Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 167
Текст из файла (страница 167)
со!6 ТЬе слгси1аг Ьегегойир1ех пю1еси1ез, Ьоъчечег, Ьед(п го гер1каге. Весаизе гЬе пцяпассЬей Ьазез аге пот гера)гей, гЬе 6гзг гоипй оЕ гер1кайоп депегагез а чй1й-гуре р)аяпЫ гЬаг сагпез гЬе опдша1 геяпсгюп яге апй а пшгагей р1аяпЫ гЬаг йоез пог. РХА Егош гЬе 6ьг зег оЕ ггапзЕоппапь Ь гесочегей, сддезгеъ1 опсе пюге ъч(гЬ гЬе залпе гезгпсйоп епхугпе го 1шеапге ЕЬе ъч11й-гуре пю1- еси!ез, апй гЬеп изей го ггапзЕопп а згапйагй!аЪогагогу зггаш оЕ Е. со)Ь ТЬЬ ЬюсЬегпка1 зе1ес6оп сап Ье вийк!епг1у роъчег6л1 го епяп.е гЬаг а ЬлдЬ ргорогйоп оЕ ЕЬе геял16пд ггапзЕоппапь сагту гЬе йеягес1 шшайоп (Репд апй %с)со1оЕЕ ! 992; гЬц 1996).
ТЬе гЬеогегка! гпахипшп уле1й оЕ ппцапгз )п гЬе згапйагй Еопп оЕ ()5Е (ип(цце яге е1(пипайоп) с1езспЬей лп гЬлз ргососо1 Ь 50%. Ноъчечег, лп гпозг 1аЪогасопез, гЬе Егес!иепсу ъч)гЬ ъчЬ|сЬ пшгапс р!аяпЫз аге гесочегес1 чапез Ьегъчееп 558 апй 3098, йерепсдпд оп гЬе сошр1ехпу оЕ ЕЬе пшгайоп апй гЬе ейклепсу оЕ с1еачаде ъч!гЬ ЕЬе гезгпсгюп епхуше.
!Е песеззагу, гЬе гаге оЕ пцлгапг гесочегу сап Ье цпргочес1 ядпл6сапг!у Ьу согпЬлшпд ()5Е ъчЬЬ гЬе Кип)се! гпегЬос1 оЕ зе1есгюп адашзг игас!1-сопла!пшд гешр1аге Р)ъ(Аз (Маг(счагйзеп ег а!. 1995) ог Ьу (псгеаяпд ЕЬе сопсепггайоп оЕ ЕЬе пшгадепк ргипег го 10: ! ш Еачог оЕ гЬе пшгадешс ргппег. 13.26 13.28 СЬаргег 13: Мига8епеж Мег!!а 18 а8аг р)а7еь апд ЕВ тесоит сопгат!п8 гЬе арргорг!аге ап6Ь!06с прес!а! Ес!о!ргпепЕ Яа7ег Ьа7Ьа ргеаег го 70 С ап6 7о Яе арргорпаге гетрегагиге Еог геагпс6оп епдопис7еаье с 78еабоп А4М!6опа! КеарепЕВ 5герь 7 ап6 74 о! гЬ!а ргогосо! геди!ге Яе геа8епга 7!аге6 !и СЬаргег 7, Ргогосо! 23, 24, ог 26 Еог Яе ггапеуоггпабоп оЕ Е.
со!Е 5герь 70 апс! 76 оЕ ГЬ|ь ргогосо! гедигге Яе геа8епГь 7!а!ее! т СЬаргег 7, Ргогосо! 7 Еог Яе тт!ргерагабоп оЕ р!аьт!6 О74А. 5гер 77 оЕ ГЬ!а ргогосо! гедгпгег Яе геа8епга 7!агес7 го СЬаргег 72, Ргогосо! 3, 4, ог 5. УЕС$ОГ5 аПС! ггаСЕЕГ!а! ЬгГа!П5 Р)еаае аее Аррепг7!х 3.
Е. со1! агга!и нВЯ а гпиг5 Вепосуре Ее.8., ВМН 77-78) сотрегепГ Еог ггапеуогта6оп Е. со!! агга!и нВЯ а гпиг рЬепогуре сотрегеп! Еог ггат5огта6оп Р!саге асс 5гер 74. МЕТНО0 вкупе!7е5!5 оЕ Йе моЕап$ 1:ПАЛА Ягапс! 1. М!х йе Е01!отчие сошропепь ш а ш!сгоЕ08е !пЬе: !пспЬаге йе шЬе ш а Ьо!1108 геагег ЬагЬ Еог 5 гпшпгея ТЬе оргппа! агпоапг о! р!аяпЫ 77ХА Ь г7ерепг!епг оп ЬогЬ гЬе рпгоег апг! гЬе р1аяпЫ го Ье оаег!. 2.
