Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 171
Текст из файла (страница 171)
Ргор йе тоотЬрк1с (пто а ьтет!1е тиЬе сопса(п(п8 1 ш! от атеп!е ТЕ (РН 7.6). 5тоге тЬе шЪе тот 10 — 15 ш(потея ат гоопт тешрегатиге, аЬаЫп8 и тгош 6ше со 6тпе то с)1а!офе Ьастет!орЬа8е раттк!ея с. МаКе а вебер от" тепуо16 сИи6опь от'йе ЬастепорЬа8е ьиарепяоп чч(тЬ ТЕ (РН 7.6). М!х 10 )л! от тЬе 10 л, 10 л, апс1 10 ~ Й1итюпь лч(тЬ 100-)л! а1(с(иота оу ап очегш8Ы си1тиге от" ап арргорпасе а!та)п от" Е. со8 (е.8., ТС1). й АтЫ 2.5 пл! от" 2х т'Т тор а8аг (ше!те6 апт) соо!ес1 то 45"С) то еасЬ си1тиге, апс1 р!ате йе епбге пихшге оп а яп8!е т'Т а8аг р1ате,!псиЪате тЬе р1ате тот 16 Ьоига ат 37'С то а1!очч р1ат)иеь то Гогш.
е. Кеасгееп тЬе р!ас)иеа сбтЬ тЬе тат((о1аЬе1ет( о118опис1еотЫе аа с(екает(Ъес) (п 5тера 5 — 12. 1п тЬ(л аесопс1 гоипс1 о( асгеегбп8, тЬеге (а по пеев то шсгеаае тЬе тетпрегатиге от' тЬе ччазЬ- )п8 ло1шюп )п а атерлчье гааЬюп. !плтеад, тЬе 6!сета сап Ье !тапа(еггед т!!тест!у тгош тЬе лчааЬ!п8 ао1ит!оп ат тоопт сешрегатите (5тер 8) то бх 55С ргечюиа1у лчатшес1 то йе 6!я сппипатоту тешрегатиге топит! етпртпса1!у !п 5тер 12. 14. Рк1с тччо р1ас)иев !гош еасЬ от" йгее !пт)ерепйепт рита6че пплтапгя Ргераге яп81е-а!таис(ес) РЬ(А 1топт япа!1-аса1е си!тигеь !птестес) ит(тЬ ЪастепорЬацеь депче6 (тотп еасЬ от' тЬеае р1ат!иеь аь деьспЬед (п СЬарсег 3, Рготосо1 4.
Саггу оит РХА аес(иепс(п8 Ъу йе с!Ыеоху-шет)!атет! сЬаш-тегпипа6оп шетЬос! (Р1еаье аее СЬартег 12, Ртотосо1 3 ог 4) тЬгои8Ь тЬе ге8(оп сопса(п(п8 тЬе таг8ет вес)иепсе. (Ле е!йег а ип(четка! вес)иепс!п8 рпптег ог а сиьтош-ьуптЬеягет) ргипег тЬат Ь!пс(а 50 — 100 пис!еотЫеь ирьтгеаш оу йе пшта6оп ыте. 16. ЪтЬеп тЬе ргеьепсе от тЬе шйа6оп Ьаа Ьееп сопйппей четтгу йе вес)иепсе от' йе еп6ге ге81оп ог" йе таг8ес РЫА с!опес1 1п йе ЪассепорЬа8е М13 честит со епьите йат по адчеп6- тюиа шитат!опт Ьаче Ъееп цепетатес( дипп8 ргора8атюп ог тЬе гесошЬтпапт тп ЬастегюРЬа8е М13.
