе ог а писгорлреоог ел)и(рред лч(1Ь а Пе)-!пад!08 Ьр, !оад 2 р! оЕ еасЬ аагпр!е оп СЬе ро!уасгу!ашЫе Пе!. АРР1у 6 — 7 сг(снап (-250 сг !апд 15 плА] Еог а 40 х 40-спл Пе!) (о йе Пе! Еог -14 Ьоигы 12.
5иЬ)есс йе дг(ед Пе! со аилогад!о8гарЬу Еог 4 — 16 Ьоига ас гоогп сешрега1иге лч(йоис ап (псеиа!Еу(пц асгееп. ТЬе попдепагигед РСК лашр)ел (Ье., гЬоае ПНшед лпго йе лисголе Пе!-!оагНп8 Ьипег) чдП пщгаге сЬгоиВЬ гЬе Пе1 аа доиЫе-ыгапдед РЫАы Ву сопггааг, |Ье депагшед лашр!ел (г.е., сЬоае геяьреп<|ед |и Еоппапиде дуе пих апд ЪоНед) чдП иг ааПу пщгаге ал а пихгиге ос доиЫе-асгапдед апд ып8! е-аггапдед РХАы ТЬе ып81е-ягапдед Р$9Аа чдП ПепегаПу гп!Пгаге гЬгоиПЬ ро1уасгу1апиде це1а пюге а1оч|у йап йе доиЫе-лсгапдед гпо1ееи!ел (Махагп апд СНЪегс 1977, 1980; 5ха1ау ег а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