!пппейаге1у сЬ!!1 гЬе гпЬе ш ке Еог 5 пиппсея Сепсг!628е гЬе гиЪе 7ог 5 аесопгЬ !и а ппсго6лае го г1ерояг гЬе Е1п!гЕ аг гЬе Ьаае. 3. То гЬе гиЬе оЕ аппеа!ег! ргппега аиг! р!аяпЫ, аг)с1: !Ох аупгЬеяа ЬоЕЕег ЬассегюрЬаае Т4 ЕГЬА ро!угоегаас (2 — 4 опаа7Н1) Ьасгег!орЬаае Т4 ОНА !!хаас 14-6 ига!а/н1) Н,О Мгх гЬе геааепга гге!1 Ьу аеиг!е пр апг1 г)огеп ргрегппц.
Сепгг!Епае гЬе гпЬе Еог 5 ьесоиг!а !и а ппсгоупае го г1ерояг йе ЕЕи!г1 а! йе Ьазе. 1пспЬаге гЬе геасг!оп Еог 1 — 2 Ьопга ас 37'С. 4. 5гор гЬе геаспоп Ьу Ьеапп8 йе гпЪе Еог а! 1еааг 5 ш!ппгеа аг 70'С со !пас!!часе гЬе епхугпея 5гоге гЬе шЪе оп йе ЬепсЬ го а11оъч Ь соо! го гоогп гешрегагпге. 70х апаса!!па Ъоугсг р1аяпЫ ОЬ7А ае!есбоп рпгоег гоогааеп!с ргппег НО 2 н! 0.025 го 0.25 ргоо!с 25 ргоо1еа 25 рпю!са Го 20 Н! зн! 7н! ! н1 5 н! Ршгосо1 ее О11еопис1еосЫе-с11гессес1 Мисасеиеж Бу Е!~ттас1оп о! а Опцие 12ехггссссои 5ссе 13.29 Рпгпагу Ье!ес1!оп Ьу ссе51гсс6оп Епг!опос!еа5е Рфей!оп Ас)!иас сЬе Ь!аС! сопсепсга6оп 01'сЬе геаспоп со а 1ече1 сЬас 15 орйпа1 Тог сЬе ье1ессес) ипн)ие ясе ген!пес)оп епс)опис!еаае. 1)ае сЬе 10х аппеа!шд Ъи!Тег, а асосЬ ос Ь!аС!, ог сЬе 10х Ьиууег аирр11е6 ис11Ь сЬе геаспсбоп епхуше.
ТЬе соисеисгаиои оГ ХаС! 1и сЬе ауисЬеяаЛсаасюи гисхсиге ь 37.5 тм си а соса1 чо1исие ау 30 01. 1! сЬе геяпссюи йаеассои иеесСа!еы ог ио ХаС!, сЬе 13ХА иихсиге си сЬе ауисЬеасаЛ1дасюи Ьиууег саи Ъе ргессрссасесс чай ейаио1 ог раааесС сЬгоиаЬ а арии со!испи аисС геаиареис!ес! си сЬе арргорпасе геасгксюи еигугие Ьссусег.
АсЫ 20 ишса оТ сЬе ае1есг1че геаспссюп епс)опис!еазе со сЬе геас6оп пихсиге. 1псиЬасе сЬе геассюп 1ог ас 1еаас 1 Ьоиг ас йе арргорпасе 61цеа6оп сешрегасиге. А !АСРОКТАМТ ТЬе чо!игие о! еигутеа асЫед со сЬе геасгюиа Вис!ийоне ро!утегаае аис! !!Вахе) аЬои!д иоС ехсеес! 10% о! йе гога! геас6ои чо!иисе. Ас!)иаг Фе геасСюи чо!ите ассогйпц!у. Бгй Тгапйогптабоп апс! Епг1СЬгпеп1 Еог МоТап1 Р!а5гпсгЬ Тгапауогш а тис5 Е, соВ асгасп яссЬ аа ВМН 71-18 члсЬ сЬе р1аяпЫ 13ХАа сопсаспес1 ш сЬе йВеа6оп пихсиге, ияпд опе 01 сЬе сгапауоппа6оп ргосес)игеа с1еаспЬес) ш СЬарсег 1, Ргососо15 23 — 26. 5ргеас) 10, 50, апс) 250 )с! оуйе сгапаКоппасюп пихшге опсо ЕВ аВаг р1агеа сопса)п)пВ сЬе арргорпасе ап6Ъюбс.