0(теп, тЫа тес(и!тел тЬе ьуптЬеяа оГ силтош-6ея8пес) ьеоиепс(п8 ртппегь тЬат аге сотпр!етпепсату то ае8шепта о( тЬе татцет РХА арасес( -200-400 Ьр аратт. 1ао1ате ЪастегюрЬа8е М13 гер!ка6че тотш РХА тгош а си1тиге (птестет( тч(тЬ р!ат!ие-рит(- Еес1 гесотпЬ(пап! Ьастет!орЬа8ел (5тер 14) йат саггу йе т1еягет1 пштатюп апт) аЬочч по отЬег сЬап8еа ш аетрлепсе (п тЬе тасует ге8(оп. Рог шетЬотЬ то !ао!ате апд рип(у ЬастепоРЬа8е М13 гер1ка6че тогш РХА, р!еаье лее СЬартег 3, Рготосо1 3. Кесочег йе пштатед Саг8ет лес)иепсе Ъу т(!8еат!оп от" ЬастепорЬа8е М13 гер1кабче готш Р)ч)А лч)тЬ тЬе арргорпасе геяпс6оп епгуше(а) апд ргерага6че 8е! е1естгорЬогеяя С1опе тЬе Саг8ет РХА што тЬе деягет! честог.
13.46 Сйарсег 13: Магайепеьи 19. 1Ле яечега1 д|йегепс геяспсдоп епкутея 1о д18еас а!щпоса оу е|йег а гесотЬспапс йас сагпез йе оп8|па! (поппшсайешгед) сагйес аес)иепсе ог сЬе гесошЬспапс 1Ьас саггсеь йе пшсаПеп|кед саг8ес аег)пепсе. 20. 5ерагасе сЬе геап16п8 6айтепса Ъу це! е!ессгорЬогеыа, апд сгапауег йет со а ао1|д апррогс |е.8., п|сгосе11и1оае ог пу!оп шешЪгапе) ав деаспЪед сп СЬарсег 6, Ргососо1 8.
Саггу опс 5оийегп ЬуЪпд)каг|оп аС 10'С Ье!оъч СЬе Т, пяпц СЬе пр-!аЬе!ед пшгайешс о118опис1еос|де аа а ргоЬе. ъАгаьЬ йе 6Ьег цпс1ег сЬе д)асппппасогу сопд|с)опа апс| еасаЪ|1аЬ ап апсогад)ойгарЬ. ТЬе йпа| агаогаейойгарЬ яйоа)д ейоън ЬуЪг)д)хас!оп оп1у со сЬе ге1ечапс ггайтепсе ог сЬе тпсайеШеед сагйес Р)ъА. Т|ъООВсЕ5НООТ1)ъ)С ТЬе ЬуЬг!д!хагюп апд ънааЫп8 сопд!с!опа дехсг!Ьед аЬоне и ос)е и ей сог айоп оййопос1еойдек 1 <20 Ьааеа), апд !с Ь а)гпоьс а!иауь рока)Ые со !депс!Су асгоп8!у ЬуЬпдйдп8 р!ас)иеь ог со!оп!еь агсег ьенега! сус!еь ос и аъЬ- ~ !п8 апд ашогагйойгарЬу.
!)а!сег гереасед ънааЫпйе, ай Фе р!аг)иеь ог со!оп)еа сопс!псе со ЬуЬг)д!ге со сЬе оййопвс!еог!де ргоЬе, сопак|ег Сйе Сойоън|пй: ° СЬесй йас йеге ь по ге8!оп ос ехсепагне Ьопъо|оцу Ьесънееп Фе ргоЬе алд ессор)с ге8!опк о1 сЬе нессог ог йе сагцес ОЬ)А. ° !псгеаае йе агг!п8епсу ос ънааЫп8 Ьу десгеаь!п8 йе сопсеп1гайоп ос 55С !и Фе Ьо)|ег ог с|гапъайсайу !псгеаа!п8 Пъе сегпрегасвге. Рог |опйег оййопис|еойбе ргоЬеь (е.8., 40-теса), гюсЬ аъ сйоае оьед 1о де|еге |агйе аейтепга ос а с|опес| ОНА, ъчааЬ|п8 пъау гес|гйге 0.1х 55С Ьиг!его апг| а ънааЬ|п8 Сегпрегагоге о1 80'С. С)пцаоа! Ьаъе сотроь!С!опт ог хесопдагу ~госгогеь !и оййопис|ео|к|е ргоЬеь тау гес)и!ге Сйе иве о1 сесгагпесйу|апкпопнлп аа!са со д!ас)пйо!аЬ пъисап1 Сгот ие|!д-суре гетр!асеа Ср!еаье атее СЬарсег 10, Рго|осо| 8).