1псиЬасе сЬе р!асеь очегп!ВЬс ас 37"С. Саггу оис 5сер 9 ъчЬВ!е йе р!асеа аге шсиЪас)пи. ТЬеае р1асеа аге сиес1 со сСесегсисие сЬе ииисЬег ос рписагу сгаиауоггиаиса, счИсЬ аЬоисд Ье Ьеичееи 100 аисс 300 со!ои1еа рег 50 Ссс оусгаиауоггиасюи иихсиге р1асей Ашр)!су сЬе р1аяпЫа Ьу асЫ!пВ йе гешашшВ сгапасоппасюп пихшге со 3 гп1 ос 1.В шей- шп гипса)пшд сЬе арргорпасе ап6Ью6с. 1псиЪасе сЬе си!шге очегшиЬс ас 37'С сч)сЬ аЬа1с- !пи. ТЬе пехс с)ау, ргераге р1аяпЫ 13Ь)А 1гопс -25 гп! ог гЬе очегп!ВЬс си!сиге (р!еаае аее СЬарсег 1, Ргососо1 1).
10. 13!иеаС сЬе р1аяпЫ 13Ь)А ргерагес) сп Ьсер 10 иисЬ сЬе ае1есс!че геаспсс)оп епкушес 1псиЬасе сЬе геаспоп Тог 2 Ьоиса ас сЬе арргорпасе сепсрегасиге. АсЫ ап асЫЬюпа! 1О иппа 01 сЬе геаспссюп епхуше, апс1 1псиЬасе 1ог ас!еаас 1 6лгсЬег Ьоиг. 12. Аааеаа сЬе ехсепс оу 61Веас!оп Ъу гиппшц 5 — 10 р! 01 сЬе р1аяпЫ 13ХА оп а 1% аВагоае Ве! сопСаш!пу 0.5 !сВйп! ейийшп ЬгоспЫе. Ьсиеаг!хесС р1аяиЫ !3ЬСА се!11 или аа а йасгесе Ъаий иий0еасесС !сиса!аг) ОНА ч611 гии аа ьчо Ьаи0а, соггеароийи0 со сЬе ге1ахес! ссгси!аг Тогги аисс сЬе аирегсо!1есС уогии Носчечег, яисе йе рагеиса! рсаяиЫ иса)сеа ир а агеасег рагс оусЬе соса! р!аяиЫ роо!, сЬе ЬаисСа соггеароийиа со сЬе иийу.асесС иииаис р1аяшсЬ сиау Ъе 9йсе Ташс соисрагес! со йе йаеасесС рагеиса! р1аяиЫ Ьаий 13. р1аяиЫ РЬСА !Ох геасиссюи еиаугие ЬиКег ии19ие яге геьгпсгюи еисСоиис!еаае НгО 500 иа 2 01 20 ииси со 20 Сс! 13.30 СЬаргег 13: Мига5епег(г г1па! Тгапйоггпа6оп 14.
Тгапагогш сошрегеп1 гпи(5+ Е. соВ се!!а чч(ГЬ еЬЬег 2 — 4 )с! ог йе йцеа(ес) р1аяпЫ 0)х)А (-50 — 100 щ) Еог ггапагогшаг!оп ог сЬеппса11у сгеасес) согпресепс се!!а ог 1 р1 оу р1аяпЫ 0)х)А й1игес) 6чеФо1д чч((Ь агеП1е Н,О (-5 пд) Еог ггапауогшаг(оп Ьу е!есггорогаг(оп (р1еаье аее СЬаргег 1, Рго1осо1ь 23-26). 15. 5ргеас( 10, 50, апс1 250 )г! ог (Ье ггапауогша1юп ппхгпге опго ЕВ аааг р1а1еа сопгаш(па 1Ье арргорпасе апг(Ъ|о((с.
!псиЪаге йе р!агез очегп!ВЬ( а( 37'С. 16. ТЬе пехг с)ау, ргераге ппп!Ргерагаг(опа ог р1аяпЫ 0ИА Егогп а( 1еакг 12 шс1ерепс)епг ггапя Гоппапгя 5сгееп 1Ье ргерагаг(опа Ьу геагг(сг(оп епс)опис!еаке с)(Веьгюп апс) аВагоае Ве1 е1ессгорЬогеяа го Ыепг(уу р1аяпЫа йаг аге геяяапс го с!еачаце Ьу (Ье ае1есггче геегг(сгюп епкуше. 17. Е)ае 0ЫА аес)иепсшВ го сопйпп (Ьаг йе р!аяпЫь сопсагп йе с)еягес) пшгагюп (р!еаее аее СЬаргег 12, Рго1осо1 3, 4, ог 5). ТВОЕ)ВЕЕВНООТ1)с)С В йе гаге о( ти(апг гесочегу ь 1онч, (гу ° согпЫп(пц 05Е сн((Ь йе Кип(се1 гпе(Ьос( о( ае(есВоп аВа(пь( огас(1-сопга1п(пц гегпр(а(е 0ЫАз (Маг(счагс(аеп ег а!. 1995) апс(гог ° (псгеаа(па йе сопсеп(га(юп о( (Ье шигадеп(с рпгпег ьо йа( (Ье пю!аг гагю о( йе пно рпгпега 1ь 101 (п (аног о(йе гпи(ацепк рпгпег (Ни(сЬгпюп апс( А)!еп 1997).