° Петене Ьассепа! г|еЬгь сгот сЬе ййегь Ье|оге ЬуЬг!диас!оп Ьу ие|р!п8 сЬе й!СегычсЫдпъчреь зоа)сед !и ънапп 2х 55С, 0.1е~о 505. ° Рог|)у йе гпоСайеп!с оййопис|еоСЫе Ьу ро|уасгу|агп!де Пе| е|есг орЬогеа|к К СЬе Ьас1сйгоопд ргоЬ|егп рега)иск геаупсЬех)хе Фе оййопис!еос!де, апд сопа!дег ьуп1Ьеь!Ыпй а ейогсег оййопос|ео1к|е сог оае аъ а ргоЬе. Ргососо1 7с 5сгееп)пе ИесотЫпапс С)опезГог 5ссе-г))гессег) Миса5еиесВ ГЗА7 АЕТЕКМАТ1ЧЕ РКОТОСО)а 5СКЕЕМ)МС РНАСЕМ!О-СОМТА)М!МС ВАСТЕК)АЕ СОЕОМ1Е5 ВУ НУВК101УАТ1ОМ ТО КА01ОЕАВЕЕЕ0 ОЕ1СОМ0СЕЕОТ)0Е5 ТЬЯ ргососо! ь Ыепйса! )п рппс|р|е апс) а)пи!аг |и ргасбсе со )Ье та|и ргососо! Всгеегипд Ьассег)орЬайе )Ъс) 3). Ноъчечег, Ьесаиье со)оп!еь о) Ьассепа сгапа)естес) Ьу СЬе ргос)ос|а о) а)се-6)гес)ес) ти)ацепеа)а геасйопь о)Сеп сои)а|и а гп|хсиге о) ъчйс3-суре апс1 гписасес) то)еси)еь, а аесопс) гоипс| о1 )сапа)оппайоп апс) ьсгееп)пй ь гес|Я гес) 1о ьедгецасе 1Ье счю Суреь о) РЬаеет)сЬ. Мосе 1Ьас а)гор|е геьсгеаЫпй о) роа)1Ме со|оп)еа с)оее по1 цепегайу у)еЫ риге роро)ас)опь ос' Ьассепа: ТЬе сору пипсЬег ос рЬайетЫа 3ь ю Ь)еЬ )Ьа1 сопър1есе ьеегейасюп оГ ти1апс Ггопс ъп!8-суре РЬаеет)с)а ассов оп!у гаге1у.
Ап а|сегпайче гпесЬос) ос оЬ|а)п)пй риге гписап1 рЬа5ет|8а Ье)оге ойфопис!еосЫе ЬуЬгкйаайоп 'ь со ьсгаре СЬе со!оп)еь )сапа)оггпес) Ьу СЬе ргос)ис)а о1 )п ЫСго 0МА ьупсЬеа)а Ы1о а етай чоЫпзе о) |к)иЫ гпес)3- игп. РЬадепсЫ 0МА 'ь )ю)асес) )гоги сЬе роо|ес3 со)оп)еь Ьу а ь)апс)агс) гп|п|ргерагасюп гпесЬос) апс) иьсх) со ~ сгапь)огт апосЬег Ьа1сЬ о) согпресепс Е. сой сейк ТЬе геюЯпе со)оп)еь, ъчЫсЬ па|И сои)а|и риге рори|айопе ос еПЬег псисапс ог еВЫ-Суре рЬацет)8а, аге СЬеп ьсгеепес) Ьу ЬуЬпсйаайоп иь)пц СЬе тисайепк ойкопис)еосЫе аа а ргоЬе. Ас)1311!опа) Ма1ела!ь Е, сой асса|и Мус )84, согпре1епс Гог сгапаГогтайоп Р|еаке атее СЬар1ег 3, Ргососо| 8, Гог рбайегпЫ ъсга)п |п)оппайоп. 18 тег)|ит спаса)и)пе сйе арргориасе апйЬюйс Р)еаъе ъее 51ер б. 2х 55С соп1асгйпд О.
1% ГъчМ 505 Яасег Ьа)Ь ргеьег Со 55'С Ме)Ьос) 1. Пайо|аЬе3 сЬе гписацепк оййопис|еойде Ьу рЬоьрЬогу!айоп, аь с)еьспЬес) )п 5)ерш 1-4 о1 1Ье с па|и рго1осо|. 2. угала)ег сйе сгапь)естес) со!оп)еа со ийгосейи)оае ог пу3оп Гс)сегь аъ с)еьспЬес) |и СЬар1ег 1, Ргососо| 29. | поиЬасе гбе Ьассепа3 гпаъсег р)асеь Гог а )еч Поим а1 37ъС со айоъь яе со)оп)ея со гейгер сбеп ьеа) сбе р)асеь > и багап сигар, апа ъсоге сбеги ас 4'С ииЯ Яеу аге иеес3ес|. 3. суье 1Ье со)оп)еь сгапа)еггес) со сйе Я1ег ъчПЬ айсай Ср!еаъе атее СЬарсег 1, Рюсосо3 31 ). Меисгайае сйе Я- сегк апс) 1Ьеп йх сЬе ПЬегасес| 0МА |и а)си Ьу ЬаЫпй Гог 1 Ьоиг а1 80'С |и а часиипс очегс. 4. 5оа)с сйе П)сегь Ы бх 55С, 0.17ь счуч) 505 ас 37"С.
0ье )С)тъч)рек юа|сес| |п ГЬе ьагпе ю3исюп со цепс)у гиЬ СЬе Я)его со гегпоче а3! Ьасгепа! с|еЬпк |псиЬа1е СЬе й)сега )и ГгеаЬ бх 55С, О. ГЫЬн ч) 505 Гог 3 Ьоигь а1 55'С. 5. Сапу оис ЬуЬг)с )аас)оп ъч)1Ь сйе гар-|аЬе|ег3 то)ахеи!с ойцогвс|еойде аъ с)еасг)Ьес) )п 51ерь б — ) 2 о) сйе та)п рго1осо|. 6. 18епс)Гу со)оп)еа 1Ьас Ьубг)сйае рге)егепс|айу 1о 1Ье гписайепк оййопис)еоск3е, 5е1 ир а пигпЬег о) агпайьса)е!к|ос3 си!сигеа )п 18 гпес))игп иа)пе )ис))чЫиа) со!оп!еь аа |поси1а.
Сгоиг сйе сийвгеь со ьасигайоп !п сйе ргеаепсе о) |Ье арргорпасе аис)Ьюс)с. 7. 1ю|асе юрегЬейса! рЬайегпЫ 0МА )гоги еасЬ оНЬе си)сигеа Ьу опе ос ГЬе тесЬос)ь с)еьсг!Ьес) )п СЬарсег 1. 8. Тгапа)огт сотресепс Е, со!г ъч)1Ь еасЬ оГ сЬе рЬайегпЫ 0МА ргерага1юпк 9.
Ргераге а|пд|е-Кгапдед рЬайегпЫ 0МА Ьу свреип)есйоп о) )пс))ч|8иа) сгапа)оггпапсь аъ с)еьсг)Ьед |и СЬар1ег 3, Рго1осо| 8. С О. 5ес)иепсе сЬе сагйес 0МА 1о чег))у сЬе ргеьепсе о) сйе с)еа)гес) гписайоп апс3 1о сопйггп сЬас по ас)чепййоиь тисас)огь Ьаче ахеи, 11. Кесочег )Ье тисасес) Ггадгпепс Ьу сйдеас)оп о) 1Ье рЬайетЫ чессог пчсЬ 1Ье арргорпа1е геьспгйоп епаугпе|ь) апс3 ргерагас)че це) е!ессюрЬогеВк С!опе сЬе сагйес 0МА |псо ап арргорпасе чессог (П пеес|- ес)).