° (псиЬа((пц (Ье ехгепьюп геасгюп са(а!угас( Ьу Т4 0ХА ро1угпегаее а( 42 ОС гайег (Ьап 37"С (РЬаппас(а (ппгис(юп ВооИео Чесгогь о( Йе рВ!иеаспр( (аш((у Ьаче Ьееп геропес( (о у(е(с( ши(ап(а гм(Ь чегу (оън еВ)с!епсу, регЬарь Ьесаиье (Ьеу сопга(п а (спопу геяоп о! аесопс(агу в(гас(иге (Ьа( (гпрес(еь (Ье ргоВгеаа оНЬе 0)4А ро1угпегаае Виппер (Ье ехгепьюп о( рпгпегь !п М(го. ТЬВ ргоЫегп сап Ье аноЫес( согпр1е(е)у Ьу иа(па а р(аьгпЫ чесгог йаг 'ь пог а гпегпЬег о( йе рВ(иеьспрг (апп! у ог Ьу иа(па а (Ьеггпоа(аЫе 0ЫА ро(ушегаае апс) 0ЫА 1(еаза апс) (псиЬаВпц (Ье ех(епяоп геасг(оп а( Ь(аЬ гегпрега(игера (Ъчопд апс) Когпагогпу 1995). Рго1осо~ 5 Карй апд Ийс~еп1 Я1е-сйгес1ед Ми1ацепеыь Ьу Йе 5~пц1е-ЫЬе Мецарпгпег РСК Мейод нс мгслаа|мех мутно«т |ятаоо«тсе«т нч Клммл«т«т ес а1.
(!989) ап|1 аиЬает)иенс!у шот!16|ет( Ьу шапу 1пчеа68атогя !пс1игбп8 8ат)тат апт( 8опипег (1990, 1992), СсеЬе! ап|1 8рпст (1990), Ьапт)с е« а!. (1990), Мапш ес а!. (1993), Ркагт! ес а!. (1994), апт! Е(п8 апт) КоЪ|пюп (1997), )а «Ье яшр1еас апт! тпоас соас-е«Тес«)че ше«Ьот! от РСК-Ьаает) шиса8епеа(а си«теис!у аъа)1аЫе. ТЬе тпе8арптпег шесЬо|1 от" ясе-т!!гессе|( шиса8епеяа пав йгее о1!8опис1еосЫе рт(шета ап|1 съчо гонит(а оЕ РСК.
Опе от йе о!18опис1ео«Ыеа ыписа8ешс, апг) «Ье осЬег съчо аге Гогъчагб ап|1 тече«те ргппега йас 1(е ирягеап| ап«1 г)оъчпьсгеаш Егош йе Ь!пебп8 ясе Сот «Ье шиса8ешс о118опис1ео«Ые (р!еаае аее Р18иге !3-3). ТЬе йапЫп8 ргнпега сап Ье сошр1ешепсагу со ает)иепсеа !п «Ье с1опет( 8епе ог со ат()асепс чессог ает)иепсея ТЬе пшса8епк ргнпег сап, (п сЬеогу, Ье от(енса соъчагт) еЬЬег опе о( сЬе бапЫп8 ргнпегя!п ргас6се, Ьоъчечег, «Ье пшса8ешс ргнпег (а опепсе|1 соъчагт! йе пеагег от' «Ье съчо йапЫп8 ргипета ю «Ьас йе 1еп8й от сЬе ше8аргнпег 1а )терс со а пипнтинп. ТЬе пшса8епк ргнпег апт( «Ье пеагег ос «Ье ехсегпа! ргнпега аге пает) ш сЬе 6гя РСК со 8епегасе апт) атпрИу а пшсасе«1 тга8шепс от 1Э)ъ)А.
ТИа ашр116е«1 тта8шепс — йе п|е8аргнпег — !а пает) сп йе аесопт! РСК |и соп)ипс6оп ъч!«Ь сЬе ге|па!шп8 ехсегпа1 рпшет со ашрИу а 1оп8ег ге8)оп оЕ йе сешр1асе !3ХА (Капнпапп ес а1. 1989; С|еЬе1 ап|1 8рпсх 1990; Еапт!с ес а1. 1990; 8аг)тат апт( Бопппег 1990, 1992).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