12. СопЫп )Ье ргеьепсе о) 1Ье гписасюп Ьу 5оисЬегп ЬуЬг|сйгасюп аъ с)еаспЬес) |и 5)ерш 19 апс3 20 о) сйе та)п рю1осо!. 13.48 СБарсег 13: МисаКепез|5 АЕТЕКЫАТ17Е РКОТОСОЕг 0ЕТЕСТ1ОЫ ОЕ 0ЕЕ|КЕ0 МЕ)ТАХТ5 ВУ РСК 5ечега| СесЬВ)с(иез Ьаче Ьееп дезспЬес1 (о зсгееп 0ЫА загпр|ез Гог 1Ье ргезепсе ог аЬзепсе о( а с1еИпес1 1 гиисадоп (С|Ис апд А|ачапдс 1996; ЛЬи апд С|аг1с 1996; НигиЬег( апд Е|агд 1997; А|ачалдс е| а|. 1998). АИ о( йезе гпе(ЬосЬ аге Ьий оп йе оЬзегчадоп йа( РС|КК гес)и!ге йе 3 '-(еггп(па( Ьазе оГ йе оИфопис(ео(Ые ! рпгпег со Ье регГесду согпр|егпепсагу со йе 0ЫА (еспр|асе. й йе 3 '-сепи|па| Ьазе саппос Гопп а сопчеп- ! Иопа| Ч(аЬоп-Сг(с(с Ьазе ра|Г ъч!СЬ йе Ьазе Ы йе соггезРопд!пц роз(с!оп о( йе (егор(асе, (Ье ейоепсу о1 рпгп|пц дгорз дгагпабсаИу, Е!Кисе 13-5 оид!пез йе (есЬп!с)ие с|езспЬес| Ьу СИ5(с апд А(ачапс(с (1996), счЫсЬ гес)и!гез Гоиг рппзегз.
! ОИцопис|еодс|ез 1 апс| 4 аге Гогъчагд апс| гечегзе ргопегз Гог агпрИсадоп о( йе |агре( ге5(оп сои(а!п!пд 1Ье сии(адоп 5!(е. ОИцопис|еодс|ез 2 апд 3 аге аИе|езрес|Вс рпгпегз йа( аппеа| (о а дейпес| зес)попсе сч!(Ып (Ье (агнес ге5!оп апд сИег оп(у Ы йе 3 '-(епп|па| Ьазе: опе о( йе оИдопис1еос!доз соггезропсЬ со (Ье счИд-(уре | аИе|е, апс| (Ье о|Ьег соггезропдз (о йе пюгап( аИе(е. Тччо агп рИсадоп геас|юпз аге зе( ир, члй 35 рпю|ез,, о1 оИцопис)ео(!дез 1, 2, апс| 4 |и опе (иЬе апс| Ыеп(|са| апюипЬ о( оИКопис(еоддез 1, 3, апд 4 |и (Ье ойег ( (иЬе. ТЬе (егор|а(е 0ЫА сап Ье гпагпгпаИап цепогпгс 0ЫА (500 пц), уеазс цепогп|с 0ЫА (10 пц), ЬассепорЬаее М1 3 014А (1 — 5 р5), р)азгп!д 014А (1 — 5 рИ Ь ог |п Гас( апу о(Ьег 0ЫА йа( пзау сапу йе дейпед гпи1а-, (юп.
АгпрИсадоп Ь сагпес1 оис ипдег 5(апс1агс1 РСК сопсИ(юпз аис1 (Ье ргос1ись аге апа|угед Ьу алагеза ЕЕ( ! е(ессгорЬогез!5. Вой геассюпз 5|ЗОиЫ у(еЫ а ргопдпеп( Ьапс1 о( агпрИ|ес| 0ЫА соггезриид!пд |и 5!2Е (О йе: СагВес гее!оп. ТЫ5 0Г(А, счЬозе зуп(Ьез(5 ь рпгпес| Ьу оИцопис|еодс|ез 1 апд 4, зегчез аз а (егор|а(е Гог агпрИ- ,,' Ясадоп Ьу йе аИе(е-зрес!Ис оИВопис(ео((дез.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
